Anticorps monoclonaux de rat

Notre protéine est un antigène de groupe sanguin nommé Lu/Bcam qui possède une grande partie

extracellulaire (composée de 5 domaines de type immunoglobulines), un domaine

transmembranaire et une courte séquence intracellulaire. Il s'agit de la protéine murine car

l'anticorps monoclonal de rat est prévu pour une utilisation chez la souris.

Nous sommes capables de produire la totalité de la partie extracellulaire en fusion avec la partie

Fc des immunoglobulines humaines, ce qui nous permet de la purifier sur protéine A. Nous avons

déjà obtenu des anticorps polyclonaux de lapin de bonne qualité contre cette protéine

(débarrassée du fragment Fc). Ils nous permettent de travailler en western blot,

immunohistochimie et immunoprécipitation. Nous savons donc que cette protéine possède une

bonne antigénicité. Nous souhaitons développer an anticorps monoclonal de rat car nous sommes

limités en immunohistochimie pour faire des marquages double lorsque tous les anticorps sont

issus du lapin. Nous fournissons la protéine Lu purifiée (nous nous débarassons de la partie Fc).

Caractéristiques du besoin :

1- Immunisation

Nous souhaitons tester le sérum pré-immun nous même par Western blot et par

immunohistochimie.

Immunisation de deux rats (au moins trois injections) en zone sécurisée, selon un protocole

spécifique et aux normes avec la législation sur l’expérimentation animale. Comme indiqué ci-

dessus nous fournissons la protéine Lu à immuniser. Indiquez nous la quantité nécessaire pour

l’immunisation.

Après immunisation nous souhaitons tester nous même le sérum immun par Western blot,

immunohistochimie et éventuellement par ELISA.

2- Fusion

Les cellules du rat qui donne la meilleure réponse anti-Lu (selon notre convenance) seront

fusionnées à un myélome de rat.

3- Sélection et amplification des hybridomes

Chaque hybridome sera testé contre la protéine Lu. Indiquez le tarif si cette opération de

criblage est faite par le prestataire. Chaque hybridome positif est stocké sous forme d’ampoules

(au moins deux) en azote liquide.

Nous souhaitons tester les hybridomes positifs lors du criblage précédent par Western blot et

par immunohistochimie.

Le prestataire doit nous indiquer le nombre d’hybridomes que nous pouvons choisir.

4- Clonage des hybridomes

Les hybridomes que nous sélectionnons doivent être clonés par dilution limite. Après clonage

chaque hybridome est stocké sous forme d’ampoules (au moins trois) en azote liquide.

Caractérisation de la sous-classe des anticorps produits par chaque hybridome.

Les tarifs indiqués par les prestataires doivent être définitifs.

Critères de sélection :

1- Qualité de la prestation. Le prestataire s’engage sur la bonne conservation des ampoules

en azote liquide jusqu’à la fin du protocole. Le prestataire s’engage est acheminer les

échantillons selon une forme qui maintient leur état de congélation jusqu’à destination. Le

prestataire s’engage à nous fournir un rapport à la fin de chaque phase (1 à 4, voir ci-

dessus).

2- Expérience du prestataire. Nous joindre si possible une ou deux références (= articles de

recherche).

3- Possibilité de demander une ou plusieurs immunisations supplémentaires des animaux avec

la stabulation adéquate (indiquez la facturation supplémentaire).

4- Concurrence du tarif de la prestation