NEUROBIOLOGIE (J-M MIENVILLE 2001) I.

Gnralits - Anatomie
Toutes les cellules de lorganisme gnrent de llectricit (cf. potentiel de repos). Ce qui caractrise les cellules excitables neurones et cellules musculaires , cest un rpertoire particulier de canaux ioniques qui leur permet de gnrer des potentiels daction (PA). Pour les cellules musculaires ce PA permet la contraction, pour les cellules scrtrices il est souvent li la scrtion ; pour les neurones il permet une communication ultra-rapide de cellule cellule. Par comparaison avec le SN, le systme endocrinien utilise un mode de communication beaucoup plus lent et implique gnralement des effets plus long terme (heures jours contre ms). Ceci est bas sur lloignement entre la cellule endocrinienne et sa cible et le fait que le message emprunte la voie systmique, alors que les neurones sont en contact quasi direct par lintermdiaire des synapses. Le PA constitue lunit de base de la communication neuronale. On a ici un codage binaire (PA = 1 ; pas de PA = 0) bas sur la modulation en frquence des impulsions transmises. La richesse de linformation vient du grand nombre dunits fonctionnelles (neurones et synapses) construites en rseaux. Sur le plan phylogntique, le SN apparat chez la mduse. Chez lAplysie il y a 20000 neurones (rpertoris), et dja on trouve une bauche de mise en mmoire. Chez lhomme, il y a 1011 neurones et un nombre variable de synapses par neurones, de quelques unes jusqu 200000 dans la cellule de Purkinje. Si on multiplie le nombre de neurones par le nombre de synapses, on a donc une ide des capacits de travail que cela suppose... Durant la dernire dcennie, de nombreux dogmes appartenant aux neurosciences ont d tre abandonns. Un de ces dogmes concerne la soit-disant incapacit de lorganisme adulte gnrer des neurones. Il est vrai que chez les mammifres la neurognse dans son ensemble se termine la naissance, et quil y a ensuite perte du patrimoine de dpart raison de 5000 neurones par jour (?), sauf condition pathologique. Mais on sait maintenant quil existe aussi une neurognse adulte, tout au moins dans 2 rgions spcifiques qui sont le gyrus dent de lhippocampe et la zone sous-ventriculaire du tlencphale. Morphologie neuronale Le neurone comprend : 1. Un soma (corps cellulaire) quip de lappareillage commun toutes les cellules (noyau, mitochondries, Golgi, rticulum...) 2. Le neurone est une cellule dite polarise (asymtrique) avec dun ct les dendrites, qui constituent le ple normalement rcepteur. Les dendrites font 1-2 mm de longueur, et prsentent une arborisation variable (maximale chez la cellule de Purkinje). Laspect distal peut prsenter des pines, sites synaptiques dont la morphologie varie au cours des processus dapprentissage (sujet chaud). Ceci semble d laction de protines (ex. Arc codes sur place par lARNm prsent) qui interagissent avec le cytosquelette. Les pines constituent galement des compartiments calciques individualiss (possibilits de rgulation fine et prcise). Les dendrites, tout au moins leur point de dpart du soma, sont plus paisses que...
Neurone

3. laxone, trs fin, ce qui permet de distinguer ce dernier en microscopie. La longueur de laxone varie, de quelques mm dans le SNC jusqu >1 m la priphrie (jambe). Ces longues distances impliquent le besoin de support mtabolique, lequel seffectue par lintermdiaire du transport axonal le long des microtubules. Ces derniers sont galement utiles lanatomiste qui peut diffrencier les neurones des cellules gliales par exemple, par marquage des microtubules avec la toxine ttanique. Il existe aussi des microfilaments quen loccurrence on appelle neurofilaments, plus impliqus comme lments structuraux de la cellule, et quon peut aussi marquer de faon spcifique. Laxone prsente son dpart un cne axonique, au niveau duquel le PA est souvent gnr, et une arborisation terminale, chaque terminaison prsentant un renflement appel bouton terminal. Enfin, laxone peut tre mylinis ou pas, ce qui a des consquences Schwann importantes sur la vitesse de conduction (voir plus loin). Au niveau priphrique la mylinisation est effectue par les cellules de Schwann, qui entourent laxone de plusieurs A A couches de membrane plasmique, dont la nature essentiellement lipidique constitue un bon isolant. Au niveau central, la mylinisation est assure par les oligodendrocytes. Cest cause de la prsence de myline sur les axones quon emploie le terme de substance blanche pour les voies nerveuses, alors que les corps cellulaires constituent la substance grise. Types neuronaux
Types

Impossible ici de rendre compte de tous les types neuronaux, mais les grandes classes sont : 1. Neurones multipolaires : il sagit entre autres des interneurones et des motoneurones, qui se distinguent par le fait que les IN ont des axones plutt courts, alors que les MN peuvent avoir des axones trs longs (+ GABA-gly vs ACh). 2. Neurones bipolaires : ex. cellules de Cajal-Retzius 3. Neurones monopolaires : cellules des ganglions de la racine dorsale, qui prsentent la particularit (elles nont pas de dendrites) que les axones ont un segment priphrique sensitif (activ par des rcepteurs mcano ou thermosensibles), et un segment central qui relaie linfo (ex. douleur) la molle pinire. 4. Cellules pyramidales : tage de sortie excitateur du nocortex et de lhippocampe. 5. Cellules de Purkinje : tage de sortie inhibiteur du cervelet.

