Memoire Amine

RÉPUBLIQUE DU CAMEROUN REPUBLIC OF CAMEROON
Paix – Travail – Patrie Peace – Work – Fatherland

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UNIVERSITÉ DE NGAOUNDÉRÉ THE UNIVERSITY OF NGAOUNDERE
*************** ***************
FACULTÉ DES SCIENCES FACULTY OF SCIENCE
B. P. 454 NGAOUNDÉRÉ P. O. Box 454 NGAOUNDERE
INSTITUT UNIVERSITAIRE ÉVANGÉLIQUE DU CAMEROON EVANGELICAL UNIVERSITY

CAMEROUN INSTITUTE
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FACULTÉ DES SCIENCES ET TECHNOLOGIE FACULTY OF SCIENCES AND TECHNOLOGY
B. P. 127 BANDJOUN P. O. Box 127 BANDJOUN
Tél : + 237 677 93 85 29 Tel : + 237 677 93 85 29
E-mail : uec.deanfst@uecam.org E-mail : uec.deanfst@uecam.org
Parcours : Biologie Clinique
EVALUATION DE LA PERFORMANCE D’UN TEST DE

DIAGNOSTIC RAPIDE ANTICORPS ANTI-SRAS-COV-2
AU LAGET, A N’DJAMENA
Mémoire
Présenté en vue de l’obtention du Diplôme de Master Professionnel en BIOLOGIE
CLINIQUE APPROFONDIE, Option VIROLOGIE
Rédigé par :
AMINE Akouya
Étudiant en Master 2
Matricule : UN21B038UE
Licencié en BIOCHIMIE
Sous la Co-direction de :
Pr EDIMA Helene Carole Dr FOKAM Joseph

MC/Université de NGaoundéré Chargé de recherche/CIRCB
Année académique : 2021-2022

DEDICACE
Mon père,
AKOUYA DJALAH
i
Mémoire rédigé par AMINE Akouya
REMERCIEMENTS
Je remercie ALLAH qui m’a aidé, et m’a donné de la patience, et le courage pour
l’accomplissement de ce travail.
Je tiens également à adresser mes sincères remerciements à tous ceux et celles qui m’ont
soutenu dans la réalisation de ce travail par leurs encadrements, leurs soutiens matériels, et leurs
chaleureuses affections. Tout particulièrement j’adresse mes remerciements :
Au Pr COLIZZI Vittorio, Doyen de la Faculté des Sciences et Technologie de l’Université

Evangélique du Cameroun pour la qualité des programmes pendant notre cursus ;
Au Prof Pr EDIMA Helene Carole Maitre de conférence à l’Université de NGaoundéré

pour ses conseils et son encouragement.
Au Dr NODJIKOUAMBAYE Zita Aleyo, responsable du Laboratoire des Grandes
Epidémies Tropical (LAGET) pour vos précieux conseils et orientations ;
Au Dr FOKAM joseph, responsable du laboratoire de Virologie/CIRCB, pour l’immense

honneur que vous nous avez fait de diriger ce travail ;
Au Dr MOMO Aime Césaire et Mr TALOM Alaric pour leurs conseils et leurs

encouragements.
Au personnel permanent et stagiaire du Laboratoire LE BON-SAMARITAIN de walia et
particulièrement à Mr Djallaye Djimtoibay (Chef du laboratoire).
A ma mère HALIME Bichara tu es une mère qui a été toujours présente aux côtés de ses
fils. Tu nous as enseigné les règles d’une bonne moralité, de l’honnêteté et de la bonne conduite.
Ton souci pour notre réussite n’a pas d’égale. Je prie le tout puissant de te donner longue vie et
santé et aussi que nous fassions ta fierté.
A mes camarades et promotionnaires, tout particulièrement KOUTAYA Dezoumbe,
NOUBARAMADJI SUITOMBAY Yamti et sans oublier DAFOGO DJIBAGAO Abel pour les
moments difficiles et de bonheur que nous avons eu à surmonter tout au long de ce parcours.
A mes frères et sœurs MAHAMAT Ali, Eldjima, Goudja, Seid, Moubarak : Votre amour
et votre soutien inconditionnel ont été des baumes réconfortants à chaque étape.
ii
TABLE DES MATIERES
DEDICACE .................................................................................................................................................... i
REMERCIEMENTS ..................................................................................................................................... ii
RESUME .................................................................................................................................................... viii
ABSTRACT ................................................................................................................................................. ix
LISTE DES ABREVIATIONS .............................................................................................................................. x
INTRODUCTION .........................................................................................................................................1
Question de recherche .......................................................................................................... 3
Hypothèse de recherche ........................................................................................................ 3
But de l’étude ....................................................................................................................... 3
Objectifs ............................................................................................................................... 3
Définitions opérationnelles des termes ................................................................................. 4
.......................................................................................................................................................................6
CHAPITRE I : REVUE DE LA LITTERATURE ...................................................................................6
I. GENERALITE SUR LE SRAS-COV-2 ........................................................................... 7
I.1. Historique du SRAS-CoV-2 .........................................................................................................7
I.2 Définition ........................................................................................................................................7
I.3 L’agent pathogène..........................................................................................................................8
I.4. Le cycle de vie et de réplication .................................................................................................10
I.5 La transmission ............................................................................................................................11
I.6 Physiopathologie du sars-cov-2...................................................................................................11
I.7 Les symptômes de la maladie à COVID-19 ...............................................................................12
I.8. LE DIAGNOSTIC DE COVID-19 ............................................................................................12
Avantages ...........................................................................................................................................17
I.9. Caractéristiques du test ELISA IgG DIATHEVA ...................................................................17
CHAPITRE II : MATERIEL ET METHODES ....................................................................................19
CHAPITRE II : MATERIEL ET METHODES ..........................................................................................20
II.1 CADRE DE L’ETUDE ................................................................................................ 20
II.1.1 Type d’étude ............................................................................................................................20
II.1.2 Lieu d’étude .............................................................................................................................20
II.1.3 Période d’étude ........................................................................................................................20
II.2 Population d’étude avec les critères d’inclusion et d’exclusion .................................. 20
II.2.1. Population d’étude .................................................................................................................20
iii
II.2.2 Matériel ....................................................................................................................................21
II.3 PROCEDURES ........................................................................................................... 22
II.3.1. Procédure de test ÉLISA .......................................................................................................22
1. Stockage des échantillons .......................................................................................... 22
2. Préparation des réactifs ............................................................................................. 22
3. Préparation des échantillons ..................................................................................... 22
4. Exécution du test ........................................................................................................ 22
II.3.2 Procédure de test rapide (TDR) .............................................................................................26
II.4 CALCULS DES CARACTÉRISTIQUES D’UN TEST BIOLOGIQUE ................... 27
✓ Interprétation des résultats de la sensibilité .....................................................................................28
✓ Interprétation des résultats du coefficient k.....................................................................................29
II.5 Analyses statistiques .................................................................................................... 29
II.6 Considérations éthiques ............................................................................................... 29
CHAPITRE III : RESULTATS ET DISCUSSION ...............................................................................32
III- RÉSULTATS ............................................................................................................... 32
III.2. CARACTERISTIQUES CLINIQUES ..................................................................................32
III.3. La répartition des résultats au SRAS-C0V-2 par le test immuno-enzymatique ELISA IgG
et le test de diagnostic rapide (TDR)................................................................................................34
par tranche d’âge...............................................................................................................................34
et du test de diagnostic rapide (TDR) en fonction du sexe.............................................................35
III.6 Evaluation de la concordance positive et négative des résultats des tests ELISA IgG et le
test de diagnostic rapide (TDR)........................................................................................................36
IV.DISCUSSION ............................................................................................................... 38
CONCLUSION ..........................................................................................................................................41
LIMITES ....................................................................................................................................................43
RECOMMANDATIONS ..........................................................................................................................43
PERSPECTIVES .......................................................................................................................................43
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ................................................................................................45
ANNEXES ..................................................................................................................................................53
Annexe 1 : Matériel pour le kit ELISA IgG DIATHEVA ................................................. 53
Annexe 2 : Contenu du kit .................................................................................................. 54
iv
Annexe 3 : lettre d’autorisation pour la séroprévalence. .................................................... 55
Annexe 4 : Attestation de recherche délivrée par le CHU LE BON-SAMARITAIN ........ 56
Annexe 5 : autorisation de recherche délivrée par UEC .................................................... 57
Annexe 6 : analyse des résultats ELISA. ............................................................................ 58
v
Liste des tableaux
Tableau 1:Critères de validité du test........................................................................................... 25
Tableau 2:Interprétation des résultats .......................................................................................... 26
Tableau 3:Tableau de contingence d’un échantillon de N sujets classés en fonction de leur état
de santé selon une méthode de référence et le test étudié. ............................................................ 28
Tableau 4:Apport diagnostic d’un test en fonction du coefficient Kappa ................................... 29
Tableau 5:les personnes vaccinées............................................................................................... 32
Tableau 6:Ancienne positivité connue à COVID-19 ................................................................... 32
Tableau 7:Les personnes ayant été en contact avec un malade. .................................................. 33
Tableau 8:Répartition selon les symptômes ................................................................................ 33
Tableau 9:Répartition selon les comorbidités .............................................................................. 33
Tableau 10:Répartition des Résultats de cas total avec le test ELISA ........................................ 34
Tableau 11:Répartition des cas du test de diagnostic rapide (TDR ............................................. 34
Tableau 12:Répartition des résultats ELISA en fonction du sexe ............................................... 36
Tableau 13: Répartition des résultats du TDR en fonction du sexe ............................................. 36
Tableau 14:Evaluation des résultats de test rapide TDR en fonction test ELISA ....................... 36
Tableau 15:Caractéristiques extrinsèques et le coefficient de contingence du TDR ................... 37
Tableau 16:Tableau : Matériel du kit ELISA .............................................................................. 53
Tableau 17:Contenu du kit ........................................................................................................... 54
vi
LISTE DES FIGURES
Figure 1: Coronavirus de type SRAS-CoV-2 vu sous un microscope électronique (SARS-CoV-2

