29/04/2020

Cours de Microbiologie industrielle Université Hassiba Benbouali de chlef

L3 microbiologie Faculté de SNV
Dr. DRICHE E-H Département de biologie

Milieux de culture
CHAPITRE II et
fermentation industrielle

1-Introduction
v Les milieux de culture utilisés en industrie sont essentiels pour la grande majorité des microorganismes
industriels qui sont des chimiohétérotrophes

v Le milieu de culture peut se définir comme le milieu permettant la production de la biomasse

cellulaire, la synthèse du produit désiré. Il doit contenir au moins une source de carbone, d’azote,
d’oxygène (pour une culture aérobie), d’hydrogène, des certains oligo-éléments, des vitamines, des
facteurs de croissance et des précurseurs métaboliques.

v De plus, un agent anti mousse et des produits chimiques tampons peuvent également être ajoutés dans
le milieu.

v Lorsque la biomasse constitue le produit cible, le milieu de production doit permettre une croissance
optimale du microorganisme.

v Pour la production de métabolites secondaires, (les antibiotiques, leur biosynthèse n'est pas liée à la croissance),
les milieux sont conçus pour fournir une période initiale de croissance cellulaire, suivie de conditions optimisées
pour la production de métabolites secondaires.
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2. Composition du milieu Ile milieu de culture peut être :

synthétique Semi- synthétique complexe

2.1.-Sources de carbone

v Le glucose est une excellente source de carbone pour stimuler la croissance microbienne. Mais
le glucose peut avoir des effets indésirables sur la production de métabolites secondaires.

v Le glucose est additionné au début de la fermentation pendant la phase de croissance pour

favoriser au maximum la croissance et ne fournir pendant la phase de production que des
quantités minimales non inhibitrices

v Lactose est l’un des sucres lentement métabolisables, et n’inhibe pas la production de la
pénicilline après hydrolysation du lactose en galactose et glucose,

v le saccharose et dextrane sont souvent utilisés comme source de carbone simple, mais ils peuvent
être fournis dans un substrat industriel complexe tel que la mélasse, (non seulement la source de
carbone, azotées, des vitamines et des oligo-éléments). 3

Le choix de la source de carbone, qui représente généralement le coût principal des matières
premières, dépend des cultures:

Ø Par exemple, les microbes producteurs d'amylase peuvent utiliser de l'amidon et des dextrines
au lieu du glucose plus coûteux

Ø Yarrowia lipolytica, est capable de dégrader les lipides, les protéines et les n-paraffines en tant
que source unique de carbone.
-Candida peut assimiler les n-alcanes et acides gras en tant que sources de carbone

2.2. Sources d’azotes

1- L'azote inorganique :
sels d'ammonium de sulfate (NH4+SO4-) et
le phosphate de d'ammonium (NH₄)₂HPO₄)
ou l'ammoniac (NH3).
Ce denier est utilisé pour ajuster le pH de la
fermentation
2-Azote organiques : les acides aminés,
les protéines et l’urée
ex: le maïs, les extraits de levure, les
peptones et la farine de soja (riches en
protéines, des acides nucléiques, des vitamines,
des oligoéléments, des lipides, des sucres, du
soufre et du phosphate). 4

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2.3. Sels minéraux :

Les sels minéraux sont très essentiels ayant des rôles très divers :
-Eléments constitutifs des antibiotiques (P, S, Cl…). ; de la biomasse (Mg, P, Cl, Ca, Fe,..)
- Responsable de la pression osmotique (NaCl, KCl,….); Modificateur de pH (CaCO3….)
--Agents de précipitation (NH4-SO4-2 ); Catalyseurs de réaction (Mg+2, Mn+2, Fe+2/ +3, Zn).

