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v Le glucose est une excellente source de carbone pour stimuler la croissance microbienne. Mais
le glucose peut avoir des effets indésirables sur la production de métabolites secondaires.
v Lactose est l’un des sucres lentement métabolisables, et n’inhibe pas la production de la
pénicilline après hydrolysation du lactose en galactose et glucose,
v le saccharose et dextrane sont souvent utilisés comme source de carbone simple, mais ils peuvent
être fournis dans un substrat industriel complexe tel que la mélasse, (non seulement la source de
carbone, azotées, des vitamines et des oligo-éléments). 3
Le choix de la source de carbone, qui représente généralement le coût principal des matières
premières, dépend des cultures:
Ø Par exemple, les microbes producteurs d'amylase peuvent utiliser de l'amidon et des dextrines
au lieu du glucose plus coûteux
Ø Yarrowia lipolytica, est capable de dégrader les lipides, les protéines et les n-paraffines en tant
que source unique de carbone.
-Candida peut assimiler les n-alcanes et acides gras en tant que sources de carbone
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2.6.-Eau
Ø L’eau est un composant majeur dans tous les milieux de culture et responsable de toutes les
réactions métaboliques des processus de fermentation industrielle (sauf les fermentations sur
substrat solide).
Ø Elle fournit également des oligo-éléments nécessaires pour la croissance.
Ø Sa qualité est très importante pour obtenir des cultures optimales et reproductibles ( ex: L’eau
déminéralisée, déionisée sont obtenues par des techniques de filtrations sur membranes)
Un milieu doit être stérile avant d’être ensemencé par la souche productrice.
v Le traitement thermique est le moyen le plus utilisé pour stériliser le milieu; mais il présente
l’inconvénient d’altérer et de modifier les qualités du milieu à cause de la dégradation de
polymères (protéines, acide nucléiques), des vitamines et d’acide aminés comme le
tryptophane et l’asparagine, ce qui entraîne parfois la formation de produits de dégradation
toxiques ou inhibiteurs de croissance.
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Ø Ce sont des milieux dont la composition exacte Ø Ce sont des milieux contenant des
n’est pas connaît que pour certains composants composés naturels dont la composition
Ø Ils contiennent des sources de carbones simples chimique précise n’est pas connue tels que
(comme le glucose, etc) où complexé (amidon, l'extrait de levure, de peptone, de mélasse,
cellulose, etc) et source d’azote simples
Ø Ils fournissent des nutriments nécessaires
(minérales : NH4+SO4-, NO3-, etc ; ou
organiques : acide aminés) où complexe (extrait et génèrent des rendements cellulaires
de levure, de la peptone, etc). supérieurs aux milieux définis.
Ø souvent utilisés comme milieux optimisés pour la Ø Pour des raisons économiques, les milieux
production des enzymes, acides aminés, où des complexes sont largement utilisés dans les
métabolismes secondaires (les antibiotiques et
fermentations industrielles
antifongiques, etc.)
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v Les milieux non sélectifs permettent la croissance des bactéries non exigeantes des sucres
nutritives particulières.
v La composition de ces milieux est simple et sans effet de sélection. Un exemple de milieu
ordinaire pourrait être la gélose nutritive, PCA, ISP2, Bennett, etc.
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Ø Il assure le contrôle les contions physicochimiques (température, pH, aération, etc.) pour avoir un
bon rendement de productivité.
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Ø Elle utilise des pompes spéciales qui injectent un mélange air-milieu à haute vitesse dans
le réservoir principal, ce qui assure agitation et aération (figure 08).
Ø Ce type d’agitation est utilisé pour des pilotes avec des moisissures et des
actinobactéries, par exemple dans la production d’acide citrique par A. niger
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3.2.-État de culture :
Ø La plupart des fermenteurs utilisés dans l’industrie sont du type submergé ; ce dernier
économise de l’espace et facilite son contrôle technique et conception.
3.3.-Volume de culture :
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4-Systèmes de fermentation
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Ø Les cellules sont initialement inoculées dans un milieu frais et aucun autre élément
nutritif n'est ajouté jusqu'à ce que le produit désiré soit produit.
Ø l’oxygène injecté est assuré par une agitation continue du milieu de culture sous
forme d’air comprimé pour l’homogénéité de la culture et la dissolution.
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a.-Phase de latence :
C'est le temps nécessaire à la bactérie pour synthétiser les enzymes adaptées au nouveau substrat.
Le taux de croissance est nul (µ = 0). La durée de cette phase dépend de l'âge des bactéries et de la
composition du milieu.
µmax: Elle est égale à la vitesse de croissance en biomasse (QX ) rapportée à l’unité de biomasse
(X = biomasse en g.L-1 ; t = temps en h).
Ø Temps de génération (G) est constant et minimal. Il est défini comme le temps de doublement de la biomasse
X pendant la phase exponentielle (ou le temps de doublement de l’absorbance pour un suivi
spectrophotométrique)
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f. Phase de déclin :
le taux de croissance est négatif (µ < 0). Toutes les ressources nutritives sont épuisées et
l’accumulation de métabolites toxiques, ce qui entraine une diminution d'organismes viables et
une lyse cellulaire sous l'action des enzymes protéolytiques endogènes.