Cellules gliales Assurent un support mtabolique, par rgulation des concentrations ioniques et du pH extracellulaires (cf. activit neurones et [K+]e), mais aussi recyclage et synthse des prcurseurs des neuromdiateurs. 3 grands types : 1. Astrocytes : impliqus dans lactivit mtabolique mentionne.

Radiales Cortex

Ventricule

2. Oligodendrocytes : assurent la mylinisation dans le SNC. 3. Microglie : ressemblent des macrophages, et semblent prolifrer en cas de lsions nerveuses, ce qui suggre un rle dans la restauration neuronale (sujet chaud). 4. Gliales radiales : pendant la corticognse, aident la migration radiale des neuroblastes. Se transforment ensuite en astrocytes.

II. Biophysique membranaire

Gnse du potentiel daction Les neurones sont mauvais conducteurs dlectricit (axone considr comme cble). Lvolution a donc permis de dvelopper un systme qui permette la propagation de linflux : le PA. Au dbut des recherches (40-50s), linstrumentation limite obligeait utiliser des modles biologiques faciles daccs : axone gant de calmar ( ~1 mm), nerf sciatique de grenouille (TP), ganglion dAplysie... On a maintenant accs des structures plus fines, et on utilise en gnral des lectrodes de verre (~ 1 m la pointe) qui sont remplies dune solution saline connecte linstrumentation denregistrement. La prep est baigne dans un liquide physiologique mis la terre via une lectrode de rfrence quon dfinit comme le potentiel zro, et cest la ddp entre lintrieur et lextrieur de la fibre ou cellule quon enregistre. Dans un premier temps, on va sintresser aux proprits Hyperpol passives des membranes. Pour cela, on va transitoirement hyperpolariser la membrane via llectrode, laquelle sert la fois lenregistrement et la stimulation. La rponse (quon appelle un potentiel lectrotonique) a une forme exponentielle cause du fait que la membrane se comporte comme une rsistance et une capacitance en parallle. Si on place une 2me lectrode denregistrement une distance x de la 1re, on saperoit 1) que la rponse y arrive peu prs en mme temps qu la 1re, mais que 2) son amplitude est largement diminue. Et si on loignait cette 2me lectrode de plus en plus, on sapercevrait que la diminution de la rponse est exponentielle par rapport x. On peut donc caractriser la rponse V une distance , appele constante despace, telle V que V = V0/e (V0 = rponse au point de stimulation) ; autrement V0 dit, quand x = , V = V0 e-x/ = V0 x 0.37. A x = 3, comme e-3 = 0.05, la rponse nest plus que 5% de la rponse initiale. Or, dans la plupart des fibres, tourne autour du mm, ce qui pose un srieux problme puisque les axones doivent parfois x conduire sur >1 m. Il fallait donc inventer le PA. Le PA est une manifestation explosive qui rsulte de louverture de canaux sodiques et, pour ce qui est du muscle cardiaque et stri et de certains neurones scrteurs , de canaux calciques. Pour simplifier, on ne considrera ici que le cas des canaux sodiques. Le canal sodique est une protine, ce qui implique la prsence de charges lectriques. Comme, de plus, cette protine est ancre dans la membrane, elle capte les variations de ddp. On verra par la suite le cas physiologique de la gnse du PA, mais pour
Prep

linstant on ne considre que le cas de lexprimentateur qui, in vitro, stimule lectriquement une fibre ou un neurone et, ce faisant, fournit donc une certaine nergie au systme. Lide datteindre le seuil de dclenchement du PA signifie que lapport nergtique est suffisant pour altrer la structure tertiaire (conformation) de la protine, altration qui se traduit par louverture du canal. On est pass ici du domaine passif, pour lequel la membrane ne faisait que subir la stimulation, au domaine des proprits actives, grce auxquelles le PA est dclench. Louverture du canal entrane un influx de Na+ (NB : linflux, lui, est passif), et comme il sagit dun cation, la membrane va tre dpolarise davantage, ce qui va entraner louverture dun plus grand nombre de canaux, et ainsi de suite. On parle de phnomne rgnratif, ou de rtrocontrle positif... On compare aussi ce phnomne une explosion due la mise en train dune raction exothermique. A partir, donc, du seuil Polarisation de dclenchement, on Em (mV) Dpol observe une dpolarisation Seuil TEA 40 Overshoot trs rapide de la membrane Repol qui atteint le zro Hyperpol (undershoot) (signification mme de la TTX 0 d-polarisation ; NB : viter TEA de parler daugmentation ou diminution du Em), mais qui TTX ensuite continue... jusquau -40 voisinage du ENa 58 log10 -60 150/15 58 mV. En fait, on natteint jamais ce potentiel Temps (ms) car 2 autres freins sinterposent : lun consiste 1 2 3 4 en linactivation des canaux sodiques, lesquels passent donc dun tat ferm un tat ouvert puis un O tat inactiv, avant de revenir un tat ferm disponible la rouverture. Un 3me mcanisme se met aussi en train avec louverture de canaux K, qui F I sont galement sensibles au potentiel mais sont plus lents que INa. Ces canaux K sont responsables de la repolarisation et, ventuellement, dune hyperpolarisation de la membrane. Un autre dogme mane souvent de la confusion entre la nature tout-ou-rien du PA et lide que son amplitude ne serait pas modulable. En fait, lamplitude du PA dpend de : 1) la densit de canaux Na, 2) la concentration de Nae, 3) la prsence de canaux K (IA) presque aussi rapides que les canaux Na, et 4) lutilisation de bloqueurs (TTX) concentrations submaximales. Ce qui compte en fait, cest laspect tout-ou-rien du PA qui, quelque soit lamplitude, dtermine sil y a conduction ou pas. [A retenir, la pharmacologie de base du PA : TTX et TEA.] Au cours dun PA, la quantit dions implique nest de nature modifier les concentrations ioniques ni lintrieur de la cellule, ni autour de la membrane. Par contre, un neurone met souvent des frquences de dcharge soutenues ; dans ces conditions, le travail de restauration ionique effectu par lATPase Na/K est important : il peut mme consommer jusquaux 2/3 du pool disponible dATP de la cellule. Chaque type de neurone se manifeste aussi par sa frquence de dcharge maximale. Par exemple, les interneurones GABAergiques sont les cellules les plus rapides du SN ( 600 Hz ; cf. pilepsie), alors que les cellules pyramidales sont plus lentes (50-100 Hz), ces critres rpondant aux diffrents rpertoires de canaux ioniques que possdent ces cellules.