2.4.-Vitamines et facteurs de croissance

v Les vitamines sont des composés organiques essentiels pour la croissance des microorganismes
v Ils peuvent être ajouter comme suppléments au milieu de fermentation pour certains
microorganismes (bactéries, champignons et levures).
2.5.-Précurseurs
Les précurseurs sont des molécules intermédiaires qui servent de substrats de départ des réactions au
cours de la biosynthèse de métabolites secondaires tels que des antibiotiques.
Ø Ils sont souvent ajoutés de manière contrôlée et sous une forme relativement pure. Par exemples :
- L'acide phénylacétique est ajouté pour la chaîne latérale dans la production de pénicilline.
- D-thréonine est utilisé comme précurseur dans la production de L-isoleucine par Serratia
marsescens .
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2.6.-Eau
Ø L’eau est un composant majeur dans tous les milieux de culture et responsable de toutes les
réactions métaboliques des processus de fermentation industrielle (sauf les fermentations sur
substrat solide).
Ø Elle fournit également des oligo-éléments nécessaires pour la croissance.
Ø Sa qualité est très importante pour obtenir des cultures optimales et reproductibles ( ex: L’eau
déminéralisée, déionisée sont obtenues par des techniques de filtrations sur membranes)

3.-Stérilisation de milieux de culture

Un milieu doit être stérile avant d’être ensemencé par la souche productrice.
v Le traitement thermique est le moyen le plus utilisé pour stériliser le milieu; mais il présente
l’inconvénient d’altérer et de modifier les qualités du milieu à cause de la dégradation de
polymères (protéines, acide nucléiques), des vitamines et d’acide aminés comme le
tryptophane et l’asparagine, ce qui entraîne parfois la formation de produits de dégradation
toxiques ou inhibiteurs de croissance.
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4. Exemples de milieux industriels

Les milieux de culture industriels sont très divers et peuvent être utilisés pour :
v La croissance et la production de la biomasse cellulaire et les protéines d’origine
microbienne.
v - La production de nombreux métabolites primaires et secondaires dans des bioréacteurs.
v - le contrôle microbiologie (recherche de germes pathogènes) de matières brutes produites finis,
v -Recherche de nouvelles souches d’intérêt industriel (Isolement, identification, repiquage)
La formulation du milieu est déterminée par la nature des produits de fermentation souhaités et par la
culture utilisée.

4.1.-Milieux synthétiques 4.2.-Milieux semisynthétiques

Ce sont des milieux bien définis ayant des
quantités spécifiques de composés chimiques
purs et une composition chimique identifiable.
Ils ont plus reproductibles, donnant à l'opérateur
un meilleur contrôle de la fermentation, mais
sont plus coûteux que les milieux complexes
7
Ce sont des milieux dont la composition exacte n’est pas
connaît que pour certains composants
Ils contiennent des sources de carbones simples (le
glucose, etc) où complexé (amidon, cellulose, etc) et source
d’azote simples (minérales : NH4+SO4-, NO3-, etc ; ou
organiques : acide aminés) où complexe (extrait de levure,
de la peptone, etc).
-utilisés comme milieux pour la production des enzymes,
7
acides aminés, les antibiotiques et antifongiques, etc.

4.2.-Milieux semisynthétiques 4.3.- Milieux complexes

Ø Ce sont des milieux dont la composition exacte
n’est pas connaît que pour certains composants
Ø Ils contiennent des sources de carbones simples
(comme le glucose, etc) où complexé (amidon,
cellulose, etc) et source d’azote simples
(minérales : NH4+SO4-, NO3-, etc ; ou
organiques : acide aminés) où complexe (extrait
de levure, de la peptone, etc).
Ø souvent utilisés comme milieux optimisés pour la
production des enzymes, acides aminés, où des
métabolismes secondaires (les antibiotiques et
antifongiques, etc.)
Ø Ce sont des milieux contenant des
composés naturels dont la composition
chimique précise n’est pas connue tels que
l'extrait de levure, de peptone, de mélasse,
Ø Ils fournissent des nutriments nécessaires
et génèrent des rendements cellulaires
supérieurs aux milieux définis.
Ø Pour des raisons économiques, les milieux
complexes sont largement utilisés dans les
fermentations industrielles
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4.4.- Autres milieux de culture