| Flickr, s. d.) .................................................................................................................................... 7
Figure 2: La structure du SARS-CoV 2 (SARS-CoV-2 - Antigènes (Protéines et peptides) pour
la recherche et, s. d.) ........................................................................................................................ 9
Figure 3:Le cycle de réplication du SRAS-CoV 2avec les différentes molécules et leurs cibles
(Antar & Atef, 2021) ..................................................................................................................... 10
Figure 4:Test ELISA détectant les anticorps (A) ou les antigènes (B) (Carter et al., 2020) ....... 14
Figure 5:Illustration schématique du test rapide de détection des anticorps IgM-IgG combinés
contre le SRAS-CoV-2 (Li et al., 2020)........................................................................................ 16
Figure 6:Photo représentative des différents résultats d'analyse sanguine des patients. .............. 27
Figure 8: Répartition des résultats ELISA en fonction de l’âge. ................................................ 35
Figure 9: Répartition du test de diagnostic rapide (TDR) par Age .............................................. 35
vii
RESUME
La maladie à coronavirus 2019 (COVID-19) a été caractérisée comme une pandémie,
représentant une grave urgence de santé publique mondiale. Outre la détection du génome viral
avec la RT-PCR spécifique, il existe un besoin croissant de détermination du statut sérologique.
Les tests sérologiques ont été proposés comme outils fiables pour détecter les anticorps anti-SRAS-
CoV-2 chez les patients infectés, notamment à des fins de surveillance épidémiologique. Notre
étude avait pour objectif d’évaluer la performance entre le test sérologique rapides IgG/IgM
immunochromatographique à flux latéral avec le test de référence immuno-enzymatique (ELISA)
au LAGET.
Nous avons mené une étude rétrospective transversale pour une évaluation de Mars à juillet
2022 sur des échantillons pour le diagnostic sérologique du SRAS-CoV-2 au Laboratoire de
Grandes Epidémies Tropicales (LAGET) à N’Djamena. Les anticorps anti-SRAS-CoV-2 ont été
mesurés avec le test COVID-19 ELISA IgG DIATHEVA KIT et le test rapide GENRUI Biotech
Inc IgG/IgM test kit (colloidal gold ; TDR) sur du sérum humain au LAGET. Cette étude a évalué
la performance de test rapide par rapport au test ELISA qui est le test de référence. Les échantillons
ont été analysés selon les protocoles préétablis par les fabricants et nous avons interprété les
résultats en ce qui concerne les IgG pour les deux tests. Les données ont été saisies sur Excel et
analysées avec le logiciel SPSS_18.0. Un l'intervalle de confiance a été fixé à 95% et la p-
value<0,05 a été considérée comme significative.
Au total 198 échantillons ont été collectés de la sérothéque à l’Institut de recherche en
Elevage pour le Développement (IRED). Les échantillons provenaient d’une population à majorité
féminine (53,5%) dont l’âge est compris entre 10 et 70 ans et résidant majoritairement dans le 1er
arrondissement et le 9eme arrondissement de N’Djamena. La séropositivité IgG avec la méthode
de référence immunoenzymatique ELISA était de 84% contre 54% avec le TDR. La sensibilité du
TDR par rapport au test de référence ELISA était de 60% et la spécificité était de 80% avec une
valeur prédictive positive de 94% [IC95% : 87-98] et une valeur prédictive negative de 26%
[IC95% :20-30]. Globalement, la concordance entre les deux tests était modérée (coefficient de
Kappa Cohen de 0,22) ; avec une concordance positive de 51% et une concordance negative de
12,12%. L’âge, le sexe et la zone de résidence n’étaient pas associes à la discordance entre les
deux tests.
La concordance des tests immuno-chromatographique et le dosage immuno-enzymatique
est modérée, ce qui conforte dans l’utilisation du test ELISA comme test de référence pour les
surveillances épidémiologiques. Les indications de l'évaluation du statut sérologique avec les
outils actuellement disponibles dans la pandémie de COVID-19 nécessitent des investigations
supplémentaires.
Mots clés : COVID-19 ; test sérologique ; anticorps ; immuno-chromatographie ; ELISA, SRAS-

CoV-2, sensibilité, spécificité.
viii
ABSTRACT
Coronavirus disease 2019 (COVID-19) has been characterized as a pandemic, representing
a serious global public health emergency. Besides the detection of the viral genome with specific
RT-PCR, there is a growing need for the determination of the serological status. Serological tests
have been proposed as reliable tools for detecting anti-SARS-CoV-2 antibodies in infected
patients, in particular for epidemiological surveillance purposes. The objective of our study was
to evaluate the performance between the lateral flow immunochromatographic IgG/IgM rapid
serological test with the reference immunoenzymatic test (ELISA) at LAGET.
We conducted a cross-sectional retrospective study for an evaluation from March to July

2022 on samples for the serological diagnosis of SARS-CoV-2 at the Laboratory of Major Tropical
Epidemics (LAGET) in N'Djamena. Anti-SARS-CoV-2 antibodies were measured with the
COVID-19 ELISA IgG DIATHEVA KIT test and the rapid test GENRUI Biotech Inc IgG/IgM
test kit (colloidal gold ; TDR) on human serum at LALET. This study evaluated the performance
of the rapid test against the ELISA which served as the gold standard. The samples were analyzed
as per the manufacturers’ instructions and we interpreted the results with regard to IgG for the two
tests. Data were entered into Excel and analyzed with SPSS_18.0 software. A confidence interval
was set at 95% and the p-value<0.05 was considered significant.
A total of 198 samples were collected from the bio-Bank at the Institut de recherche en
Elevage pour le Développement (IRED). The samples came from a predominantly female
population (53.5%) aged between 10 and 70 years and residing mainly in the 1st and 9th sub-
divisions of N'Djamena. IgG seropositivity with the reference ELISA method was 84% compared
to 54% with the RDT. The sensitivity of the RDT compared to the reference ELISA was 60% and
the specificity was 80% with a positive predictive value of 94% [IC95% : 87-98] and a negative
predictive value of 26% [IC95% : 20-30]. Overall concordance between the two assays was
moderate (Cohen's Kappa coefficient of 0.22) ; with a positive concordance of 51% and a negative
concordance of 12.12%. Age, sex and area of residence were not associated with the discordance
between the two assays.
The concordance between the immunochromatographic and enzyme-linked

immunosorbent assays was moderate, which supports the use of the ELISA as the reference for
epidemiological surveillance. The indications for the assessment of serological status with the
currently available tools in the COVID-19 pandemic require further investigations.
Keywords : COVID-19 ; serological test ; antibodies ; immuno-chromatography ; ELISA, SARS-

CoV-2, sensitivity, specificity.
ix
LISTE DES ABREVIATIONS
ACE2 : Angiotensin-Converting Enzyme 2 LAGET : Laboratoire des Grandes
AP-1 : Activator Protein-1 Epidémies Tropicales
ARN : Acide Ribonucléique MERS-CoV : Coronavirus du Syndrome

Respiratoire du Moyen-Orient
AuNP : nanoparticules d'or
NGS : Next Generation Sequencing
CD4 : Cluster de Différentiation 4
NK : Natural Killer
CD8 : Cluster de Différentiation 8
OMS : Organisation Mondiale de la Sante
CLIA : Chimiluminescence immunoassay
PAMP : Pathogen Associated Molecular
CNBT : Comité national de bioéthique du
Patterns
Tchad
PRR : Pattern Recognition Receptor
COVID-19 : Coronavirus Disease 2019
RBD : Receptor Binding Domain
CV : coefficient de variation
RT-PCR : Reverse Transcriptase
DC : Cellule Dendritique
Polymerase Chaine Reaction
ELISA : Enzyme-Linked Immunosorbent
SDRA : syndrome de détresse respiratoire
Assays
aiguë sévère
ET : l'écart-type
SRA : Système Rénine-Angiotensine
HCoV : Coronavirus Humain
SRAS-CoV-2 : Syndrome respiratoire aigu
HRP : horseradish peroxidase
sévère 2
ICTV : International Committee on
TDR : Tests de Diagnostic Rapide
Taxonomy Viruses
TLR : Récepteur Toll-Like
IFN : Interféron
TMPRSS2 : Protéase transmembranaire a
IgG : immunoglobuline de type G
Serine 2
IgM : immunoglobuline de type M
TNF : Facteur de Nécrose Tumorale
IRED : l’Institut de Recherche en Elevage
UEC : Université Evangélique du Cameroun
pour le Développement
VPN : Valeur prédictive négative
IRF : l'interféron
VPP : valeur prédictive positiv
x
INTRODUCTION
Contexte
La COVID-19 est une maladie hautement pathogène et transmissible responsable du syndrome

respiratoire aigu sévère lié au coronavirus de type 2(SRAS-CoV-2) (OMS, 2022). Considérée
comme urgence de santé publique à portée internationale, l'Organisation mondiale de la santé
(OMS) l’a déclaré le 12 Mars 2020 pandémie mondiale. A nos jours, on compte 581 millions
de cas confirmés dans le monde et environ 6,41 millions de mort de COVID-19 (OMS, 2022).
Bien que l’ensemble de l’humanité soit touchée, nous constatons que toutes les régions du
monde ne sont pas frappées de la même manière par la pandémie. Le continent africain, qui
regroupe 17 % de la population mondiale, ne pèse que 5 % des cas mondiaux de COVID-19
soit 12 millions des cas confirmes et environ 254.661 décès à la date du 4 Aout 2022 (Carte
Covid : Monde, Europe, France, par département, s. d.).
Le Tchad, 5ème pays le plus vaste du continent africain avec une superficie de 1.284.000 km².
Il est limité au Nord par la Lybie, au Sud par la République Centrafricaine, à l’Est par le Soudan
et à l’Ouest par le Niger, le Nigeria et le Cameroun. Le deux dernier Pays (Nigeria et Cameroun)
ont été touché par l’épidémie de COVID-19 par conséquent le risque de propagation est très
élevé. Dans ce contexte, le premier cas de COVID-19 a été confirmé à N’Djamena le 19 mars
2020, dans la 12e semaine épidémiologique. Au 5 Mai 2022, le nombre cumulé de cas positifs
était de 7420. Parmi ces cas confirmés, il y a eu 193 décès à la date du 4 aout 2022. À la fin de
la Campagne de masse de la vaccination contre la COVID-19, le Tchad enregistre 1 648 031
personnes complètement vaccinées dans 10 provinces (sitrep_covid-19_n460_du_26_mars_-
_1er_avril_2022.pdf, s. d.). Ainsi le Tchad, comme la majorité des pays africains, a signalé peu
de décès et de cas liés à la COVID-19. Ces chiffres peuvent être sous-estimés en raison de la
faible capacité de dépistage et de la faible organisation du système de santé. En effet, certaines
études ont montré des données sérologiques surprenantes dans la population générale africaine
après la première vague. De plus, cette pandémie n'est pas encore terminée avec l'apparition
des variants qui pourraient être plus dangereux que les variants actuels.
Mémoire rédigé par AMINE Akouya 1

Problématique
La prévention de la transmission pour contrôler la propagation du SRAS-CoV-2 à travers les

individus symptomatiques et asymptomatiques est l’objectif principal de toute stratégie de lutte
contre la propagation de la pandémie. De nombreux tests immunologiques, basés sur la
détection d'antigènes ou d'anticorps sont disponibles et leur utilisation a été approuvée dans le
monde entier. Les tests mis au point pour détecter les anticorps anti-SRAS-CoV-2 sont
généralement basés sur des tests immuno-chromatographiques, des tests immunoenzymatiques
(ELISA) ou des tests immunologiques par chimioluminescence (CLIA). Contrairement aux
tests basés sur la détection du génome viral dont la fenêtre diagnostique est courte et liée à la
période d'excrétion virale, les tests sérologiques ont l'avantage d'être des marqueurs plus
durables, de procédures simples, d’un cout moindre et d’un temps de détection plus court et qui
ont été classiquement utilisés comme un outil d'évaluation de la dissémination des infections
dans les populations. Les tests disponibles ciblent principalement les anticorps contre les
principales protéines de surface du nouveau coronavirus SRAS-CoV-2 (Nikolai et al., 2020).
Ainsi, ces outils pourraient être utilisés pour informer les autorités de santé publique sur le
développement de l’immunité collective et la diffusion de la COVID-19 au sein de la population
(Nikolai et al., 2020).
La pression sur le marché générée par cette pandémie a donné lieu à plusieurs nouveaux tests
dont les performances réelles sont incertaines (Weitzel et al., 2020). Il sera question pour nous
de déterminer la concordance diagnostic entre le test rapide anti-SRAS-CoV-2 GENRUI
Biotech Inc IgG/IgM test kit (colloidal gold) et le test COVID-19 ELISA IgG DIATHEVA
KIT, utilisé comme test de référence. La comparaison des résultats sérologiques (IgG) anti-
SRAS-CoV-2 mesurés par ELISA et le test rapide pourra être utile pour s’assurer de la qualité
des résultats rendus en situation d’urgence sanitaire sur les échantillons reçus et traités au
Laboratoire des Grandes Epidémies Tropicales (LAGET).

