Minicap Immunotyping. Ref - 05

MINICAP IMMUNOTYPING
Ref. 2300
2015/05
MINICAP IMMUNOTYPING - 2015/05
UTILISATION
Le kit MINICAP IMMUNOTYPING permet la détection et la caractérisation en milieu basique (pH 9,9) des protéines monoclonales (immunotypage)
dans l’urine et le sérum humains par électrophorèse capillaire dans le système automatique MINICAP. Il doit être utilisé avec le kit MINICAP
PROTEIN(E) 6, SEBIA, permettant une séparation des protéines en six fractions majeures.
Le système MINICAP permet de réaliser toutes les séquences de l’électrophorèse jusqu’à l’obtention des profils protéiques pour l’analyse qualitative.
Chaque échantillon d’urine ou de sérum à analyser est mis en contact avec les antisérums des différentes spécificités, anti-chaînes lourdes gamma
(Ig G), alpha (Ig A) et mu (Ig M) et anti-chaînes légères kappa et lambda (libres et liées).
Toutes les protéines, séparées dans des capillaires en silice fondue, sont détectées directement au niveau d’une cellule sur le capillaire par
spectrophotométrie d’absorbance à 200 nm.
Les profils électrophorétiques sont ensuite analysés visuellement pour détecter les anomalies et caractériser les protéines monoclonales mises en
évidence.
À usage in vitro exclusivement.
NOTE : Dans cette notice d’utilisation, le nom "MINICAP" est utilisé pour désigner les instruments automatiques MINICAP et MINICAP
FLEX-PIERCING, SEBIA.
PRINCIPE DU TEST
L’électrophorèse des protéines de l’urine ou du sérum humains est une analyse très utile en laboratoire d’analyses cliniques pour rechercher les
modifications du profil protéique. Parallèlement aux techniques d’électrophorèse sur différents supports, dont le gel d’agarose, la technique
d’électrophorèse capillaire a été développée car elle offre l’avantage d’une automatisation complète de l’analyse, de séparations rapides et d’une
bonne résolution. Elle se définit comme une technique de séparation électrocinétique effectuée dans un tube de diamètre interne inférieur à 100 µm
rempli d’un tampon composé d’électrolytes. Par de nombreux aspects, elle se présente comme un intermédiaire entre l’électrophorèse classique de
zone sur support et la chromatographie liquide.
Le système MINICAP utilise le principe de l’électrophorèse capillaire en solution libre, qui représente la forme la plus courante de l’électrophorèse
capillaire. Il permet la séparation de molécules chargées en fonction de leur mobilité électrophorétique propre dans un tampon de pH donné, et, selon
le pH de l’électrolyte, d’un flux électro-osmotique plus ou moins important.
Les immunoglobulines monoclonales, marqueurs des gammapathies, sont détectées lors de l’électrophorèse des protéines. En électrophorèse
capillaire, elles se présentent sous forme de pics anormaux situés essentiellement dans les zones bêta ou gamma globulines du profil
électrophorétique. Dans les techniques MINICAP IMMUNOTYPING et MINICAP IMMUNOTYPING URINE, l’immunotypage est effectué à l’aide
d’antisérums monospécifiques et permet l’identification de ces pics monoclonaux dépistés par électrophorèse.
Le système MINICAP comprend 2 capillaires en parallèle permettant 2 analyses simultanées. Pour l’immunotypage réalisé sur ce système,
l’échantillon à analyser est injecté, par aspiration à l'anode, 3 fois successivement dans les 2 capillaires. Le profil protéique de référence (profil ELP)
est obtenu par injection de l'échantillon en présence de la solution ELP. Les profils antisérums sont obtenus, lors des 5 analyses suivantes, par
injection du même échantillon en présence des antisérums de différentes spécificités anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa et anti-Lambda dans
les capillaires.
Lors de chaque analyse, la séparation est ensuite réalisée en appliquant une différence de potentiel de plusieurs milliers de volts aux bornes de
chaque capillaire et la détection directe des protéines est effectuée à 200 nm côté cathode. Les capillaires sont lavés entre chaque analyse par une
solution de lavage, puis par le tampon d’analyse.
La superposition d’un des profils antisérum avec le profil ELP permet de visualiser la disparition et / ou la diminution d’un pic monoclonal sur le profil
antisérum et d’en déduire une gammapathie.
REMARQUE : Avec le tampon utilisé à pH basique, l’ordre de migration des protéines est le suivant, de la cathode à l'anode : gamma globulines,
bêta-2 globulines, bêta-1 globulines, alpha-2 globulines, alpha-1 globulines et albumine. Chaque fraction contient un ou plusieurs constituants. Le
complexe immunoglobulines de l’échantillon (urine ou sérum) - immunoglobulines de l'antisérum spécifique apparaît en position très anodique (zone
inter alpha-1/albumine ou plus anodique que l’albumine).
L’immunotypage se réalise en quatre étapes :

1. Dilution du sérum ou de l’urine dialysée dans un diluant spécifique dans une cupule réactif. La dilution est adaptée à la concentration en
immunoglobulines de l’échantillon.
2. Prélèvement de la solution ELP, de chaque antisérum et de l’échantillon dilué puis mélange dans une cupule réactif, à raison d’une cupule pour
2 réactifs. Le complexe antigène - anticorps se forme rapidement en milieu liquide sans étape d'incubation, ni de sédimentation.
3. Trois injections successives des échantillons traités par aspiration dans les 2 capillaires (côté anodique) puis séparations électrophorétiques des
protéines en milieu alcalin par application d'une différence de potentiel de plusieurs milliers de volts aux bornes des capillaires. La détection directe
des protéines est effectuée à 200 nm (côté cathodique).
4. Superposition du profil ELP et des profils antisérums (Ig G, Ig A, Ig M, Kappa et Lambda) permettant la caractérisation de la protéine monoclonale.
L’analyse des sérums et des urines peut être réalisée avec la version 7.47 du logiciel PHORESIS et les versions suivantes.
RÉACTIFS FOURNIS DANS LE KIT MINICAP IMMUNOTYPING
ATTENTION : Voir les fiches de données de sécurité.
COMPOSANTS RÉF. N° 2300

Diluant échantillon (prêt à l’emploi) 6 flacons de 4,0 mL
Support avec tubes de solution ELP et d’antisérums
Solution ELP (prête à l’emploi) 1 flacon de 1,2 mL
Immunoglobulines totales de mammifère anti-chaînes lourdes gamma humaines (prêtes à l’emploi) 1 flacon de 1,2 mL
Immunoglobulines totales de mammifère anti-chaînes lourdes alpha humaines (prêtes à l’emploi) 1 flacon de 1,2 mL
Immunoglobulines totales de mammifère anti-chaînes lourdes mu humaines (prêtes à l’emploi) 1 flacon de 1,2 mL
Immunoglobulines totales de mammifère anti-chaînes légères kappa humaines (libres et liées) (prêtes à l’emploi) 1 flacon de 1,2 mL
Immunoglobulines totales de mammifère anti-chaînes légères lambda humaines (libres et liées) (prêtes à l’emploi) 1 flacon de 1,2 mL
Durant le transport, le kit peut rester à température ambiante (entre 15 et 30 °C) pendant 15 jours sans que cela n’affecte la qualité du test.
-1- NOTICE D’UTILISATION SEBIA - Français

POUR DES RÉSULTATS OPTIMUMS :

Les éléments d’un même kit doivent être utilisés ensemble et selon les instructions de la notice.
LIRE ATTENTIVEMENT LA NOTICE D’UTILISATION.
ATTENTION : Ne pas utiliser d’eau déminéralisée du commerce, eau pour fer à repasser par exemple (risque de détérioration importante
des capillaires). Utiliser exclusivement de l’eau de qualité ultrapure, type eau pour préparation injectable.
1. DILUANT ÉCHANTILLON
Préparation
Le diluant échantillon est prêt à l’emploi. Il contient : tampon pH 9,4 ± 0,5 ; composants sans danger aux concentrations utilisées nécessaires pour
des performances optimales.
Utilisation
Diluant spécifique pour la dilution automatique des échantillons avant l’analyse des protéines en électrophorèse capillaire dans le système
automatique MINICAP. Il contient un marqueur permettant une superposition optimale des profils électrophorétiques.
À placer directement sur le carrousel de MINICAP après avoir enlevé le bouchon du flacon, en positionnant le code-barres en face de la fenêtre de
lecture.
Conservation, stabilité et signes de détérioration
Le diluant échantillon peut être conservé à température ambiante (de 15 à 30 °C) ou au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Il est stable jusqu’à la date
d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de diluant.
Il ne doit pas y avoir de précipité.
NE PAS CONGELER.
2. SUPPORT AVEC TUBES DE SOLUTION ELP ET D’ANTISÉRUMS

Le support contenant les tubes de solution ELP et d’antisérums anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa et anti-Lambda est prêt à l’emploi. À placer
directement sur le carrousel de MINICAP en positionnant les codes-barres en face des fenêtres de lecture.
IMPORTANT : Placer le support sur le carrousel de MINICAP juste avant le lancement de la série d’analyses et, dès la fin de la série, le replacer
immédiatement au réfrigérateur à 2 – 8 °C.
2.1. SOLUTION ELP

Préparation
La solution ELP est prête à l’emploi. Elle contient : tampon pH 7,4 ± 0,5 ; composants sans danger aux concentrations utilisées nécessaires pour des
performances optimales.
Elle a une couleur spécifique (jaune) pour éviter toute erreur lors de l’utilisation. La couleur est rappelée sur l’étiquette du flacon.
Utilisation
Pour l’obtention du profil protéique de référence (profil ELP).
La solution ELP doit être conservée au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C) sur le support. Avant utilisation, elle est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée
sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de solution ELP.
Le flacon de solution ELP, placé sur le support et sur le carrousel de MINICAP, est stable au maximum 60 heures (cumulées) à température ambiante
(de 15 à 30 °C).
Après chaque utilisation, la solution ELP doit impérativement être conservée au réfrigérateur à 2 – 8 °C dans les plus brefs délais, elle est
alors stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur l’étiquette du flacon de solution ELP.
IMPORTANT : Le temps cumulé de la solution ELP passé à température ambiante ne doit pas excéder 60 heures.
NE PAS CONGELER.
2.2. ANTISÉRUMS
Préparation
Les antisérums sont prêts à l’emploi. Ils contiennent des immunoglobulines totales de mammifère anti-chaînes lourdes gamma (rose), anti-chaînes
lourdes alpha (bleu foncé), anti-chaînes lourdes mu (jaune vert), anti-chaînes légères kappa libres et liées (vert clair), et anti-chaînes légères libres et
liées lambda (bleu clair) ; composants sans danger aux concentrations utilisées nécessaires pour des performances optimales.
Chaque réactif a une couleur spécifique pour éviter toute erreur lors de l’utilisation. La couleur est rappelée sur les étiquettes des flacons.
Utilisation
Pour l’immunotypage des protéines par électrophorèse dans le système automatique MINICAP.
IMPORTANT : Les antisérums sont spécifiques à la technique MINICAP IMMUNOTYPING, ils ne peuvent en aucun cas être utilisés pour des
techniques d’immunofixation sur gels d’agarose et inversement.
Les antisérums doivent être conservés au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C) sur le support. Avant utilisation, ils sont stables jusqu’à la date d’expiration
indiquée sur le kit ou sur les étiquettes des flacons d’antisérum.
Les flacons d’antisérum, placés sur le support et sur le carrousel de MINICAP, sont stables au maximum 60 heures (cumulées) à température
ambiante (de 15 à 30 °C).
Après chaque utilisation, les antisérums doivent impérativement être conservés au réfrigérateur à 2 – 8 °C dans les plus brefs délais, ils
sont alors stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur l’étiquette des flacons d’antisérum.
IMPORTANT : Le temps cumulé des antisérums passé à température ambiante ne doit pas excéder 60 heures.
NE PAS CONGELER.
NOTE : Durant le transport, la solution ELP et les antisérums peuvent rester à température ambiante (entre 15 et 30 °C) pendant 15 jours sans que
cela n’affecte la qualité du test.
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ANALYSE DES SÉRUMS : TECHNIQUE MINICAP IMMUNOTYPING

