Présenté par :

DANI Lamyae Encadré par :

EL GUENNOUNI Kaoutar Pr. LOUATI Sara
PRESENTATION TITLE

SOMMAIRE

I. INTRODUCTION

II. MATÉRIELS ET
MÉTHODES

III. RÉSULTATS

IV. DISCUSSION

V. CONCLUSION
INTRODUCTION

• Tumeurs à petites cellules rondes. • Le sarcome d’Ewing et tumeur

neuroectodermique primitive
(PNET).

Figure 1 : Frozen section of Ewing sarcoma shows a small Figure 2 :Rosettes.

round blue cell tumor with chatter artifact. Contributed by Mark R. Wick, M.D
Contributed by Laura Warmke, M.D.
 • Sarcome d’Ewing / PNET

Tissus mous

L’os
 EWING / PNET SARCOMAS
Pseudorosettes de HOMER WRIGHT
• Caractère de différenciation neurale.

CD99
• Biomarqueur immunohistochimique.
• Très sensible.
• Manque de spécificité.

Réarrangement du gène EWSR1 sur le chromosome 22

• Translocations entre EWSR1 et le facteur de transcription de l'intégration de la
leucémie amicale 1 (FLI1) (85%, t(11;22)(q24;q12)).
• Translocation entre EWSR1 et le facteur de transcription ETS (ERG) (10%,
t(21;22)(q22;q12)).
PROBLÉMATIQUE

Diagnostique
particulièrement difficile

La rareté de
Caractère ces tumeurs
indifférencié
ou peu
différencié
OBJECTIF

• Étudié la valeur diagnostique de l'immunomarquage

combiné de CD99 et de réarrangement de EWSR1
t(22q12) dans une population marocaine.
MATÉRIELS ET MÉTHODES

Du janvier 2010
au janvier 2017

Etude
rétrospective
Pédiatriques
et adultes 41 Échantillons
ANALYSE IMMUNOHISTOCHIMIQUE
• Examen complémentaire
• Préciser un diagnostique
• Qualifier une tumeur

Principe : détecter des protéines ou des antigènes

dans des sections des tissus exposés à des anticorps
marqués dirigés contre des épitopes de la protéine
cible.
ANALYSE IMMUNOHISTOCHIMIQUE

Sections préparées à partir des blocs de tissu

de FFPE

Immunocoloration avec l’anticorps

monoclonal de lapin CD99

Chromogène = DAB (3,3-

diaminobenzidine tétrahydrochloride)

Résultat positif si coloration membranaire

des tissus tumorales est sup à 10 %
HYBRIDATION IN SITU FISH

• Technique de biologie moléculaire.

• L’analyse des régions précises au moyen de

sonde spécifique dans les chromosomes
ou dans le noyau.

• Mise en évidence des anomalies ainsi et de

réarrangements.
HYBRIDATION IN SITU FISH

• Traitement des tissus FFPE à l'aide de la

sonde de réarrangement break-apart
bicolore EWSR1 (22q12).
• Cellules normales dépourvues de t(22q12) =
signal à deux fusions (jaune) = gène
EWSR1 intact.
• Cellules anormales avec t(22q12) = un signal
divisé (un signal vert et un signal orange).

• Un résultat positif a été défini comme étant

les cellules avec des signaux divisés est sup
à 30%.
ANALYSE STATISTIQUE

• La valeur prédictive positive (VPP) est la probabilité qu'un test positif

soit réellement positif.

• La valeur prédictive négative (VPN) est la probabilité qu’un test négatif

soit réellement négatif.

• L'index de Youden (Y) est une mesure de la précision de la méthode de

diagnostic. Il dépend de la spécificité et de la sensibilité.
 RÉSULTATS
Ø Caractères cliniques

29.3
17.1

• Prédominance Membre inf

Thorax
masculine Abdomen
Membre sup
27/14 12.2
Bassin
Tête et cou
Tissu mou

14.6

• L’âge moyen 24
ans 12.2
2.4

12.2

Figure 3 : répartition de l’emplacement de l’EPS

 RÉSULTATS
IMMUNOHISTOCHIMIE
• L'activité mitotique varie de 4 à 20 mitoses par
10 champs de haute puissance (médiane, 10
mitoses).
• Des zones de nécrose tumorale étaient présentes
dans 92,7% Figure 5 : Prolifération des petites cellules rondes

• 92,7% des cas (38/41) ont montré une positivité

pour l'anticorps CD99, dont 29 cas avec une
coloration membranaire forte, diffuse et
caractéristique
• L'anticorps CD99 était négatif dans les 15
contrôles comparatifs.
Figure 6 : expression membranaire de l’anticorps CD99
HYBRIDATION IN SITU FISH

• Réarrangement du locus du gène EWSR1

dans 48,8 % des cas (20/41).

• 7,3 % des cas (3/41), l'interprétation des

signaux d'hybridation n'a pas été possible Figure 7 : réarrangement du gène EWSR1.

en raison de la faiblesse des signaux, de

l'insuffisance des tissus ou d'une
mauvaise fixation des tissus.

• La FISH était négative pour les 15 cas

utilisés comme contrôles comparatifs.
Figure 8 : gène EWSR1 normale.
SENSITIVITÉ, SPÉCIFICITÉ, VPN ET VPP

Tableau 1: Comparison entre IHC et FISH pour le diagnostic de

l’EPS.
• la FISH avait une meilleure sensibilité et
spécificité face à la immunohistochimie

• En termes de VPP, la technique FISH

(89%) prédit mieux la maladie que
l'IHC (48%).

• L'indice de Youden de la rupture de

l'EWSR1 (0,9) était proche de la valeur
1, ce qui conforte la technique FISH
comme outil de diagnostic précis de
l'EPS
Tableau 2 : Association de rearrangement de EWSR1 et la positivité de
CD99.

Ø Forte corrélation entre la positivité diffuse ≥ 50% de CD99

et la présence du réarrangement EWSR1 (p<0.05)
DISCUSSION

• La combinaison de l’immunohistochimie et de la FISH (CD99 et

réarrangement du gène EWSR1) est plus sensible et plus spécifique
que la réalisation de chaque test seul pour le diagnostic de l’EPS qui
regroupe le sarcome d’EWING et le PNET.

• Mhawech-Fauceglia et al. ont trouvé une sensibilité de 50% dans une

étude similaire, ce qui est significativement moins que notre résultat
(100%).
• L’immunohistochimie a montré une faible spécificité et faible VPP par
rapport à la technique de FISH.
DISCUSSION

• Les tumeurs contenant moins 50% de cellules CD99 positives avaient

une faible probabilité d'être réarrangées.

• Au moment où la technique de FISH break-apart présente des avantages

évidents, son principal inconvénient est que le partenaire de la
translocation n'est pas identifié, ce qui est important pour prédire le
comportement tumoral.
CONCLUSION

• Afin de diagnostiquer correctement l’EPS, les tests de laboratoire

devraient inclure à la fois l'histopathologie et l'immunomarquage du
CD99, ainsi que l'analyse moléculaire à l'aide d'une sonde de
réarrangement bicolore break-apart, afin de mieux caractériser cette
entité en identifiant le réarrangement EWSR1.