Question de recherche
Quelle est la concordance du diagnostic sérologique du SRAS-COV-2 entre le TDR et
le test ELISA indirect utilisés au LAGET ?
Hypothèse de recherche
Les tests de diagnostic sérologique du SRAS-CoV-2 au LAGET ont une forte
concordance.
But de l’étude
Cette étude a pour principal intérêt de faire ressortir la fiabilité des résultats obtenus lors
d’un diagnostic sérologique de la COVID-19 avec le test ELISA IgG DIATHEVA KIT
qui est le test de référence au LAGET et le test rapide GENRUI Biotech Inc IgM/IgG
test kit (colloidal gold).
Objectifs
1.1.Objectif général
Evaluer la concordance diagnostic du test rapide anti-SRAS-CoV-2 par rapport au test ELISA
au LAGET.
1.2.Objectifs spécifiques
 Déterminer la séropositivité au SRAS-CoV-2 IgG par la technique ELISA indirect

 Déterminer la séropositivité au SRAS-CoV-2 IgG par le test de diagnostic rapide
(TDR) ;
 Evaluer les concordances positives et négatives entre les résultats de test ELISA
indirect et le test rapide anti-SRAS-CoV-2 ;

Définitions opérationnelles des termes
COVID-19 : est une maladie respiratoire pouvant être mortelle chez les patients fragilisés par
l'âge ou une autre maladie chronique. Elle se transmet par contact rapproché avec des personnes
infectées.
Test sérologique : est un examen de biologie médicale utilisant le sérum pour établir des
diagnostics médicaux. Elle est basée sur la recherche d'anticorps spécifiques (IgM ou IgG), afin
de de pouvoir poser un diagnostic de maladie infectieuse, de suivre l'évolution d'une maladie
ou encore de vérifier l'efficacité des vaccinations.
Anticorps : sont des protéines produites par les lymphocytes (des globules blancs) permettant
de se défendre contre un antigène (un virus, une bactérie ou toute autre substance étrangère). Il
en existe cinq types - IgG, IgA, IgM, IgE, IgD -, le premier d'entre eux étant le plus répandu
dans notre organisme.
Immuno-chromatographie : Test de dépistage rapide dans lequel un anticorps de capture,

couplé à un réactif de détection, est immobilisé à la surface d’une membrane poreuse afin de
fixer l’antigène recherché présent dans un échantillon d’urine, de plasma ou de crachat,
entraînant l’apparition d’une tache colorée en cas de positivité.
Immuno-enzymatique (ELISA) : La méthode immuno-enzymatique ELISA est un examen

de laboratoire. Cette méthode est principalement utilisée pour détecter la présence d'un
anticorps ou d'un antigène dans un échantillon.
Contrôle qualité : La qualité au laboratoire peut être définie comme la justesse, la fiabilité et
la précision des résultats d’analyses. Les résultats de laboratoire doivent être aussi précis que
possible, tous les aspects des activités doivent être fiables et le rendu des résultats doit être
correct afin d’être utilisé à des fins cliniques ou de santé publique.
SRAS-CoV-2 : Le SARS-CoV-2 (acronyme anglais de severe acute respiratory syndrome

coronavirus 2), soit coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère, est le virus responsable
du Covid-19. Son acronyme est parfois partiellement francisé en SRAS-CoV-2.
Statut sérologique : définit la présence ou l'absence d’un type d’anticorps donné chez un
patient.

Sensibilité : Elle mesure la probabilité d’avoir un test positif chez les malades. Dans le cas des
tests sérologiques en contexte COVID-19, il s’agit de déterminer la capacité du test à détecter
les anticorps dirigés contre le virus SARS-CoV-2. Son niveau est mesuré en pourcentage,
l’idéal étant d’être au plus près de 100%, d’avoir le moins d’erreur - de faux négatifs - possible.
Spécificité : Elle mesure la probabilité que le test soit négatif chez les non-malades. Pour les
tests sérologiques en contexte COVID-19, il s’agit donc de s’assurer que le test ne détecte pas
d'anticorps dirigés contre le virus SARS-CoV-2 chez les personnes n’ayant pas été touché par
la maladie. Là aussi la mesure est exprimée en pourcentage et l’objectif de se rapprocher de
100%, d’avoir le moins de faux positif possible.
Valeur Prédictive Négative (VPN) : la valeur prédictive négative est la probabilité que le sujet
soit non malade si le test est négatif.
Valeur Prédictive Positive (VPP) : la valeur prédictive positive est la probabilité que le sujet
soit malade si le test est positif.

CHAPITRE I : REVUE DE LA LITTERATURE

CHAPITRE I : REVUE DE LA LITTERATURE
I. GENERALITE SUR LE SRAS-COV-2
I.1. Historique du SRAS-CoV-2
En décembre 2019, plusieurs cas de pneumonies inconnues ont été observés dans la ville de
Wuhan en Chine. Au début janvier 2020, un nouveau coronavirus a été identifié comme SRAS-
CoV-2 (Faraj et al.,2020) et la maladie, apparue en 2019, a été appelée COVID-19. L’épidémie
s’est rapidement répandue hors de Chine causant une pandémie mondiale avec 30 millions de
cas et 900 000 décès qui ont été déclarés neuf mois après le début de cette crise sanitaire dont
l’Europe, les États-Unis, l’Amérique du Sud et le sous-continent indien ont été particulièrement
touchés. Le virus SARS-CoV2 est plus contagieux que les SRAS-CoV et que le MERS-CoV
vu son émergence rapide et sa diffusion pandémique (Faraj et al.,2020).
I.2 Définition
La maladie Covid-19 est une maladie apparue en 2019 en Chine, causée par le
virus SRAS-CoV 2 responsable d'une pandémie mondiale à cause de la maladie qu'il
entraîne, le virus SRAS-CoV 2 est un agent infectieux appartement à la grande famille
des Coronavirus (Combis, 2020).
Figure 1: Coronavirus de type SRAS-CoV-2 vu sous un microscope électronique (SARS-

CoV-2 | Flickr, s. d.)

I.3 L’agent pathogène
Le SRAS-CoV 2 (Syndrome respiratoire aigu sévère 2) c’est le nom officiel du
nouveau coronavirus qui tire son nom de l’apparence que lui confère la couronne, il est
l'agent étiologique de l'épidémie de pneumopathie infectieuse qui s'est répandue en Chine
et dans le monde (Définition | Covid-19 - Coronavirus disease 2019 | Futura Santé, s. d.).
I.3.1 La taxonomie
Le coronavirus appartient à la famille des Coronaviridae, qui comprend deux sous-
familles, les Coronavirinae et les Torovirinae. Les Coronavirinae sont divisés en quatre
genres, appelés Alpha-, Beta-, Gamma et Delta coronavirus. Le genre Beta-coronavirus
est lui-même subdivisé en quatre clades (A, B, C et D) (Adnet & Dina, 2021). Les
coronavirus humains (HCoV) répertoriés en 2020 appartiennent aux Alpha et aux Beta-
coronavirus, les analyses phylogénétiques ont montré que les chauves-souris et les
rongeurs sont les réservoirs de la majorité des Alpha- et des Beta-coronavirus, tandis que
les oiseaux sont les principaux réservoirs des Gamma et des Delta-coronavirus
(Agharezaee & Forouzesh, 2020). Actuellement, sept coronavirus sont capables
d’infecter l’homme. Quatre sont ubiquitaires et responsables d’infections respiratoires
hautes et basses (HCoV), peu sévère en général chez les individus immunocompétents.
Deux autres, très pathogènes, ont émergé plus récemment : en 2003, le SRAS-CoV-1
associé à un syndrome respiratoire aigu sévère en 2012, le Middle East Respiratory
Syndrome-Related Coronavirus (MERS-CoV), provoquant le syndrome respiratoire du
moyen orient. Fin 2019, un nouveau coronavirus, le SRAS CoV-2, responsable de la
COVID 19, Il s’agit d’un Beta-coronavirus (clade B), comme le SRAS-CoV 1 (Wu et al.,
2020).
La classification Selon ICTV, 2019 est :
• Type : Virus
• Royaume : Riboviria
• Règne : Orthornavirae
• Embranchement : Pisuviricota
• Classe : Pisoniviricetes
• Ordre : Nidovirales

• Sous-ordre : Cornidovirineae
• Famille : Coronaviridae
• Sous-famille : Orthocoronavirinae
• Genre : Betacoronavirus
• Sous-genre : Sarbecovirus
• Espèce : SRASr-CoV
• Forme : SRAS-CoV-2
I.3.2 La structure
Le SRAS-CoV-2 est un virus à ARN, enveloppé, plutôt sphérique, d’un diamètre

compris entre 80 et 200nm, les protéines N, étroitement liées à l’acide ribonucléique (ARN)
génomique, forment la nucléocapside. Les protéines M et E constituent la matrice et
l’enveloppe (Détails du taxon | ICTV, s. d.). La protéine de pointe Spike (protéine S) est le
médiateur de la liaison au récepteur et de la fusion membranaire, Cette protéine est la cible
commune des anticorps neutralisants et des vaccins(GTX135684-pro-100μg | SARS-CoV-2
(COVID-19) Spike S2 (ECD) protein, s. d.).
Figure 2: La structure du SARS-CoV 2 (SARS-CoV-2 - Antigènes (Protéines et peptides)

pour la recherche et, s. d.)