PR

Priodes rfractaires
O F I O PRA F PRR

INa

IK

Reprsentent des priodes qui suivent un PA et qui correspondent une certaine incapacit mettre un 2me PA, cause de linactivation des canaux Na. Elles permettent aussi dtablir les frquences maximales de dcharge. Enfin, on verra plus loin que les PR expliquent la notion de propagation unidirectionnelle. Relations intensit-dure de stimulation

Istim efficace

Rhobase

Rh Chronaxie Accommodation

tstim

Le paramtre de base dune stimulation est la charge (Q = i.t ; en coulombs). Si on considre la charge minimale qui dclenche un PA (stimulation dite liminaire), on peut augmenter la dure t et diminuer lintensit i de faon obtenir des stimulations liminaires identiques. Lintensit au-dessous de laquelle on nobtient plus de PA quelque soit la dure sappelle la rhobase. La dure qui, sur la courbe i-t, correspond au double de la rhobase sappelle la chronaxie. Accommodation

Si au lieu dutiliser une stimulation carre on augmente i progressivement, lobtention dun PA va demander davantage dintensit car en mme temps PL ZR quon active les canaux Na, on en inactive une partie. Plus la rampe de stimulation est lente, plus lintensit requise est grande, jusqu ce quon atteigne une pente limite partir de laquelle on nobtient plus de PA quelque soit lintensit utilise. Rh La droite daccommodation dfinit une zone de rponse, et son intersection avec laxe dintensit est Temps dtablissement la rhobase. La projection, par cette droite, du double de la rhobase sur laxe du temps dtablissement dfinit la constante daccommodation qui, NB, augmente quand laccommodation diminue et est infinie quand laccommodation est nulle (pente = 0). NB : laccommodation a des consquences physiologiques. Avec des neurones forte accommodation et/ou avec des stimuli qui varient lentement, linfo peut ne pas tre transmise, c--d le stimulus peut ne pas tre peru.

Istim

. ..

DA

Unidirect. a+b

Propagation du PA

Linactivation des canaux Na donne la propagation son caractre unidirectionnel. Dans le contexte physiologique, a pourrait vouloir dire quun PA gnr au niveau du cne axonique se propage uniquement vers les terminaisons. En fait, il sagit l encore dun dogme obsolte puisquil a t dmontr (Sakmann) quil existe une propagation rtrograde (dont le rle serait de moduler ltage dentre du neurone) vers les dendrites. De mme, dans le contexte exprimental, une stimulation au milieu de laxone entrane une propagation dans les 2 sens. Nanmoins, le concept dunidirectionnalit reste valable si on considre seulement limpossibilit de retour du PA vers le point de dpart. Considrons maintenant les Proche-proche obstacles la propagation : PA el1-el2 (mme ampli mais dlai) 1) Dans laxone amylinique, le PA se propage de proche en proche, ce qui prend beaucoup de temps puisquil sagit de 0 1 2 0 1 2 changements successifs de conformation protique (courant ++++++++++++++++++ ionique au travers des canaux Na + Ri et K). Rm 2) La conduction lectrotonique (courant lectrique) est beaucoup Re plus rapide, mais on a vu que la distance laquelle ce courant se propage, f( ), est insuffisante. La raison en est que Rm Saltatoire = (Re est ngligeable). Si Rm est faible et/ou Ri Ri + Re leve, le courant a tendance fuir et se dissiper. Solution : augmenter Rm ou diminuer Ri pour allonger . Or, Ri = (L/S). Pour diminuer Ri, il suffit donc daugmenter le diamtre des axones, et pour augmenter Rm, de les garnir dune gaine de myline (lipides = isolants). La myline est dpose en manchons de 1-2 mm spars par les noeuds de Ranvier riches en canaux. Le PA se propage ainsi sur le mode saltatoire grce une conduction lectrotonique rapide dun noeud lautre, en faisant une conomie nette douvertures de canaux. On passe ainsi dune vitesse de conduction de 1-10 m/s dans les fibres amyliniques jusqu 150 m/s dans les motoneurones myliniss de gros calibre. NB : ce systme est dautant plus prpondrant dans les neurones qui 1) sont importants pour la survie (ex. fuite devant un prdateur) et 2) ont de longs prolongements qui impliquent un temps de conduction lev.

