Série d’exercices 1

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Exercice 1(04 pts):

Dans un gène codant pour la synthèse d´une enzyme bactérienne, interviennent,

ponctuellement et accidentellement 2 mutations sur le brin transcrit:
 Une addition d´un nucléotide (nucléotide ajouté).
 Une délétion d´un autre nucléotide (nucléotide perdu).
La séquence des acides aminés (de 10 à 15) d´une portion de la molécule enzymatique qui
était initialement :

Devient :

1. Quel est le nucléotide ajouté? …………..

2. Quel est le nucléotide perdu?.................
3. Où se situent ces mutations sur le brin transcrit de l´ADN (donner le numéro de
nucléotide)? N° de l’ajouté……………/ N° du perdu…………..

Exercice 2 (04 pts):

On a étalé des cellules d'une souche haploïde de levure [Leu-] sur un milieu contenant de la
leucine et un antibiotique (la canavanine). Sur 109 cellules étalées on a récupéré 9 colonies.
1. Quel est le génotype de la souche de départ vis-à-vis de la Canavanine?...............
2. Quel est le génotype des 9 clones obtenus?....................
3. Quel est le taux de mutation?.......................
 Exercice 3 (04 pts):

On considère 3 souches mutantes d'E.coli A, B et C, dont les génotypes sont les suivants :
A : Leu+ His+ Ala- Arg- Mal- AmpS
B : Leu+ His- Ala+ Arg+ Mal+ AmpS
C : Leu+ His- Ala- Arg+ Mal+ AmpR
(Leu, His, Ala et Arg sont des acides aminés) (Maltose c’est un sucre) (Ampicilline c’est un
antibiotique). Remplir le tableau suivant.

Milieu de culture pour Milieu sélectif pour Milieu de la co-culture

Souche
chacune des souches ? chacune des souches ? des 3 souches ?
A

Exercice 4 (04 pts):

Un fragment d’ADN (X) de 1kb est digéré par l’enzyme EcoRI en un fragment de 300 pb et
un fragment de 700 pb. Si le fragment de 300 pb est purifié et digéré par l’enzyme PstI, il
donne deux fragments : l’un de 100 pb et l’autre de 200 pb. Si le fragment de 700 pb est traité
de la même enzyme, il produit deux fragments : l’un de 500 pb et l’autre de 200 pb. Lorsque
le fragment (X) est digéré directement par l’enzyme Pst1 on obtient trois fragments : 100,
200 et 700 pb.
- Donner le résultat de la double digestion EcoRI et PstI sur le fragment de 1kb (nombre
des fragments avec leurs tailles ?).
……………………………………………………………………………………

Exercice 5 (04 pts):

La digestion par diverses enzymes de restriction d’un fragment d’ADN linéaire de 5 kb

donne, après analyse sur gel d’agarose, les bandes de taille suivante:
SacI : 1 / 4 kb.
BamHI : 2.5 kb.
PstI : 0.5 / 2.1 / 2.4 kb.
SacI + PstI : 0.5 / 1.6 / 2.4 kb.
BamHI + PstI : 0.1 / 0.5 / 2 / 2.4 kb.
- Tracer la carte de restriction de ce fragment.

ADN

BON COURAGE
 Corrigé 1

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Exercice 1(04 pts):

Dans un gène codant pour la synthèse d´une enzyme bactérienne, interviennent, ponctuellement et
accidentellement 2 mutations sur le brin transcrit:
 Une addition d´un nucléotide (nucléotide ajouté).
 Une délétion d´un autre nucléotide (nucléotide perdu).
La séquence des acides aminés (de 10 à 15) d´une portion de la molécule enzymatique qui était
initialement :

Devient :

4. Quel est le nucléotide ajouté? …………..

5. Quel est le nucléotide perdu?.................
6. Où se situent ces mutations sur le brin transcrit de l´ADN (donner le numéro de nucléotide)? N° de
l’ajouté……………/ N° du perdu…………..
Il y a plusieurs possibilités comme c’est indiqué dans la figure suivante : (une seule possibilité et
demandée) :
 Exercice 2 (04 pts):

On a étalé des cellules d'une souche haploïde de levure [Leu-] sur un milieu contenant de la leucine et un
antibiotique (la canavanine). Sur 109 cellules étalées on a récupéré 9 colonies.
4. Quel est le génotype de la souche de départ vis-à-vis de la Canavanine? CanS.
5. Quel est le génotype des 9 clones obtenus? CanR.
6. Quel est le taux de mutation? 9.109.
Exercice 3 (04 pts):

On considère 3 souches mutantes d'E.coli A, B et C, dont les génotypes sont les suivants :
A : Leu+ His+ Ala- Arg- Mal- AmpS
B : Leu+ His- Ala+ Arg+ Mal+ AmpS
C : Leu+ His- Ala- Arg+ Mal+ AmpR
(Leu, His, Ala et Arg sont des acides aminés) (Maltose c’est un sucre) (Ampicilline c’est un antibiotique).
Remplir le tableau suivant.