I.4. Le cycle de vie et de réplication
Le SRAS-CoV-2 se lie via la protéine S au récepteur ACE2 humain exprimé à la surface

des cellules cibles, et pénètre ensuite par endocytose ou par fusion directe à la membrane
plasmique, la sérine protéase TMPRSS2 est également impliquée dans l’étape d’entrée du virus,
en permettant l’amorçage de la protéine S. Après libération de l’ARN génomique dans le
cytoplasme, celui-ci est traduit en polypeptides, qui, clivés par la protéase virale, permettent de
générer les protéines non-structurales, qui forment le complexe de réplication/transcription
(réplicase). L’ARN génomique et les protéines structurales vont alors s’assembler dans le
réticulum endoplasmique, les virus néoformés sont alors transportés via des vésicules de
transport vers l’appareil de Golgi puis vers la surface cellulaire, où ils sont libérés (Bailly et al.,
2022).
Figure 3:Le cycle de réplication du SRAS-CoV 2avec les différentes molécules et leurs cibles
(Antar & Atef, 2021)

I.5 La transmission
La propagation de personne à personne est le principal mode de transmission du SRAS-CoV-
2. Elle a lieu essentiellement par le biais de gouttelettes produites lorsqu’on tousse, éternue ou
parle. Une personne peut être infectée si ces gouttelettes rentrent directement en contact avec
ses muqueuses ou si elle touche une surface infectée, puis touche ses yeux, son nez ou sa bouche
(Mouton, 2020).
I.6 Physiopathologie du sars-cov-2

Dès le début de l'épidémie COVID-19, l'analyse des lésions histologiques et
cytologiques a largement contribué à la compréhension des mécanismes physiopathologiques
impliqués dans les formes sévères de l'infection, notamment via la mise en évidence de
multiples caillots sanguins et de lésions de « dommage alvéolaire diffus ». Des découvertes qui
ont abouti à la mise en place de stratégies thérapeutiques fondées, en particulier, sur le recours
aux anticoagulants et aux corticoïdes (Antar & Atef, 2021). L’entrée du virus dans la cellule
cible nécessite la fixation d’une portion de la région S1 du spicule, appelée domaine de RBD,
au récepteur cellulaire qui est une métalloprotéase : l’enzyme de conversion de l’angiotensine
de type 2 qui, pour pénétrer dans la cellule hôte, dégrade l’angiotensine 2 en angiotensine 1-7
((PDF) La séro-prévalence Covid 19 chez les donneurs de sang dans la région SOUSS MASSA
du MAROC, s. d.). La liaison de là sous unité S1 à ACE-2 entraîne une modification de la
configuration de la protéine S qui expose S2 et permet l’endocytose puis la fusion membranaire
(Bonny et al., 2020). Cette fusion nécessite l’activation de la protéine S par le clivage au niveau
de la jonction S1/S2 et d’un autre site de S2, notamment réalisée par la protéase
transmembranaire TMPRSS2 (transmembrane protease serine 2). La TMPRSS2 est l’enzyme
présent à la surface de la cellule hôte qui intervient lors du processus de pénétration du virus,
coopérant avec l’ACE-2 pour former un complexe clé-serrure (COVID-19 Résumé des attitudes
et de l’adoption du vaccin, 2010) .
L’ACE-2 étant une protéine présente en grande quantité dans plusieurs cellules d’organes
comme le cœur, les vaisseaux, les intestins, les pneumocytes de type 2 et macrophages, les
reins, les testicules, et le cerveau, donne une explication sur la complexité de la grippe à
SARSCoV-2, la variabilité des tableaux cliniques et les complications liées au COVID-19.
Dans l’organisme, il a pour rôle la dégradation de l’angiotensine II afin de limiter les effets
négatifs tels que la vasoconstriction, l’inflammation la thrombose liée à la liaison aux récepteurs

angiotensine I. Ainsi, l’entrée du SARS-CoV-2 dans la cellule inhibe les récepteurs ACE-2 qui
n’auront plus la capacité de dégrader l’angiotensine II et de ce fait déclenchera une série
d’inflammation. Cette inflammation est causée par une cascade de cytokines avec pour point
de départ le site d’infection. Les cytokines libérées vont se propager à travers la circulation
sanguine dans tout. La libération excessive de cytokines en grand nombre conduira à la
diminution considérable de la production des interférons de type I (IFN-I) et sera responsable
de la septicémie virale, le syndrome de détresse respiratoire aigüe (SARS), l’insuffisance
respiratoire, la défaillance d’organe et la mort l’organisme (Combadière, 2020).
I.7 Les symptômes de la maladie à COVID-19
Selon le Centre pour le contrôle et la prévention des catastrophes en 2020, les
symptômes du COVID-19 peuvent inclure : fièvre, toux, difficultés respiratoires, frissons,
douleurs musculaires, maux de gorge, nouvelle perte de goût ou de l’odorat.
I.7.1 La période d'incubation
La durée entre l'exposition au virus et la manifestation des premiers symptômes, est
estimée entre 2 et 14 jours après un contact à risque. Pendant cette période le sujet peut être
contagieux (Lumni, 2020).
I.8. LE DIAGNOSTIC DE COVID-19

I .8.1 Le diagnostic biologique moléculaire direct du COVID-19
Le diagnostic moléculaire du COVID-19 repose sur des tests d’amplification des acides
nucléiques, dont la technique de RT-PCR en temps réel est recommandée en dépit de sa grande
sensibilité et spécificité (OMS, 2020).
Les techniques de séquençage du génome du virus comme le NGS ont été essentielles à
l’identification initiale du SRAS-CoV-2 et seront utiles dans le futur pour l’identification des
différentes mutations virales (Zhou et al., 2020).
I.8.2 Le diagnostic biologique indirect ou sérologique du COVID-19

La production d'IgM débuterait à partir du 5eme jour suivant l'apparition des
symptômes ; deviendrait détectable chez certains patients à partir du 7eme jour et chez la totalité
des patients au cours de la 2eme semaine après l'apparition des symptômes.
La production des IgG survient légèrement après celle des IgM, mais peut également
être fréquemment quasi concomitante de cette dernière, les taux d'anticorps semblent plus

élevés pour les cas les plus sévères, il a également été rapporté des cas avec des productions
d'anticorps plus tardives, au-delà du 15eme jour après l'apparition des symptômes, et jusqu'à 30
jours après l'infection, notamment chez des patients asymptomatiques ou paucisymptomatiques
(Laëtitia, 2020). D'après l'analyse de l'épitope antigénique du SRAS-CoV-1 et du SRAS-CoV-
2 (Coronavirus disease (COVID-19), s. d.).
Les protéines N et S devraient être des cibles potentielles d'anticorps avec un grand
nombre d'épitopes pour l'induction de la réponse des lymphocytes T et de la réponse des
lymphocytes B, ce qui pourrait être utile pour le développement des vaccins et l'induction de
réponses immunitaires à long terme (Distinctive Roles of Furin and TMPRSS2 in SARS-CoV-2
Infectivity | Journal of Virology, s. d.).
I.8.3. Les tests sérologiques ou immunologiques

Les tests sérologiques sont définis comme une analyse du sérum ou du plasma sanguin
et ont été étendus sur d'autres fluides biologiques pour la détection de la présence d’anticorps
IgM, IgA et IgG. Ils offrent certains avantages par rapport à la RT-PCR (Shukla et al., s. d.):
• Les tests sérologiques détectent les anticorps qui sont connus pour être beaucoup plus
stables que l'ARN viral. En conséquence, les échantillons sérologiques IgM/IgG sont moins
sensibles à la détérioration pendant le prélèvement, le transport, le stockage que les échantillons
destinés à la RT-PCR.
• Les anticorps sont généralement uniformément distribués dans le sang, les échantillons
sérologiques ont des variations beaucoup moins importantes que les échantillons d'ARN viral
issus des prélèvements nasopharyngés et peuvent être facilement collectés avec une gêne
mineure liée au prélèvement pour le patient.
• Les tests sérologiques peuvent détecter une infection ancienne car les anticorps
spécifiques du virus peuvent persister dans le sang pendant plusieurs semaines ou mois après
le début des symptômes (Dalour, 2020).
I.8.3.1 Test immuno-enzymatique (ELISA).

C’est une technique immuno-enzymatique de détection qui se fait en laboratoire et qui
permet de visualiser une réaction antigène-anticorps grâce à une réaction colorée produite par
l’action sur un substrat d’une enzyme préalablement fixée à l’anticorps. L’utilisation
d’anticorps monoclonaux rend la détection spécifique et la réalisation d’une gamme en

parallèle permettant de quantifier les anticorps du patient présents dans le sang (Canada,
2021).
Une réaction enzymatique rend toutefois cette technique dépendante de la température,

du pH et de l’éclairement. Concrètement, l’ELISA nécessite la réalisation de différentes étapes
successives : antigène spécifique du virus SRAS-CoV-2 (la protéine N contenue dans la
nucléocapside virale ou le récepteur de liaison du virus dit RBD (Receptor Binding Domain)
est fixé pendant une nuit dans le fond d’un puit d’une plaque 96 puits (« coating ») ; les
anticorps présents dans l’échantillon de plasma du patient vont se fixer spécifiquement sur
l’antigène. Un anticorps de détection va ensuite fixer les anticorps humains à doser. Ces
anticorps de détection sont couplés à une enzyme qui en présence de son substrat le transforme
en produit de réaction détectable et mesurable grâce à l’apparition d’une coloration.
L’intensité de celle-ci est proportionnelle à la quantité d’enzyme présent et donc à la
concentration d’anticorps recherché.(Dalour, 2020)
Figure 4:Test ELISA détectant les anticorps (A) ou les antigènes (B) (Carter et al., 2020)
Limite du dosage (ELISA IgG DIATHEVA KIT)
• Pour usage en laboratoire uniquement

• Aucun médicament n'a été étudié pour l'interférence du dosage
• Toute variation du diluant de l'échantillon, de l'opérateur, de la technique de pipetage, de la

technique de lavage, du temps ou de la température d'incubation, de l'âge du kit peut entraîner
des variations dans la formation de complexes immuns.
• Patients infectés par le nouveau coronavirus (COVID-19) la première semaine de l'apparition

dont le nouveau coronavirus IgG peut être négatif. De plus, les patients présentant une faible
auto-immunité ou d'autres maladies qui affectent la fonction auto immune, la défaillance
d'organes systémiques importants et l'utilisation de médicaments qui suppriment la fonction
immunitaire peuvent également entraîner des résultats négatifs des nouvelles IgG de
coronavirus. Une infection antérieure du SRAS ou d'une autre souche de coronavirus peut
provoquer une légère IgG positive compte tenu de souches similaires ou différentes.
• Le test ne peut pas être utilisé seul pour un diagnostic clinique et le résultat doit toujours être
évalué avec les données des antécédents médicaux du patient et d'autres investigations
diagnostiques.
Les résultats faussement négatifs peuvent résulter de :
• Collecte ou stockage incorrect de l'échantillon
• Dégradation secondaire des anticorps pendant le transport/stockage
• Non-respect des instructions d'utilisation
Les résultats faussement positifs peuvent résulter de :
• Contamination lors du prélèvement, de la manipulation ou de la préparation des échantillons
• Contamination lors de la manipulation du produit
• Contamination des puits lors des étapes de lavage de la plaque
I.8.3.2 test immunochromatographique (TDR)

