Les biofilms bactériens

Organisation en biofilm
• Formes de vie primitives moins sensibles à
environnement hostile :
– éléments chimiques
– facteurs physiques
– condition sine qua non de survie
• Antarctique biofilms (algues et bactéries)/roches
• Bactéries modernes descendantes de ces
formes colonisant la terre avec succès
Stromatholites
Antonie van Leeuvenhoek
1632-1723
taxocellwall.jpg
 Deux types de bactéries
• Bactéries Bactéries sessiles
planctoniques

Méthodes d’étude au
laboratoire ?
 Deux types de pathologies
• Bactéries Bactéries sessiles
planctoniques
• Infections bactériennes Bactéries de
aiguës l’environnement :
• Peste Pseudomonas
• Antibiotiques, vaccins Legionella
(maîtrise)
 Nouvelles pathologies
• Autrefois
– immunodéprimés ne résistaient pas à bactéries
planctoniques
• Aujourd’hui
– immunodéprimés sensibles à bactéries de
l’environnement (domicile, hôpital)
 Définitions
• « ensemble de cellules isolées et de
microcolonies de cellules filles, associées
entre elles et/ou aux surfaces et interfaces,
et incluses dans une matrice constituée
d’exopolysaccharides bactériens, de
matières organiques et non organiques, ainsi
que de macro-molécules piégées du milieu
environnant »
 Paramètres en cause
Support des bactéries
– flore cutanée (cathéters)
– exogènes (infections nosocomiales)
Efficacité des défenses naturelles
Nature du support
Facteurs de virulence du micro-organisme
(adhésines, synthèse d’exopolysaccharide, …)
 Les biofilms bactériens
• 99 % des bactéries à l’état adhéré
• Bactéries, fongi, algues, protozoaires
• Capacité d’adhérer dans milieu naturel
– Critère de sélection
 Les biofilms bactériens
• 15 % de cellules
• 85 % matériel de matrice (polysaccharide)
 IMPACT DES BIOFILMS
Industrie maritime

Secteur industriel

Réseaux d’eau Industrie du papier

Industrie alimentaire

Secteur médical

Légionelloses

Plaque dentaire Implants et Prothèses Mucoviscidose

 Effets néfastes
• Phénomènes de corrosion, encrassement
• Processus infectieux
- en liaison avec l’environnement et surfaces

procédures de nettoyage et désinfection
- en liaison avec systèmes d’adduction et
traitement de l’eau (Pseudomonadaceae)
Dispositifs médicaux implantables
• Cathéters
Dispositifs médicaux implantables
• Valves cardiaques
Détachement de morceaux de
biofilms

embols dans capillaires
 Dispositifs médicaux implantables
• Lentilles intra-oculaires
CATARACTE -- 22
CATARACTE

Traitement chirurgical

Pièce à main de Noyau du

Ultrasons
phacoémulsification cristallin
Noyau du
cristallin

Sac
Sac
cristallinien
cristallinien Implant

Ablation du cristallin opacifié Mise en place d'un implant intra-oculaire

Implants rigides :
- PMMA
Implants souples :
- Silicone
- Acryliques hydrophiles ou hydrophobes
Dispositifs médicaux implantables
Implants osseux (prothèse de hanche, genou, )
 Formation du biofilm
• Nécessité d’une phase aqueuse : film entre
cellule et support
– Eau (environnement)
– Fluides biologiques
• Urines (cathéters)
• Sang (valve cardiaque)
• Humeur aqueuse (œil)
•…
 Formation du biofilm
• Adhésion change expression phénotypique
de 30 % des protéines

Yu & Costerton, 1995

 Formation du biofilm
• Pseudomonas aeruginosa gène algC
contrôlant phosphomannomutase impliqué
dans synthèse d’alginate
(exopolysaccharide)
• Activé quelques minutes après adhésion
 Formation du biofilm
• Pseudomonas aeruginosa
• 45 gènes différents entre bactéries sessiles
et bactéries planctoniques
 FORMATIOND’UN
FORMATION D’UNBIOFILM
BIOFILM--11

