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TRAVAUX PRATIQUES.
TOXICOLOGIE I
Pr. Y. CHERRAH
Pr. A. ZELLOU
Pr. S. SERRAGUI
Laboratoire de Pharmacologie
Toxicologie 2007-2008
Remerciements
-
RECOMMANDATIONS AUX TUDIANTS
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SOMMAIRE
ACTIVITE CHOLINESTERASIQUE....16
ET DES IMIPRAMINES......27
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RECHERCHE ET DOSAGE DE L'ETHANOL
I/Recherche
A/ Test de Curry
1- Principe
La recherche de l'alcoolmie par le test de Curry peut tre effectue sur sang
total prlev sur fluorure de sodium.On utilise des cellules de Conway.
2- Ractifs:
Bichromate de potassium.4,90 g
3- Matriel :
Cellule de Conway.
Table oscillante de Dale.
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4-Mode opratoire :
Faire un tmoin dans les mmes conditions, ezn remplaant le sang par un
millilitre d'eau distille (ou 1ml de sang frais ne contenant pas d'alcool).
5- Rsultats et interprtation:
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B/ Alcotest
1- Principe :
Le principe de cette technique est bas sur le fait qu'environ 2 L d'aire alvolaire
contiennent la mme quantit d'thanol qu'un ml de sang.
a) une flche indiquant le sens dans lequel doit tre expuls l'aire expir;
b) un anneau repre blanc, qui divise la coluche ractive jaune en deux parties
gales.
Les tube Alcotest peuvent tre stocks pendant 3 ans, la condition d'tre
conservs sous emballage ferm l'abri de la lumre et une temprature infrieures
30C.
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4-Mode d'emploi:
le ct de la bote;
Faire entreR en force le tube Alcotest dans cette embouchure, en tenant le tube
entre le pouce et l'index et en vitant soigneusement de toucher l'embouchure;
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Lembouchure peut alors tre retire de la boite dans laquelle elle est place
(voir fig.3)
Pour procder une preuve, le sujet doit remplir compltement et dans toute la
mesure du possible en une seule expiration, la poche en matire plastique par
l'intermdiaire de l'embouchure et du tube ALCOTEST;
Cette opration doit durer au minimum 10 secondes et au maximum 20 secondes
(voire fig.4);
Aprs usage sparer le tube de la poche en tenant celle-ci par son embout!
5-Rsultats:
Sera considre comme positive toute preuve dans laquelle la masse ractive
jaune virera au vert;
L'preuve de L'ALCOTEST doit faire au plus tt 15 minutes aprs l'absorption
de boissons alcoolises ou aromatiques (jus de fruit).
Ce temps d'atteinte est galement ncessaire aprs utilisation d'un vaporisation
buccale;
De plus, la personne tester ne doit pas fumer ou sucer de bonbons alcooliss,
ni immdiatement dans les 15 minutes prcdant l'preuve, ni pendant le test. La
coloration brune rsultat d'une forte proportion de fume de tabac, peut altrer la
coloration ractive initiale. Dans ce cas le contrle doit galement tre rpt
aprs 15 minutes.
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II/ DOSAGE PAR LA MTHODES DE CORDEBARD
1/Principe:
2-Matriel :
o Appareil de SCHLOESING-AUBIN .1
o Ballon jaug de 250 ml1
o Chauffe ballon .1
o Rfrigrant ...1
o Cristallisation de 500ml....1
o Erlenmeyers de 250 ml bouch meri..2
o Burette gradue en 1/20me de ml.1
o Billes de verre lave au sulfochromique
o Bchers de 100ml;2
o Eprouvettes de 50 ml3
o Pipettes gradues
o Pissette..1
o Entonnoir ..1
3-Ractifs :
10
Solution nitro-chromique N/10:
4- Mode opratoire:
a) Extraction :
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b) Dosage :
c)Taux de l'alcoolmie:
Alcoolmie Clinique
Infrieur ou gale 0,50g/l Pas de signes cliniques apprciables
0,50-1g/1 Pas de symptmes apparents
Diminution du pouvoir de
concentration. Tout sujet sensible
ou hypoglycmique prsente un tat
d'brit.
1-1,50g/l Ebrit. A 1,50 g/L, L'ivresse est
caractrise
2g/1 Perte de l'attention et incoordination
motrice.
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RECHERCHE DES BENZODIAZEPINES
2-Ractifs :
3-Matriel :
Tubes essais
Porte tubes essais
Pipettes
Eprouvettes de 10ml
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4- Technique :
2- Ractifs:
Ether.