III. Physiologie synaptique

En parlant du PA, nous avons jusqu prsent parl de canaux voltage-dpendants (voltage-gated), qui utilisent de lnergie lectrique pour sactiver. Nous allons maintenant parler de canaux ligand-dpendants , qui eux utilisent de lnergie chimique (liaison du

ligand avec un complexe rcepteur-canal). On peut cependant noter que cette nergie chimique est convertie en nergie lectrique puisque louverture des canaux liganddpendants entrane une modification de potentiel de la membrane postsynaptique. Jusqu prsent, nous navons parl du PA que sous langle de lexprimentation, c--d comme tant gnr artificiellement par stimulation lectrique. Nous allons maintenant voir comment un PA peut tre gnr de faon physiologique par activation synaptique. Il faut cependant signaler quin vivo, tous les PAs ne sont pas forcment gnrs de cette manire ; il existe en effet des cellules dites pace-makers qui sont capables de dcharger de faon automatique ; il sagit par ex. des myocytes cardiaques du noeud sinusoatrial, mais aussi, dans le SNC, de Module certains neurones quon trouve par ex. dans le thalamus, et qui oscillent avec un rythme propre. Entre Sortie En simplifiant, on peut concevoir un module 2 neurones o lactivation de canaux liganddpendants constitue ltage dentre du systme, en fonction de quoi lactivation de canaux voltage-dpendants constitue son tage de sortie. Types de synapse (niveau microscopique)
Synapses

AS AA AD -

Au
Rseaux

Synapses axo-dendritiques : les plus communes ; seffectuent le cas chant entre boutons terminaux et pines. Synapses axo-somatiques. A-D et A-S peuvent tre excitatrices ou inhibitrices. Synapses axo-axoniques : modulent (facilitent ou inhibent) la libration de neuromdiateurs (NMs) par laxone. Autapses. Concept relativement nouveau ; rle inconnu.

Types de rseaux synaptiques (niveau macroscopique) Rseaux linaires : cas des cnes rtiniens discrimination spatiale - Rseaux convergents : cas des btonnets dtection de faibles intensits lumineuses (amplification) - Rseaux divergents : cas des structures mises en jeu dans le rflexe myotatique. Cf. aussi le traitement en parallle de linfo sensorielle (coordination de la rponse). Rseaux en boucles. NB : quand linterneurone est inhibiteur, plus la frquence de dcharge de lorigine augmente, plus la transmission est inhibe (rtrocontrle ngatif) ; quand linterneurone est excitateur, plus la frquence de dcharge augmente, plus la transmission est facilite (feedforward positif). -

Cortex Syn.

Synapses lectriques (phapses)

En trs faible proportion chez les vertbrs suprieurs (0,1%), elles sont plus communes Ext. dans le SN embryonnaire ou chez les organismes infrieurs (ex. langouste). Assurent le couplage lectrique entre cellules au moyen de pores rassembls dans Flch. Renshaw des zones dapposition membranaire troite (2-3 nm) appeles gap junctions . Les pores sont forms par la connexion de 2 Myotatique complexes macromolculaires consistant eux-mmes en un assemblage de 6 sous-units de connexine (protine de 25 kDa). Le diamtre du 2-4 nm pore permet le passage non-discriminatif non seulement dions divers mais aussi de composs i 1,5 nm dun poids molculaire atteignant jusqu 500 Da, ce qui peut donc inclure, par ex., des nuclotides (ATP, AMPc, GTP, GMPc...). Ceci laisse penser quau del du couplage lectrique, les gaps Connexines assument aussi un rle au niveau de lchange mtabolique cellulaire (prsence dans le SN embryonnaire, mais aussi dans dautres tissus non-excitables comme les cellules pithliales, hpatiques, etc...). Le couplage lectrique phaptique est instantan (pas de dlai synaptique), un avantage manifeste au niveau par ex. du syncitium cardiaque pour assurer la synchronisation de la contraction. On pourrait par contre considrer comme un dsavantage le fait que la transmission phaptique est monotone , en ce sens que le signal postsynaptique reflte exactement le signal prsynaptique sans possibilit de modulation (excitatrice ou inhibitrice), contrairement au cas des synapses chimiques.

Synapses chimiques Ce sont celles qui nous intressent ici puisque prsentes 99,9%. En microscopie lectronique, la synapse est reconnaissable par des paississements pr- et postsynaptiques, et, en gnral, par la prsence de vsicules de scrtion prsynaptiques. Les paississements peuvent tre de mme taille, on parle alors de synapse symtrique, ce qui le plus souvent correspond une synapse inhibitrice ; ou bien lpaississement prsynaptique est plus fin que le post, et on a alors une synapse asymtrique de type excitateur. La largeur de la fente synaptique est de lordre de 20 40 nm. Le dlai synaptique est de lordre de 0,5 ms et dpend essentiellement du mcanisme de libration du NM (et non pas du franchissement de lespace synaptique).
Symtrie