Biofilm = Communauté structurée de bactéries engluées dans une matrice

polymérique extracellulaire - le glycocalyx ou « slime » - qu’elles ont elles-mêmes produite,
et qui adhérent à une surface inerte ou vivante
Costerton JW, 1999

Etapes de formation d’un biofilm

Biofilm mature
Décrochage

Transport des
cellules planctoniques

Adhésions réversible
et irreversible
Contact
Synthèse du glycocalyx
bactérie / support

SUPPORT
 FORMATIOND’UN
FORMATION D’UNBIOFILM
BIOFILM--77

Facteurs intervenant dans la formation d’un biofilm

Support
- Rugosité
- Composition chimique Bactérie
- Hydrophobicité - Composition
- Charges électriques - Hydrophobicité
- Charges électriques
- Pili ou flagelles Environnement
- Concentration bactérienne - Rhéologie du fluide
- Métabolisme cellulaire - Composition en ions et
en nutriments
- pH
- Température
Mucoviscidose – P. aeruginosa
Mucoviscidose – P. aeruginosa
Mucoviscidose – P. aeruginosa
Legionella
Fausse membrane (biofilm sur tissu
libération toxine)
 Vésicule biliaire
• Cholangite : infection de la bile
– douleur
– fièvre
– Jaunisse
• Cause importante
– urgence abdominale
– septicémie
 Vésicule biliaire
• Bactériologie de la cholangite :
– coliformes (E. coli, Klebsiella sp)
– Streptocoques fécaux
– Anaérobies (Bacteroides fragilis, Clostridium
perfringens)
• Synergie entre E. coli et Bacteroides
• Calculs contient microcolonies (80 %)
 Escherichia coli
V I – Pouvoir pathogène
1 – Infections urinaires
femmes enceintes +++
femme > homme
Hormones : dilatation des
voies urinaires
 Infections urinaires
Polynucléaires Bactéries
> ou = 104/ml > ou = 105/ml
Normale 0 0

Infection + +(monomicrobien)
vraie
+(polymicrobien) ?
Cas 0 + ?
particuliers
Cas + 0 ?
particuliers
 Proteus mirabilis
• Struvite (lithiase) : NH4MgPO4, 6 H2O
• Carbonate apatite : Ca10(PO4) 6, CO3

• Protection contre antibiothérapie

 FORMATIOND’UN
FORMATION D’UNBIOFILM
BIOFILM--55

Aspect d’un biofilm mature

FLUIDE Détachement de cellules

Recrutement de
ou d’amas cellulaire
cellules planctoniques

Circulation dans les canaux Communication cellulaire

SUPPORT
 FORMATIOND’UN
FORMATION D’UNBIOFILM
BIOFILM--66

Cinétique de formation d’un biofilm

12 3 4 5

1 – Latence
2 – Accélération
3 – Accumulation linéaire
4 – Ralentissement
Biofilm 5 – Stabilisation apparente
Bactéries planctoniques

Roques, 2000
Résistance des biofilms
 LEBIOFILM
LE BIOFILM::UN
UN««CASSE-TETE
CASSE-TETE»»THERAPEUTIQUE
THERAPEUTIQUE

RESISTANCE ACCRUE
REPONSE AUX ANTIBIOTIQUES
IMMUNITAIRE
Leucocytes, Ac
Pénétration difficile

Diffusion ralentie

Destruction des
tissus sains Etat de
Modifications de l’expression génétique Zzz… dormance des bactéries

BIOFILM
IMPLANT
 Résistance des bactéries en
biofilms
Pénétration difficile
Ciprofloxacine
40 sec dans surface stérile
21 dans biofilm à P.aeruginosa
Tobramycine 15 fois plus active sur
bacétries planctoniques/sessiles
 Résistance des bactéries en
biofilms
P.aeruginosa
suspension d’alginate à 2% inhibe diffusion
alginate lyase
restauration
 Résistance des bactéries en
biofilms
Ancienneté du biofilm
Absence d’oxygène (aminosides)
Bactéries planctoniques
 CATARACTE--11
CATARACTE