RÉACTIFS NÉCESSAIRES NON FOURNIS
1. KIT MINICAP PROTEIN(E) 6 (SEBIA, référence N° 2203)

Présentation, conservation, stabilité et signes de détérioration
Voir la notice d’utilisation du kit.
2. EAU DISTILLÉE OU DÉMINÉRALISÉE

Utilisation
Pour le rinçage des capillaires de l’automate pour électrophorèse capillaire, MINICAP, SEBIA.
Il est recommandé d’utiliser de l’eau distillée ou déminéralisée filtrée (sur filtre de porosité ≤ 0,45 μm) et d’une conductivité inférieure à 3 µS/cm, soit
une résistivité supérieure à 0,33 MΩ.cm.
Afin d’éviter les contaminations microbiennes, renouveler l’eau chaque jour.
Pour un fonctionnement optimum, il est recommandé d'ajouter 350 μL/L de CLEAN PROTECT (SEBIA, référence N° 2059 : 1 flacon de 5 mL).
IMPORTANT : Avant de remplir le flacon de rinçage, il est recommandé de le rincer abondamment avec de l’eau déminéralisée ou distillée.
3. CAPICLEAN (POUR MINICAP) OU CAPICLEAN MINICAP FLEX-PIERCING (POUR MINICAP FLEX-PIERCING)

Présentation
Le flacon de solution enzymatique concentrée CAPICLEAN (CAPICLEAN, SEBIA, référence N° 2058 : 1 flacon de 25 mL ou CAPICLEAN MINICAP
FLEX-PIERCING, SEBIA, référence N° 2251 : 1 flacon de 25 mL) contient : enzymes protéolytiques, surfactants et composants sans danger aux
concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales.
Utilisation
Pour le nettoyage de l'aiguille de prélèvement de l’automate pour électrophorèse capillaire, MINICAP ou MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA, au cours
du cycle de nettoyage CAPICLEAN.
IMPORTANT : Réaliser un cycle de nettoyage avec CAPICLEAN au minimum une fois par semaine et au maximum une fois par jour, ou toutes les
500 analyses quand elles sont réalisées en moins d’une semaine.
Voir les notices d’utilisation de CAPICLEAN ou de CAPICLEAN MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA.
IMPORTANT : Pour une utilisation optimale de CAPICLEAN sur MINICAP et MINICAP FLEX-PIERCING, il est indispensable d’utiliser une étiquette
code-barres destinée à identifier le tube contenant la solution CAPICLEAN diluée.
CAPICLEAN doit être conservé au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur l’étiquette du flacon. NE PAS
CONGELER.
Un précipité ou des particules agrégées en suspension (floculat) peuvent être observés dans le flacon de CAPICLEAN sans que cela n’affecte son
utilisation.
Ne pas remettre en suspension ce précipité ou ces particules. Il est recommandé de ne prélever que le surnageant.
Pour une utilisation différée, placer le tube contenant la solution diluée au réfrigérateur. Il doit être utilisé dans la journée.
4. SOLUTION D’HYPOCHLORITE DE SODIUM (pour le nettoyage de l’aiguille de prélèvement)

Préparation
Préparer une solution d’hypochlorite de sodium à 2 - 3 % de chlore à partir d’une dose concentrée de 250 mL à 9,6 % de chlore diluée à 1 litre (volume
final) dans de l’eau froide distillée ou déminéralisée.
Utilisation
Pour le nettoyage de l’aiguille de prélèvement de l’automate pour électrophorèse capillaire, MINICAP ou MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA (entretien
hebdomadaire afin d’éliminer toute protéine adsorbée sur l’aiguille).
Voir le manuel d’instructions de MINICAP ou MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA.
• Pour MINICAP, déposer 2 mL de solution d’hypochlorite de sodium, préparée précédemment, dans un tube à hémolyse.
• Pour MINICAP FLEX-PIERCING, déposer 2 mL de solution d’hypochlorite de sodium, préparée précédemment, dans un tube 100 mm.
• Placer le tube (identifié avec une étiquette code-barres spécifique de la solution d’hypochlorite de sodium), sur le carrousel de MINICAP ou de
MINICAP FLEX-PIERCING.
• Vérifier la présence de cupules réactif neuves sur le chargeur de MINICAP / MINICAP FLEX-PIERCING prévu à cet effet (en cas d’absence de
cupule réactif, un message apparaît).
• Introduire le carrousel dans le système MINICAP / MINICAP FLEX-PIERCING.
• Fermer les portes de MINICAP / MINICAP FLEX-PIERCING, le cycle de nettoyage démarre automatiquement.
IMPORTANT : Pour une utilisation optimale de la solution d’hypochlorite de sodium sur MINICAP et MINICAP FLEX-PIERCING, il est indispensable
d’utiliser une étiquette code-barres destinée à identifier le tube contenant la solution.
La solution d’hypochlorite de sodium diluée peut être conservée 3 mois à température ambiante dans un récipient en plastique fermé hermétiquement,
à l’abri des rayonnements solaires et de toute source de chaleur ou d’ignition et à l’écart des acides et de l’ammoniaque.
5. SOLUTION DE LAVAGE CAPILLARYS / MINICAP

Préparation
Chaque flacon de solution de lavage concentrée CAPILLARYS / MINICAP (SEBIA, référence N° 2052 : 2 flacons de 75 mL) doit être complété à
750 mL avec de l’eau distillée ou déminéralisée.
Pour MINICAP, il est recommandé de prélever la solution de lavage par quantité de 25 mL et compléter à 250 mL avec de l’eau distillée ou
déminéralisée.
Après dilution, la solution de lavage contient une solution basique pH ≈ 12.
-3-
Utilisation
Pour le lavage des capillaires de MINICAP.
IMPORTANT : Avant de remplir le flacon de solution de lavage, il est recommandé de rincer abondamment à l’eau distillée ou déminéralisée le col du
flacon, le connecteur et le tuyau afin d’éviter l’accumulation de sels.
Les solutions de lavage concentrée et diluée doivent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés pour éviter
l’évaporation. La solution concentrée est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon.
La solution diluée est stable pendant 3 mois.
Éliminer la solution de lavage diluée s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne.
6. BÊTA-MERCAPTOÉTHANOL (BME ou 2-MERCAPTOÉTHANOL) (non fourni par SEBIA)
NOTES :
Les tests réalisés lors de la validation des réactifs montrent que, pour les différentes solutions et avec l’utilisation d’un matériel adapté au volume à
reconstituer, une variation du volume final de ± 5 % n’affecte en rien la qualité de l’analyse.
L’eau distillée ou déminéralisée, utilisée pour la reconstitution des solutions, doit être exempte de colonies bactériennes et de moisissures (utiliser un
filtre de porosité ≤ 0,45 μm) et d’une conductivité inférieure à 3 µS/cm, soit une résistivité supérieure à 0,33 MΩ.cm.
ÉQUIPEMENT ET ACCESSOIRES NÉCESSAIRES
1. Système d’électrophorèse capillaire MINICAP SEBIA, référence N° 1230, MINICAP FLEX-PIERCING SEBIA, référence N° 1232.
2. Carrousel, fourni avec le système MINICAP.
3. Bidons plastiques fournis avec le système MINICAP : flacon pour le rinçage des capillaires (à remplir avec de l’eau déminéralisée ou distillée) et
flacon de vidange.
4. Cupules réactif MINICAP SEBIA (par 250), référence N° 2280.
5. Couvercles pour cupules réactifs MINICAP usagées (par 12), référence N° 2286 : couvercles destinés à fermer les boîtes pour cupules usagées.
ÉCHANTILLONS À ANALYSER
Prélèvement et conservation des échantillons

L’analyse se fait sur sérums frais. Les sérums doivent être prélevés selon la procédure utilisée pour tout test de laboratoire d’analyses cliniques.
Les échantillons peuvent être conservés au maximum 10 jours au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C).
Pour des conservations prolongées, congeler rapidement les échantillons à - 18 / - 30 °C (au maximum dans les 8 heures après le prélèvement). Les
sérums congelés sont stables 3 mois.
Les protéines des échantillons conservés entre 2 et 8 °C ou entre 15 et 30 °C, se dégradent, en particulier le complément C3 pour lequel la cinétique
de dégradation est très rapide à 15 – 30 °C et est nettement visible au-delà de 3 jours.
Un sérum conservé entre 2 et 8 °C ou entre 15 et 30 °C présente une fraction bêta-2 qui diminue progressivement et peut apparaître déformée (avec
apparition de petits pics supplémentaires du côté gamma et / ou bêta-1 suite à la dégradation du complément C3) et une fraction alpha-2 dont la forme
peut être légèrement modifiée.
Au-delà de 10 jours entre 2 et 8 °C ou 3 jours entre 15 et 30 °C, la fraction bêta-1 se déforme en s’élargissant, et la fraction bêta-2 diminue fortement.
Selon les échantillons, lors de leur conservation au-delà de 10 jours entre 2 et 8 °C ou 3 jours entre 15 et 30 °C, la superposition automatique des
fractions par le logiciel de traitement des données peut potentiellement être perturbée.
NOTE : Chaque laboratoire doit s’assurer que les échantillons sont transportés dans les conditions optimales pour leur intégrité (1).
(1) ISO 15189 : Laboratoires de biologie médicale - Exigences concernant la qualité et la compétence.
Préparation des échantillons
Utiliser directement les échantillons de sérum non dilués.
Après conservation au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C) ou congélation, certains sérums (en particulier ceux qui contiennent une cryoglobuline ou un
cryogel) deviennent visqueux ou troubles. Après remise à l’état liquide, ces sérums peuvent être analysés directement.
De même, les sérums contenant une immunoglobuline polymérisée peuvent être utilisés directement, sans traitement préalable.
Il est recommandé d’observer l’aspect du sérum avant l’analyse (cas d’hémolyse, de présence de cryoglobulines ou de turbidité).
Échantillons à éviter
• Ne pas utiliser des échantillons de sérum anciens ou conservés dans de mauvaises conditions, les fractions bêta seraient fortement modifiées.
• Ne pas utiliser de plasma. Le fibrinogène migre en position bêta-2 (pic épaulé en bêta-2).
NOTE : Les tubes de prélèvement des échantillons biologiques sont décrits dans la documentation disponible sur la phase pré-analytique de biologie
médicale (données fournies par les fabricants de tubes, guides et recommandations sur le prélèvement biologique…). En l’absence d’indication dans
la notice d’utilisation sur le type de tube à utiliser, se référer à cette documentation et pour les dimensions de tube à utiliser, se référer au document
SEBIA "Caractéristiques des tubes à utiliser selon l’instrument". La phase pré-analytique doit être réalisée selon l’état de l’art, les différentes
recommandations, dont celles fournies par les fabricants de tubes, et la réglementation applicable.
TECHNIQUE
Le système MINICAP est un instrument multiparamétrique automatique qui assure l’analyse des protéines sériques sur 2 capillaires en parallèle dans
la technique MINICAP IMMUNOTYPING selon les étapes suivantes :
• lecture des codes-barres des tubes primaires (jusqu’à 18), des tubes de réactifs MINICAP IMMUNOTYPING et du carrousel ;
• dilution des échantillons à partir des tubes primaires dans des cupules réactif ;
• mise en contact des sérums avec la solution ELP et avec les antisérums des différentes spécificités dans des cupules réactif ;
• lavage des capillaires ;
• injection des échantillons dilués ;
• séparation et détection directe des protéines sur les capillaires.
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Les étapes manuelles sont les suivantes :