4.4.1. Milieux de sélectifs
Ø Ils permettent uniquement la croissance de
certains genres de micro-organismes.
Ø Ils contiennent des éléments inhibant la
croissance des micro-organismes indésirables.
Ø Ces éléments peuvent être une source nutritive
déterminée (azote, carbone) des agents
chimiques (pH, le cristal violet, bleu de
méthylène, etc), des sels minéraux (NaCl, Na
S04), des antibiotiques (à spectre étroit ou large),
antifongiques (actidione, etc).
Ø Le choix de ces éléments dépend des
caractéristiques du micro-organisme recherché.
Les milieux sélectifs sont utilisés aux laboratoires pour
isoler un groupe de microorganismes d’intérêt industriel
où pour le contrôle microbiologique des matières brutes
ou des produits finis lors de la fermentation industrielle
Exemples des milieux sélectifs
-Chitine –vitamine B =l’isolement d’actinobactérie.
-Milieu de Sabouraud ou PDA = des champignons
-Milieu de Chapman = les staphylocoques.
-Milieu EMB =: les bactéries intestinales à Gram -.
-Gélose MacConkey (MCK) ou gélose Drigalski : =
des bacilles à GRAM négatif.
-Gélose (S.S.) Salmonella et des Shigella .
-Gélose M17 et bouillon M.R.S: =
lactocoques, des streptocoques, et des Lactobacillus,
respectivement.
-Cultures enrichis : Ils sont utilisés pour l'obtention
des bactéries dites exigeantes. Ex, les
milieux au sang frais (streptocoques),
Gélose Baird Parker (avec du sérum) pour
isoler des Staphylococcus aureus. 9

2.4.2. Milieux non sélectifs

v Les milieux non sélectifs permettent la croissance des bactéries non exigeantes des sucres
nutritives particulières.
v La composition de ces milieux est simple et sans effet de sélection. Un exemple de milieu
ordinaire pourrait être la gélose nutritive, PCA, ISP2, Bennett, etc.

3.-Choix des matières premières les plus adaptés

Ø Le milieu de culture est varié d’un microorganisme à l’autre.

Ø Sa composition détermine le coût total d’un procédé particulier. Ainsi, les matières brutes choisies
doivent être peu coûteuses et servent de sources de carbones, d’azote et de phosphore ainsi que
comme facteurs de croissance.
Ø Parmi-elles, les hydrolysats végétaux bruts, les mélasses et le lactosérum obtenu lors de la
fabrication du fromage. 10

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Ø Les mélasses de betteraves et de canne à sucre : riches en saccharose, permettent

d’obtenir des biomasses protéiques ou des levures pour la panification.

Ø Le lactosérum: est un excellent milieu de culture permettent le développement des

levures utilisant le lactose.
Ø L’amidon : est utilisé comme matière première pour la production industrielle des
protéines

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II.- Bioréacteur et systèmes de fermentation industrielle

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1.- Définition de bioréacteur

Ø Le bioréacteur (appelé aussi fermenteur) est un appareil (ou cuve) qui permet la croissance
des microorganismes (levures, bactéries, champignons microscopiques, algues) pour la
production de biomasse, de métabolites primaires et secondaires ou encore la
bioconversion d'une molécule d'intérêt.

Ø Il assure le contrôle les contions physicochimiques (température, pH, aération, etc.) pour avoir un
bon rendement de productivité.

Ø La performance de tout bioréacteur dépend de nombreuses fonctions

-les concentrations de biomasse,

-l’apport de nutriments, Ø l’inhibition du produit,
-les conditions stériles, Ø l’évacuation de la chaleur
-le retrait du produit, Ø l’aération et les métabolismes
-les agitations efficaces,
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3.-Différents types de fermenteurs

Les fermenteurs industriels peuvent être classés en plusieurs groupes selon l’agitation, la culture, le
volume de culture, etc. Il existe deux types d’agitation avec des propriétés différentes
.1.-Selon agitation

schéma général d’un bioréacteur à agitation mécanique

le plus simple (allant d’un litre à 500.000 litres) 14

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Il existe deux types d’agitation

1-Bioréacteur à agitation mécanique 2.-Agitateurs rotatifs à débit radial

-C’est le modèle le plus employé et le plus simple.

