03/08/2020 Dr. Z .

Sabir
Génétique bactérienne L3 Dr Mouhamadou Lamine Dia
Objectifs du cours : 1. Connaître mécanismes des mutations 2. Décrire caractères des mutations
3. Connaître différents types transfert gènes 4. Connaître nature/devenir gènes transférés
I. Introduction
Définition :
• Modifications du chromosome bactérien.
-Mutation = Modification qui affecte le chromosome - Transferts génétiques = échanges d’ADN.
* Elles sont stables , transmises à la descendance * Entre 2 bactéries = Conjugaison , transformation .
* Un allèle = nouvelle forme d’un gène ayant subi des mutations * Entre une bactérie et un bactériophage = Transduction.
Variations génétiques Variations phénotypiques
•Génotype: ensemble des déterminants génétique portés par une cellule •Phénotype : ensemble des propriétés observables d’une bactérie
•Variations génétiques =modifications du chromosome bactérien •Variations phénotypiques = adaptation transitoire d’une bactérie
. à diverses conditions extérieures.
Elle est induite, réversible, non transmise à la descendance
•Mécanismes des variations génétiques : •Mécanismes des variations phénotypiques
- mutations dans les gènes du chromosome régulation de l’activité de certains gènes(induction, répression …)
- apport de gènes extérieurs au chromosome
•Apparition de bactéries différentes
Intérêts
•Identification bactérienne : - nomenclature
•Etude des mécanismes de la - résistance aux antibiotiques . - virulence des bactéries
II. Rappels : Le matériel génétique d’une bactérie : composition : noyau, ribosome, plasmides
1 /Patrimoine génétique bactérie 2 /Structure d’un gène 3/Composition chimiq d’un acide nucléique
•Chromosome = support principal •Gène = succession de nucléotides •Bases
- ADN bicaténaire, circulaire, - nucléotide = base + sucre + phosphore - puriques : adénine (A), guanine (G)
surenroulé - nucléoside = base + sucre - pyrimidiques :cytosine (C), thymine (T),
- 10.000 gènes (6x105 paires de bases) •Codon = succession de 3 bases= unité de base uracile (U)
•Ribosomes = support secondaire - codon correspond à un acide aminé •Sucres
- ARN monocaténaire - codon = « lettre de l’alphabet » - désoxyribose (ADN)
- ARN 23S, ARN 16S, ARN 5S -code génétique renferme 64 codons - ribose (ARN)
•Plasmides = support secondaire •Phosphore

4/Fonctionnement d’un chromosome

•Transcription
- message ADN est transcrit en ARNm
- rôle de l’ARN polymérase
L’ADN est recopié en ARNm par
les ARN polymérases
•Traduction •Réplication
- ARNm est traduit en protéines - message ADN est dupliqué en ADN
- rôle des ribosomes - rôle de l’ADN polymérase
L’ARNm est lu et traduit en protéines par L’ADN est recopié en ADN par
les ribosomes. les ADN polymérases

III. Mutations
1/Définition = •Modification de la séquence d’un gène (d’un codon) -Définition : la perte , l’addition ,
2-Substances mutagènes : cassure (ouverture) des liaisons stables dans l’ADN. ou le remplacement .
-Agents physiques : rayons ultraviolets à 260 , rayons X, alpha , beta , gamma, neutrons. -Soit d’une base en point donné=
Les lésions sont létales , mutagènes et cancérigènes. Mutation ponctuelle
-Agents chimiques : acide nitreux , nitrosoguanidine, alfatoxine. -Soit d’une séquence de bases =
-Agents biologiques remaniement génomique
3/Caractères des mutations
Spontanéité Discontinuité Stabilité
•Non induite •Caractère brusque •Caractère muté
- non provoquée par l’agent sélecteur - mutation se fait en une seule étape - est transmis à la descendance
- révélée par l’agent sélecteur - c’est la loi du « tout ou rien » - même si l’agent sélecteur est
•Exemple : résistance à un antibiotique •Possibilité de mutations successives absent
- dans un même gène
- ou dans plusieurs gènes

