Cycle cellulaire : contrôle, étapes clefs

Oncogènes et gènes suppresseurs de tumeurs

Apoptose
Oncogénèse des gliomes.

DIU Neuro-oncologie Février 2011

Véronique QUILLIEN
 L’oncogénèse

Perte des
Indépendance vis à vis Perte du contrôle
capacités Angiogénèse Métastases
des signaux de prolifération du cycle cellulaire
apoptotiques

RTK/PI3K/PTEN/Akt
RTK /RAS/RAF

P16/CDK4/Rb

P53/P14/MDM2/MDM4

Protéines de la famille BCL-2

 Les mécanismes moléculaires en cause

  Perte d’activité : gènes suppresseurs de tumeur

ADN n n

Mutation Mutation LOH Double perte Méthylation des promoteurs

ARN Protéine  Vitesse de dégragation

miRNA : destruction ARN P53/PTEN/Rb/P14/P21/P16

 Transcription ou blocage synthèse proteique

  Gain d’activité : oncogènes

ADN ARN Protéine
 Vitesse de dégradation
 Synthèse

 Transcription
Mutation   Stabilisation ARN EGFR/BCL-2/MDM2/MDM4…
Amplification Translocation
activatrice  miRNA
 Altéré dans
88% des cas

Altération des
3 voies dans
74% des cas

Altéré dans
86% des cas

Altéré dans
78% des cas

Cancer Genome Atlas Network, Nature, 455, Nature,

October2008
2008

GBM : premier cancer à être étudié par le « Cancer Genome Atlas Research Network »
 (EGF, PDGF..) (EGF, PDGF..) Voies des facteurs de croissance
RTk

P P P P P P P P PIP2
P P P P P P P P
NF1

PTEN
RAS RAS PI3k PI3k
actif inactif inactif actif
⊕ PIP3

⊕
RAF mTORC2
⊕
AkT

MEk
- TSC1 -
TSC2

⊕ BAD
ERk
mTORC1 FOXO

-  Entrée dans
le cycle cellulaire 4 EBP1 S6k
-  Prolifération Favorise synthèse protéines clefs : Blocage
cellulaire   Prolifération cellulaire apoptose
  glycolyse
  angiogénèse

Voie MAP kinases Voie PI3 kinase

 EGFR

P P
P P

Cox 2
B-Myb Aurora A CyclinD1

iNOS
P P P P
P P P P P
P P P P P P
P P P P P P
PCNA STAT3 E2F1 STAT5 ?
 (EGF) (EGF)

EGFR

P P P PP P P P P P PP PP P P PIP2
P P P PP P P P P P PP PP P P
NF1

PTEN
RAS RAS PI3k PI3k
actif inactif inactif actif
⊕ PIP3

⊕
RAF mTORC2
⊕
AkT

MEk
- TSC1 -
TSC2

⊕ BAD
ERk
mTORC1 FOXO

-  Entrée dans
le cycle cellulaire 4 EBP1 S6k
-  Prolifération Favorise synthèse protéines clefs : Blocage
cellulaire   Prolifération cellulaire apoptose
  glycolyse
  angiogénèse

Voie MAP kinases Voie PI3 kinase

 Dérégulation voies des facteurs de croissance

EGFR

Amplification du gène EGFR

  ~ 45 % des GBM (surtout I)
  0 – 20 % des AA
  rare dans Astrocytomes II
  rare dans oligodendrogliomes

Mutation du gène EGFR

  ~ 20-30 % des GBM

PDGFRA

Amplification du gène PDGFRA

  ~ 11 % des GBM
  Mutations rares
 L1
EGFRv III
(Δ6 – 273)
CR1

L2

CR2

Domaine
Tyrosine
kinase

Signalisation indépendante
Signalisation
de la fixation du ligand
  EGFRvIII : 20 – 30% des GBMs (50 – 60 % si amplification EGFR)

+ Activation constitutive de l’activité kinase, avec activation voie

PI3k.
+ Interaction avec STAT3 au niveau nucléaire
+ Expression IL-6 et LIF induisant l’activation de gp130 sur cellules
exprimant EGFRwt: activation et pousse tumorale des cellules EGFRwt
+ Augmentation adhésion et invasion cellulaire
+ Résistance aux rayons par augmentation des mécanismes de
réparation.
+ ……..
PTEN