• mise en place des tubes primaires (débouchés) sur le carrousel en positions 1 à 18 ;
• mise en place du tube de diluant échantillon en position 27 sur le carrousel ;
• mise en place du support contenant les tubes de solution ELP et d’antisérums en positions 19 à 24 sur le carrousel ;
• introduction dans le système MINICAP ;
• récupération des tubes après analyse ;
• récupération et fermeture des boîtes pour cupules usagées.
Une analyse électrophorétique préalable effectuée sur le système MINICAP avec le kit MINICAP PROTEIN(E) 6 aura permis de sélectionner les
échantillons dont le profil protéique présente un pic anormal par examen visuel et le mode de dilution à appliquer.
LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS DE MINICAP.
I. PRÉPARATION DE L’ANALYSE ÉLECTROPHORÉTIQUE

1. Sélectionner les échantillons dont le profil protéique obtenu par la technique MINICAP PROTEIN(E) 6 a permis de détecter un pic anormal
après analyse qualitative.
2. Mettre MINICAP et l’ordinateur de contrôle sous tension.
3. Pour le démarrage, placer au moins une cupule réactif neuve sur le chargeur de MINICAP prévu à cet effet (en cas d’absence de cupule
réactif, un message apparaît).
4. Démarrer le logiciel, l’automate est alors automatiquement initialisé.
5. Pour chaque échantillon, sélectionner le mode de dilution à appliquer automatiquement selon sa concentration en immunoglobulines :
• "HYPERGAMMA" si la concentration en immunoglobulines est supérieure à 20 g/L (cas d'hypergammaglobulinémie),
• "HYPOGAMMA" si la concentration en immunoglobulines est inférieure à 8 g/L (cas d'hypogammaglobulinémie),
• "STANDARD" dans tous les autres cas (mode de dilution sélectionné par défaut).
6. Pour l’analyse des sérums, utiliser le kit MINICAP IMMUNOTYPING avec le programme d’analyses "IMMUNOTYPING 6" et le tampon
d’analyse MINICAP PROTEIN(E) 6. Pour sélectionner le programme d’analyses "IMMUNOTYPING 6" et mettre en place le flacon de tampon
MINICAP PROTEIN(E) 6 en position " B1 " sur l’appareil, lire attentivement le manuel d’instructions de MINICAP et suivre les instructions
apparaissant à l’écran.
REMARQUE : Le passage de la technique MINICAP PROTEIN(E) 6 à la technique MINICAP IMMUNOTYPING 6 (et réciproquement) ne
nécessite pas de changement de flacon de tampon.
7. Placer les cupules réactif neuves sur le chargeur de MINICAP prévu à cet effet (en cas d’absence de cupule réactif, un message apparaît).
8. Placer une boîte neuve pour cupules usagées dans MINICAP à l’emplacement prévu à cet effet.
9. Vérifier le niveau de remplissage des différents flacons de réactifs, compléter les volumes, si nécessaire, et vider le flacon de vidange. Dans
la fenêtre "Vérifier le niveau des bidons", réactualiser le logiciel de contrôle au moyen des curseurs.
10. Le carrousel possède 28 emplacements pour tubes :
• Placer jusqu’à 18 tubes primaires sur le carrousel (positions 1 à 18), en prenant bien soin de déboucher le tube et de laisser le code-barres
de chaque tube en face de sa fenêtre de lecture. Dans le cas où l’échantillon placé sur le portoir ne ferait pas partie des sérums
préalablement sélectionnés, le mode de dilution "STANDARD" sera appliqué.
• Le support contenant les tubes de solution ELP et d’antisérums anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa et anti-Lambda est prêt à l’emploi.
Insérer directement le support sur le carrousel à l’emplacement correspondant à la solution ELP et aux antisérums, en le manipulant par
les deux clips situés à chaque extrémité et en prenant soin de laisser le code-barres de chaque tube en face de sa fenêtre de lecture.
IMPORTANT : Vérifier que le support est bien fixé sur le carrousel avant de démarrer l’analyse.
• Déboucher le tube de diluant échantillon et le placer en position 27 (position «Diluent / Solution»), le code-barres du tube doit être situé en
face de sa fenêtre de lecture.
IMPORTANT : Pour une analyse donnée, la solution ELP et les antisérums doivent tous être du même lot. Ne pas mélanger les fonds de tube
de chaque antisérum de même spécificité ou de solution ELP aux tubes suivants même s’ils sont du même lot.
IMPORTANT : En cas d’absence de tubes échantillons à analyser, de tubes réactifs en positions No. 19 à 24 (antisérums et solution ELP) et
27 (diluant échantillon), l’analyse ne peut pas démarrer et un message apparaît.
11. Introduire le carrousel dans le système MINICAP.
12. Fermer les portes de MINICAP et suivre les instructions apparaissant à l’écran.
13. Dès la fin de l’analyse, retirer le carrousel afin d’enlever les tubes analysés. Retirer le support avec les tubes de solution ELP et d’antisérums
et le placer à 2 – 8 °C dans les plus brefs délais.
IMPORTANT : Une déformation des profils ELP et des profils antisérums entre les zones alpha-2 et bêta-1 peut être observée en cas de
maintien prolongé des tubes dans l’automate.
14. Si nécessaire, retirer avec précaution la boîte contenant les cupules réactif usagées, la fermer hermétiquement à l’aide du couvercle destiné
à cet effet et la jeter.
ATTENTION : Manipuler avec précaution les boîtes contenant les cupules réactif usagées contenant des échantillons biologiques.
DILUTION - MIGRATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES

1. Lecture des codes-barres des tubes primaires d’échantillons (jusqu’à 18), des tubes de réactifs MINICAP IMMUNOTYPING et du carrousel.
2. Dilution du sérum dans le diluant échantillon dans une cupule réactif.
3. Prélèvement des 2 premiers réactifs et de l’échantillon dilué puis mélange dans une cupule réactif, avec rinçage de l’aiguille de prélèvement entre
chaque dilution. Le mode de dilution préalablement sélectionné pour cet échantillon sera automatiquement appliqué. Si celui-ci n’a pas été défini,
le mode de dilution "STANDARD" sera appliqué. Par défaut, l’ordre des réactifs est le suivant : solution ELP & anti-Ig G, anti-Ig A & anti-Ig M, puis
anti-Kappa & anti-Lambda.
4. Lavage des capillaires.
5. Injection des échantillons dilués dans les capillaires.
6. Migration à voltage constant en température régulée par effet Peltier, pendant environ 4 minutes.
7. Lecture à 200 nm et apparition simultanée des profils protéiques sur l’écran de l’ordinateur.
NOTE : Les étapes 3 à 7 sont répétées pour les autres réactifs (antisérums anti-Ig A & anti-Ig M, puis anti-Kappa & anti-Lambda, par défaut).
NOTE : Ces étapes sont effectuées les unes après les autres pour les 2 premiers réactifs (solution ELP et anti-Ig G). Pour les réactifs suivants
(antisérums anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa et anti-Lambda), la phase 3 se fait en temps masqué, pendant les 2 analyses précédentes. L’ensemble
des profils correspondants au typage de l’échantillon est obtenu après 35 minutes environ.
-5-
Dans la fenêtre de statut :

- L’onglet "Légende" présente l’état d’avancement des analyses sur le carrousel.
- L’onglet "Compteur IT" indique le nombre d’analyses effectuées et n’apparait que dans le mode "tubes bouchés". Après installation de la version du
logiciel, le compteur d’analyses démarre à zéro. Il comptabilise l’analyse en cours et toute analyse effectuée ou interrompue (en cas d’arrêt).
Remettre le compteur à zéro (par l’intermédiaire du bouton "reset") quand les flacons sont vides.
NOTE : Une alerte clignotante apparait dans la fenêtre de statut lorsque 60 analyses ont été réalisées. Si le compteur d’analyses n’est pas remis à
zéro, cette alerte persiste sans bloquer les analyses suivantes.
II. TRAITEMENT DES DONNÉES

Dès la fin de l’analyse, chaque profil antisérum (Ig G, Ig A, Ig M, Kappa et Lambda) est superposé au profil ELP. En cas de réaction entre la protéine
monoclonale et l'antisérum spécifique, le pic correspondant disparaît du profil électrophorétique de l’antisérum.
Ces comparaisons permettent d'identifier et de caractériser le ou les composants monoclonaux.
III. FIN DE SÉQUENCE D’ANALYSE

Une procédure d’extinction doit être lancée par l’opérateur en fin de session de travail afin de conserver les capillaires dans des conditions optimales.
IMPORTANT : Placer une cupule réactif neuve sur le chargeur de MINICAP prévu à cet effet (en cas d’absence de cupule réactif, un message
apparaît).
IV. REMPLISSAGE DES FLACONS DE RÉACTIFS