Synapse calmar

Nb PPM 20 15

Histo EPPs

Mcanismes de libration synaptique

10

Le PA (dclench par un facteur X) 5 arrive au niveau de la terminaison axonique et la dpolarise, activant PMPM ainsi des canaux calciques voltagedpendants (cf. T, L, N, P, Q, R). 0 0,8 1,6 2,4 3,2 mV Le [Ca]i passe ainsi de 50-100 nM 1-5 M (distribution diffrentielle zone primembranaire-cytoplasme), ce qui dclenche la libration de NM. Fatt et Katz dans les annes 50-60 et Miledi dans les 70s dmontrent limplication du Ca dans la libration des NM. Ils utilisent pour cela la synapse gante de calmar, sur laquelle ils placent des lectrodes au niveau pr- (!) et postsynaptique. Expriences : 1. En prsence de TTX une Exocytose Cytosquelette stimulation prsynaptique produit quand mme une rponse post. 2. Lomission du Ca ou son Synapsine remplacement par Cd ou Co abolissent la rponse. 3. Lutilisation dune sonde calcique Synaptophysine (Fura, Indo...) permet de dtecter une augmentation de [Ca]i dans llment prsynaptique stimul. Synaptotagmine 4. Une injection de Ca (iontophorse) dans llment prsynaptique induit une rponse sans stimulation Kinase Ca-depte pralable. 5. Une coinjection avec un chlateur Pi + ADP ATP du Ca (EGTA, BAPTA...) abolit la rponse. Ces auteurs travaillent ensuite sur la jonction neuromusculaire (JNM). Ils rduisent le [Ca]e afin (1) dviter de casser llectrode (contraction), et (2) dobtenir autre chose quun monotone PA sans valeur informative. Ils obtiennent alors, soit sur stimulation, soit de faon spontane, des Ca2+ EPP (PPM) qui varient en amplitude de manire alatoire. Ils groupent ces Ca amplitudes en intervalles de classe et construisent des histogrammes (nb de PPM vs. ampli). Ils observent alors (1) que les pics des histogrammes sont espacs de 9

faon quidistante, et (2) quil existe une amplitude minimum (~ 0.4 mV) correspondant ce quils appellent MEPP (PMPM). Simultanment, la technique de microscopie lectronique bat son plein et Transport met en vidence la prsence de vsicules prsynaptiques. Cest la naissance de la thorie quantique de la libration synaptique, Stockage un PMPM correspondant la libration dune vsicule, et les PPM celle de n Lib vsicules. De plus, la thorie et le modle Recyclage sont confirms par les prdictions Endocytose statistiques de Poisson (courbe). Il faut quand mme prciser que ce modle nest pas universel en ce que 1) il existe des synapses sans vsicules, et que 2) certaines formes de libration nobissent pas aux prdictions statistiques (sujet constamment dbattu actuellement). La thorie quantique est cependant universelle en ce qui concerne la JNM. On connat mme la concentration (100 mM) et le nombre de molcules (10000) dACh dans une vsicule. Aprs toutes ces dcouvertes, il reste maintenant comprendre le lien (encore mal connu) entre le Ca et la libration vsiculaire. De nombreuses protines impliques dans ce processus ont t dcouvertes ; nous nen considrerons que 3, trs importantes : synapsine, synaptophysine et synaptotagmine (cf. schma). Larrt de lexocytose est marqu par la repolarisation membranaire (aprs PA), la fermeture des canaux Ca et la baisse consquente de la [Ca]i. Celle-ci est due au pompage du Cai hors de la cellule et vers les organites intracellulaires (ex. rticulum) par des Ca-ATPases. Ce travail est facilit par des protines cytoplasmiques qui lient le Ca (ex. calmoduline) et le dlivrent aux sites de pompage. Aprs largage de leur contenu, les vsicules sont rcupres par endocytose et recycles sur place (re-remplies) ou transportes par transport rtrograde vers le soma, galement pour recyclage.
Recyclage

IV. Neuromdiateurs
Loewi

On connaissait en 1960 7 ou 8 NMs, ~30 en 83, >100 maintenant ! La 1re preuve de lexistence de NMs remonte 1921 avec Otto Loewi qui enregistre le coeur de grenouille isol et stimule le vague pour observer des effets inotropes et chronotropes ngatifs. Or, sur un 2me coeur perfus avec le perfusat du 1er coeur, il observe les mmes effets que la stimulation du vague, ce qui prouve que ces effets sont dus une substance chimique, alors appele vagustoff, plus tard identifie comme lACh.

Critres didentification dun NM 1. Il faut dabord dmontrer la prsence du NM prsum dans le neurone prsynaptique. Mais la prsence ne suffit pas... (cf. le glu prsent comme lment du mtabolisme cellulaire) 10

2. Montrer aussi quil existe une libration Ca-dpendante sur stimulation prsynaptique et, ventuellement, un systme de clairance (recapture ou dgradation, c--d fin du signal). 3. Il faut enfin dmontrer la prsence de rcepteurs spcifiques prsents sur la membrane postsynaptique (les agonistes miment la stimulation prsynaptique ; les antagonistes la bloquent). Classes de NMs I. Amines O + ACh (CH3)3 N (CH2)2 O C CH3 Jonction neuromusculaire (organismes suprs) SNA : tous les neurones prganglionnaires + les neurones postganglionnaires du systme parasympathique. Noyau de Meynert Cortex (cf. Alzheimer) ; voie septo-hippocampique (ibid). R1 C CH2 N HO H H HO a) NA (+A) - SNA neurones postganglionnaires du systme sympathique. - Formation rticule (locus coeruleus 90% de la NA) : systme ascendant (cf. dpression) + descendant (cf. sommeil paradoxal) ; rle modulateur ; alternance veille-sommeil ; vigilance. b) DA - Voie nigro-strie (Parkinson Carlsson) - Voies msolimbique + msocorticale (schizophrnie) R2 R1 R2