LOH en 10 q
  > 70 % des GBM
  ~ 60 % des AA
  ~ 40 % des oligodendrogliomes

Mutation PTEN
  ~ 31 % des GBM
  0 - 20 % des AA
  rare dans Astrocytomes II et oligodendrogliomes

Délétion homozygote
  ~ 8% des GBM

PI3K

  Mutation dans 5% des GBM

  Mutation dans 9% des GBM

RAS

  Augmentation de l’activité fréquente dans les gliomes

  Mutation rares (< 5% des GBM)

NF1

  ~ 17% mutations dans GBM

RAF

  Produit de fusion KIAA – BRAF

dans ~ 80% des AP sporadiques
 (EGF) (EGF) Les
AC anti-EGFR
EGFR Cetuximab/Panitunumab “Thérapeutiques”
Immunothérapie
Anti-EGFRvIII
P P P P P P P P Inhibiteurs Rtk PIP2
P P P P P P P P
NF1 Gefitinib : anti EGFRtk
Erlotinib : anti EGFRtk
PTEN
RAS RAS PI3k PI3k
actif inactif inactif actif

Inhibiteurs de
⊕ PIP3
Farnesyl transférase
⊕ Tipifarnib
RAF mTORC2
⊕ Inhibiteurs AkT
AkT Perifosine
Nelfinavir
MEk
- TSC1 -
TSC2
Inhibiteurs de mTOR BAD
ERk Temsirolimus ⊕
Everolimus
mTORC1 FOXO

-  Entrée dans
le cycle cellulaire 4 EBP1 S6k
-  Prolifération Favorise synthèse protéines clefs : Blocage
cellulaire   Prolifération cellulaire apoptose
  glycolyse
  angiogénèse

Voie MAP kinases Voie PI3 kinase

 (EGF) (EGF) Les
AC anti-EGFR
EGFR Cetuximab/Panitunumab “Thérapeutiques”
Immunothérapie
Anti-EGFRvIII
P P P P P P P P Inhibiteurs Rtk PIP2
P P P P P P P P
NF1 Gefitinib : anti EGFRtk
Erlotinib : anti EGFRtk
PTEN
RAS RAS PI3k Inhibiteurs PI3k PI3k
actif inactif inactif actif
LY294002
Inhibiteurs de
⊕ PIP3
Farnesyl transférase
⊕ Tipifarnib
RAF mTORC2
Inhibiteurs PI3k//mTOR Inhibiteurs AkT
PI-103 AkT Perifosine
Inhibiteurs mTORC1 et C2 Nelfinavir
Tipifarnib NVP-BEZ235
PP242
MEk
- TSC1 -
TSC2
Inhibiteurs de mTOR BAD
ERk Temsirolimus ⊕
Everolimus
mTORC1 FOXO

-  Entrée dans
le cycle cellulaire 4 EBP1 S6k
-  Prolifération Favorise synthèse protéines clefs : Blocage
cellulaire   Prolifération cellulaire apoptose
  glycolyse
  angiogénèse

Voie MAP kinases Voie PI3 kinase

Réseau de 214 gènes dont les anomalies génétiques ont une influence sur
l’expression dans les gliomes

Bredel et al, JAMA, 2009

Point de contrôle G2/M
ATR Le cycle cellulaire
ATM
Wee 1
CDC 25 B Cycline H
Cycline H Cycline B
Cdk 7
Cdk 7 Cdk 1
Cycline D

CDC 25 A,B,C Cdk 4/6

P16, P15, P18, P19

Cycline A
M (Famille INK4)
Cdk 1 G2 RB E2F
CHk1 ATR
G1 CDC 25 A
S CHk2 ATM
Cycline A Cycline E

CDC25 B Cdk 2 Cdk 2

P53 MDM2
RB
E2F
P P14ARF
P21, P27, P57

Point de contrôle S (Famille CIP/KIP)