L’automate MINICAP permet une gestion automatique des réactifs.
IMPORTANT : Il est nécessaire de suivre la procédure prévue pour le changement des flacons et de respecter le code couleur flacon – raccord rapide
lors de chaque remplacement de flacon.
L’apparition de la fenêtre de gestion des réactifs indique qu’il est nécessaire de changer un ou plusieurs réactifs :
• mise en place d’un nouveau flacon de tampon d’analyse et / ou,
• remplissage du flacon de lavage avec la solution de lavage reconstituée et / ou,
• remplissage du flacon de rinçage par de l’eau déminéralisée ou distillée filtrée et / ou,
• vidange du flacon de vidange.
CONTRÔLE QUALITÉ
Il est recommandé de réaliser l’analyse d’un sérum de contrôle (tel que le Contrôle IT / IF SEBIA, référence N° 4788) lors de chaque changement de
lot d’un des réactifs.
NOTE : Si nécessaire, le Sérum de Contrôle Normal SEBIA, référence N° 4785, ou le Sérum de Contrôle Hypergamma SEBIA, référence N° 4787,
peuvent être utilisés comme contrôle négatif.
RÉSULTATS
Aide à l’analyse des profils électrophorétiques

1. Profil de référence (profil ELP)
• Tout d’abord, il est recommandé d’examiner attentivement le profil de référence (profil ELP) pour détecter toute anomalie.
• Lorsqu’une anomalie est détectée sur le profil ELP, repérer la position de migration du(des) pic(s) sur la courbe – zone alpha-2, bêta,
bêta-gamma ou gamma. À l’aide du profil ELP, chercher spécifiquement les zones anormales par comparaison de ce profil ELP avec chaque
profil antisérum – G, A, M, kappa et lambda.
• Les pics anormaux peuvent se présenter sous forme de composants monoclonaux, biclonaux, triclonaux ou oligoclonaux, de chaînes lourdes,
de chaînes légères, etc…
2. Examiner chaque profil antisérum en le comparant au profil de référence superposé (profil ELP).
Chercher la disparition ou la diminution d’un pic anormal.
• Ig G : Les Ig G représentent la classe majoritaire d’immunoglobulines rencontrées dans le sérum et une élimination normale du fond polyclonal
est communément observée. Cette diminution normale du fond polyclonal ne doit pas être confondue avec un composant monoclonal. Une Ig G
monoclonale est détectée par la disparition d’un pic par comparaison avec le profil ELP.
• Ig A : Normalement, les Ig A sont en concentration relativement faible par rapport aux Ig G. Chercher une légère diminution dans la zone
bêta-gamma. Le profil ELP devrait refléter la présence d’Ig A dans les échantillons normaux.
• Ig M : Le profil est similaire à celui obtenu avec l’antisérum anti-Ig A à l’exception de la concentration qui est normalement inférieure. Les
échantillons normaux présenteront une très faible diminution sans modification de la symétrie de la fraction. Le profil ELP devrait refléter la
présence d’Ig M dans les échantillons normaux.
• Kappa : Elles sont normalement présentes dans un rapport de 2 kappa pour 1 lambda. Observer normalement une diminution de 2/3 de la
fraction gamma. Une élimination polyclonale apparaît sous la forme d’une réduction de la fraction sans aucune modification de sa symétrie. Un
composant monoclonal kappa est détecté par l’élimination d’un pic avec un changement de symétrie de la fraction, par comparaison avec le
profil ELP.
• Lambda : Du fait d’un rapport de 2 kappa pour 1 lambda, le profil lambda d’échantillons normaux devrait présenter une réduction d’un 1/3 de la
fraction gamma. Un composant monoclonal lambda est détecté par l’élimination d’un pic avec un changement de symétrie de la fraction, par
comparaison avec le profil ELP.
L’identification d’un composant monoclonal est obtenue par l’observation de l’absence ou de la disparition d’un pic anormal sur les profils antisérums
correspondants. Par exemple, l’élimination d’un pic anormal sur le profil Ig G et le profil kappa pourrait indiquer la présence d’un composant
monoclonal Ig G, kappa.
-6-
Interprétation pour l’analyse de sérums
Absence de protéine monoclonale

• La disparition des immunoglobulines polyclonales sur les profils antisérums (avec diminution des fractions gamma et bêta), sans disparition d'autres
pics protéiques, est observée pour l'analyse d'un sérum normal ou présentant une hypergammaglobulinémie.
Présence d’une protéine monoclonale
• Une gammapathie (présence d’une immunoglobuline monoclonale) est caractérisée par la disparition d’un pic avec l’un des antisérums anti-chaînes
lourdes (gamma, alpha ou mu) et avec l’un des antisérums anti-chaînes légères (kappa ou lambda). La fraction monoclonale mise en évidence doit
être située au même niveau de migration que la bande détectée sur le profil ELP.
• La disparition d'un pic avec l’un des antisérums anti-chaînes légères (kappa ou lambda) sans disparition de ce pic avec l’un des antisérums
anti-chaînes lourdes peut signifier :
a) la présence d’une gammapathie à Ig D ou Ig E qu’il conviendra de confirmer par les techniques HYDRAGEL IF, SEBIA, avec les antisérums
anti-chaînes lourdes delta ou epsilon,
b) la présence d’une chaîne légère libre qu’il conviendra de confirmer par les techniques HYDRAGEL BENCE JONES ou HYDRAGEL IF, SEBIA,
avec les antisérums spécifiques anti-chaînes légères libres kappa ou lambda.
• La disparition d'un pic avec l’un des antisérums anti-chaînes lourdes sans disparition de ce dernier avec les antisérums anti-chaînes légères est
rare. Il conviendra de confirmer la présence d’une maladie des chaînes lourdes gamma, alpha ou mu.
Présence de plusieurs protéines monoclonales
• La même interprétation s’applique en présence de plusieurs protéines monoclonales. Ces cas plus rares correspondent à la prolifération de
plusieurs clones de cellules B. Une gammapathie biclonale sera détectée par la présence de deux chaînes lourdes (identiques ou différentes) et de
deux chaînes légères (identiques ou différentes), c’est-à-dire par la disparition des 2 pics avec l’un des antisérums anti-chaînes lourdes (identiques
ou différents) et avec l’un des antisérums anti-chaînes légères (identiques ou différents).
• La disparition de plusieurs pics avec l’un des antisérums anti-chaînes lourdes et avec l’un des antisérums anti-chaînes légères est caractéristique
d’une polymérisation des immunoglobulines.
Il conviendra d’effectuer un traitement réducteur au ß-mercaptoéthanol et de renouveler l'immunotypage pour confirmer la présence d’une seule
anomalie. Dans ce cas, préparer une solution réductrice en ajoutant 1 % de ß-mercaptoéthanol dans le Fluidil (SEBIA, référence N° 4587, 1 flacon
de 5 mL). Le système MINICAP en attente de carrousel, prétraiter l’échantillon par cette solution en ajoutant 100 µL de solution réductrice à 300 µL
de sérum pur. Agiter au vortex et laisser en contact 15 minutes maximum puis suivre la technique.
IMPORTANT : Après traitement réducteur au ß-mercaptoéthanol, l’échantillon doit être analysé immédiatement ; il ne doit alors pas y avoir
d’échantillon en attente d’analyse dans le système MINICAP.
Après traitement réducteur au ß-mercaptoéthanol, la transformation de ce profil bi- ou tri-clonal en profil monoclonal permet de conclure à la
présence d’un seul clône. Il est à noter que le traitement du sérum au ß-mercaptoéthanol entraîne par ailleurs une dégradation du complément C3
(visualisation de fortes déformations de la zone bêta) et l’apparition possible d’un large pic entre les fractions alpha-1 et albumine.
• La disparition de plusieurs pics multiples avec un ou plusieurs antisérums anti-chaînes lourdes et avec les deux antisérums anti-chaînes légères
est caractéristique d’un profil oligoclonal.
Cas particuliers :
• Cas de disparition incomplète d’un pic monoclonal sur les profils antisérums, refaire l’analyse avec une dilution plus importante du sérum.
Sélectionner le mode de dilution "STANDARD" à la place du mode "HYPOGAMMA" et "HYPERGAMMA" à la place de "STANDARD".
• Cas des échantillons contenant une ou des protéine(s) monoclonale(s) en concentration très importante (en mode de dilution "HYPERGAMMA") :
Dans ce cas, le complexe formé avec les antisérums apparaît sous la forme d’un pic large et important entre les fractions albumine et alpha-1 ; la
disparition du (ou des) pic(s) monoclonal (-aux) peut ne pas être complète sur les profils antisérums.
• Cas des échantillons contenant une ou des protéine(s) monoclonale(s) polymérisée(s) :
Dans ce cas, le complexe formé avec les antisérums peut apparaître sous la forme d’un pic large et important entre les fractions albumine et bêta-1.
• Cas de protéines monoclonales de forte intensité migrant dans les zones bêta-1 ou bêta-2 : Sélectionner le type de dilution adapté à l’intensité de
cette protéine monoclonale.
• Cas des biclonales
Les biclonales peuvent être dues à des immuncomplexes, des gammapathies biclonales ou des polymérisations ou, cas extrêmement rare, à des
réactions croisées (cf § Interférences et limites).
• Cas de disparition d’Ig M sur les profils antisérums Kappa et Lambda :
En cas de soustraction complète d’un pic avec les antisérums anti-Ig M, anti-chaînes légères Kappa et Lambda, il est recommandé d’effectuer un
traitement réducteur de l’échantillon au bêta-mercaptoéthanol (voir le paragraphe précédent) et de répéter l’immunotypage.
• En cas de réactions multiples simultanées avec les antisérums anti-chaînes lourdes G, A, et M, il est recommandé de refaire l’analyse de
l’échantillon de sérum en sélectionnant le mode de dilution "OPTIMISÉE".
Interférences et limites
IMPORTANT : L’utilisation d’antisérums autres que ceux spécifiques à la technique MINICAP IMMUNOTYPING fournis avec le kit peut affecter la
qualité des résultats. Utiliser uniquement les antisérums spécifiques à la technique MINICAP IMMUNOTYPING.
Voir ÉCHANTILLONS À ANALYSER.
Compte tenu des principes analytiques des techniques actuelles (principes de l’électrophorèse de zone, résolution et sensibilité), aucune garantie ne
peut être donnée quant à la détection totale de toutes les composantes monoclonales.
De nombreux travaux ont montré que la réaction antigène - anticorps en phase liquide se fait différemment de la réaction sur gel. La technique
MINICAP IMMUNOTYPING se déroulant totalement en milieu liquide, il peut arriver que certains antisérums donnent des réactions croisées avec
certaines protéines monoclonales présentes dans l’échantillon.
Il n’y a aucun risque de faux négatifs c'est-à-dire de ne pas révéler une gammapathie, mais cette réaction croisée, extrêmement peu fréquente, se
présente comme un diagnostic de gammapathie biclonale alors qu’il n’y a en fait qu’une gammapathie monoclonale. En tout état de cause, la littérature
indique qu’il n’y a pas de différence de traitement entre une gammapathie monoclonale et une gammapathie biclonale (Kyle et al, 1981).
En cas de doute sur un profil biclonal, il est recommandé de confirmer ce résultat par les techniques d’immunofixation HYDRAGEL.
De légers décalages entre le profil ELP et les profils antisérums superposés (notamment dans la zone bêta-1) peuvent être observés. Ils ne doivent
pas être confondus avec la disparition d’un pic monoclonal sur un ou plusieurs profils antisérums.
Quand une protéine monoclonale est détectée par la technique MINICAP PROTEIN(E) 6 d’analyse des protéines sur MINICAP et non caractérisée
par la technique MINICAP IMMUNOTYPING, il est recommandé de renouveler l’immunotypage en traitant, au préalable, l’échantillon au
bêta-mercaptoéthanol (voir le paragraphe précédent) et si un doute persiste, de confirmer le résultat obtenu par une technique d’immunofixation sur
gel d’agarose.
-7-
Dans la technique MINICAP IMMUNOTYPING, la présence à forte concentration de cholestérol (≤ 8,24 mmol/L), de triglycérides (≤ 11,58 mmol/L) et
d’hémoglobine (≤ 4,0 g/L) dans le sérum n’interfère pas sur la détection et la caractérisation des protéines monoclonales.
L’interférence de la bilirubine sur la technique MINICAP IMMUNOTYPING n’a pas été étudiée. Il est recommandé d’observer l’aspect du sérum avant
l’analyse ; dans le cas où une interférence est suspectée, il est recommandé de refaire l’analyse du sérum, ou d’effectuer une analyse complémentaire
par une autre technique.
Comme toute technique d’électrophorèse, de faibles protéines monoclonales migrant conjointement avec des protéines normales du sérum peuvent
être difficiles à détecter. Lorsque de faibles protéines monoclonales sont suspectées, des analyses complémentaires à l’aide des kits d’immunofixation
HYDRAGEL, SEBIA, peuvent alors être nécessaires (Keren, 1998).
Assistance technique
Contacter le Service Technique SEBIA en cas de test défectueux.
Les fiches de données de sécurité des différents réactifs du kit ainsi que les informations relatives au nettoyage et à l’élimination des déchets, aux
règles d’étiquetage et de sécurité appliquées par SEBIA, à l’emballage de transport pour les échantillons biologiques et à la décontamination des
appareils sont disponibles sur le DVD "INSTRUCTIONS & SAFETY DATA SHEETS".
PERFORMANCES
Répétabilité intra-séquence et inter-analyses