Milieu de culture pour chacune des Milieu sélectif pour chacune des Milieu de la co-culture des 3
Souche
souches ? souches ? souches ?
A Milieu minimum + Ala + Arg
Milieu minimum + Ala + Arg

B Milieu minéral + Mal + His Milieu minimum + Mal + Ala

Milieu minéral + Mal + His
+ Arg + His
C Milieu minéral + His + Ala Milieu minéral + His + Ala +
Amp

Exercice 4 (04 pts):

Un fragment d’ADN (X) de 1kb est digéré par l’enzyme EcoRI en un fragment de 300 pb et un fragment de 700
pb. Si le fragment de 300 pb est purifié et digéré par l’enzyme PstI, il donne deux fragments : l’un de 100 pb et
l’autre de 200 pb. Si le fragment de 700 pb est traité de la même enzyme, il produit deux fragments : l’un de 500
pb et l’autre de 200 pb. Lorsque le fragment (X) est digéré directement par l’enzyme Pst1 on obtient trois
fragments : 100, 200 et 700 pb.
- Donner le résultat de la double digestion EcoRI et PstI sur le fragment de 1kb (nombre des fragments
avec leurs tailles ?).
- 4 fragments avec les tailles suivantes : 100 / 200 /200 / 500 pb. Selon la carte de restriction
suivante :

Exercice 5 (04 pts):

La digestion par diverses enzymes de restriction d’un fragment d’ADN linéaire de 5 kb donne, après analyse sur
gel d’agarose, les bandes de taille suivante:
SacI : 1 / 4 kb.
BamHI : 2.5 kb.
PstI : 0.5 / 2.1 / 2.4 kb.
SacI + PstI : 0.5 / 1.6 / 2.4 kb.
BamHI + PstI : 0.1 / 0.5 / 2 / 2.4 kb.
- Tracer la carte de restriction de ce fragment.
 Série d’exercices 2
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EXERCICE 01 (05 PTS ) :
Quatre souches d’E.coli sont repiquées sur un milieu minimum additionné ou non par des
acides aminés. Les résultats de croissance après 24 heures d’incubation sont les suivants :

Milieu
Milieu minimum Milieu minimum Milieu minimum Milieu minimum
Souches minimum
+Met +Val +Met +Arg +Arg +Val +Met +Arg +Val
A - + + - +
B - + - + +
C - - + + +
D - - - + +

- Sur la base de ces résultats, remplir le tableau ci-dessous.

Souches Génotype ? Composition du milieu de Composition du milieu de co-
culture de la souche culture des souches
A
B
C
D

Exercice 2 (05.5 PTS) :

La figure ci-dessous représente la carte de restriction d’un plasmide ARABIDO. Donner pour
chaque digestion enzymatique, le nombre des fragments obtenus et leurs tailles.

Nombre des
Digestion Tailles
fragments
EcoRI
BamHI
Hind III
Pvu II
EcoRI + BamHI
Hind III + Pvu II

Exercice 3 (03 pts):

La digestion par diverses enzymes de restriction d’un fragment d’ADN linéaire de 5 kb
donne, après analyse sur gel d’agarose, les bandes de taille suivante:
SacI : 1 / 4 kb.
BamHI : 2.5 kb.
PstI : 0.5 / 2.1 / 2.4 kb.
SacI + PstI : 0.5 / 1.6 / 2.4 kb.
BamHI + PstI : 0.1 / 0.5 / 2 / 2.4 kb.
- Dresser la carte de restriction de ce fragment d’ADN.
ADN
Exercice 04 (06.5 pts) :
Pour connaître la position des gènes sur le chromosome d'E.coli on réalise une expérience de
conjugaison interrompue, avec une souche F- auxotrophe pour la leucine, la proline, la
thréonine, les purines, la cystéine, sensible au phage Tx, incapable de pousser sur milieu avec
galactose et résistante à la streptomycine.

1°) Quel est le génotype de la souche Hfr qu'on doit utiliser ?

- …………………………………………………………………………………………

2°) Donnez la composition du milieu de culture pour la souche F-

- ………………………………………………………………………………………….

3°) Quelle est la composition du milieu de culture pour la souche Hfr ?

- ………………………………………………………………………………………….

4°) De quoi il est constitué le milieu de conjugaison ?

- ………………………………………………………………………………..…
……

On réalise le croisement par conjugaison Hfr x F-. Toutes les minutes on prélève quelques
millilitres de la co-culture qu’on agite avant de les répartir par étalement sur plusieurs boîtes
afin de tester, individuellement, le phénotype de la réceptrice pour chacun des marqueurs. Les
résultats obtenus sont mentionnés dans le tableau («+» indique la présence de colonies).
1°) Quel sera le milieu de culture permettant de tester les recombinants [pro+] ?
…………………………………………………………………………………………………
……
2°) Quel sera celui permettant de tester les recombinants [gal+] ?
…………………………………………………………………………………………………..