Rareté Indépendance Spécificité

•N’affecte
- qu’une partie population bactérienne
- la majorité des bactéries est normale
•Exemple : résistance de M. tuberculosis
- streptomycine (S): 1b/100.000 (10-5)
- isoniazide (H): 1b/1.000.000 (10-6)
- rifampicine (R) : 1b/10.000.000 (10-7)
3/Mécanismes moléculaires
•Substitution de bases
- transition : AT => AC ; AT =>GT
- transversion : AT => TT ; AT => AG
Applications pratiques = •Thérapeutique : association d’antibiotiques
•Mutation en un point donné d’un gène n’empêche pas la •Mutation n’affecte qu’ un seul
probabilité de mutation dans un autre point du gène caractère
•Probabilité de deux mutations simultanés est égale au
produit des probabilités de chacune d’elles
•Exemple : double R de M. tuberculosis
- S et H = 10-5 x 10-6 = 10-11
- soit 1b/100.000.000.000
•Perte de bases = délétion •Acquisition de bases = insertion
- perte d’une seule base - acquisition d’une seule base
- perte de plusieurs bases - acquisition de plusieurs bases
•Inversion de séquences de bases

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3 /Mécanismes des mutations :
Mutation ponctuelle : Remaniement génétique
-Mécanisme 1 : remplacement d’une base par une autre base . -Mécanisme de l’insertion : un segment d’ADN arrive et s’insère dans le chromosome.
*Transition : une base purique remplace une autre base purique , ou une base pyrimidique remplace une autre -Mécanisme de la délétion : une cassure accidentelle (coupure) se produit sur le
base pyrimidique . chromosomique et un segment d’ADN est perdu . Le chromosome se ressoude .
*Transversion : une base purique remplace une base pyrimidique , ou une base pyrimidique remplace une
base purique
-Mécanisme 2 : Addition (Acquisition) ou perte (délétion) d’une base
Conséquences : Synthèse de protéine de mauvaise qualité.
V. Transfert de matériels génétiques chez les bactéries
Différents processus
•Définition = passage de matériel génétique d’une bactérie à une autre bactérie
•Processus : - transformation - conjugaison – transposition - transduction
1. Transformation Mécanisme
Définition • Bactérie donatrice éclate (exogénote) et libère son chromosome ( fragment d’ADN) dans la solution.
•Passage d’un fragment d’ADN d’une bactérie donatrice dans une bactérie réceptrice •L’ADN se fixe sur la bactérie réceptrice (endogénote) qui doit être en état de compétence.
=Transfert d’un segment d’ADN libre , nu, en solution , entre 2 bactéries. •Une enzyme coupe l’ADN en fragments qui pénètre dans la bactérie réceptrice
•Mise en évidence du phénomène . (Fixation – pénétration fragment ADN dans la bactérie réceptrice)
- Griffith le découvre chez pneumocoque •Dans la membrane cytoplasmique de la bactérie réceptrice, une enzyme hydrolyse l’un des brins d’ADN ,
- Avery-Mac Leod- Mc Carty: principe transformant est l’ADN l’autre brin pénètre dans le cytoplasme.
ADN transféré • Ce brin d’ADN s’insère enfin dans le chromosome de la bactérie réceptrice , en remplaçant le segment de
•Quantité d’ADN transférable <1% chromosome ayant les mêmes composition et orientation.
•Devenir de l’ADN transféré •Intégration du fragment d’ADN dans le chromosome de la bactérie réceptrice
il est intégré uniquement s’il provient d’une espèce génétiquement très proche Applications
•Établissement de carte génétique
•Fabrication de l’insuline (biotechnologie)
•Compréhension mécanisme synthèse capsule
•Compréhension mécanisme résistance AB
2. Conjugaison
Définition Mécanisme
•Transfert « actif total ou partiel à sens unique» d’ADN d’une bactérie donatrice (mâle) •Appariement entre bactéries mâle et femelle grâce aux pili F et passage du matériel
- dans une bactérie réceptrice (femelle) - lors d’un contact physique étroit et directe. génétique uniquement du male vers la femelle
•Mise en évidence du phénomène par : •Matériels transférables =ADN chromosomique ADN plasmidique IS Tn Int
- Lederberg et Tatum (1946) Mécanisme
- chez Escherichia coli •Appariement des deux bactéries
Support génétique de la conjugaison = facteur de fertilité F - le pilus F établit le contact entre elles
•Plasmide F ou facteur de fertilité - le pilus F forme un pont entre elles
- n’existe que chez la bactérie mâle - les cytoplasmes sont en communication
- code pour la synthèse des pili sexuels •Transfert de l’ADN
- code pour la mobilisation de l’ADN - en sens unique du mâle vers la femelle
•Pas de barrières liées à l’espèce - progressif
•Très fréquente chez bactéries Gram (-) - porte sur un seul des brins d’ADN
•peut occuper différentes positions dans la bactérie male . Applications
-Autonome dans le cytoplasme comme un plasmide = Bactérie F+ •Rôle dans résistance aux antibiotiques
-Intégré dans le chromosome de la bactérie = Bactérie Hfr (Haute fréquence de recombinaison ) - acquisition de résistances multiples
•Bactérie femelle = Bactérie F -- : Ne possède pas de plasmides - résistance « épidémique »
•Plasmide F est le support de la synthèse des pilis sexuels ou pili F . •Adaptation bactéries conditions de vie
ADN transférés - acquisition de caractères métaboliques
•Nature = gènes de la bactérie mâle - acquisition de la virulence
- plasmide F; autres plasmides
- chromosome
•Devenir de l’ADN transféré :- gènes plasmidiques forment des plasmides
- gènes chromosomiques s’insèrent dans chromosome de la bactérie femelle
•Conjugaison = phénomène fréquent

