SIS 051

FICHE TECHNIQUE 25 : Centrifugation

la fin de la lecture de ce document, vous devez : Connatre le fonctionnement de la centrifugeuse Connatre le temps de centrifugation pour chaque spcimen Savoir calculer la RCF Connatre les erreurs pr-analytiques

1. La centrifugation en analyse mdicale dfinition La centrifugation est une technique qui utilise le principe de la force centrifuge pour sparer les composants du sang, en vue d'analyses ultrieures. Le sang est rcolt dans des tubes centrifugation qui sont ensuite placs dans la centrifugeuse. Pendant la centrifugation certains composants du sang vont sdimenter et se dposer au fond du tube. Ils sont ainsi spars du surnageant. Abrviations utiles : g = 9,81 m . s 2 (m = mtre, s = seconde). RPM : rotation par minute. RCF : force centrifuge relative (Relative Centrifugal Force).

2. Manipulation : quilibrage des tubes Les tubes doivent tre disposs dans le rotor de faon viter tout dsquilibre. Ainsi le poids des tubes qui se font face dans le rotor doit tre identique. Si le nombre de tubes centrifuger est impair, on placera en face du tube unique un tube contenant le volume deau ncessaire pour obtenir un poids identique. Un dsquilibre dans le chargement du rotor (tube plus lourd dun cot que de lautre) peut avoir des consquences dramatiques : rupture de laxe et expulsion du rotor car soumis des vitesses normes, do le risque de dommages dans le laboratoire et de blessures du personnel. 3. Temps de centrifugation ncessaire pour le srum, le plasma et le sdiment urinaire Pour obtenir un srum : il faut dabord attendre que le sang soit compltement coagul, cest--dire au minimum 30 60 minutes temprature ambiante. Le temps peut tre prolong si le patient est sous anticoagulant. Aprs coagulation, centrifuger le tube entre 1 000 et 1 200 g pendant 10 15 minutes. Pour obtenir un plasma et/ou un srum dpourvu de plaquettes : une centrifugation de 2 000 3 000 g pendant 15 30 minutes est ncessaire. Pour le sdiment urinaire : centrifuger lchantillon 400 g pendant 5 minutes. Ne pas dpasser ces recommandations car les culots ont tendance tre trop compacts et les leucocytes former des amas. 4. Calcul de la force centrifuge relative (RCF ou nombre de g ) Le calcul de la force centrifuge relative peut se faire soit par quation mathmatique ou par lutilisation dun nomogramme. 4.1 Calcul de la RCF par quation mathmatique La force centrifuge relative en g est fonction de la vitesse en tours/min du rotor et de la distance entre laxe du rotor et le point considr (ou rayon de rotation) selon la formule : RCF = 1,118 x 10-5 . r . n2 O r = distance en cm entre laxe du rotor et le point considr (rayon de rotation) n = vitesse de rotation en tours par minute Exemple : un rotor a un rayon de rotation de 10 cm. A quelle vitesse faudra-t-il programmer la centrifugeuse pour obtenir une acclration de 100 000 g ? En utilisant la formule ci-dessus, on obtient : 100 000 = 1,118 x 10-5 . 10 . n2 o n=

100000 = 1,118 x104

100000 x104 = 29 904 tours par minutes. 1,118

4.2 Calcul de la force centrifuge relative (RCF) par lutilisation du nomogramme Exemple : quelle est la force centrifuge relative en g pour un rotor ayant un rayon de rotation de 10 cm et une vitesse de rotation de 4 000 tours par minute ? Rponse : 2 000 g. En effet, en reliant les points reports sur lchelle de la rotation par minute et rayon du nomogramme ci-dessous, la droite coupe lchelle de la force de centrifugation relative 2 000 g.

Figure1: Nomogramme et formule de calcul de la vitesse de rotation partir du rayon de la centrifugeuse (cm) et de la force centrifuge relative (g). A remarquer qu'en gnral, on devrait donner la RCF en termes de g plutt que de RPM. En effet les RPM n'ont de signification qu'en fonction d'un rotor donn, puisque chaque rotor a des dimensions diffrentes, donc des rayons de rotation diffrents. Ainsi si lon donne la RCF en g, on pourra calculer les RPM quivalents pour le rotor disposition, sans avoir chercher les dimensions du rotor utilis, pour retrouver la mme force de centrifugation. 5. Entretien et maintenance de la centrifugeuse La qualit des analyses peut tre affecte par un appareil sale (risque de contamination croise). Le rotor et les accessoires doivent tre nettoys et dsinfects rgulirement. Un programme de maintenance doit tre prvu pour vrifier que la vitesse de centrifugation est bien celle attendue (voir les recommandations de maintenance du fournisseur). 6. Erreurs pr-analytiques lies la centrifugation Toute centrifugation incorrecte peut provoquer en particulier une augmentation du taux de potassium, de phosphate inorganique ou de lactate dshydrognase. 6.1 Temprature La centrifugation est en gnral ralise temprature ambiante, mais pour certains analytes labiles ces tempratures (tenir aussi compte que la temprature augmente durant la centrifugation), il faut rgler la temprature de centrifugation la temprature adquate. 6.2 Temps de centrifugation Le temps de centrifugation doit correspondre lchantillon. Pour les spcimens anticoaguls, il doit tre adapt de faon ce quil ne reste plus de plaquettes dans le plasma. 6.3 Tubes avec gel sparateur Les tubes avec gel ne doivent jamais tre re-centrifugs car la re-centrifugation de tels tubes peut avoir des consquences sur les rsultats : des particules de gel peuvent se dtacher et se mlanger au srum. Conseil : si lchantillon devait tre re-centrifug, aspirer le srum ou le plasma du tube primaire et le recentrifuger dans un autre tube propre et sec. 6.4 Re-centrifugation des spcimens conservs Une pseudo augmentation du potassium peut tre observe sur des srums re-centrifugs, aprs 12 heures de conservation. Juillet 2009 Tarik Sabbari Hassani, Dagmar Kesseler et Andr Deom CSCQ 2009. AUCUNE COPIE DE CE DOCUMENT N'EST AUTORISEE SANS LACCORD DU CSCQ. .CSCQ, 2 CHEMIN DU PETIT-BEL-AIR, CH - 1225 CHNE-BOURG