Trois échantillons de sérums pathologiques à gammapathie monoclonale (Ig GL, Ig AK et Ig MK) et un sérum normal ont été analysés en parallèle
sur 3 systèmes MINICAP dans la technique MINICAP IMMUNOTYPING en mode de dilution "STANDARD" et avec le même lot de kit MINICAP
IMMUNOTYPING. Chaque sérum a été analysé 3 fois, simultanément sur les 2 capillaires de chaque système MINICAP avec un des 6 réactifs, selon
l’échantillon analysé (solution ELP pour l’échantillon normal, anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa et anti-Lambda pour les échantillons
pathogiques, selon le type de gammapathie monoclonale).
Tous les échantillons analysés ont donné les mêmes résultats pour les 3 systèmes MINICAP et les profils obtenus sont caractéristiques pour chacun
des échantillons.
Dans la technique MINICAP IMMUNOTYPING, l'immunotypage n’a détecté qu’un seul composant monoclonal pour les 3 échantillons pathologiques
et aucun pic pour le sérum normal.
Reproductibilité inter-analyses et inter-sytèmes

Trois échantillons de sérums pathologiques à gammapathie monoclonale (Ig GK, Ig GL et Ig MK) présentant des concentrations en immunoglobulines
(Ig) différentes, ont été analysés dans la technique MINICAP IMMUNOTYPING, en mode de dilution "HYPOGAMMA" pour le sérum dont la
concentration en Ig était < à 8 g/L, en mode de dilution "STANDARD" pour le sérum dont la concentration en Ig était comprise entre 8 et 20 g/L, et en
mode de dilution "HYPERGAMMA" pour le sérum dont la concentration en Ig était > à 20 g/L. Cette analyse a été répétée 3 fois successivement sur
chacun des 3 systèmes MINICAP et avec le même lot de kit MINICAP IMMUNOTYPING.
Chaque échantillon analysé a donné les mêmes résultats pour l’ensemble des analyses réalisées sur les 3 systèmes MINICAP et les profils obtenus
sont caractéristiques pour chacun des échantillons. Dans la technique MINICAP IMMUNOTYPING, l'immunotypage a mis en évidence les pics
monoclonaux attendus pour chacun des échantillons.
Reproductibilité inter-analyses et inter-lots

Deux échantillons de sérums pathologiques à gammapathie monoclonale Ig GK et Ig MK et un échantillon à gammapathie biclonale Ig AL, présentant
des concentrations en immunoglobulines comprises entre 8 et 20 g/L, ont été analysés 3 fois successivement dans la technique MINICAP
IMMUNOTYPING avec trois lots de kit MINICAP IMMUNOTYPING et en mode de dilution "STANDARD".
Chaque échantillon analysé a donné les mêmes résultats pour l’ensemble des analyses réalisées à l’aide des 3 lots de kits MINICAP IMMUNOTYPING
et les profils obtenus sont caractéristiques pour chacun des échantillons. Dans la technique MINICAP IMMUNOTYPING, l'immunotypage a mis en
évidence les pics monoclonaux attendus pour chacun des 3 échantillons.
Exactitude
69 échantillons de sérum (57 échantillons pathologiques différents et 12 sérums normaux) ont été analysés en parallèle dans la technique MINICAP
IMMUNOTYPING et sur un autre système d'immunotypage par électrophorèse capillaire disponible dans le commerce.
Les résultats obtenus ont montré une parfaite corrélation entre les deux systèmes d’analyse pour tous les échantillons analysés, avec une sensibilité
de 100 % et une spécificité de 100 % par rapport à la technique de référence, calculées selon la méthode recommandée (Wendling, 1986) :
• Pour les 12 sérums normaux : corrélation parfaite,
• Pour les 57 sérums pathologiques : corrélation parfaite.
Sensibilité
Trois sérums à gammapathie monoclonale ont été dilués en série dans un sérum normal et analysés dans la technique MINICAP IMMUNOTYPING.
Les résultats sont résumés ci-dessous.
BANDE MONOCLONALE
ÉCHANTILLON N° CONCENTRATION (g/L) LIMITE DE DÉTECTION (g/L)
TYPE
Alpha 0,25
1 Ig A, L 27,0
Lambda 0,25
Gamma 0,25
2 Ig G, K 29,0
Kappa 0,25
Mu 0,25
3 Ig M, K 17,0
Kappa 0,25
Le seuil de détection d’un pic monoclonal est donc de l'ordre de 0,25 g/L.
NOTE : Selon la position du pic monoclonal et le fond polyclonal de la zone des gamma et bêta globulines, le seuil de détection d’un pic monoclonal
peut varier.
-8-
ANALYSE DES URINES : TECHNIQUE MINICAP IMMUNOTYPING URINE
RÉACTIFS NÉCESSAIRES NON FOURNIS
1. KIT MINICAP PROTEIN(E) 6 (SEBIA, référence N° 2203)

2. KIT CAPILLARYS / MINICAP URINE (SEBIA, référence N° 2013)

Utilisation
Pour la préparation des échantillons d’urine pour l’analyse des protéines urinaires humaines par électrophorèse capillaire dans le système
automatique MINICAP.
3. EAU DISTILLÉE OU DÉMINÉRALISÉE

Utilisation
Pour le rinçage des capillaires de l’automate pour électrophorèse capillaire, MINICAP, SEBIA.
Il est recommandé d’utiliser de l’eau distillée ou déminéralisée filtrée (sur filtre de porosité ≤ 0,45 μm) et d’une conductivité inférieure à 3 µS/cm, soit
une résistivité supérieure à 0,33 MΩ.cm.
Afin d’éviter les contaminations microbiennes, renouveler l’eau chaque jour.
Pour un fonctionnement optimum, il est recommandé d'ajouter 350 μL/L de CLEAN PROTECT (SEBIA, référence N° 2059 : 1 flacon de 5 mL).
4. CAPICLEAN
Présentation
Le flacon de solution enzymatique concentrée CAPICLEAN (SEBIA, référence N° 2058 : 1 flacon de 25 mL) contient : enzymes protéolytiques,
surfactants et composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales.
Utilisation
Pour le nettoyage de l'aiguille de prélèvement de l’automate pour électrophorèse capillaire, MINICAP, SEBIA, au cours du cycle de nettoyage
CAPICLEAN.
IMPORTANT : Réaliser un cycle de nettoyage avec CAPICLEAN au minimum une fois par semaine et au maximum une fois par jour, ou toutes les
500 analyses quand elles sont réalisées en moins d’une semaine.
Voir la notice d’utilisation de CAPICLEAN, SEBIA.
IMPORTANT : Pour une utilisation optimale de CAPICLEAN sur MINICAP, il est indispensable d’utiliser une étiquette code-barres destinée à identifier
le tube contenant la solution CAPICLEAN diluée.
CAPICLEAN doit être conservé au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur l’étiquette du flacon. NE PAS
CONGELER.
Un précipité ou des particules agrégées en suspension (floculat) peuvent être observés dans le flacon de CAPICLEAN sans que cela n’affecte son
utilisation.
Ne pas remettre en suspension ce précipité ou ces particules. Il est recommandé de ne prélever que le surnageant.
Pour une utilisation différée, placer le tube contenant la solution diluée au réfrigérateur. Il doit être utilisé dans la journée.
5. SOLUTION D’HYPOCHLORITE DE SODIUM (pour le nettoyage de l’aiguille de prélèvement)

Préparation
Préparer une solution d’hypochlorite de sodium à 2 - 3 % de chlore à partir d’une dose concentrée de 250 mL à 9,6 % de chlore diluée à 1 litre (volume
final) dans de l’eau froide distillée ou déminéralisée.
Utilisation
Pour le nettoyage de l’aiguille de prélèvement de l’automate pour électrophorèse capillaire, MINICAP, SEBIA (entretien hebdomadaire afin d’éliminer
toute protéine adsorbée sur l’aiguille).
Voir le manuel d’instructions de MINICAP, SEBIA.
• Déposer 2 mL de solution d’hypochlorite de sodium, préparée précédemment, dans un tube à hémolyse.
• Placer le tube (identifié avec une étiquette code-barres spécifique de la solution d’hypochlorite de sodium), sur le carrousel de MINICAP.
• Placer une cupule réactif neuve sur le chargeur de MINICAP prévu à cet effet (en cas d’absence de cupule réactif, un message apparaît).
• Introduire le carrousel dans le système MINICAP.
• Fermer les portes de MINICAP, le cycle de nettoyage démarre automatiquement.
IMPORTANT : Pour une utilisation optimale de la solution d’hypochlorite de sodium sur MINICAP, il est indispensable d’utiliser une étiquette code-
barres destinée à identifier le tube contenant la solution.
-9-