Temps de
conjugaison Leu+ Pro+ Thr+ Pur+ Cys+ TxR Gal+
(mn)
0 - - - - - - -
4 - - + - - - -
10 + - + - - - -
17 + + + - - - -
21 + + + - - - +
28 + + + - - + +
30 + + + - + + +
36 + + + + + + +

3°) Donner la position des gènes sur le chromosome de Hfr ?

Origine
du transfert
 Corrigé 2
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EXERCICE 01 (05 PTS ) :
Quatre souches d’E.coli sont repiquées sur un milieu minimum additionné ou non par des
acides aminés. Les résultats de croissance après 24 heures d’incubation sont les suivants :

Milieu
Milieu minimum Milieu minimum Milieu minimum Milieu minimum
Souches minimum
+Met +Val +Met +Arg +Arg +Val +Met +Arg +Val
A - + + - +
B - + - + +
C - - + + +
D - - - + +

- Sur la base de ces résultats, remplir le tableau ci-dessous.

Souches Génotype ? Composition du milieu de Composition du milieu de co-
culture de la souche culture des souches
- + +
A Met , Arg , Val Milieu minimum +Met Milieu minimum
B + + - +Met +Val
Met , Arg , Val Milieu minimum +Val
+ - +
C Met , Arg , Val Milieu minimum +Arg Milieu minimum
+ - - +Arg +Val
D Met , Arg , Val Milieu minimum +Arg +Val

Exercice 2 (05.5 PTS) :

La figure ci-dessous représente la carte de restriction d’un plasmide ARABIDO. Donner pour
chaque digestion enzymatique, le nombre des fragments obtenus et leurs tailles.

Nombre des
Digestion Tailles
fragments
EcoRI 1 7
BamHI 1 7
Hind III 2 3.5 ; 3.5
Pvu II 4 1; 1.5 ; 2 ; 2.5
EcoRI + BamHI 2 2;5
Hind III + Pvu II 6 0.5 ; 0.5 ; 1 ; 1.5 ; 1.5 ; 2

Exercice 3 (03 pts):

La digestion par diverses enzymes de restriction d’un fragment d’ADN linéaire de 5 kb
donne, après analyse sur gel d’agarose, les bandes de taille suivante:
SacI : 1 / 4 kb.
BamHI : 2.5 kb.
PstI : 0.5 / 2.1 / 2.4 kb.
SacI + PstI : 0.5 / 1.6 / 2.4 kb.
BamHI + PstI : 0.1 / 0.5 / 2 / 2.4 kb.
- Dresser la carte de restriction de ce fragment d’ADN.

PstI SacI BamHI PstI ADN

0.5 0.5 1.5 0.1 2.4

Exercice 04 (06.5 pts) :

Pour connaître la position des gènes sur le chromosome d'E.coli on réalise une expérience de
conjugaison interrompue, avec une souche F- auxotrophe pour la leucine, la proline, la
thréonine, les purines, la cystéine, sensible au phage Tx, incapable de pousser sur milieu avec
galactose et résistante à la streptomycine.

1°) Quel est le génotype de la souche Hfr qu'on doit utiliser ?

- Leu+, Pro+, Thr+, Pur+, Cys+, TxR, Gal+, StrS.
2°) Donnez la composition du milieu de culture pour la souche F-
- Milieu minéral + Glucose + Leu + Pro + Thr + Pur + Cys.
3°) Quelle est la composition du milieu de culture pour la souche Hfr ?
- Milieu minéral + Galactose.
4°) De quoi il est constitué le milieu de conjugaison ?
- Milieu minéral + Glucose + (Galactose) + Leu + Pro + Thr + Pur + Cys.

On réalise le croisement par conjugaison Hfr x F-. Toutes les minutes on prélève quelques
millilitres de la coculture qu’on agite avant de les répartir par étalement sur plusieurs boîtes
afin de tester, individuellement, le phénotype de la réceptrice pour chacun des marqueurs. Les
résultats obtenus sont mentionnés dans le tableau («+» indique la présence de colonies).
1°) Quel sera le milieu de culture permettant de tester les recombinants [pro+] ?
- Milieu minéral + Glucose + Leu + Thr + Pur + Cys + Str.
2°) Quel sera celui permettant de tester les recombinants [gal+] ?
- Milieu minéral + Galactose + Leu + Pro + Thr + Pur + Cys + Str.
Temps de
conjugaison Leu+ Pro+ Thr+ Pur+ Cys+ TxR Gal+
(mn)
0 - - - - - - -
4 - - + - - - -
10 + - + - - - -
17 + + + - - - -
21 + + + - - - +
28 + + + - - + +
30 + + + - + + +
36 + + + + + + +

3°) Donner la position des gènes sur le chromosome de Hfr ?