Solution tampon pH =6,7.
Soude 0,1N.
Acide chlorhydrique 2N.
3-Matriel:
o Tubes essais
o Porte Tubes essais.1
o Ampoule pied... 1
o Verre dcantation..1
o Micropipettes de 1 ml ..1
o Pipettes
4-Technique : Mlanger :
6,5 ml d'ther.
1 ml de la solution tampon pH =6,7.
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0,5 ml d'eau distille.
1 ml du sang
Faire un spectre d'absorption dans L'U.V entre (200-400) nm contre HCI 2N.
5- Rsultats:
1-Principe :
2-Ractifs:
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o Ethanol 95.
o Nitrite de sodium 0,5%.
o Ractif de trfouel (solution aqueuse 0,1% de chlorhydrate de N-
alpha-naphtyl N,N diethylpropylne).
3 - Matriel :
4- Mode opratoire :
Aprs sparation, la phase thre est lave deux fois avec 5ml de solution
aqueuse dacide chlorhydrique N, puis deux fois avec 5 ml deau distille.
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5-Analyse chromatographique :
- Migration : 10 12 cm.
6-- Rvlation :
- Raction de diazocopulation :
Pulvriser sans excs une solution de nitrite de sodium 0,5% dans l'acide
chlorhydrique (d=1,18)au 1/10 (prpare extemporanment).Attendre cinq minutes.
Scher la plaque sous un courant d'aire tide. Pulvriser enfin le ractif de Trfouel
solution aqueuse 0,1% de chlorhydrate de N-alpha naphtyl N, N-dithylpropylne
diamine .Les sports correspondant aux amines aromatiques primaires apparaissent en
quelques minutes colors en violet.
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RECHERCHE ET DOSAGE DES SALICYLES
1-Principe :
2-Ractifs :
Eau distille.850 ml
HCI N 120 ml
- Salicytate de sodium.580mg
- Eau distille.250 ml
- Chloroforme..1 ml
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3-Matriel :
-Ampoules dcanter.2
Verres pied de 100ml 2
Bchers de 100 ml 2
Tubes essais
Porte tubes essais.1
Porte ampoule dcanter 1
Micropipette de 1 ml 1
Entonnoirs 2
4- Mode opratoire :
b) Etalonnage :
La solution talon de salicylate de sodium est dilue au 1/5 dans l'eau distille
(ractif III). La concentration en acide salicylique est alors de 400 mg/l.
d'acide
salicylique en
mg/L
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Agiter;
Attendre 5 min;
Centrifuger;
Attendre 20 min;
Lire les DO au spectrophotomtre 530 nm.
Dduire la courbe d'talonnage.
Agiter;
Attendre 5 min;
Centrifuger;
Attendre 20 min;
Centrifuger;
Prlever le liquide surnageant;
Lire au spectrophotomtre 530 nm ;
Dduire d'aprs la courbe d'talonnage la concentration en mg/l de
votre chantillon.
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Tube Tube Tube
n1 n2 n3
- Eau distille 2ml 1ml -
-Plasma ou urine - 1ml 1ml
(ventuellement dilue)
- Solution talon - - 1ml
Ractif de Trinder 5ml 5 ml 5ml
Agiter;
Attendre 5 min;
Centrifuger;
Attendre 20 min;
Prlever le liquide surnageant;
Mesurer rapidement les Do au spectrophotomtre 530 nm (Zro de Do faire
sur le tube N1)
5- Rsultats:
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DOSAGE DU PARACETAMOL SERIQUE
EN CAS D'INTOXICATION
I- Principe
II- Ractifs :
(2g/10 ml d'eau).
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4- Solution aqueuse de sulfamate d'NH 4 NH 4 SO 3 NH 2 30%.
5- Solution de Na OH 25%
III-Matriel:
2-Cuve photomtrique.
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- Sachant que le taux srique toxique est suprieur 50mg/l aprs 1O heures
d'ingestion ou 200mg/l aprs 2 heures, qu'en concluez-vous ?
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ACTIVITE CHOLINESTERASIQUE
1- Principe:
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2- Ractifs:
pendant 10mn et la laisser l'abri de l'air. Cette eau servira la prparation des
ractifs 1 et 2.
- Bleu de Bromothymol100mg
Vider les tubes du contenu de B.B.T et du NaOH dans une fiole de 100 ml
et la remplir moiti avec de l'eau distille exempte de CO 2 Boucher tout de
suite la fiole. Mlanger lgrement et la laisser reposer 1heure.