-Il existe en volumes allant d’un l à 500.000 litres
1.2-Agitateurs rotatifs à débit axial
-L’agitation génère un mouvement axial du
1.1-Agitateurs rotatifs à débit radial :
liquide grâce à une action de pompage
-La turbine génère un mouvement radial, puis axial -L’efficacité de transfert de l’02 n’est pas bonne.
lorsque le liquide rencontre la paroi de la cuve. ` - utilisé pour les cellules fragiles.
-entraîne une bonne efficacité de transfert de 02 ex : turbine : hélice type marine
-Il convient bien aux bactéries et levures

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1.2.-Agitateurs rotatifs à débit radial

L’agitation la plus utilisé est celle de l’ Agitation à air

Ø Elle utilise des pompes spéciales qui injectent un mélange air-milieu à haute vitesse dans
le réservoir principal, ce qui assure agitation et aération (figure 08).

Ø Ce type d’agitation est utilisé pour des pilotes avec des moisissures et des
actinobactéries, par exemple dans la production d’acide citrique par A. niger

figure 08 : Fermenteur à agitation par air (air lift)

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3.2.-État de culture :

fermentation en milieu liquide fermentation en milieu solide

(également connus sous le nom submergé) (également connu sous le nom surface).

Ø La plupart des fermenteurs utilisés dans l’industrie sont du type submergé ; ce dernier
économise de l’espace et facilite son contrôle technique et conception.

3.3.-Volume de culture :

Ø bioréacteurs de laboratoire stérilisable à l’autoclave jusqu’à 18 L

Ø bioréacteurs in situ jusqu’à 30 L,
Ø des pilotes employés pour les tests en vue de l'industrialisation (de 30 à 600 litres)
Ø bioréacteurs destinés à la production industrielle peuvent entre 600 et 50 000L,
cas de la production d'éthanol).
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4-Systèmes de fermentation

en milieux liquides bien sur des milieux solides

c’est le cas le plus utilisé en industrie,

selon la souche productrice ;

Ø les conditions optimales de la croissance ;
Ø de la production ainsi que le produit désiré à produire en tenant compte que le coût
total d’un produit qu’il soit moins chère.

4.1.-Fermentation en phase liquide

culture discontinue, culture discontinue

culture contenue
batch ou non renouvelé alimentée (Fed-batch
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4.1.1.-Fermentation en culture discontinue, batch ou non renouvelé

1.- Caractéristiques générales

Ø Les cellules sont initialement inoculées dans un milieu frais et aucun autre élément
nutritif n'est ajouté jusqu'à ce que le produit désiré soit produit.

Ø Le bioréacteur ne possède donc ni entré et ni sortie.

Ø En fin de fermentation, le fermenteur est nettoyé pour une prochaine culture.

Ø l’oxygène injecté est assuré par une agitation continue du milieu de culture sous
forme d’air comprimé pour l’homogénéité de la culture et la dissolution.

Ø Ce mode de fermentation est le seul utilisé pour la production de métabolites

secondaires surtout pour les antibiotiques.
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.2.-Cinétique de croissance microbienne

Ø la population de micro-organismes passe par plusieurs phases de croissance distinctes

Figure 09: Cinétique de croissance bactérienne en milieu non renouvelé (Batch) 20

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a.-Phase de latence :
C'est le temps nécessaire à la bactérie pour synthétiser les enzymes adaptées au nouveau substrat.
Le taux de croissance est nul (µ = 0). La durée de cette phase dépend de l'âge des bactéries et de la
composition du milieu.

b.. Phase d'accélération :

il se produit une augmentation de la vitesse de croissance. Les divisions cellulaires commencent : N augmente,
(μ) augmente, et G (temps de génération) diminue

c.-. Phase exponentielle ou logarithmique :

durant cette phase, les bactéries se multiplient d’une façon exponentielle où la vitesse spécifique de croissance
(µmax, en h-1). ) est maximale et constante

µmax: Elle est égale à la vitesse de croissance en biomasse (QX ) rapportée à l’unité de biomasse
(X = biomasse en g.L-1 ; t = temps en h).