Le kit de test rapide de détection des anticorps IgG-IgM combinés SRAS-CoV-2 est
conçu et fabriqué par Genrui Biotech Inc. Il s'agit d'un test immunochromatographique
qualitatif à flux latéral permettant de déterminer rapidement la présence ou l'absence
d'anticorps anti-SRAS-CoV-2-IgM et anti-SRAS-CoV-2-IgG dans des échantillons

humains (sang total, sérum et plasma). Le kit de test est fourni avec une cartouche de test,
un tampon de dilution d'échantillon et une notice d'utilisation. La cartouche de test comporte
trois bandes de détection, dont une bande de contrôle distale qui apparaît lorsque
l'échantillon s'est écoulé à l'extrémité de la bande de test. La présence des anticorps IgG et
IgM du SARS-CoV-2 est indiquée par une ligne rouge/violette dans la région spécifique
indiquée sur le dispositif. La bandelette de test rapide SRAS-CoV-2 à anticorps IgG-IgM
combinés, comme le montre la Figure 5, comporte deux anticorps monoclonaux anti-
humains de souris (anti-IgG et anti-IgM) disposés sur deux lignes de test séparées. Un
antigène de surface du SRAS-CoV-2 qui peut se lier spécifiquement aux anticorps du
SRAS-CoV-2 (y compris les IgM et les IgG) est conjugué à des nanoparticules d'or (AuNP)
colloïdal et pulvérisé sur des tampons de conjugaison. Les conjugués AuNP-IgG de lapin
ont également été pulvérisés sur des tampons de conjugaison pour se lier à l'anticorps IgG
antilapin qui est immobilisé sur la ligne de contrôle (Figure 5 A) (Li et al., 2020).
Figure 5:Illustration schématique du test rapide de détection des anticorps IgM-IgG combinés
contre le SRAS-CoV-2 (Li et al., 2020).
A, Schéma du dispositif de détection ; B, illustration des différents résultats du test ; C,
signifie ligne de contrôle ; G, signifie ligne d'IgG ; M, signifie ligne d'IgM.

Avantages
Les tests de diagnostic rapide sérologique présentent plusieurs avantages telles que :
- L’utilisation facile des TDR ;
- Le dépistage décentralisé de la COVID-19,

- Pour déterminer la séroprévalence de la COVID-19 dans les communautés ;
- Les résultats rapides en 15-30minutes.
Limites :
(1) Ce kit de test est destiné à un usage diagnostic in vitro uniquement. Les résultats ne
peuvent pas être utilisés comme base du diagnostic. Un jugement global doit être porté en
combinaison avec symptômes cliniques, conditions épidémiologiques et autres données
cliniques.
(2) Un résultat de test négatif n'exclut pas la possibilité d'un nouveau coronavirus infection.
(3). Ce produit ne peut détecter que qualitativement le nouveau coronavirus IgM, IgG
anticorps dans l'échantillon et ne peut pas déterminer la concentration de l'anticorps dans
l'échantillon.
(4) Le diagnostic et le traitement peuvent non seulement reposer sur ce résultat de test, en
tenant compte l'histoire clinique et d'autres résultats de tests de laboratoire.
(5) Pour un usage professionnel médical uniquement.
I.9. Caractéristiques du test ELISA IgG DIATHEVA
Performances analytiques
La sensibilité analytique qui définit la dilution maximale à laquelle un échantillon positif, a

été calculé en utilisant la valeur moyenne de 10 échantillons positifs et 10 échantillons négatifs
et exprimée en titre d'anticorps. La sensibilité analytique déterminée pour le kit COVID-19
ELISA IgG DIATHEVA est égale à 1 600 (ou Log 1 600 = 3,20).
Spécificité analytique (réactivité croisée) : pour l'évaluation de la réactivité croisée contre

d'autres maladies, 18 échantillons provenant de patients atteints des infections suivantes : VIH1

et 2, VIH1 VHA, VHB, VHC et Pneumocystose ont été testés. Aucune réactivité croisée n'a été
observée dans ces échantillons, la spécificité analytique pour le kit COVID-19 ELISA IgG
DIATHEVA est de 100%.
Performances diagnostiques
Sensibilité diagnostique : Pour l'évaluation DSe (sensibilité diagnostique), 167 échantillons

prélevés sur des individus avec ou sans symptômes cliniques, qui ont eu des résultats cliniques
positifs pour le test RT-PCR, ont été testés. 50 échantillons positifs ont également été évalués
avec un test ELISA anti COVID-19 IgG marqué CE-IVD et 10 échantillons positifs ont
également été déterminés avec CLIA IgG. 165 échantillons montrent des résultats positifs
conformément à la fois au le test moléculaire et à l'immunodosage utilisé comme standard de
référence. La sensibilité diagnostique (DSe) déterminée pour le kit COVID-19 ELISA IgG
DIATHEVA est de 98,80 %. La valeur prédictive positive est de 97,06 %.
La valeur prédictive positive (VPP) indique les chances qu’un test, lorsqu’il est positif, soit
réellement positif et non faussement positif. La VPP dépend des autres caractéristiques du test,
particulièrement de la spécificité, mais encore beaucoup plus de la probabilité pré-test du
diagnostic. Lorsqu’une maladie ou infection est rare et donc sa probabilité pré-test faible, un
résultat positif sera beaucoup plus souvent faussement positif que si cette infection était
fréquente dans le groupe étudié (UCLOUVAIN FDP Virologie, s. d.2016).
La valeur prédictive négative (VPN) indique les chances qu’un test, lorsqu’il est négatif, soit
réellement négatif et non faussement négatif. De même que dans le cas de la VPP, la VPN est
fortement dépendante de la probabilité pré-test du diagnostic (UCLOUVAIN FDP Virologie,
s. d.).
Le coefficient Kappa de Cohen (K) permet de chiffrer l’accord entre deux ou plusieurs
observateurs ou techniques lorsque les jugements sont qualitatifs dans le but de déceler et de
quantifier les désaccords pour les corriger ou les interpréter. L’accord observé entre un ou
plusieurs jugements qualitatifs, résulte de la somme d’une composante « aléatoire » (hasard)
et d’une composante d’accord « véritable » (réel). Pour contrôler ce hasard, le coefficient
Kappa propose de chiffrer l’intensité ou la qualité de l’accord réel. C’est un indice qui permet
de « retirer » la portion de hasard ou de subjectivité de l’accord entre les techniques.
(BERGERI & Michel, 2002).
CHAPITRE II : MATERIEL ET
METHODES

CHAPITRE II : MATERIEL ET METHODES
II.1 CADRE DE L’ETUDE
II.1.1 Type d’étude
Il s’agissait d’une étude retrospective transversale.
II.1.2 Lieu d’étude
L'étude s’est déroulée au Laboratoire des Grandes Epidémies Tropicales (LAGET), pour une
évaluation du contrôle qualité des tests sérologiques. Le laboratoire des grandes épidémies
tropicales (LAGET), né sous la pression de covid-19, inauguré le 12 décembre à N'Djamena,
va accroître les capacités de dépistage du pays en matière de Covid-19. Financé par l’Agence
italienne pour la coopération au développement (AICS), le laboratoire des grandes épidémies
tropicales (LAGET) au Tchad assure jusqu’à 400 tests par jour soit 4 fois plus que par le passé.
C’est une nouvelle infrastructure, logée au sein du centre Hospitalier universitaire le BON-
SAMARITAIN de Walia, à N'Dajmena, permet dans le même temps de suivre les malades
atteints du sida, des hépatites B et C, et du papillomavirus. Ce laboratoire va intégrer de façon
progressive un réseau de recherche biomédicale et de suivi de patients et va également accueillir
des sessions de formation des médecins biologistes, techniciens de laboratoire ainsi que les
étudiants de la faculté de médecine de N'Djamena.
II.1.3 Période d’étude
Notre étude a durée quatre (04) mois allant de Avril 2022 à juillet 2022.
II.2 Population d’étude avec les critères d’inclusion et d’exclusion

II.2.1. Population d’étude
Notre étude s’est intéressée aux échantillons des patients qui se sont fait diagnostic de la
COVID-19 pendant l’années 2021 à N’Djamena.
II.2.1.1 Critères de sélection des échantillons

 Critères d’inclusion :
- Sérum inclus dans l’étude sur la séroprévalence du COVID-19 à N’Djamena.
- Des sérums provenant de dix (10) hôpitaux de N’Djamena datant de l’année 2021.
 Critères d’exclusion :
- Quantité insuffisant de sérum
- La qualité du sérum (sérum hémolysé)
- Serum mal conservé
- Résultats indéterminés
II.2.1.2 Échantillonnage
Les échantillons issus de dix (10) hôpitaux de N’Djamena, étaient stockés au niveau de l’Institut
de Recherche en Elevage pour le Développement (IRED). Nous avions récupéré au total 198
échantillons. C’était des échantillons obtenus par prélèvement sanguin au niveau du pli du
coude. Les techniques utilisées étaient le dosage immuno-enzymatique (ELISA) et le dosage
immuno-chromatographique (TDR).
II.2.1.3 Taille minimal d’échantillon
Afin de s’assurer que l’échantillonnage soit représentatif, le calcul de la taille
minimale de l’échantillon a été faite à partir de la formule de LORENZ suivante :
n = t² × p (1-p) /m²
Soit : n = taille d'échantillon requise, t = niveau de confiance à 95% (valeur

type de 1,96), p = prévalence de la pathologie, m = marge d'erreur à 5% (valeur
type de 0,05).
Selon l’OMS la prévalence de la maladie à Coronavirus 2019 au Tchad

était de 0,04 % en Janvier 2022.
Après calcul, la taille obtenue était de 59 échantillons
II.2.2 Matériel
II.2.2.2-Matériels pour le test rapide (TDR)
Le kit de test était composé d'une carte de test, d'un diluant d'échantillon et des instructions.
(1) La carte de test était compose du logement de la carte et de la bandelette de test. La

bandelette de test contenait un tampon d'échantillon, fibre de verre (enduit d'or colloïdal -
conjugués d'IgM anti-humain de rat, conjugués or colloïdal-IgG anti-humain de rat,
conjugués or colloïdal-IgG de lapin), membrane de nitrocellulose (NC) la zone de test (T)