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3- Mode opratoire
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- - Noter l'heure la minute prs : c'est le temps zro. Lire immdiatement dans le
compartiment droit. Le rsultat doit tre infrieure ou gal 12,5%.
- A intervalle d'une minute, ajouter 0,5 ml de la solution de substrat dans le tubes "
personnes tester" en prenant la prcaution de respecter l'intervalle de 1 minute
entre les 2 tubes.
- Attendre que l'chantillon contrle atteigne 100% d'activit cholinestrasique en
lisant contre l'chantillon blanc dans le compartiment gauche. Le temps
d'incubation dpend de la temprature ambiante et varie en gnral entre 18 et 30
minutes.
- Lire chaque chantillon des personnes tester 1 minute d'intervalle.
- Noter le pourcentage d'activit cholinestrasique.
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RECHERCHE TOXICOLOGIQUE DES
ANTICOAGULANTS
1- Principe:
2-Formules gnrales:
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b) Indandiones : Chlorophacinone.
3- Matriel :
4- Ractifs:
Gel de silice HF. Au cours de cette sance de TP les plaques sont fournis
recouverts du silicagel (paisseur de la couche 0,2mm).
Ether.
Benzne.
Chloroforme.
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Actone.
Iode (en cristaux).
Solutions talons d'anticoagulants soit dans le chloroforme soit dans la
l'actone.
- Coumaphne - Fassouk.
- Coumachlore - Brodifacoum
- Dicoumarol - 4- Hydoxycoumarin 3.(A .Acetonylbenzyl).
- Chlorophacinone -Racumin
5- Extraction:
6- Technique:
- Prparer l'luant:
Ether: 60 ml.
Benzne:30 ml.
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Actone : 20 ml.
- Comparer les rsultats obtenus par rvlation en ultra violet avec ceux obtenus
par l'iode.
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RECHERCHE ET DOSAGE DES
BARBITURIQUES
I- Formule gnral:
A- Par spectrophotomtrie UV
I. Principe :
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2-Ractifs:
Dichloromthane.
Soude 0,45N.
Tampon borate0,6M
H 3 BO 3 37,2g
KCI.4,2 g
3- Mode opratoire
A partir d'une solution mre de phnorabital 2g/l, prparer une gamme talon
comme suit:
Tube N 1 2 3 X
Solution PB(2g/l)ml 0,1 0,2 0,3 -
Plasma(ml) 4,9 4,8 4,7 -
Volume final(ml) 5 5 5 5
Dichloromthane(ml) 50 50 50 50
HCI 5 5 5 5
concentr(gouttes)
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Filtrer sur un papier filtre contenant 10g de sulfate de sodium anhydre.
Dans une ampouler dcanter, mettre 30 ml du filtrat.
Ajouter 6 ml de soude 0,45N.
Agiter pendant 3 minutes.
Centrifuger la phase sodique (Phase suprieure).
Pour chaque concentration, prparer les solutions suivant le protocole ci-
dessous:
pH10.1,5ml de L'extrait
pH13.1,5ml de L'extrait
1- Ractifs
Ether thylique.
Acide chlorydrique (d=1,18).
Sulfate de sodium anhydre.
Alcool absolu.
Solution alcoolique de nitrate de cobalt 3%o.
Solution alcoolique de diethylamine 3%.
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2- Mode opratoire:
10 20g d'chantillon sont puiss par l'ther en milieu acide, la phase organique
recueillie est vapore sec , puis additionne de 1 ml d'thanol, 1 ml de solution
alcoolique de nitrate de cobalt 3% et 1 ml de la solution de diethylamine 30%o. La
prsence de barbituriques se traduit par une coloration violette et stable.
C- Par C.C.M
1-Ractifs:
- Chloroforme.
- Actone.
- Diethylamine.
- Chlorure mercurique.
- Diphnylcarbazone.
2- Analyse chromatographie:
* Rvlateur :
3- Interprtation :
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La prsence de barbituriques se traduit par un spot rose sur fond violet.
ET DES IMIPRAMINES
I- INTRODUCTION
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A Par Raction colore
1. Phnothiazines :
Une raction colore en rouge apparat en moins de dix secondes par le mlange
d'un volume d'urine un volume de ractif , traduit la prsence de drivs
phnothiaziniques.
2. Imipramine:
* Ractif : Forrest ;
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B- Par CCM :
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DOSAGE DES PHETHIAZINES
1- Ractifs
- Dichlormthane;
A/ URINE
1-Extraction :
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aqueuse surnageante. Il est inutile de laver l'extractum organique et de
dshydrater par agitation avec du sulfate de sodium anydre .
2- Raction :
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