Ø Temps de génération (G) est constant et minimal. Il est défini comme le temps de doublement de la biomasse
X pendant la phase exponentielle (ou le temps de doublement de l’absorbance pour un suivi
spectrophotométrique)
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d.-. Phase de ralentissement :

la vitesse de croissance régresse. Il y a un épuisement du milieu de culture et une accumulation
des déchets. Il existe un début d'autolyse des bactéries.

e.-. Phase maximale stationnaire :

le taux de croissance devient nul (µ = 0).
Le taux de mortalité annule le taux de croissance.

f. Phase de déclin :
le taux de croissance est négatif (µ < 0). Toutes les ressources nutritives sont épuisées et
l’accumulation de métabolites toxiques, ce qui entraine une diminution d'organismes viables et
une lyse cellulaire sous l'action des enzymes protéolytiques endogènes.

Note, dans certains cas dans cette phase: la phase dite "cryptique, où la bactérie persiste
une croissance par libération de substances libérées lors de la lyse (croissance cryptique).
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4.1.2. Fermentation en culture discontinue alimentée (Fed-batch)

Ø C’est une culture discontinue alimentée en continu par un milieu nutritif.
Ø La croissance démarre plus vite dans un volume de culture réduit.
Ø Quand la croissance est en phase stationnaire, du milieu de culture stérile est ajouté et contrôlé.
Ø Le volume dans la cuve augmente alors au cours du temps. Le débit est réglé de façon que la
concentration en substrat soit constante dans la cuve et que l’effet de dilution ne soit pas inhibiteur de la
production de biomasse.
Ø Lorsque la cuve est remplie, l’alimentation est coupée ( la conduite est alors en mode discontinu)

Ø Le fed batch permet en pratique un gain de temps, une augmentation de productivité et une possibilité
de modification du milieu en cours de culture. Mais le risque de contamination est élevé

Applications

Ex: la production de la pénicilline, la concentration en glucose est maintenue à des valeurs précises au
cours du temps.

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4.1.3. Fermentation en culture contenue

Ø -le milieu de croissance frais est ajouté en permanence, et les cellules et le milieu épuisé sont
éliminés simultanément
Ø Le volume de culture microbienne est constant où le débit de milieu est égal au mélange de
biomasse-milieu liquide, de façon à maintenir le volume du réacteur constant

Il existe deux principaux types de cultures contenue à écoulement continu

1.3. .-Turbidostat

Ø le taux de croissance spécifique est égal ou très proche de µmax et est contrôlé par les vitesses
des réactions cellulaires internes.
Ø Cela se fait par un photoélectrique réglé, sur une valeur de X choisie, et reliée à la vanne
d’entrée du milieu neuf.

Ø Il s’agit d’une autorégulation de D en fonction de la biomasse mesurée à la sortie (Figure 10

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1.3. .-Turbidostat

Figure 10 : Schéma d'un turbidostat. 25

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3.2.- Chemostat

Ø Le chemostat constitue le système ouvert de fermentation continue, qui est

le plus simple et le plus répand

Ø Il est constitué d’une unique cuve alimentée en continue par du milieu stérile contenant le
substrat limitant

Ø Le milieu contenant microorganismes et métabolites produits est prélevé en continu,

avec un débit égal au débit d’alimentation

Ø le chemostat est donc caractérisé par un volume réactionnel constant.

Ø Le taux de dilution détermine le taux de croissance spécifique de la culture :

D = F / V où D = taux de dilution, F = débit moyen, V = volume de culture.
A l'état d'équilibre (µ = D), la concentration de biomasse et la concentration limite de substrat dans
la culture restent constantes
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Dispositif de chemostat (A), diagramme de croquis d'un récipient de culture

continue(B).,
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3.3-Bioréacteurs à membrane

Ø Un bioréacteur à membrane est un réacteur à flux dans lequel des membranes sont utilisées
pour séparer des cellules ou des enzymes des flux d'alimentation ou de produit.

Ø Il se caractérise par le fait que des cellules où des enzymes sont retenues dans les réacteurs, ce
qui permet de perfuser les réacteurs en continu.