………
ATR
ATM
ATRIP Point de contrôle G1/s
CLASPIN
RAD17
RAD9 – RAD1 – HUS1
 Dérégulation de la voie P16/Cdk4/Rb

Perturbation : > 90 % des GBMs

Très fréquente pour AA et oligo haut grade
< 15 % oligo bas grade
< 15 % A bas grade
P16

Perte d’expression de la protéine P16

  50 – 70 % GBM et AA

Délétions homozygotes
  ~ 55 % des GBMs
  20 – 25 % des AA
  10 – 20 % des O
  < 10 % à grade A II

Méthylation ou mutation
  < 10% des GBM
P15

Délétions homozygotes
  ~53 % GBMs

Méthylation du gène
  ~16 % GBMs

P18

Délétions homozygotes
  ~ 3 % GBMs

Méthylation du gène
  ~16 % GBMs
Rb

LOH en 13 q
  30 – 40 % des GBM et AA
  10 – 30 % des O
  rare pour A grade II

Mutation
  ~ 10 % des GBMs

Délétions homozygotes
  ~3 % des GBMs
Cdk4

Amplification
  ~ 14 % des GBMs
  5 – 10 % des AA et OA

Cdk6

  Amplification rare dans les GBMs

  Régulation par différents miRNA
 Les
“Thérapeutiques”

Wee 1
CDC 25 B Cycline H
Cycline H Cycline B
Cdk 7
Cdk 7 Cdk 1
Cycline D

CDC 25 A,B,C Cdk 4/6

Inhibiteurs de cdk
P16, P15, P18, P19à activité restreinte
Cycline A ex PD0332991
M (inhibiteur de cdk4/cdk6)
Cdk 1 G2 RB E2F
CHk1 ATR
G1 CDC 25 A
S CHk2 ATM
Cycline A Cycline E

CDC25 B Cdk 2 Cdk 2 Inhibiteurs de CHKI1

ex UCN-01 P53 MDM2
RB ( 7-hydroxystaurosporine)
E2F
P P14ARF
P21, P27, P57
Inhibiteurs de cdk à activité large
ex Flavopiridol
………
(inhibiteur de cdk1, cdk2, cdk4 et cdk6)
 Voie P53/P14/MDM2/MDM4
CELLULE NON STRESSEE

ub ub

ub ub Dégradation P53
MDM2

TAD PRD 4D
DBD LL CTD
E
MDM4
Inactivation P53

MDM2 ARN codant pour P53

Augmentation traduction
de P53

ub ub
Diminution traduction
de P53
ub ub
MDM2

RPL26
 P P

Altération ADN : MDM2 MDM2

P14 ARF
Activation
oncogénique : Transcription P14ARF
MDM2 Activation P53

RPL11
RPL23
Stress nucléaire RPL5
ou ribosomial :
MDM2 Nucleophosmin

Nucleostemin RP57
 Voie P53/P14/MDM2/MDM4
P P P CELLULE STRESSEE (atteinte DNA/hypoxie/activation d’oncogènes/diminution nutriments…)

TAD ***** 4D accumulation P53

DBD LL CTD
PRD E Cytoplasme

Noyau
Liaison à BCL2

p300 A A
A A
p300
DBD A 4D
p300 A A A
Apoptose p300 DBD A 4D A A A
*****
P
PP DBD A 4D A A
PRD
***** 4D
TAD DBD L CTD
PRD D

Transcription gènes cibles

BAX
MDM2 P21 PCNA PUMA TIGAR DRAM
NOXA
arrêt du cycle réparation apoptose Inhibition de la Engagement
cellulaire de l’ADN glycolyse vers autophagie
 Dérégulation de la voie P53 / MDM2 / P14-ARF

Voie perturbée dans ~ 87% des GBM

> 70 % des astrocytomes
> 50 % des oligo II

P 53

Mutation du gène
  ~ 34 % des GBM I (> 60 % si GBM II)
  40 – 70 % des AA
  40 – 70 % des A II
  < 15 % des oligo
MDM2

Amplification du gène
  ~ 11 % des GBMs I (GBM I > GBM II)
  2 – 10 % des AA
  0 – 8 % des A II