Opacification progressive du cristallin entraînant

une baisse de la vue allant jusqu’à la cécité

Œil sain Cataracte

 CATARACTE--22
CATARACTE

Traitement chirurgical

Pièce à main de Noyau du

Ultrasons cristallin
phacoémulsification
Noyau du
cristallin

Sac
Sac
cristallinien
cristallinien Implant

Ablation du cristallin opacifié Mise en place d'un implant intra-oculaire

Implants rigides :
- PMMA
Implants souples :
- Silicone
- Acryliques hydrophiles ou hydrophobes
 ENDOPHTALMIE
ENDOPHTALMIE

Complication infectieuse post-opératoire due à

la présence de bactéries dans l’humeur aqueuse entraînant
une perte fonctionnelle et / ou anatomique de l’œil

GRAM positif
S. epidermidis

Etiologie : formation d’un biofilm bactérien sur l'implant intra-oculaire

 METHODESD’ETUDE
METHODES D’ETUDEDES
DESBIOFILMS
BIOFILMS

1 - Méthodes d’observation

• Loupe binoculaire
• Microscopie optique
• Microscopie électronique
• Analyse d’image
2 - Méthodes de quantification

• Méthodes directes
• Méthodes indirectes
- Décrochages des bactéries
- Méthodes bactériologiques
- Méthodes biochimiques
- Méthodes physiques
3 – Méthodes de modélisation

• Méthodes d’étude in vivo

• Méthodes d’étude in vitro
- Modèles statiques
- Modèles dynamiques
 ETAPESDE
ETAPES DELA
LAMISE
MISEAU
AUPOINT
POINT

1 -Réalisation du modèle dynamique

2 - Formation de biofilms

3 - Observations microscopiques des biofilms

4 - Quantification des biofilms

5 - Evaluation du montage

6 - Réalisation d’une cinétique bactérienne

MODELED’ETUDE
MODELE D’ETUDEDYNAMIQUE
DYNAMIQUE
 Legionella
• Bacilles à Gram négatif mobiles
• Aérobies
• Nécessitent milieux spécifiques + CO2
• Legionella pneumophila
• 15 sérogroupes : Lp 1 le plus fréquent
 Legionella pneumophila

• 8 000 à 18 000 cas de maladies des légionnaires

chaque année aux USA
• pneumonie
• fièvre de Pontiac
• L. pneumophila (90 %)
• Autres Legionella :
• L. micdadei, L. longbeachae,
L. dumoffii, L. bozemanii
 Legionella
• 1 – Habitat
– eau douce (multiplication dans les amibes)
– réseaux d’eau potable
– refroidissement tours aéro-réfrigérantes
 Legionella
• 2 – Transmission
– Voie aérienne (aérosols contaminés)
– Douches, tours aéro-réfrigérantes
(climatisation)
– Bains à remous
– Hôpital
• rinçage à l’eau courante de matériels
• Voies respiratoires (sondes, humidificateurs, …)
 Legionella
• 2 – Transmission
– Pas de transmission interhumaine
– Cas sporadiques ou épidémiques

– Souvent séjour à l’hôtel ou hôpital

• Un tiers cas nosocomiaux
 Legionella
• 3 – Pouvoir pathogène
– incubation 2 à 10 jours
– Pneumopathie aiguë de sévérité variable
– 2 à 5 % des pneumopathies aiguës
– mortalité à l’hôpital (10 à 30 %)
– sujets âgés
– immunodéprimés (transplantés, chimiothérapie,
corticoïdes, sidéens)
– fièvre de Pontiac (syndrome pseudo-grippal)
 FORMATIOND’UN
FORMATION D’UNBIOFILM
BIOFILM--22

Transport Adhésion réversible Décrochage Adhésion irréversible

agitation

SUPPORT

• Forces • Théorie DVLO • Liaisons hydrogènes

hydrodynamiques • Théorie de l’énergie • Forces électriques
• Mouvements libre d’adhésion • Forces hydrophobes
browniens • Organites bactériens
• Mouvements actifs • Adhésines bactériennes
• Forces hydrophobes • Matrice extracellulaire