Ø Les membranes sont fabriquées à partir de divers matériaux, notamment la cellulose, l’acétate
et le nitrate, le polypropylène, et polyacrylonitrile.

Les réacteurs à membrane ont été utilisés pour une très grande variété d'applications ::

Ø la biocatalyse, la fermentation, les cultures cellulaires et le traitement des eaux usées et des
gaz résiduaires.
Ø L’une des applications les plus utilisées est celle trouvée dans le traitement biologique des
eaux usées. 28

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Module de séparation par membrane externe (Fig. 12a) Module à membrane immergée (Fig. 12b)

La figure 12 montre deux bioréacteurs à membrane typiques pour les eaux usées:

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4.1.4. Applications de culture continue

Ø Elle est utilisée pour la production de protéines unicellulaires, des solvants organiques tels que la
vinaigre, l'éthanol, l'acétone, le butanol, l'isopropanol, l'acide acétique à partir de matières
premières traditionnelles telles que le sucre, l'amidon la mélasse et la cellulose.

Ø la culture contenue peut être utilisée pour la digestion continue des déchets d’eaux usées
provenant de produits chimiques en dehors des boues activées existe.

Avantages : Inconvénients
• Les cellules sont dans un état physiologique
constant (état stationnaire). - La culture continue n’est pas efficace pour la production
• Elle peut être utilisée avec une immobilisation de métabolites secondaires (antibiotiques) et des
pour des concentrations élevées de cellules et une
protéines recombinantes dont la production est déclenchée
alimentation réduite.
• Les temps de nettoyage et d’arrêt sont beaucoup à la fin de la phase de croissance.
moins fréquents. -Il y un risque de contamination lors de l’ajout des
• Il convient bien au traitement de l’eau et aux
nutriments peut nuire au processus.
processus environnementaux 30

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4.2-Fermentation en phase solide

Ø La fermentation en phase (ou sur substrat) solide implique la croissance de micro-

organismes sur des matériaux solides organiques qui sont simplement humidifiés et non
solubilisés ou en suspension.
Ø Les substrats utilisés sont souvent les céréales, le son, les légumineuses et les matières
lignocellulosiques telles que les copeaux de bois, etc. Ce type de fermentation ne dispose pas
des mécanismes de contrôle sophistiqués généralement associés aux fermentations submergées.
Les principales étapes de la fermentation sur substrat solide

1.-Prétraitement d'un substrat par un traitement mécanique, chimique ou biologique;

2- Hydrolyse de substrats principalement polymères : des polysaccharides et des protéines;
3- séparation et purification des produits finis.
Les microorganismes utilisés dans ce type de fermentation sont peu tolérés à l’activité de l’eau (0,7).
Ils peuvent être employés sous la forme de :
1- Monocultures, comme dans la production de champignons, par ex. Agaricus bisporus;
2- Cultures duales : Ex, bioconversion ;
3-Cultures mixtes, utilisées dans le compostage et la préparation de l'ensilage, 31

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4.2.1. Systèmes utilisés pour les fermentations sur substrat solide

Ø La plupart des fermentations sur substrat solide sont des procédés discontinus

Ø Certains processus ne nécessitent pas de bioréacteurs, ils impliquent simplement d'étendre

le substrat sur un sol approprié.
Ø Dans quelques procédés anaérobies : la production d'ensilage, ne nécessitent pas
d’agitation ou d'aération. (L'ensilage est une méthode de conservation des fourrages par
acidification passant par la fermentation lactique anaérobie d'un fourrage humide ).
Ø Par contre, la majorité des fermentations aérobies, nécessitant
Ø une aération et une agitation occasionnelle ou continue.