MDM4

Amplification du gène
  ~ 4% des GBMs
P 14ARF

Délétions homozygotes
  ~ 55 % des GBMs
  15 – 20 % des AA
  rare dans A II

Méthylation du promoteur
  10-15% des GBMs
  20 – 30% % A II
 Les
“Thérapeutiques”

Wee 1
CDC 25 B Cycline H
Cycline H Cycline B
Cdk 7
Cdk 7 Cdk 1
Cycline D

CDC 25 A,B,C Cdk 4/6

P16, P15, P18, P19

Cycline A Molécules inhibant le complexe P53/MDM2
M Nutlins
Cdk 1 G2 RB E2F Spirooxindoles
CHk1 ATR
G1 CDC 25 A
S CHk2 ATM
Cycline A Cycline E

CDC25 B Cdk 2 Cdk 2

P53 MDM2
RB
E2F Restauration de la fonction P53
P P14ARF
Adv P53
P21, P27, P57
Réactivation forme mutante P53
PRIMA ………
Ciblage de cellules P53+
immunothérapie
 L’apoptose

Voie Extrinsèque Voie Intrinsèque

Famille
des TNFr

NOXA/PUMA

Pro-caspase BAX/BAK
8 t BID
Bcl-2/MCL-1
FLIP
BIM

Caspase 8 BID
activée
Pro-caspase 9 Cytochrome C

Apaf 1

Pro-caspases

Apoptosome

Caspases activées
(3, 7…)

Anti apoptotiques
 Protéines de la famille Bcl2

 Protéines multidomaines anti-apoptotiques

BH4 BH3 BH1 BH2

BCL-2, BCL-xl, BCL-w, MCl-1, A1

 Protéines multidomaines pro-apoptotiques

BH3 BH1 BH2

BAX, BAk, BOK

 Protéines avec juste le domaine BH3 (BH3-only proteins)

BH3

BIM, NOXA, PUMA, BAD, BID

 L’apoptose

Voie Extrinsèque
Voie Intrinsèque

Famille
des TNFr

NOXA/PUMA

Pro-caspase BAX/BAK
8 t BID
Bcl-2/MCL-1
FLIP
BIM

Caspase 8 BID
activée
Pro-caspase 9 Cytochrome C

Apaf 1

Pro-caspases

Apoptosome

Caspases activées
(3, 7…) XIAP

Survivin
Anti apoptotiques
 Protéines de la famille IAP (inhibitors of apoptosis)
ou BIRC (BIR containing domain)
1 142

BIRC5 = Survivin BIR

1 236

BIRC8 = ILP2 BIR RING

1 298

BIRC7 = ML-IAP BIR RING

1 497

BIRC4 = XIAP BIR1 BIR2 BIR3 RING

1 604

BIRC2 = C-IAP1 BIR1 BIR2 BIR3 RING

1 618

BIRC3 = C-IAP2 BIR1 BIR2 BIR3 RING

1 1403

BIRC1 = NAIP BIR1 BIR2 BIR3

BIRC6 = BRUCE BIR

Impliqué dans lien

avec caspases
RING Activité E3 ubiquitin ligase
 Résistance à l’apoptose

Famille
des TNFr

NOXA/PUMA

P53
Pro-caspase BAX/BAK
8 t BID
Bcl-2/MCL-1 ATF5
FLIP
BIM cMYC

Caspase 8 BID
activée
Pro-caspase 9 Cytochrome C

Apaf 1

Pro-caspases

Apoptosome

Bcl2L12

Caspases activées
(3, 7…) XIAP

Survivin
 Les
“Thérapeutiques”

Famille
des TNFr

NOXA/PUMA

P53
Pro-caspase BAX/BAK
8 t BID
Bcl-2/MCL-1 ATF5
FLIP
BIM cMYC

Caspase 8 BID Inhibiteurs de Bcl2

activée Gossypol
Pro-caspase 9 Cytochrome C
ABT-737
HA14-1
Apaf 1

Pro-caspases

Apoptosome

Inhibiteurs d’IAPs
Bcl2L12
GDC-0152
LCL161
Caspases activées TL32711
(3, 7…) XIAP AT-406

Survivin