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 3-Transduction bactérienne Mécanisme
Définitions •Phage tempéré infecte la bactérie donatrice et s’y réplique .
•Transduction = transfert d’ADN (matériel génétique) d’une bactérie donatrice vers une bactérie A leur libération, certains phages fils emportent un fragment d’ADN de la bactérie donatrice, infectent la
réceptrice par l’intermédiaire d’un bactériophage bactérie réceptrice et lui donnent ce fragment d’ADN.
•Lysogénie ou conversion lysogénique : Mécanisme
- insertion des gènes d’un virus dans le chromosome d’une bactérie •Phage tempéré infecte une bactérie
- C’est le bactériophage qui donne son propre noyau à la bactérie . - s’insère dans chromosome (lysogénisation)
Il n’y’a pas de transfert entre 2 bactéries , mais entre un phage et une bactérie . - réveil du phage : multiplication suivie de la lyse bactérienne
Exemples : diphtérie , scarlatine . - phage emporte des gènes bactériens
ADN viral transféré •Phage infecte une autre bactérie et peut lui transférer les gènes bactériens
•Transduction abortive
-ADNv non inséré dans chromosome bactérie
- ADNv reste généralement libre « Types de transductions » :
•Transduction complète ou généralisée -Transduction généralisée et non spécifique :
- ADNv inséré dans chromosome bactérie les gènes transférés ne sont pas spécifiques (sont pris au hasard ) .
- ADNv est transmis à Ils s’intègrent au noyau de la bactérie réceptrices (transduction complète ) ou
. une partie descendance bactérie restent libres dans le cytoplasme de la bactérie réceptrice (transduction abortive)
. toute descendance bactérie
-Transduction spécialisée ou spécifique :la bactérie réceptrice hérite de gènes précis.
4.Transposition
Mécanisme
•Excision du transposon
Définition Transposon - soit à partir d’un plasmide
•Transposon = fragment d’ADN - soit à partir du chromosome
- extrémités •Insertion du transposon
: séquences répétitives inversées (IR) - soit dans un autre plasmide
: séquences d’insertion (IS) - soit dans le chromosome
- centre : gènes spécifiques
•Transposon = gène sauteur ou gène mobile Définition – Mécanisme de la transposition
Départ (excision) d’un fragment d’ADN bicaténaire (transposon) présent en un point
d’un réplicon (chromosome ou plasmide) ,et son insertion (intégration) en un autre
Définition Transposition point du même réplicon ou sur un réplicon différent
•Échange de gènes entre Différents transposons : IS , TN , Intégrons
- deux plasmides dans une bactérie
- plasmide et chromosome dans une bactérie
•Pas de transfert de gènes entre bactéries

4 . Applications de la génétique bactérienne

Test de mutation génique (test d’Ames) : détecte les substances génotoxiques
Clonage : isoler un gène de son contexte naturel et multiplier dans un autre système afin d’avoir plusieurs copies
Biotechnologie : production d’acide aminés , protéines (insuline, hormone de croissance) , d’antibiotiques, d’immunosuppresseurs, d’enzymes….
V/Conclusion
•Plusieurs mécanismes: mutations, transfert de matériel génétique (transformation, transduction, transposition conjugaison)
•Compréhension métabolisme bactérien
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