était recouverte d'un nouvel antigène de coronavirus, la zone de contrôle qualité (C) était
induite d'IgG de chèvre anti-lapin, de papier absorbant.
(2) Diluant d'échantillon : le composant principal était le tampon phosphate (PBS).
(3) Pipettes et pointes de pipettes : 100 uL.
(4) Minuterie : Chronométrer l’heure de la lecture des résultats.
II.3 PROCEDURES
II.3.1. Procédure de test ÉLISA
1. Stockage des échantillons
Les échantillons étaient stockés entre 2 et 8 °C pendant 24 heures ou pendant sept jours
maximum ou congelés jusqu'à six mois. Pour des périodes plus longues, les échantillons étaient
conservés congelés en petites aliquotes afin d’éviter les cycles répétitifs de congélation et de
décongélation.
2. Préparation des réactifs
Tampon B (Wash Buffer 10X Concentré) : nous avions dilué 100 ml de tampon B à 1 000 ml
avec de l'eau distillée. Lorsque les cristaux se sont formés dans le concentré, nous avions
réchauffé à température ambiante et mélangé doucement jusqu'à ce que les cristaux soient
complètement dissous.
3. Préparation des échantillons
Les échantillons ont été vortexé pendant 3 à 5 secondes et tourner avant de les prélever pour
dilution.
4. Exécution du test
Tous les réactifs et échantillons ont été équilibrés pour revenir à température ambiante avant
utilisation et mélangés doucement. Une fois la procédure commencée, toutes les étapes étaient
complétées sans interruption. Temps d'exécution du test : 140 minutes.
1. nous avions extrayé le nombre souhaité de bandes du sachet en aluminium qui

contenait la plaque et placé dans le support.

• nous avions distribué 100 µl/puits de contrôle négatif dans des puits en double.
• nous avions distribué 100 µl/puits de contrôle positif dans un seul puits.
• Pour le blanc de réactif, nous avions distribué 100 µl de diluant d'échantillon (tampon
A) dans un puits en double.
2. Préparation de dilution 1 :100v/v des échantillons en ajoutant 1 µl d'échantillon à 99

µl de tampon A dans les tubes stériles. Distribuer 100µl/puits de sérums dilués à 1 :100v/v dans
les puits appropriés.
Tableau 3 : Configuration des tests

Rangée Bande 1 Bande 2 Bande 3
A contrôle négatif (CN) Echantillon 4 Echantillon 10
B Contrôle négatif (CN) Echantillon 5 Echantillon 11
C Blanc Echantillon 6 Echantillon 12
D Blanc Echantillon 7 Echantillon 13
E Contrôle positif (CP) Echantillon 8 Echantillon 14
F Echantillon 1 Echantillon 9 Echantillon 15
G Echantillon 2 Echantillon 10 Echantillon 16
H Echantillon 3 Echantillon 11 Echantillon 17
3. les barrettes ou la plaque a été couvert avec du papier aluminium et incuber à 37±1°C
pendant 60±5 minutes ;
4. le lavage des barrettes de microtitration s’est fait cinq fois avec 350 µl de tampon B
reconstitué. Avant de commencer la phase de lavage, nous avions équilibré la laveuse avec le
tampon B de lavage une fois. Nous avions réglé l'instrument comme indiqué dans le tableau 3

Tableau 4 : Réglage pour le lave-linge automatisé
Lavage des bandes avec laveur automatisé
Nombre de cycles 5
Formulaire Assiette/ (définir le nombre de bandes à
laver)
Volume pour puits 350 µl/puits
Amorçage avant lavage Oui
5. Distribution de 100µl/puits d'anticorps secondaire conjugué à la HRP.
6. les barrettes ou la plaque a été couvert avec une feuille d'aluminium et incuber à
37°±1C pendant 60± 5 minutes.
7. Lavage des bandelettes de microtitration cinq fois comme au point 5
8. Ajout de 100 µl/puits de solution ABTS
9. couverture des barrettes de microtitration et incubation à température ambiante (22-

27°C) pendant 20 ± 2 minutes
10. La lecture de l'absorbance a été fait à 405 ± 5 nm à l'aide d'un lecteur de microplaques
et agité pendant 3 secondes avant la lecture.
5. Contrôles qualité
Le kit comprend des contrôles de qualité qui permettent l'interprétation correcte des
résultats Pour être valide, le test doit répondre aux CRITÈRES DE VALIDITÉ DU TEST.
Pour assurer la validité des résultats, chaque test doit inclure à la fois des contrôles négatifs
(puits doubles) et positifs (puits simples) et un blanc (puits doubles).
Vérifier que les valeurs indiquées dans le tableau 4 sont satisfaites avant de procéder à
l'interprétation des résultats.

Tableau 1:Critères de validité du test
Blanc ≤ 0,16 DO
(ABS à 405 nm moyenne des deux répétitions)
Contrôle négatif (NC)

(ABS à 405 nm moyenne des deux répétitions) ≤0,10 DO (après soustraction du
blanc)
Contrôle positif (PC)
(ABS à 405nm) ≥ 1,00 DO
Recommandation : Si les conditions ci-dessus ne sont pas trouvées, le test n’est pas valide,
la technique peut être suspect et le test doit être répètes à la suite d’un examen approfondi
des informations sur le produit.
6. Analyse des données : calcul Cut-off (CO) (seuil)
Les résultats du test sont calculés à travers une valeur seuil (Co) déterminée à l'aide de la
formule ci-dessous qui est basée sur la valeur moyenne du Contrôle Négatif (NC après
soustraction du blanc).
Contrôle négatif (abs une moyenne 405 nm) - Blanc (abs une moyenne 405 nm) = NC
Cut-Off (Co)= NC+ 0.480
La valeur obtenue est utilisée pour l'interprétation des résultats comme décrit ci-dessous
7. Analyse des données : calcul des résultats
Les résultats sont interprétés en calculant le rapport entre l'absorbance de l'échantillon à

405nm (après soustraction de la valeur moyenne du blanc) et la valeur de coupure (Co)
déterminée comme décrit ci-dessus (Calcul de CUT-OFF) avec la formule suivante :
S/Co=Échantillon (ABS à 405nm) / Cut-off (Co)

Remarque : si les échantillons sont testés en double, faire la moyenne de deux absorbances.
La variation d’absorbance entre ces deux échantillons reproduit du même échantillon ne
sont pas acceptés s’il est supérieur à 0,250 abs à 405nm. Réutilisez l’échantillon.
Les résultats doivent être interprétés en comparant le rapport S/Co avec les plages indiquées
dans le tableau 5.
Tableau 2:Interprétation des résultats
NÉGATIF ÉQUIVOQUE (*) POSITIF
S/Co ≤ 1,0 1,0 <S / Co <1,5 S/Co ≥ 1,5
Remarque : en cas de résultat équivoque, répétez le test si l’échantillon est toujours

équivoque il est recommandé de prendre un nouvel échantillon sérum/plasma après 4 à 5
jours et répéter le test.
II.3.2 Procédure de test rapide (TDR)
1 Préparer
(a) L'échantillon d'essai et les réactifs requis des conditions de stockage ont été équilibré à
température ambiante.
b) la carte de test du sac d'emballage a été retiré et posé à plat sur une surface sèche.
2 Échantillonnage :
(a) Échantillons de sérum/plasma : nous avions prélevé 10 μL d'échantillons de sérum ou

de plasma et nous les avions ajouté dans le puits d'échantillon, puis ajouté verticalement 4
gouttes (environ 100 μL) de diluant d'échantillon.
(b) Après avoir ajouté l'échantillon, l'échantillon positif peut être détecté dans les 15
minutes. C’est confirmé par l'expérience que le temps de réaction (calculé après addition
de l’échantillon) dépassant 15 minutes affectera l'observation des résultats du test.
Pour illustrer les résultats de tests réels, la Figure 6 montre une photo des résultats
de tests pour six cartouches de test différentes provenant de six patients, qui représentent

plusieurs types de résultats différents. Dans la cartouche n° 13, la photo représente la
détection d'IgM et d'IgG ; dans la cartouche n° 14, détection d'IgM uniquement en faible
concentration ; dans la cartouche n° 15, pas d'IgM ni d'IgG ; dans la cartouche n° 16,
détection d'IgG uniquement en faible concentration ; dans la cartouche n° 17, des IgG
uniquement en forte concentration et dans la cartouche n° 18, des IgM uniquement en forte
concentration dans le sang des patients, respectivement.
Figure 6:Photo représentative des différents résultats d'analyse sanguine des patients.
II.4 CALCULS DES CARACTÉRISTIQUES D’UN TEST BIOLOGIQUE
Après analyse, un tableau de contingence (tableau IV) a été classé en fonction de l’état de santé
de la population étudiée, selon les résultats obtenus par le test de référence ELISA IgG
DIATHEVA KIT et le test rapide anticorps étudié (S+/S-) (Delacour et al., 2005).

Tableau 3:Tableau de contingence d’un échantillon de N sujets classés en fonction de leur état
de santé selon une méthode de référence et le test étudié.
Méthode de référence
Malade (M+) Non malade (M-) Total

Classé malade (S+) Vrai positif (VP) Faux positif (FP) VP + FP
Faux négatif (FN) Vrai négatif (VN) FN + VN
Test étudié Classé non malade (S-)
Total VP + FN FP + VN N
➢ Calcul des caractéristiques intrinsèques du test

- La sensibilité (Se) du test a été estimée par la proportion de vrais positifs chez les
malades (Delacour et al., 2005), soit :
✓ Interprétation des résultats de la sensibilité : 0 ≤ Se ≤ 1 ou Se ≤100%

- La spécificité (Sp) du test a été estimée par la proportion de vrais négatifs chez les non malades
(Delacour et al., 2005), soit :
✓ Interprétation des résultats de la spécificité : 0 ≤ Sp ≤1 ou Sp ≤100%
➢ Calcul des caractéristiques extrinsèques du test

- La valeur prédictive positive (VPP) a été estimée par la proportion de vrais positifs parmi
les sujets S+ (Delacour et al., 2005) soit :
✓ Interprétation des résultats de VPP : 0 ≤ VPP ≤1 ou VPP≤100%

- La valeur prédictive négative (VPN) a été estimée par la proportion de vrais négatifs parmi
les sujets S- (Delacour et al., 2005), soit :
✓ Interprétation des résultats de VPN : 0≤VPN≤1 ou VPN≤100% ➢ Calcul du coefficient

Kappa de Cohen
Le coefficient kappa de Cohen (k) a été calculé afin de mesurer la concordance ajustée entre
les résultats obtenus par ELISA et le TDR. Le calcul a été fait sur le logiciel SPSS version 21
avec une marge d’erreur de 95%.
✓ Interprétation des résultats du coefficient k
Tableau 4:Apport diagnostic d’un test en fonction du coefficient Kappa
Accord Kappa
Excellent ≥ 0,81
Bon 0,61 – 0,80
Modéré 0,21 – 0,60
Mauvais 0,0 – 0,20
Très mauvais < 0,0
II.5 Analyses statistiques

Nos données recueillies ont été saisies dans le logiciel Excel et exportées dans le logiciel
SPSS_18.0 pour les analyses. Les proportions ont été estimées avec les intervalles de
confiance. Le p-value a été calculé afin de déterminer l’existence d’un lien statistiquement
significatif entre les variables d’étude.
II.6 Considérations éthiques

Après obtention de l’accord des directeurs de recherche et de l’Université Evangélique
du Cameroun (UEC), une copie du protocole a été déposée à la direction du CHU LE BON
SAMARITAIN de WALIA pour l’obtention des autorisations administratives. Cette étude
s'inscrit dans le cadre des mesures de surveillance de la santé publique en vue d’une intervention

en cas d'urgence. Toutefois, le protocole de l’étude est soumis au Comité national de bioéthique
du Tchad (CNBT) pour approbation.