O, P

Catcholamines

DA H H

NA OH H

A OH CH3

Rticule

STM Th

SN

Srotonine (5HT ; indoleamine) HO - Raph : voies ascendantes (sommeil ; dpression) voies descendantes (analgsie) NB : catch. + 5HT = monoamines

(CH2)2 NH2 N (CH2)2 NH2

Histamine (imidazoleamine) - Systme vasculaire (dilatation) ; muscle lisse HN (contraction) ; scrtion gastrique. - Hypothalamus projection dans tout le cerveau (rle inconnu).

11

II. Acides amins (3 essentiellement) R1 NH2 C R2 H R1 R2 Glu COOH (CH2)2 COOH GABA H (CH2)2 COOH Gly H COOH

Glutamate (+Asp) NM excitateur dans TOUT le SN GABA NM inhibiteur dans TOUT le SN (cf. seulement 1 COOH de diffrence avec Glu !) Gly (+Tau) NM inhibiteur dans les structures infrieures du SN (tronc + moelle 50/50 avec GABA)

III. Purines (ATP, ADP, AMP, adnosine) Systme priphrique, ganglions de la racine dorsale, hippocampe (ATP).

IV. Neuropeptides Opiodes : endorphines (15-30 AAs) ; enkphalines (5 AAs) ; dynorphines (17) Substance P (11 AAs ; douleur) Hormones hypothalamohypophysaires : OCT, ADH, LHRH, TRH... Hormones du tractus digestif : CCK, VIP... NB : double rle des HHH et HTD. Synthse, transport et catabolisme Rgle gnrale : 1. Les NMs de faible taille (amines + AAs) font lobjet dune synthse locale (c--d dans la terminaison) par des enzymes transportes depuis le soma par transport lent (0,5-5 mm/jour). 2. Les peptides sont synthtiss comme prcurseurs (propeptides) dans le soma, et stocks dans des vsicules (en gnral avec les enzymes de clivage) la sortie du Golgi. Les vsicules sont transportes par transport rapide (400 mm/jour) le long des microtubules (tubuline) par des protines motrices (qui consomment de lATP) comme la kinsine. NB : ct de ce transport antrograde, il existe aussi un transport rtrograde qui sert transmettre de linfo de la priphrie vers le soma au cours de processus tels que croissance, guidage axonal, rgnration, et transporter les vsicules de scrtion pour recyclage. Ici, la protine motrice est la dynine. NBB : ce transport est aussi trs utile lanatomiste qui peut retrouver lorigine de voies nerveuses par marquage avec par ex. la peroxydase du raifort ou la toxine ttanique. ACh : actylcoenzyme A + choline CAT ACh AChE actate + choline

nostigmine

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Terminaisons ACh + CA

TH DDC DBH CAT

Tyr Tyr CA

GLIE
COMT

Na+ Choline + CoA Choline + CH3COOH AChE ACh Na+ ACh

MAO

Na+

CA

Catcholamines : prcurseur commun : tyrosine TH Tyr DOPA DDC DA DBH NA PNMT A

On pensait avant que la DA ntait quun prcurseur de la NA. Carlsson (Nobel PM 2000) montre 1) que cest un NM part entire (lapins + rserpine + DOPA pas de NA) ; 2) que la voie nigro-strie, implique dans le contrle des mouvements, est dopaminergique et dficiente chez Parkinson ; 3) quon peut obtenir des rsultats thrapeutiques sur Parkinson avec L-DOPA. Srotonine : Trp (AAE) Histamine : His (AAE) HDC histamine Trp hydroxylase 5-OH-Trp AA dcarboxylase 5HT

Glu + GABA : - Synthse et dgradation considrer conjointement - 2 sources pour le glu : partir de la gln et de l -ctoglutarate (produit par le cycle de Krebs). Gly (AANE): glucose Ser Gly

13

Synthse glu-GABA + shunt

GLIE gln gln glnase glu synthase glu Ac. succ. gln glnase glu
GAD + B6

-CG

Transaminase

NH2 S

GABA

GABA

Glu

GAD Purines : - Glycolyse, phosphorylation oxydative (aprs Krebs)... - NB : ATP souvent prsent dans vsicules de scrtion (remplissage contre gradient ?) - NBB : ecto-ATPases Neuropeptides : - Exemple classique du systme prcurseur-clivages successifs : POMC ACTH -lipotropine -lipo -endorphine

Souvent colibrs avec petits NMs. Ex : GABA/SRIF ; ACh/VIP ; NA/NPY ; DA/CCK ; 5HT/SP... (cf. principe de Dale) Fin du signal = protolyse