La solution d’hypochlorite de sodium diluée peut être conservée 3 mois à température ambiante dans un récipient en plastique fermé hermétiquement,
à l’abri des rayonnements solaires et de toute source de chaleur ou d’ignition et à l’écart des acides et de l’ammoniaque.
6. SOLUTION DE LAVAGE CAPILLARYS / MINICAP

Préparation
Chaque flacon de solution de lavage concentrée CAPILLARYS / MINICAP (SEBIA, référence N° 2052 : 2 flacons de 75 mL) doit être complété à
750 mL avec de l’eau distillée ou déminéralisée.
Pour MINICAP, il est recommandé de prélever la solution de lavage par quantité de 25 mL et compléter à 250 mL avec de l’eau distillée ou
déminéralisée.
Après dilution, la solution de lavage contient une solution basique pH ≈ 12.
Utilisation
Pour le lavage des capillaires de MINICAP.
IMPORTANT : Avant de remplir le flacon de solution de lavage, il est recommandé de rincer abondamment à l’eau distillée ou déminéralisée le col du
flacon, le connecteur et le tuyau afin d’éviter l’accumulation de sels.
Les solutions de lavage concentrée et diluée doivent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés pour éviter
l’évaporation. La solution concentrée est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon.
La solution diluée est stable pendant 3 mois.
Éliminer la solution de lavage diluée s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne.
NOTES :
Les tests réalisés lors de la validation des réactifs montrent que, pour les différentes solutions et avec l’utilisation d’un matériel adapté au volume à
reconstituer, une variation du volume final de ± 5 % n’affecte en rien la qualité de l’analyse.
L’eau distillée ou déminéralisée, utilisée pour la reconstitution des solutions, doit être exempte de colonies bactériennes et de moisissures (utiliser un
filtre de porosité ≤ 0,45 μm) et d’une conductivité inférieure à 3 µS/cm, soit une résistivité supérieure à 0,33 MΩ.cm.
ÉQUIPEMENT ET ACCESSOIRES NÉCESSAIRES
1. Système d’électrophorèse capillaire MINICAP SEBIA, référence N° 1230.

2. Carrousel, fourni avec le système MINICAP.
3. Bidons plastiques fournis avec le système MINICAP : flacon pour le rinçage des capillaires (à remplir avec de l’eau déminéralisée ou distillée) et
flacon de vidange.
4. Cupules réactif MINICAP SEBIA (par 250), référence N° 2280.
5. Couvercles pour cupules réactifs MINICAP usagées (par 12), référence N° 2286 : couvercles destinés à fermer les boîtes pour cupules usagées.
6. Tubes à hémolyse de 75 mm de hauteur et 13 mm de diamètre.
ÉCHANTILLONS À ANALYSER
Prélèvement et conservation des échantillons

L’analyse se fait de préférence sur urines fraîches de 24 heures. Les urines doivent être prélevées selon la procédure utilisée pour tout test de
laboratoire d’analyses cliniques.
Les échantillons d’urine peuvent être conservés une semaine au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C).
Pour des conservations prolongées, il est recommandé de congeler les échantillons à – 70 / – 80 °C ; les échantillons congelés sont stables au
minimum 1 mois.
IMPORTANT : Ne pas congeler les échantillons à – 20 °C.
Les échantillons dégradés ou décongelés peuvent présenter des fractions déformées avec apparition de petits pics supplémentaires suite à la
dégradation de protéines.
NOTE : Ne pas conserver les échantillons d’urine à température ambiante.
Préparation des échantillons
Préparer au préalable les échantillons d’urine selon le protocole de préparation (dialyse et concentration) indiqué dans la notice d’utilisation du kit
CAPILLARYS / MINICAP URINE (voir le paragraphe "Réactifs nécessaires non fournis").
Utiliser directement ces échantillons d’urines préparées.
IMPORTANT : La technique d’analyse des urines par électrophorèse capillaire nécessite la dialyse et la concentration des échantillons sur systèmes
de dialyse SEBIA (tubes de 20 mL). Utiliser un tube par échantillon. L’échantillon dialysé et concentré ainsi obtenu peut être ensuite analysé dans les
techniques MINICAP URINE et MINICAP IMMUNOTYPING URINE.
Les échantillons doivent être analysés au plus tard le jour suivant leur préparation. Afin de limiter l’adsorption des protéines urinaires sur la membrane
du dispositif de dialyse et concentration (système de dialyse), il est recommandé de ne pas conserver l’échantillon dans le système de dialyse après
centrifugation, mais dans un microtube placé au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C).
Échantillons à éviter
• Ne pas utiliser des échantillons d’urine anciens ou conservés dans de mauvaises conditions, les fractions seraient fortement modifiées, suite à une
dégradation des protéines urinaires.
• Il est recommandé d’observer l’aspect de l’urine après la première centrifugation (cas d’hémolyse ou de turbidité).
• Ne pas utiliser d’échantillon conservé dans un dispositif de dialyse et concentration, certaines protéines pouvant s’adsorber sur la membrane.
- 10 -
NOTE : Les tubes de prélèvement et les paramètres de centrifugation des échantillons biologiques sont décrits dans la documentation disponible sur
la phase pré-analytique de biologie médicale (données fournies par les fabricants de tubes, guides et recommandations sur le prélèvement
biologique…). En l’absence d’indication dans la notice d’utilisation sur le type de tube à utiliser ou sur la centrifugation, se référer à cette
documentation et pour les dimensions de tube à utiliser, se référer au document SEBIA "Caractéristiques des tubes à utiliser selon l’instrument". La
phase pré-analytique doit être réalisée selon l’état de l’art, les différentes recommandations, dont celles fournies par les fabricants de tubes, et la
réglementation applicable.
TECHNIQUE
Le système MINICAP est un instrument multiparamétrique automatique qui assure l’analyse des protéines urinaires sur 2 capillaires en parallèle dans
la technique MINICAP IMMUNOTYPING URINE selon les étapes suivantes :
• lecture des codes-barres de l’échantillon d’urine à analyser, des tubes de réactifs MINICAP IMMUNOTYPING et du carrousel ;
• dilution des échantillons dans des cupules réactif ;
• mise en contact des urines avec la solution ELP et avec les antisérums des différentes spécificités dans des cupules réactif ;
• lavage des capillaires ;
• injection des échantillons dilués ;
• séparation et détection directe des protéines sur les capillaires.
Les étapes manuelles sont les suivantes :

• mise en place des microtubes (sans bouchons) contenant les échantillons à analyser sur des tubes à hémolyse servant de support, sur le carrousel
en positions 1 à 18 ; chaque tube étant identifié par le code-barres spécifique d’identification correspondant à l’échantillon à analyser ;
• mise en place du tube de diluant échantillon en position 27 sur le carrousel ;
• mise en place du support contenant les tubes de solution ELP et d’antisérums en positions 19 à 24 sur le carrousel ;
• introduction dans le système MINICAP ;
• récupération des tubes après analyse ;
• récupération et fermeture des boîtes pour cupules usagées.
Une analyse électrophorétique préalable effectuée sur le système MINICAP avec la technique MINICAP URINE aura permis de sélectionner les
échantillons dont le profil protéique présente un pic anormal par examen visuel.
I. PRÉPARATION DE L’ANALYSE ÉLECTROPHORÉTIQUE

1. Sélectionner les échantillons dont le profil protéique obtenu par la technique MINICAP URINE a permis de détecter un pic anormal après
analyse qualitative.
2. Mettre MINICAP et l’ordinateur de contrôle sous tension.
3. Pour le démarrage, placer au moins une cupule réactif neuve sur le chargeur de MINICAP prévu à cet effet (en cas d’absence de cupule
réactif, un message apparaît).
4. Démarrer le logiciel, l’automate est alors automatiquement initialisé.
5. Pour chaque échantillon, sur le profil protéique obtenu avec le programme d’analyse "URINE", déterminer la valeur du "Ratio urine" du pic
anormal à caractériser (voir le paragraphe "Traitement des données" de la notice du kit CAPILLARYS / MINICAP URINE). Le "ratio urine" est
défini par le rapport de la surface du pic anormal sur la surface totale des protéines du Sérum de Contrôle Normal.
6. Sélectionner le mode de dilution à appliquer automatiquement selon la valeur du "Ratio urine" :
• "HYPOGAMMA" si la valeur du "Ratio urine" est inférieure à 0,55,
• "STANDARD" si la valeur du "Ratio urine" est comprise entre 0,55 et 1,55,
• "HYPERGAMMA" si la valeur du "Ratio urine" est supérieure à 1,55.
NOTE : Lorsque le "Ratio urine" se situe à ± 10 % d’une valeur seuil (0,55 ou 1,55), il est recommandé de sélectionner le mode de dilution en
fonction du pic protéique anormal à caractériser dans la technique MINICAP IMMUNOTYPING URINE :
- pour améliorer la sensibilité de détection d’un pic de faible intensité, moins diluer l’échantillon, c'est-à-dire sélectionner le mode de dilution
"HYPOGAMMA" à la place de "STANDARD" et "STANDARD" à la place de "HYPERGAMMA",
- pour améliorer l’immunotypage d’un pic de forte intensité, augmenter la dilution de l’échantillon, c'est-à-dire sélectionner le mode de dilution
"STANDARD" à la place du mode "HYPOGAMMA" et "HYPERGAMMA" à la place de "STANDARD".
7. Pour l’analyse des urines, utiliser le kit MINICAP IMMUNOTYPING avec le programme d’analyses "IMMUNOTYPING URINE" et le tampon
d’analyse MINICAP PROTEIN(E) 6. Pour sélectionner le programme d’analyses "IMMUNOTYPING URINE" et mettre en place le flacon de
tampon MINICAP PROTEIN(E) 6 en position "B1" sur l’appareil, lire attentivement le manuel d’instructions de MINICAP et suivre les
instructions apparaissant à l’écran.
NOTE : Le passage de la technique MINICAP URINE à la technique MINICAP IMMUNOTYPING URINE (et réciproquement) ne nécessite pas
de changement de flacon de tampon.
8. Placer les cupules réactif neuves sur le chargeur de MINICAP prévu à cet effet (en cas d’absence de cupule réactif, un message apparaît).
9. Placer une boîte neuve pour cupules usagées dans MINICAP à l’emplacement prévu à cet effet.
10. Vérifier le niveau de remplissage des différents flacons de réactifs, compléter les volumes, si nécessaire, et vider le flacon de vidange. Dans
la fenêtre "Vérifier le niveau des bidons", réactualiser le logiciel de contrôle au moyen des curseurs.
11. Le carrousel possède 28 emplacements pour tubes :
• Placer jusqu’à 18 tubes à hémolyse vides (qui serviront de support) identifiés avec les étiquettes code-barres de chaque patient, sur le
carrousel (positions 1 à 18), puis les microtubes contenant les échantillons dialysés, en prenant bien soin de couper le bouchon du
microtube et de laisser le code-barres de chaque tube en face de sa fenêtre de lecture. Dans le cas où l’échantillon placé sur le carrousel
ne ferait pas partie des urines préalablement sélectionnées, le mode de dilution "HYPOGAMMA" sera appliqué.
• Conserver le bouchon de chaque microtube pour la conservation ultérieure de l’échantillon, si nécessaire.
IMPORTANT : Il est recommandé d’identifier les tubes à hémolyse servant de support aux microtubes contenant les échantillons à analyser,
avec les étiquettes code-barres d’identification correspondant à ces derniers.
- 11 -
• Le support contenant les tubes de solution ELP et d’antisérums anti-Ig G, anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa et anti-Lambda est prêt à l’emploi.
Insérer directement le support sur le carrousel à l’emplacement correspondant à la solution ELP et aux antisérums, en le manipulant par
les deux clips situés à chaque extrémité et en prenant soin de laisser le code-barres de chaque tube en face de sa fenêtre de lecture.
IMPORTANT : Vérifier que le support est bien fixé sur le carrousel avant de démarrer l’analyse.
• Déboucher le tube de diluant échantillon et le placer en position 27 (position «Diluent / Solution»), le code-barres du tube doit être situé en
face de sa fenêtre de lecture.
IMPORTANT : Pour une analyse donnée, la solution ELP et les antisérums doivent tous être du même lot. Ne pas mélanger les fonds de tube
de chaque antisérum de même spécificité ou de solution ELP aux tubes suivants même s’ils sont du même lot.
IMPORTANT : En cas d’absence de tubes échantillons à analyser, de tubes réactifs en positions No. 19 à 24 (antisérums et solution ELP) et
27 (diluant échantillon), l’analyse ne peut pas démarrer et un message apparaît.
12. Introduire le carrousel dans le système MINICAP.
13. Fermer les portes de MINICAP et suivre les instructions apparaissant à l’écran.
14. Dès la fin de l’analyse, retirer le carrousel afin d’enlever les tubes analysés. Retirer le support avec les tubes de solution ELP et d’antisérums
et le placer à 2 – 8 °C dans les plus brefs délais.
IMPORTANT : Une déformation des profils ELP et des profils antisérums entre les zones alpha-2 et bêta-1 peut être observée en cas de
maintien prolongé des tubes dans l’automate.
15. Si nécessaire, retirer avec précaution la boîte contenant les cupules réactif usagées, la fermer hermétiquement à l’aide du couvercle destiné
à cet effet et la jeter.
ATTENTION : Manipuler avec précaution les boîtes contenant les cupules réactif usagées contenant des échantillons biologiques.
DILUTION - MIGRATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES

1. Lecture des codes-barres des échantillons d’urine à analyser (jusqu’à 18), des tubes de réactifs MINICAP IMMUNOTYPING et du carrousel.
2. Dilution de l’urine dialysée dans le diluant échantillon dans une cupule réactif.
3. Prélèvement des 2 premiers réactifs et de l’échantillon dilué puis mélange dans une cupule réactif, avec rinçage de l’aiguille de prélèvement entre
chaque dilution. Le mode de dilution préalablement sélectionné pour cet échantillon sera automatiquement appliqué. Si celui-ci n’a pas été défini,
le mode de dilution "HYPOGAMMA" sera appliqué. Par défaut, l’ordre des réactifs est le suivant : solution ELP & anti-Ig G, anti-Ig A & anti-Ig M,
puis anti-Kappa & anti-Lambda.
4. Lavage des capillaires.
5. Injection des échantillons dilués dans les capillaires.
6. Migration à voltage constant en température régulée par effet Peltier, pendant environ 4 minutes.
7. Lecture à 200 nm et apparition simultanée des profils protéiques sur l’écran de l’ordinateur.
NOTE : Les étapes 3 à 7 sont répétées pour les autres réactifs (antisérums anti-Ig A & anti-Ig M, puis anti-Kappa & anti-Lambda, par défaut).
NOTE : Ces étapes sont effectuées les unes après les autres pour les 2 premiers réactifs (solution ELP et anti-Ig G). Pour les réactifs suivants
(antisérums anti-Ig A, anti-Ig M, anti-Kappa et anti-Lambda), la phase 3 se fait en temps masqué, pendant les 2 analyses précédentes. L’ensemble
des profils correspondants au typage de l’échantillon est obtenu après 35 minutes environ.
Dans la fenêtre de statut :

- L’onglet "Légende" présente l’état d’avancement des analyses sur le carrousel.
- L’onglet "Compteur IT" indique le nombre d’analyses effectuées et n’apparait que dans le mode "tubes bouchés". Après installation de la version du
logiciel, le compteur d’analyses démarre à zéro. Il comptabilise l’analyse en cours et toute analyse effectuée ou interrompue (en cas d’arrêt).
Remettre le compteur à zéro (par l’intermédiaire du bouton "reset") quand les flacons sont vides.
NOTE : Une alerte clignotante apparait dans la fenêtre de statut lorsque 60 analyses ont été réalisées. Si le compteur d’analyses n’est pas remis à
zéro, cette alerte persiste sans bloquer les analyses suivantes.
II. TRAITEMENT DES DONNÉES

Dès la fin de l’analyse, chaque profil antisérum (Ig G, Ig A, Ig M, Kappa et Lambda) est superposé au profil ELP. En cas de réaction entre la protéine
monoclonale et l'antisérum spécifique, le pic correspondant disparaît du profil électrophorétique de l’antisérum.
Ces comparaisons permettent d'identifier et de caractériser le ou les composants monoclonaux.
Pour l’analyse des urines, les positions des différentes zones protéiques (Albumine, Alpha 1, Alpha 2, Bêta et Gamma) sont repérées à l’écran et sur
le compte-rendu résultats.
III. FIN DE SÉQUENCE D’ANALYSE

Une procédure d’extinction doit être lancée par l’opérateur en fin de session de travail afin de conserver les capillaires dans des conditions optimales.
IMPORTANT : Placer une cupule réactif neuve sur le chargeur de MINICAP prévu à cet effet (en cas d’absence de cupule réactif, un message
apparaît).
IV. REMPLISSAGE DES FLACONS DE RÉACTIFS

L’automate MINICAP permet une gestion automatique des réactifs.
IMPORTANT : Il est nécessaire de suivre la procédure prévue pour le changement des flacons et de respecter le code couleur flacon – raccord rapide
lors de chaque remplacement de flacon.
L’apparition de la fenêtre de gestion des réactifs indique qu’il est nécessaire de changer un ou plusieurs réactifs :
• mise en place d’un nouveau flacon de tampon d’analyse et / ou,
• remplissage du flacon de lavage avec la solution de lavage reconstituée et / ou,
• remplissage du flacon de rinçage par de l’eau déminéralisée ou distillée filtrée et / ou,
• vidange du flacon de vidange.
- 12 -
RÉSULTATS
Interprétation pour l’analyse des urines
Absence de protéine monoclonale

• La disparition des immunoglobulines polyclonales sur les profils antisérums (avec diminution des fractions gamma et bêta), sans disparition d'autres
pics protéiques, est observée pour l'analyse d'une urine présentant une protéinurie glomérulaire ou mixte avec passage d’immunoglobulines
polyclonales.
Présence d’une protéine monoclonale

• La présence d’une immunoglobuline monoclonale complète est caractérisée par la disparition d’un pic avec l’un des anti-chaînes lourdes (gamma,
alpha ou mu) et avec l’un des anti-chaînes légères (kappa ou lambda). La fraction monoclonale mise en évidence doit être située au même niveau
de migration que la bande détectée sur le profil ELP.
• La disparition d'un pic avec l’un des anti-chaînes légères (kappa ou lambda) sans disparition de ce pic avec l’un des anti-chaînes lourdes peut
signifier la présence d’une chaîne légère libre qu’il conviendra de confirmer par les techniques HYDRAGEL BENCE JONES ou HYDRAGEL IF,
SEBIA, avec les antisérums spécifiques anti-chaînes légères libres kappa ou lambda.
• La disparition d'un pic avec l’un des anti-chaînes lourdes sans disparition de ce dernier avec les anti-chaînes légères est rare. Il conviendra de
confirmer la présence d’une chaîne lourde gamma, alpha ou mu.
Présence de plusieurs protéines monoclonales