CHAPITRE III : RESULTATS ET
DISCUSSION

CHAPITRE III : RESULTATS ET DISCUSSION
III- RÉSULTATS
Description générale de l’étude
Nous avions testé 198 échantillons au laboratoire des Grands Epidémies Tropicales (LAGET)
par les tests de diagnostics rapides et le test immuno-enzymatique (ELISA).
III.2. CARACTERISTIQUES CLINIQUES

 Les personnes vaccinées
Les personnes non-vaccinées étaient les plus représentées dans la population d’étude comme le
montre le tableau ci-dessous.
Tableau 5:les personnes vaccinées
vaccin Effectifs Pourcentage %

Non 195 98,5
Oui 3 1,5
Total 198 100,0
 Ancienne positivité connue à COVID-19

Les anciens cas représentaient 99% de la population d’étude.
Tableau 6:Ancienne positivité connue à COVID-19
Diagnostic positif Effectifs Pourcentage %

Non 196 99,0
Oui 2 1,0
Total 198 100,0
 Les personnes ayant été en contact avec un malade.

Les personnes ayant été en contact avec un malade représentent 25,3% contre 74,7% qui n’ont
pas été en contacts avec un malade.

Tableau 7:Les personnes ayant été en contact avec un malade.
contact Effectifs Pourcentage %

Non 148 74,7
Oui 50 25,3
Total 198 100,0
 Répartition selon les symptômes
La fièvre était le seul symptôme retrouve dans la population d’étude.
Tableau 8:Répartition selon les symptômes
Fièvre
Non 187 (94,4%)
Oui 11(5,55%)
Total 198
 Répartition selon les conditions médicales

Globalement, les peu de participants dans cette étude présentaient des affections médicales
(6,06%) ; l’asthme (1,53%) et le diabète (0,005%) étaient les seules comorbidités relevées.
Tableau 9:Répartition selon les comorbidités
Affections médicales
Asthme Diabète
préexistantes
Oui 12 (6,06%) 3 (1,53%) 1 (0,005) %
Non 186 (93,94%) 195 (98,47%) 197 (99,99%)
TOTAL 198 198 198

III.3. La répartition des résultats au SRAS-C0V-2 par le test immuno-enzymatique
ELISA IgG et le test de diagnostic rapide (TDR)
Le tableau 18 nous montre la répartition des résultats ELISA avec une positivité de 84,8% et
une négativité de 15,2%.
Tableau 10:Répartition des Résultats de cas total avec le test ELISA
Résultats Effectifs Pourcentage%

Neg 30 15,2
Pos 168 84,8
Total 198 100,0
Le tableau 19 nous montre la répartition des résultats TDR avec une positivité de 54,0% et
une négativité de 46%.
Tableau 11:Répartition des cas du test de diagnostic rapide (TDR
Effectifs Pourcentage%
Neg 91 46,0
Pos 107 54,0
Total 198 100,0

ELISA IgG par tranche d’âge.
La figure 8 nous montre la répartition des résultats ELISA. Selon les tranches d’âge, la
population la plus impactée par la covid-19 est compris entre 16 et 60 ans soit un pourcentage
de 86%.

Repartition des ressultats ELISA en fonction de l'age
70
60
50
40
30
20
10
0
0-15 16-30 31-45 46-60 >60
Résultat Neg Résultat Pos
Figure 7: Répartition des résultats ELISA en fonction de l’âge.

La figure 9 nous montre la répartition des résultats TDR
Repartition des resultats du TDR en fonction de l'age
40
35
30
25
20
15
10
5
0
0-15 16-30 31-45 46-60 >60
IgG Neg IgG Pos
Figure 8: Répartition du test de diagnostic rapide (TDR) par Age

ELISA IgG et du test de diagnostic rapide (TDR) en fonction du sexe
III.5.1 Distribution d’ELISA en fonction du sexe
Le tableau 22 et la figure 9 nous montre une répartition des résultats ELISA dans laquelle la
population de sexe féminin présente une positivité élevé 52% d’anticorps IgG par rapport à la
population de sexe masculin 47%.

Tableau 12:Répartition des résultats ELISA en fonction du sexe
Résultat
Effectif
Neg Pos Total
Sexe Féminin 18 88 106
Masculin 12 80 92
Total 30 168 198
III.5.2 Distribution du TDR en fonction du sexe

D’après le tableau ci-dessous, le taux de positivité est de 61(56%) pour le sexe féminin contre
46(42%) pour le sexe masculin.
Tableau 13: Répartition des résultats du TDR en fonction du sexe
IgG
Effectif
Neg Pos Total
Sexe Féminin 45 61 106
Masculin 46 46 92
Total 91 107 198
III.6 Evaluation de la concordance positive et négative des résultats des tests ELISA IgG
et le test de diagnostic rapide (TDR).
 Caractéristiques intrinsèques
La répartition des cas positifs et négatifs détectés à l’aide du test de diagnostic rapide en
fonction du test ELISA IgG est présentée dans le tableau 24.
Tableau 14:Evaluation des résultats de test rapide TDR en fonction test ELISA
ELISA Sensibilité% Spécificité%

(IC95%) (IC95%)
Variable pos neg total
pos 101 6 107

TDR 60 (57-62) 80 (79-89)
neg 67 24 91
Total 168 30 198

Selon le tableau ci-dessus, l’analyse révèle que sur les 198 cas, 101 échantillons étaient positifs
dans les deux tests et 24 échantillons étaient négatifs. Ces résultats ont permis de révéler une
sensibilité de 60% et une spécificité de 80%.
 Caractéristiques extrinsèques du TDR
Il ressort de ce tableau qu’à l’aide du test GENRUI Biotech Inc IgM/IgG test kit, 94% (VPP)
des résultats positifs sont vraiment positifs à l’anticorps IgG et 26% (VPN) des résultats négatifs
n’ont pas réellement développé de l’anticorps. Ce tableau révèle aussi que le test de diagnostic
rapide est en accord modéré (Kappa = 0,22 ; p-value = 0,000) avec le test de référence ELISA.
Tableau 15:Caractéristiques extrinsèques et le coefficient de contingence du TDR
Variable TDR IC95%

Caractéristiques extrinsèques
VPP 94 (89 - 97)
VPN 26 (20- 30)
Coefficient de concordance
Kappa (p-value) 0,22(0,000) [0 ; 1]

IV.DISCUSSION
Nous avons évalué 2 tests sérologiques qui détectent le total des anticorps anti-SARS-CoV-2 ;
l'un est un test immunochromatographique à flux lateral (GENRUI Biotech Inc IgG test kit
(colloidal gold)) et l'autre est un test de référence sur microplaques (test COVID-19 ELISA IgG
DIATHEVA KIT). Au sorti de cette évaluation, nous avons trouvé une concordance modérée
entre les deux tests, le test rapide de diagnostic étant tout de même moins sensible que le test
de référence ELISA.
Des 198 échantillons, seul 3 personnes ont déclaré être vaccinées. Ces résultats semblent
concorder avec la faible prévalence des personnes vaccinées au Cameroun de 7,8 (Covid-19 en
Afrique, 2022) en Afrique était de 16% (Covid-19, 2022), loin de 80% de la prévalence des
personnes vaccinées dans les pays occidentaux. Ce faible taux de vaccination peut s’expliquer
par la réticence d’une grande partie de la population (A propos du vaccin anti-Covid en Afrique,
s. d.) .
Dans cette étude, seul 11 personnes ont déclaré avoir uniquement la fièvre comme symptôme
et 4 personnes ont déclaré une comorbidité (asthme et diabète). Ce faible taux de comorbidité
s’explique par le fait que la population étudiée est jeune. Plus l’âge est avancé plus le risque de
comorbidités est élevé, ce résultat concorde avec une étude en 2022 (COVID-19, s. d.) dans
laquelle la population d’étude était majoritairement âgé de 65 ans ou plus et dont 52,6%
présentaient au moins deux (2) comorbidités dont le diabète et l’hypertension les plus fréquent.
La présente étude montre une séroprévalence IgG élevée (84%) avec le test de référence ELISA
et une séroprévalence IgG moindre (57%) avec le TDR dans cette population. Ce résultat est
semblable à une étude menée a Omdurman en 2021 (Moser et al., 2021) dans laquelle la
séroprévalence anti-SRAS-CoV2 était 54,6%. Cette concordance pourrait se justifier par le fait
que Moser et al., en 2021 avaient utilisé les TDR pour déterminer leur prévalence tout comme
c’était le cas dans cette évaluation. La sensibilité et la spécificité du test rapide (TDR) évaluée
avec le test de référence ELISA étaient respectivement de 60% et 80%. Ces résultats ne
concordent pas avec ceux obtenus au canada (Canada, 2021) dont la sensibilité =90%;
IC95%(88-95) et spécificité=95% ; IC95%(92-97) . Cette différence est due au fait que la taille
d’échantillon obtenu par les auteurs était largement supérieure à celle recensé au cours de cette
étude. Ce désaccord avec les résultats obtenus pourrait s’expliquer par le fait que la majorité
des participants de la présente étude respectaient considérablement les mesures barrières décrits
par l’OMS. Il a été constaté que la prévalence obtenue avec le test rapide TDR (54%) est

différente à celle retrouvée par le test de référence ELISA (84%). De plus, il a été observé que
100% des personnes positives au test de diagnostic rapide (TDR) n’ayant pas été vaccinées et
95% étaient symptomatiques et 99% des personnes positives au test de référence ELISA
n’étaient pas vaccinés. Les vaccins contre la COVID-19 étant mis au point pour limiter la
propagation de la maladie, la grande majorité de personnes qui sont actuellement atteint de la
COVID-19 n’ont pas reçu de vaccin anti COVID-19(COVID-19 Vaccines safety, s. d.). En effet,
La raison pour laquelle les vaccins entraîneraient une protection élevée contre la maladie est
liée à la forte réponse immunitaire qu’ils induisent.
De plus, la VPP et la VPN étaient respectivement de 94% (IC95% (89-97)) et 26% (IC95% (20-
30)) Il ressort que, à l’aide du test GENRUI Biotech Inc IgM/IgG test kit, 94% (VPP) des
résultats positifs sont vraiment positifs à l’anticorps IgG et 26% (VPN) des résultats négatifs
sont réellement negative.
Le coefficient de contingence Kappa de Cohen du test rapide GENRUI Biotech Inc IgM/IgG
test kit était de 0,22. Selon Landis et Koch, ce résultat signifie que l’accord entre le test ELISA
IgG et le test rapide est modéré (Bergeri et al., 2002).ce résultat est semblable à celui d’une
évaluation de deux tests rapide dont les valeurs des différents kappa (0,25 ; 0,1 et 0,03)
(Comparative Evaluation of SARS-CoV-2 Rapid Immunochromatographic Test Assays with
Chemiluminescent Immunoassay for the Diagnosis of COVID-19 | Open Access Macedonian
Journal of Medical Sciences, 2021).