V. Rcepteurs
Concept introduit en 1906 par Langley, qui observait des effets trs puissants de divers produits sur la scrtion salivaire, et travaillait aussi sur laction de la nicotine sur la contraction musculaire. Au niveau de la cellule nerveuse, la fonction dun rcepteur est de modifier, directement ou indirectement, lactivit de canaux ioniques, afin de modifier la polarisation de cette cellule. On a donc conversion dune nergie chimique en nergie lectrique. On distingue 2 grandes classes de rcepteurs : - Les rcepteurs ionotropes (ionotropic), pour lesquels le site rcepteur et le canal ionique font partie du mme complexe macromolculaire (NB : dfinition identique celle de canal ligand-dpendant). - Les rcepteurs mtabotropes (mtabotropic), qui sont spars du canal-cible et sont coupls des protines G. NB : un mme NM peut activer des rcepteurs iono et mtabotropes, y compris dans une mme cellule. 14

I. Rcepteurs ionotropes Le prototype est le rcepteur nicotinique de la JNM, activ par lACh. Cest le plus tudi (cf. Changeux), le plus connu et dans le plus grand dtail (visualis en microscopie lectronique !). NB : se souvenir que lACh active galement des rcepteurs mtabotropes de type muscarinique (ex. coeur). Principe gnral des rcepteurs ionotropes : la liaison du NM produit un changement de conformation du complexe rcepteur-canal qui se traduit par louverture du pore et le passage plus ou moins slectif dions. Selon le potentiel dquilibre, E, de ces ions, le courant engendr sera hyper- ou dpolarisant (ou rien si Ei = Em). Par ex., le canal nicotinique est cationique non-slectif, c--d quil laisse passer le Na et le K, donc son E devrait se situer autour de la moyenne ENa / EK (ENa ~ +50 ; EK ~ -85) ; en ralit, Enic ~ 0 mV parce-qu partir du potentiel de repos (~ -60/-70), il y a davantage de gradient en faveur dun influx sodique. Lactivation du rcepteur entrane donc une dpolarisation qui atteint largement le seuil de dclenchement du PA. Les rcepteurs ionotropes prsentent certaines caractristiques : - Les cintiques dactivation et de dactivation sont rapides. Jusqu prsent, nous navons parl que de variations du potentiel de membrane. En fait, llectrophysiologie moderne sintresse davantage lenregistrement de courants ioniques plutt qu celui de potentiels. Le comportement du neurone Courant entrant est rgi en grande partie par la loi dOhm : U = RI. Or, dans la ralit, quand des canaux ioniques souvrent, on a simultanment la mise en jeu dun courant I, une chute de rsistance R, et une variation de potentiel U due au passage du courant, donc 3 facteurs qui non seulement changent simultanment, mais aussi sinfluencent mutuellement. Par ex., la variation de potentiel son tour va modifier le courant ionique, et ainsi de suite, si bien que lexprimentateur nest pas en mesure dobserver ces paramtres de faon isole. Pour remdier cela, on a recours la technique de voltage impos (V-clamp), qui fait usage dastuces lectroniques pour fixer un paramtre, en loccurrence U, et enregistrer le courant potentiel constant. On peut ainsi observer les cintiques relles dun courant ionique donn, cintiques qui indiquent des activations souvent infrieures la milliseconde et des dactivations qui varient de 5 ~100 ms. - Contrairement ce quon croit gnralement (encore un dogme !), laffinit des rcepteurs ionotropes pour leur NM est assez faible. On peut comprendre cela si on ralise que ce type de transmission ionotrope est bas sur la rapidit. Les PAs mis au niveau dune terminaison prsynaptique peuvent senchaner frquence leve ; il faut donc que le rcepteur postsynaptique soit libr rapidement de son NM pour tre roccup et ractiv au moment du PA suivant, do la basse affinit. Par contre, on a vu que lactivation tait trs rapide comment conciler a avec une faible affinit ? Simplement en ayant une forte concentration de NM libr puisque la cintique dactivation du rcepteur dpend de la concentration en ligand. De fait, les NM qui activent des rcepteurs ionotropes sont en concentration millimolaire dans lespace synaptique. - Sur le plan structure molculaire, on a le plus souvent affaire des htropentamres. Rappel structure primaire quaternaire : monomres (1 gne ; ex. INa - ICa) ; polymres (homomres [1 gne ; ex. IK - Inic7] ou htromres [plusieurs gnes]). En plus de cette similarit de structure quaternaire, il existe des squences homologues au 15

niveau de la structure primaire de sous-units composant les rcepteurs ACh, GABA, gly et glu origine phylogntique commune une superfamille ? ACh : 2 types : central (3, 2 ou 5) et priphrique (JNM ; 2, , , ). Glu : 2 types (+ mtabotropes) - AMPA : trs rapide ; la base de la transmission excitatrice rapide dans tout le SN. Cationique non-slectif. - NMDA : trs permable au Ca. Impliqu la fois dans apprentissage et dgnrescence neuronale (cf. courbe en cloche survie / Ca). Bloqu par le Mg au potentiel de repos ncessit dactiver AMPA. Coactiv par gly. Cintique plus lente. GABA : A ionotrope ; B mtabotrope - A : permable au Cl -50 ECl -70 - Dpolarisant ou hyperpolarisant si Em = -60, mais le plus souvent inhibiteur car ECl < seuil PA. Gly : ionotrope seulement (fonctionne comme GABAA dans la molle pinire) 5HT : presque exclusivement mtabotropes, sauf 5HT3, cationique non-slectif semblable AChR ou AMPA. Purinergiques : lATP active le rcepteur P2X, semblable AChR ou AMPA, sauf que la structure molculaire est diffrente (2 segments transmembranaires ; structure quat. inconnue) origine phylogntique diffrente ? II. Intgration synaptique A1+2) Sommation temporelle de 2 PPSEs A+B) Sommation spatiale de 2 PPSEs A+B+C) Intgration (somme algbrique de 2 PPSEs + 1 PPSI) NB : on na considr ici que 3 synapses ; si on considre la cellule de Purkinje, qui peut en avoir jusqu 200000... !