• La disparition de plusieurs pics avec l’un des anti-chaînes légères peut être observée lors d’une polymérisation des chaînes légères libres.
Cas particuliers :
• En cas de disparition incomplète d’un pic monoclonal sur les profils antisérums, refaire l’analyse avec une dilution plus importante de l’urine.
Sélectionner le mode de dilution "STANDARD" à la place du mode "HYPOGAMMA" et "HYPERGAMMA" à la place de "STANDARD".
• Cas des échantillons contenant une ou des protéine(s) monoclonale(s) en concentration très importante (en mode de dilution "HYPERGAMMA") :
Dans ce cas, le complexe formé avec les antisérums apparaît sous la forme d’un pic large et important dans les zones albumine et alpha-1 ; la
disparition du (ou des) pic(s) monoclonal (-aux) peut ne pas être complète sur les profils antisérums.
• La disparition de 2 pics avec l’un des antisérums anti-chaînes légères, et d’un seul pic avec l’un des anti-chaînes lourdes, est due à la présence
d’une immunoglobuline complète associée à une chaîne légère libre.
• Il est recommandé de sélectionner le mode de dilution en fonction de l’intensité du pic protéique anormal à caractériser, afin d’améliorer la sensibilité
de détection d’un pic de faible intensité ou l’immunotypage d’un pic de forte intensité (voir le paragraphe "Préparation de l’analyse
électrophorétique").
Interférences et limites
IMPORTANT : L’utilisation d’antisérums autres que ceux spécifiques à la technique MINICAP IMMUNOTYPING URINE fournis avec le kit peut affecter
la qualité des résultats. Utiliser uniquement les antisérums spécifiques à la technique MINICAP IMMUNOTYPING URINE.
Voir ÉCHANTILLONS À ANALYSER.
Analyser uniquement des échantillons préparés à l’aide de dispositifs de dialyse et concentration, tels que les systèmes de dialyse SEBIA ou tout
système de performances équivalentes, homologué pour les tests de biologie clinique.
Une dialyse insuffisante de l’échantillon peut provoquer l’apparition de pics résiduels non protéiques (médicaments ou sels, par exemple). Dans le cas
où la présence d’un interférent est suspectée, il est recommandé de réaliser une dialyse supplémentaire de l’échantillon.
L’hémoglobine migre à la position de la transferrine (fraction bêta) quand elle est présente dans l’urine. Il est alors recommandé d’observer l’aspect
de l’urine après la première centrifugation (présence de globules rouges dans l’urine et / ou cas d’échantillon hémolysé).
De nombreux travaux ont montré que la réaction antigène - anticorps en phase liquide se fait différemment de la réaction sur gel. La technique
MINICAP IMMUNOTYPING URINE se déroulant totalement en milieu liquide, il peut arriver que certains antisérums donnent des réactions croisées
avec certaines protéines monoclonales présentes dans l’échantillon.
Il n’y a aucun risque de faux négatifs c'est-à-dire de ne pas révéler une gammapathie, mais cette réaction croisée, extrêmement peu fréquente, se
présente comme un diagnostic de gammapathie biclonale alors qu’il n’y a en fait qu’une gammapathie monoclonale. En tout état de cause, la littérature
indique qu’il n’y a pas de différence de traitement entre une gammapathie monoclonale et une gammapathie biclonale (Kyle et al, 1981).
En cas de doute sur un profil biclonal, il est recommandé de confirmer ce résultat par les techniques d’immunofixation HYDRAGEL.
De légers décalages entre le profil ELP et les profils antisérums superposés (notamment dans la zone bêta-1) peuvent être observés. Ils ne doivent
pas être confondus avec la disparition d’un pic monoclonal sur un ou plusieurs profils antisérums.
Compte tenu des principes analytiques des techniques actuelles (principes de l’électrophorèse de zone, résolution et sensibilité), aucune garantie ne
peut être donnée quant à la détection totale de toutes les composantes monoclonales.
Assistance technique
Contacter le Service Technique SEBIA en cas de test défectueux.
Les fiches de données de sécurité des différents réactifs du kit ainsi que les informations relatives au nettoyage et à l’élimination des déchets, aux
règles d’étiquetage et de sécurité appliquées par SEBIA, à l’emballage de transport pour les échantillons biologiques et à la décontamination des
appareils sont disponibles sur le DVD "INSTRUCTIONS & SAFETY DATA SHEETS".
- 13 -
PERFORMANCES
Exactitude
Trente neuf (39) échantillons d’urine pathologiques différents (à paraprotéines ou à chaînes légères libres Kappa ou Lambda), 2 échantillons à profil
polyclonal et 5 échantillons normaux ont été analysés en parallèle dans la technique MINICAP IMMUNOTYPING URINE et sur un autre système
d’immunotypage par électrophorèse capillaire disponible dans le commerce, pour la recherche de paraprotéines et de chaînes légères libres
(technique de référence).
Les résultats obtenus ont montré une parfaite corrélation entre les deux systèmes d’analyse pour tous les échantillons analysés, avec une sensibilité
de 100 % et une spécificité de 100 % par rapport à la technique de référence, calculées selon la méthode recommandée (Wendling, 1986) :
Pour les 5 échantillons d’urine normaux : corrélation parfaite.
Pour les 2 échantillons d’urine à profil polyclonal : corrélation parfaite.
Pour les 39 échantillons pathologiques : corrélation parfaite.
En effet, la présence de paraprotéines ou de chaînes légères libres a été mise en évidence sur tous les échantillons pathologiques dans les deux
systèmes d’analyse.
- 14 -
BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAPHY
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2. Chopin N. 1991. Étude de la protéinurie. Inf. Tech. Biol., 1 : 23-28.
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electrophoresis. J. Chromatogr. A, 744, 205 - 213 (1996).
4. Gay-Bellile C, Bengoufa D, Houze P, Le Carrer D, Benlakehal M, Bousquet B, Gourmel B, Le Bricon T. Automated multicapillary electrophoresis
for analysis of human serum proteins. Clin. Chem., 49, 1909 - 1915 (2003).
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comparison with established techniques. J. Chromatogr. B, 699, 257 - 268 (1997).
8. Joachim GR, Cameron JS, Chwartz M, Belker EL. 1964. Selectivity of protein excretion in patients with the nephrotic syndrome. J. Clin. Invest.,
43, 2332-2346.
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Electrophoresis, 18, 1775 - 1780 (1997).
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laboratoires, 269 : 29-37.
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20. Westermeier R., "Electrophoresis in Practice. A Guide to Theory and Practice", VCH Publishers, New York, NY, 1993.
21. Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité.
Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93 - 97.
- 366 -
PHOTO
INSERTION DU SUPPORT SUR LE CARROUSEL - INSERTION OF THE RACK IN THE ROTATING SAMPLER
- 367 -
SCHÉMAS / FIGURES
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES DE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF SERUM SAMPLES

Sérum Normal / Normal serum
Figure 1
ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
- 368 -
SCHÉMAS / FIGURES

Sérum Hypergamma / Hypergamma serum
Figure 2
Immun complexe
Immune complex
ELP Ig G
Ig A Ig M
Immun complexe
Immun complexe
Immune complex
Immune complex
K L
- 369 -
SCHÉMAS / FIGURES

Protéine monoclonale 0,5 g/L / Monoclonal component 0.5 g/L
Figure 3
Paraprotéine éliminée / Decreased paraprotein

Paraprotéine non affectée / Not affected paraprotein
ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
Interpretation : Ig G, Lambda
- 370 -
SCHÉMAS / FIGURES

Ig G, Kappa - mode de dilution Hypergamma / Hypergamma dilution program
Figure 4
ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
Interpretation : Ig G, Kappa
- 371 -
SCHÉMAS / FIGURES

Profil biclonal / Biclonal pattern : Ig G, Kappa + Ig M, Kappa
Figure 5

ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
Interpretation : Ig G, Kappa + Ig M, Kappa
- 372 -
SCHÉMAS / FIGURES

Profil biclonal / Biclonal pattern : Ig G, Kappa + Ig G, Lambda
Figure 6

ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
Interpretation : Ig G, Kappa + Ig G, Lambda
- 373 -
SCHÉMAS / FIGURES

Profil oligoclonal / Oligoclonal pattern
Figure 7
ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
- 374 -
SCHÉMAS / FIGURES
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES D'URINES - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF URINE SAMPLES

Proteine monoclonale / Monoclonal component – mode de dilution Hypogamma / Hypogamma dilution program
Figure 8
Albumin(e) Alpha 1 Alpha 2 Beta Gamma Albumin(e) Alpha 1 Alpha 2 Beta Gamma
ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
Interpretation : Suspicion de chaîne légère libre Kappa (à confirmer)
Kappa free light chain suspected (to confirm)
- 375 -
SCHÉMAS / FIGURES

Proteine monoclonale / Monoclonal component – mode de dilution Hypergamma / Hypergamma dilution program
Figure 9
ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
Interpretation : Suspicion de chaîne légère libre Lambda (à confirmer)

Lambda free light chain suspected (to confirm)
- 376 -
SCHÉMAS / FIGURES

Profil biclonal / Biclonal pattern – mode de dilution Hypogamma / Hypogamma dilution program
Figure 10
ELP Ig G
Ig A Ig M
K L
Interpretation : Ig G, Lambda + suspicion de chaîne légère libre Lambda (à confirmer)
Ig G, Lambda + Lambda free light chain suspected (to confirm)
- 377 -

Minicap Immunotyping. Ref - 05

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MINICAP IMMUNOTYPING

À usage in vitro exclusivement.

L’immunotypage se réalise en quatre étapes :

RÉACTIFS FOURNIS DANS LE KIT MINICAP IMMUNOTYPING

ATTENTION : Voir les fiches de données de sécurité.

COMPOSANTS RÉF. N° 2300

-1- NOTICE D’UTILISATION SEBIA - Français

POUR DES RÉSULTATS OPTIMUMS :

2. SUPPORT AVEC TUBES DE SOLUTION ELP ET D’ANTISÉRUMS

2.1. SOLUTION ELP

ANALYSE DES SÉRUMS : TECHNIQUE MINICAP IMMUNOTYPING

ATTENTION : Voir les fiches de données de sécurité.

1. KIT MINICAP PROTEIN(E) 6 (SEBIA, référence N° 2203)

2. EAU DISTILLÉE OU DÉMINÉRALISÉE

3. CAPICLEAN (POUR MINICAP) OU CAPICLEAN MINICAP FLEX-PIERCING (POUR MINICAP FLEX-PIERCING)

4. SOLUTION D’HYPOCHLORITE DE SODIUM (pour le nettoyage de l’aiguille de prélèvement)

5. SOLUTION DE LAVAGE CAPILLARYS / MINICAP

6. BÊTA-MERCAPTOÉTHANOL (BME ou 2-MERCAPTOÉTHANOL) (non fourni par SEBIA)

ÉQUIPEMENT ET ACCESSOIRES NÉCESSAIRES

Prélèvement et conservation des échantillons

Les étapes manuelles sont les suivantes :

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS DE MINICAP.

I. PRÉPARATION DE L’ANALYSE ÉLECTROPHORÉTIQUE

DILUTION - MIGRATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES

Dans la fenêtre de statut :

II. TRAITEMENT DES DONNÉES

III. FIN DE SÉQUENCE D’ANALYSE

IV. REMPLISSAGE DES FLACONS DE RÉACTIFS

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS DE MINICAP.

Aide à l’analyse des profils électrophorétiques

Interprétation pour l’analyse de sérums

Absence de protéine monoclonale

Répétabilité intra-séquence et inter-analyses

Reproductibilité inter-analyses et inter-sytèmes

Reproductibilité inter-analyses et inter-lots

ANALYSE DES URINES : TECHNIQUE MINICAP IMMUNOTYPING URINE

RÉACTIFS NÉCESSAIRES NON FOURNIS

ATTENTION : Voir les fiches de données de sécurité.

1. KIT MINICAP PROTEIN(E) 6 (SEBIA, référence N° 2203)

2. KIT CAPILLARYS / MINICAP URINE (SEBIA, référence N° 2013)

3. EAU DISTILLÉE OU DÉMINÉRALISÉE

5. SOLUTION D’HYPOCHLORITE DE SODIUM (pour le nettoyage de l’aiguille de prélèvement)

Conservation, stabilité et signes de détérioration

6. SOLUTION DE LAVAGE CAPILLARYS / MINICAP

ÉQUIPEMENT ET ACCESSOIRES NÉCESSAIRES

1. Système d’électrophorèse capillaire MINICAP SEBIA, référence N° 1230.

Prélèvement et conservation des échantillons

Les étapes manuelles sont les suivantes :

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS DE MINICAP.

I. PRÉPARATION DE L’ANALYSE ÉLECTROPHORÉTIQUE

DILUTION - MIGRATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES

Dans la fenêtre de statut :

II. TRAITEMENT DES DONNÉES

III. FIN DE SÉQUENCE D’ANALYSE

IV. REMPLISSAGE DES FLACONS DE RÉACTIFS

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS DE MINICAP.

Interprétation pour l’analyse des urines

Absence de protéine monoclonale

Présence d’une protéine monoclonale

Présence de plusieurs protéines monoclonales

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES DE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF SERUM SAMPLES

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES DE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF SERUM SAMPLES

PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES DE SÉRUMS - ELECTROPHORETIC PATTERNS OF SERUM SAMPLES