CONCLUSION

CONCLUSION
Cette étude avait pour objectif d’évaluer la performance du test GENRUI Biotech Inc IgM/IgG
test rapide et ELISA IgG DIATHEVA KIT pour le diagnostic de la COVID-19.
Une étude retrospecpective a été menée à cet effet sur 198 échantillons. La séroprévalence de
la COVID-19 au sein de la population d’étude était de 84% et 54% respectivement avec ELISA
et le TDR.
La sensibilité et la spécificité du TDR étaient de 60% (IC95% : (57- 62%)) et 80% (IC95%
:(79-89)) respectivement. En ce qui concerne les valeurs prédictives positive et négative, elles
étaient simultanément de 94% (IC95% : (89-97%)) et 26% (IC95% : (20-30)).
La concordance entre le test de référence ELISA IgG DIATHEVA KIT et le test GENRUI
Biotech Inc IgM/IgG test rapide était modéré (kappa= 0,22).
À la lumière des résultats obtenus, le test GENRUI Biotech Inc IgM/IgG test rapide ne
présenterait pas une bonne performance pour le diagnostic sérologique de la COVID-19, il est
important d’être prudents quant à la large utilisation en routine de ce test de diagnostic rapide
pour la prise de décision critique pour les cliniciens. En outre, une étude de la cinétique des
anticorps permettra de relier les résultats aux stades de la maladie. En plus des données
cliniques, le statut immunologique de la population étudiée permettra de comprendre la
réactivité croisée. D’autres études sont nécessaires pour déterminer l'aspect pratique de ces tests
dans différents contextes sérologiques. Ces résultats ont révélé également qu’il ne serait pas
adéquat d’utiliser ce test pour une surveillance épidémiologique lorsqu’il est possible d’utiliser
le test ELISA.

LIMITES, PERSPECTIVES ET
RECOMMANDATIONS

LIMITES
 Les échantillons de sérum étaient des collectes uniques. Par conséquent, la tendance
continue du niveau d'anticorps et sa relation avec la gravité de la maladie n'ont pas
pu être évaluées
 Les caractéristiques intrinsèques du test obtenus étaient très basses comparés aux
performances présentées par les études menées dans plusieurs pays et communautés.
RECOMMANDATIONS
Les suggestions vont à l’endroit :
 Du Ministère de la santé publique : contrôler la circulation sur le marché

tchadien des tests de diagnostic rapide sérologique pour le diagnostic de
la COVID-19 et retirer ceux qui n’auront pas fait l’objet d’une évaluation
ou d’un contrôle qualité ;
 Des structures et personnels de santé : Utiliser dans les laboratoires
d’analyse médicale les tests homologués par les services compétents ou
des tests qui ont fait l’objet d’une évaluation de performance locale.
PERSPECTIVES
Pour mieux apprécier les performances caractéristiques du test GENRUI Biotech
Inc IgM/IgG test kit au Tchad, il serait intéressant de recruter un plus grand nombre
de participants dont le statut sérologique était confirmé par le test ELISA.

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ANNEXES

ANNEXES
Annexe 1 : Matériel pour le kit ELISA IgG DIATHEVA
Tableau 16:Tableau : Matériel du kit ELISA
Matériel rôle
Lecteur de microplaques équipé d'un filtre 405nm détecte l’absorbance
Incubateur à 37°C maintient la température
Pipettes de précision et pointes de pipettes prélève un volume précis de liquide
Eau déminéralisée ou distillée permet de laver la microplaque
Laveur de microplaques élimine le matériel non lie et les réactifs qui n’ont pas réagit
Eprouvette graduée de 1 000 ml recueil les gaz et les liquide
Vortex ; Mélanger les solutions
Tubes pour diluer les échantillons
Consommables : Gants stériles ,Masque chirurgical, blouse

Annexe 2 : Contenu du kit
Tableau 17:Contenu du kit
Réactifs Pas de flacon x Volume La description

Plaque de 1x96 puits Plaque revêtu avec SRAS-
microtitration(12x8puits stips) COV2
Conservé avec de l'azide de
sodium 0,02% w/v
Tampon A 2x50ml Diluant d'échantillons, Prêt à
l'emploi avec conservateur
Tampon B 3x100ml Tampon de lavage concentré
10X,
Diluer à 1X avec de l'eau
distillée,
Avec conservateur
Contrôle négatif (NC) 2x1ml Prêt à l'emploi
Contrôle positif (CP) 2x1ml Prêt à l'emploi
Anticorps secondaire 1x18ml Prêt à l'emploi; Avec
conjugué à la HRP conservateur
Solution ABTS 1x23ml Prêt à l'emploi; Avec
conservateur

Annexe 3 : lettre d’autorisation pour la séroprévalence.

Annexe 4 : Attestation de recherche délivrée par le CHU LE BON-SAMARITAIN

Annexe 5 : autorisation de recherche délivrée par UEC

Annexe 6 : analyse des résultats ELISA.

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RÉPUBLIQUE DU CAMEROUN REPUBLIC OF CAMEROON

Paix – Travail – Patrie Peace – Work – Fatherland

INSTITUT UNIVERSITAIRE ÉVANGÉLIQUE DU CAMEROON EVANGELICAL UNIVERSITY

Parcours : Biologie Clinique

EVALUATION DE LA PERFORMANCE D’UN TEST DE

Pr EDIMA Helene Carole Dr FOKAM Joseph

Année académique : 2021-2022

Au Pr COLIZZI Vittorio, Doyen de la Faculté des Sciences et Technologie de l’Université

Au Prof Pr EDIMA Helene Carole Maitre de conférence à l’Université de NGaoundéré

Au Dr FOKAM joseph, responsable du laboratoire de Virologie/CIRCB, pour l’immense

Au Dr MOMO Aime Césaire et Mr TALOM Alaric pour leurs conseils et leurs

Figure 1: Coronavirus de type SRAS-CoV-2 vu sous un microscope électronique (SARS-CoV-2

Mots clés : COVID-19 ; test sérologique ; anticorps ; immuno-chromatographie ; ELISA, SRAS-

We conducted a cross-sectional retrospective study for an evaluation from March to July

The concordance between the immunochromatographic and enzyme-linked

Keywords : COVID-19 ; serological test ; antibodies ; immuno-chromatography ; ELISA, SARS-

ACE2 : Angiotensin-Converting Enzyme 2 LAGET : Laboratoire des Grandes

AP-1 : Activator Protein-1 Epidémies Tropicales

ARN : Acide Ribonucléique MERS-CoV : Coronavirus du Syndrome

La COVID-19 est une maladie hautement pathogène et transmissible responsable du syndrome

Mémoire rédigé par AMINE Akouya 1

La prévention de la transmission pour contrôler la propagation du SRAS-CoV-2 à travers les

Mémoire rédigé par AMINE Akouya 2

 Déterminer la séropositivité au SRAS-CoV-2 IgG par la technique ELISA indirect

Mémoire rédigé par AMINE Akouya 3

Immuno-chromatographie : Test de dépistage rapide dans lequel un anticorps de capture,

Immuno-enzymatique (ELISA) : La méthode immuno-enzymatique ELISA est un examen

SRAS-CoV-2 : Le SARS-CoV-2 (acronyme anglais de severe acute respiratory syndrome

Mémoire rédigé par AMINE Akouya 4

Mémoire rédigé par AMINE Akouya 5

Mémoire rédigé par AMINE Akouya 6

I. GENERALITE SUR LE SRAS-COV-2

I.1. Historique du SRAS-CoV-2

Figure 1: Coronavirus de type SRAS-CoV-2 vu sous un microscope électronique (SARS-

Mémoire rédigé par AMINE Akouya 7

La classification Selon ICTV, 2019 est :

Mémoire rédigé par AMINE Akouya 8

Le SRAS-CoV-2 est un virus à ARN, enveloppé, plutôt sphérique, d’un diamètre

Figure 2: La structure du SARS-CoV 2 (SARS-CoV-2 - Antigènes (Protéines et peptides)

Mémoire rédigé par AMINE Akouya 9

Le SRAS-CoV-2 se lie via la protéine S au récepteur ACE2 humain exprimé à la surface

Mémoire rédigé par AMINE Akouya 10

I.6 Physiopathologie du sars-cov-2

Mémoire rédigé par AMINE Akouya 11

I.8. LE DIAGNOSTIC DE COVID-19

I.8.2 Le diagnostic biologique indirect ou sérologique du COVID-19

Mémoire rédigé par AMINE Akouya 12

I.8.3. Les tests sérologiques ou immunologiques

I.8.3.1 Test immuno-enzymatique (ELISA).

Mémoire rédigé par AMINE Akouya 13

Une réaction enzymatique rend toutefois cette technique dépendante de la température,

Limite du dosage (ELISA IgG DIATHEVA KIT)

• Pour usage en laboratoire uniquement

Mémoire rédigé par AMINE Akouya 14

• Toute variation du diluant de l'échantillon, de l'opérateur, de la technique de pipetage, de la

• Patients infectés par le nouveau coronavirus (COVID-19) la première semaine de l'apparition

Les résultats faussement négatifs peuvent résulter de :

• Collecte ou stockage incorrect de l'échantillon

• Dégradation secondaire des anticorps pendant le transport/stockage

• Non-respect des instructions d'utilisation

Les résultats faussement positifs peuvent résulter de :

• Contamination lors du prélèvement, de la manipulation ou de la préparation des échantillons

• Contamination lors de la manipulation du produit

• Contamination des puits lors des étapes de lavage de la plaque