Isolement (18-24h sur milieu non slectif)

Suspension en eau physiologique

de trouble quivalent au standard
Mc Farland 0,5 ( 10 UFC/mL).
8
P
r

p
a
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d
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c
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c
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m
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n
t
Sensible Intermdiaire Rsistant
Sensible Intermdiaire Rsistant
Diamtre dinhibition en mm
8
}
}
2 5
Concentration en antibiotique
en g/cm3 ou mg/L
Disque AB
Diamtre
dinhibition
Pour chaque antibiotique, mesurer le diamtre
de la zone dinhibition. Grce aux abaques
(exemple droite) dterminer la catgorie
clinique de la bactrie vis vis de chaque
antibiotique test (sensible, intermdiaire,
rsistant) et estimer la CMI.
Dans cet exemple la bactrie est intermdiaire
vis vis de lantibiotique. Estimation de
la CMI : 4 mg/L < CMI < 16 mg/L
Antibiogramme par la mthode de diffusion en milieu glos
par Rmi Moreda daprs ldition janvier 2010 du comit de lantibiogramme de la socit franaise de microbiologie.
L
e
c
t
u
r
e
Abaque de lecture
CCI
c
CCS
C
Bacille Gram ngatif
raliser en plus un petit
utiliser directement la suspension 0,5McF pour l couvillonnage. Pour la technique par inondation diluer au
1/10 (1 mL dans 9 mL)
Staphylococcus*
Enterococcus
* pour Staphylococcus aureus et la recherche de SARM, dposer un disque FOX ou Mueller-Hinton
30C ou Mueller-Hinton hypersal 37C, 24 48h avec inoculum charg et disque oxacilline.
Streptococcus
Mueller-Hinton + 5% sang de mouton 37C sous atmosphre enrichie en CO 18-24h. Milieu :
2
4 16
S
o
u
c
h
e

p
u
r
e

t
u
d
i
e
r
D d
CCI = c = concentration critique infrieure (CCS = C = suprieure)
D = diamtre critique suprieur (d = infrieur)
Rmi Moreda - Lyce Docteur Lacroix - Narbonne
- couvillonnage : diluer au 1/10 ( 10 UFC/mL) (10 goutte de
pipette Pasteur dans 5 mL deau physiologique strile)

7
- inondation : diluer au 1/100 ( 10 UFC/mL) (1 goutte de pipette
Pasteur de suspension dans 5 mL deau physiologique strile)

6
}
Milieu : Mueller-Hinton 37C 18-24h
}
Il est possible de partir dun
bouillon, par exemple pour les
bacilles Gram ngatif,
et
:
culture en bouillon
Mueller - Hinton
incub 3 5 h
sous agitation et ajust ensuite
0,5 de Mc Farland.
Staphylococcus Enterococcus
Technique par inondation
Inoculum
Recouvrir la glose dinoculum Aspirer le surplus
Laisser scher 15 minutes
Alaide dun couvillon essor, ensemencer toute
la surface du milieu (3 passages orientation dcale
de 60 pour la bote et lcouvillon)
1/3 de tour 60 (1/3 de tour)
E
n
s
e
m
e
n
c
e
m
e
n
t
Dpt des disques dantibiotique selon schma de disposition
(maximun 6 disques sur grande bote de ptri)
Incubation 18-24 heures 37C en arobiose
sauf cas cits plus haut.
D

t
Technique par couvillonnage
Technique privilgier car elle vite les arosols.
Aujourdhui dconseille car risque d aux arosols.
Elle est nanmoins encore utilise en milieu professionnel.
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