2.1.1 Fermenteurs à tambour rotatif

Ces fermenteurs sont utilisés dans la production

L'ensilage
d'enzymes et de biomasse microbienne. Leur principal
inconvénient est que le tambour n'est rempli qu'à
30%, sinon le mélange est inefficace
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.2 Fermenteurs à plateaux :

-Les substrats sont répartis sur chaque plateau sur une profondeur de quelques centimètres seulement,
puis empilés dans une chambre à travers laquelle de l'air humidifié est mis en circulation.
Ces systèmes nécessitent de nombreux plateaux et chambres d’incubation à un volume jusqu’à 150m3
(Figure. 13b). Ils sont largement utilisés pour la production d'aliments et d'enzymes orientaux
fermentés

33

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2.- Avantages de la fermentation solide

Ø Elle est facile à réaliser et ne nécessite pas d’équipement sophistiqué, pas obligatoirement une
stérilisation du substrat ;
Ø - Elle ne produit pas de mousses et n’a pas de contaminations bactériennes suite au manque
d’eau libre ;
Ø -Elle a une forte productivité en métabolites tels que les aromes, la pénicilline les aflatoxines,
l’acide gibbérellique, etc.;
Ø -Les frais de séchage éventuels sont réduits.

Les inconvénients des fermentations solides

-Très peu de microorganismes peuvent être utilisés, surtout ceux qui se développant en faible
Aw;
Ø - Difficultés de transfert et de la diffusion d’oxygène et de la chaleur dans la culture
microbienne ;
Ø -Difficultés de suivi des paramètres de fermentation suite à la nature solide et hétérogène des
substrats utilisés. 34

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3.-Applications des fermentations sur substrat solide

Tableau 7 : Quelques exemples de fermentations sur substrat solide

Domaines d’application Produits Microorganismes
Aliments riches en protéines Canne à sucre Aspergillus
Manioc Aspergillus
Tourteaux de coprah Aspergillus
Pulpes de betterave Trichoderma
Production d’enzymes Pectinase Aspergillus
Cellulase Trichoderma
Amylase Aspergillus
Production d’acides organiques Acide citrique
Acide lactique Rhizopus
Production de métabolites Aromes Penicillium, Trichoderma
secondaire Pénicilline Penicillium
Aflatoxine Aspergillus
Acide gibbérellique Gibberalia
Production de spores Inoculum de formage Penicillium
Lutte biologique contre Coniothyrium minitans
Sclerotinia sclerotiorum
Compostage et ensilage Compostât et ensilage Bactérie lactiques 35

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4.3.-Systèmes de cellules immobilisées

Ø Les microorganismes sont immobilisés sur un support ou une matrice, puis la biomasse est alimentée
par un milieu de culture frais stérile à partir d’une entrée. Le milieu fermenté contenant le produit
désiré est récolté de son part d’une sortie.

Ce système présente plusieurs avantages :

-Il permet de conserver du matériel biologique en fin de l’utiliser pour de nouveaux cycles ;
-Il facilité l’opération de récupération des produits désirés avec peu de moyens ;
-Il augmente la densité cellulaire et la vitesse de réaction ce qui permet d’accélérer productivité du produit
désiré avec peu de moyens et du temps.

4.3.1-Adsorption

L’immobilisation de cellules par adsorption sur un matériau support peut être réalisée naturellement ou
artificiellement en utilisant des agents de liaison (oxydes métalliques ou agents de liaison covalents tels que le
glutaraldéhyde) appropriés. L'adsorption de cellules viables est réalisée via les forces de Van der Waals et les
interactions ioniques.

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Les principaux matériaux utilisés

DEAE-cellulose diéthylaminoéthyle (DEAE-C) est une résine

copeaux de bois hêtre pour pour la fabrication chargée + pour la conversion des stéroïdes par Nocardia
du vinaigre par les Acetobacter erythropolis :

Gluten De Blé Granulés (Saccharomyces Des billes de gels d'alginate de calcium pour la production de
cerevisiae, production d’ethanol), production d’oxytétracycline par Streptomyces rimosus
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4.3.2.-Inclusion ou piégeage d'hydrogel

Ø C’est la méthode la plus utilisée qui permet de l’incorporation des microorganismes dans une
matrice de polymères naturels (polysaccharides et protéines= gel) dans une colonne, dans
laquelle circule le milieu frais qui en ressort avec les produits de biosynthèse.
Ø Le gel peut être utilisé en batch ou culture continue dans des bioréacteurs