A B B C C

Intgration

SPA

SPA : seuil du potentiel daction

SPA

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III. Rcepteurs mtabotropes Il y en a ~100 identifis. Ce sont des monomres 7 segments transmembranaires dont 2 intracellulaires lient la protine G. Les protines G (dcouvertes par Gilman et Rodbell, Nobel PM 94) sont des GTPases htrotrimres . La sous-unit peut lier le GTP (forme active) ou le GDP (forme inactive). En activant un rcepteur mtabotrope, un NM donn augmente laffinit de la sousunit pour le GTP. Celui-ci est alors hydrolys et se dissocie du complexe . Ce sont les 2 entits et qui poursuivent la cascade activatrice. On considre 2 types de couplage : 1) Couplage direct protine G-canal ionique Exemples : GABAB : activation dun canal K GABAB toujours hyperpolarisant contrairement GABAA. Muscarinique M2 : Activation IK cardiaque effets chronotrope et inotrope ngatifs. Noradrnergique : Activation ICa cardiaque effets chronotrope et inotrope positifs. 5HT1A : inactivation ICa... Cintiques ~0,1-1 s. 2) Couplage indirect protine G-canal ionique Passe par des cascades enzymatiques impliquant second-messagers et kinases (selon type de protine G) et aboutissant une phosphorylation ou dphosphorylation du canal-cible. Il y a 2 cascades connatre (+1) : Gs AC AMPc PKA phosphorylation. Paul Greengard (Nobel PM 2000) a mis en vidence ce systme de transduction, impliquant phosphorylation et dphosphorylation, au niveau de plusieurs rcepteurs mtabotropes, plus particulirement le rcepteur D1 de la DA. Dans ce cas, la PKA phosphoryle un commutateur central appel DARPP-32 qui est un inhibiteur de la phosphatase PP-1, laquelle dphosphoryle un grand nombre de canaux-cibles (INa, ICa, GABAA, AMPA, NMDA...). Ces cibles, qui normalement sont dphosphoryles par PP-1, deviennent phosphoryles aprs activation du rcepteur D1. NB : la DA active aussi des rcepteurs D2 qui ont leffet inverse en activant la protine Gi (inhibition de lAC). Autres exemples : M4 (ACh) ; 5HT2/4 ; 2 (NA). Gq PLC IP3 + DAG Ca + DAG PKC phosphorylation. Exemples : M1/3/5 (ACh) ; GluR ; 5HT1C ; 1 (NA). Go PLA2 (+PLD) ac. arachidonique + mtabolites PK? + phosphatases. Exemple : histamine. Conclusion : leffet final de ces cascades consiste en phospho-dphosphorylation de canaux ioniques ; il sagit dun effet long terme (heures-jours). 1- Cest une action modulatrice (facilitation ou inhibition, ainsi que modulation de la dsensibilisation de ces canaux). 2- Il y a amplification car lactivation dune enzyme peut entraner la production de nombreuses molcules de messagers-seconds, etc...

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IV. Plasticit synaptique (exemple de mise en jeu de rcepteurs mtabotropes)

Aplysie Manteau Siphon

Sensibilisation chez lAplysie (NB : bauche de mmoire avec seulement 20000 neurones). Dcouverte dune base molculaire de la mmoire par Eric Kandel, 3me Nobel PM 2000.

Si on stimule rptitivement le syphon de lAplysie, le rflexe initial de retrait de la branchie disparat Branchie progressivement (habituation). Si on couple cette stimulation avec un seul Sensibilisation 5HT Interneurone facilitateur stimulus nocif (choc lectrique la queue), Siphon (sensoriel) on induit un rflexe Motoneurone conditionn, le retrait Branchie de la branchie, qui se reproduit court terme (~ 1 heure ; changements fonctionnels) en prsence seule du stimulus inoffensif 5HT (stimulation du siphon). Si on rpte le stimulus Prot. G nocif, on conserve le rflexe pendant des AMPc Noyau AC jours ou des semaines CRE CREB (sensibilisation long PKA terme changements K morphologiques [...]). P

IK PA ICa lib NM activation motoneurone retrait branchie

VI. Rfrences
Neurobiologie cellulaire (Hammond Tritsch) Neurobiologie (D. Richard) ; rsum Neurosciences (Bear Connors) ; jolis dessins mais superficiel. Neurosciences (Purves) ; en anglais la BU (1 exemplaire), en franais en librairie. Principles of Neural Sciences (Kandel Schwartz) ; 1 exemplaire. Neurosciences (Guyton) ; anat + physio, fac de mdecine (Pasteur). http://www.nobel.se/medicine/laureates/2000/index.html

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