Tableau 08 : Quelques applications de cellules immobilisées dans des hydrogels

Matériel hydrogel
Alginate
Phtalate d'acétate de
cellulose
Alginate de calcium
Oxyde de polyéthylène
polyacrylamide
organismes
Bifidobacterium longum
Bifdobacterium pseudolongum
Saccharomyces cerevisiae
Cellules d'ostéosarcome de rat
Arthrobacter simplex
Aspergillus niger
B. subtilis
Applications
Production de l’acide lactique
Production de probiotiques
Élimination des polluants (N,P, production éthanol
--Régénération des tissus ressemblant à l'os
-Production d’hydrocortisone
- production d’acide citrique
alpha- amylase

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.3.3. Auto-agrégation de cellules 3.4.- Confinement dans des membranes

Ø Les cellules qui s'agglomèrent naturellement et forment des Ø Elle repose sur l’immobilisation des cellules par la
granules ou floculent peuvent également être considérées filtration d'une suspension de cellules à travers d’une
comme immobilisées membrane préformée (systèmes à fibres creuses) ou formée
autour des cellules à immobiliser (microcapsules)
Ø Cette méthode a diverses applications telles que la
production d’éthanol par Zymomonas mobilis, l’enzyme Ø Les membranes synthétiques (préformée et formée) sont
d’α-Amylase par Aspergillus oryzae, la penicilline par des membranes polymères de microfiltration ou
Penicillium chrysogenum, certaines protéines d'ultrafiltration, bien que d'autres types des membranes ont
recombinantes par des animales Vero, et surtout dans le été utilisées (la céramique, le caoutchouc de silicone)
traitement des eaux résiduaires en boues activées
Tabl: Quelques exemples d'immobilisation de cellules dans des matériaux de support
poreux préformés
Matériel Microorganismes applications
Serviette en Propionibacterium Production d’acide
coton acidipropionici propioniques
Éponge de luffa Chlorella sorokiniana Élimination des métaux lourds
Saccharomyces cerevisiae Production de d’éthanol
Silicone carrier Lactobacillus rhamnosus Production d’exopolysaccharides
Mousse de Phanerochaete Production de peroxidase
polystyrène
Céramique Saccharomyces cerevisiae Production d’éthanol
Verre poreux Saccharomyces cerevisiae Maturation de la bière
Pellets d'alumine Zymomonas mobilis production d’ethanol 39

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4.3.5.-Bioréacteur à cellules
immobilisées

bioréacteurs à cellules
immobilisées peuvent être
retrouvés sous différentes
formes

fig: Types de bioréacteurs des cellules immobilisées : (a) réacteur à cuve agitée ; (b) réacteur à colonne à bulles ;
c) réacteur à élévation gaz / air; d) réacteur à lit fluidisé (à gauche); réacteur à fluide fluidisé conique (à droite);
e) réacteur à lit garni avec boucle de recyclage facultative; f) réacteur à lit ruisselant; g) réacteur à recyclage de
cellules à membrane. 40

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5.-Applications industrielles de bioréacteurs

Ø Les produits d’origine microbienne où de cellules eucaryotes sont principalement obtenus
par la production en différents types de bioréacteurs.
1-Domaine médical et pharmaceutique : la synthèse et la production de nombreuses molécules :
les antibiotiques, les anti fongiques, les antiviraux, les vitamines, les vaccins, les enzymes, etc
2-Domaine alimentaire : -produits laitiers fermentés, la biosynthèse d'acides aminés et de
vitamines, production de levures et des additifs (arômes, les acidulant et les épaississants).

3- Domaine agriculture – élevage : production d’insecticides et pesticides biologiques ainsi que

des aliments pour animaux (ex: ensilage).
4- Domaine chimique : la production de substances chimiques comme les solvants, les acides
organiques et les biopolymères.

5- Domaine de bioénergie : Production d'algues riches en hydrocarbures (photo bioréacteurs) :

biofuel (méthane, éthanol, méthanol).
6-Domaine environnemental : dépollution, gestion des déchets, traitement des effluents :
traitement des eaux, et dégradation des déchets chimiques. 41
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