Note, dans certains cas dans cette phase: la phase dite "cryptique, où la bactérie persiste
une croissance par libération de substances libérées lors de la lyse (croissance cryptique).
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Ø Le fed batch permet en pratique un gain de temps, une augmentation de productivité et une possibilité
de modification du milieu en cours de culture. Mais le risque de contamination est élevé
Applications
Ex: la production de la pénicilline, la concentration en glucose est maintenue à des valeurs précises au
cours du temps.
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Ø -le milieu de croissance frais est ajouté en permanence, et les cellules et le milieu épuisé sont
éliminés simultanément
Ø Le volume de culture microbienne est constant où le débit de milieu est égal au mélange de
biomasse-milieu liquide, de façon à maintenir le volume du réacteur constant
1.3. .-Turbidostat
Ø le taux de croissance spécifique est égal ou très proche de µmax et est contrôlé par les vitesses
des réactions cellulaires internes.
Ø Cela se fait par un photoélectrique réglé, sur une valeur de X choisie, et reliée à la vanne
d’entrée du milieu neuf.
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1.3. .-Turbidostat
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3.2.- Chemostat
Ø Il est constitué d’une unique cuve alimentée en continue par du milieu stérile contenant le
substrat limitant
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3.3-Bioréacteurs à membrane
Ø Un bioréacteur à membrane est un réacteur à flux dans lequel des membranes sont utilisées
pour séparer des cellules ou des enzymes des flux d'alimentation ou de produit.
Ø Il se caractérise par le fait que des cellules où des enzymes sont retenues dans les réacteurs, ce
qui permet de perfuser les réacteurs en continu.
Ø Les membranes sont fabriquées à partir de divers matériaux, notamment la cellulose, l’acétate
et le nitrate, le polypropylène, et polyacrylonitrile.
Les réacteurs à membrane ont été utilisés pour une très grande variété d'applications ::
Ø la biocatalyse, la fermentation, les cultures cellulaires et le traitement des eaux usées et des
gaz résiduaires.
Ø L’une des applications les plus utilisées est celle trouvée dans le traitement biologique des
eaux usées. 28
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Module de séparation par membrane externe (Fig. 12a) Module à membrane immergée (Fig. 12b)
La figure 12 montre deux bioréacteurs à membrane typiques pour les eaux usées:
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Ø Elle est utilisée pour la production de protéines unicellulaires, des solvants organiques tels que la
vinaigre, l'éthanol, l'acétone, le butanol, l'isopropanol, l'acide acétique à partir de matières
premières traditionnelles telles que le sucre, l'amidon la mélasse et la cellulose.
Ø la culture contenue peut être utilisée pour la digestion continue des déchets d’eaux usées
provenant de produits chimiques en dehors des boues activées existe.
Avantages : Inconvénients
• Les cellules sont dans un état physiologique
constant (état stationnaire). - La culture continue n’est pas efficace pour la production
• Elle peut être utilisée avec une immobilisation de métabolites secondaires (antibiotiques) et des
pour des concentrations élevées de cellules et une
protéines recombinantes dont la production est déclenchée
alimentation réduite.
• Les temps de nettoyage et d’arrêt sont beaucoup à la fin de la phase de croissance.
moins fréquents. -Il y un risque de contamination lors de l’ajout des
• Il convient bien au traitement de l’eau et aux
nutriments peut nuire au processus.
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.2 Fermenteurs à plateaux :
-Les substrats sont répartis sur chaque plateau sur une profondeur de quelques centimètres seulement,
puis empilés dans une chambre à travers laquelle de l'air humidifié est mis en circulation.
Ces systèmes nécessitent de nombreux plateaux et chambres d’incubation à un volume jusqu’à 150m3
(Figure. 13b). Ils sont largement utilisés pour la production d'aliments et d'enzymes orientaux
fermentés
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Ø Elle est facile à réaliser et ne nécessite pas d’équipement sophistiqué, pas obligatoirement une
stérilisation du substrat ;
Ø - Elle ne produit pas de mousses et n’a pas de contaminations bactériennes suite au manque
d’eau libre ;
Ø -Elle a une forte productivité en métabolites tels que les aromes, la pénicilline les aflatoxines,
l’acide gibbérellique, etc.;
Ø -Les frais de séchage éventuels sont réduits.
-Très peu de microorganismes peuvent être utilisés, surtout ceux qui se développant en faible
Aw;
Ø - Difficultés de transfert et de la diffusion d’oxygène et de la chaleur dans la culture
microbienne ;
Ø -Difficultés de suivi des paramètres de fermentation suite à la nature solide et hétérogène des
substrats utilisés. 34
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4.3.1-Adsorption
L’immobilisation de cellules par adsorption sur un matériau support peut être réalisée naturellement ou
artificiellement en utilisant des agents de liaison (oxydes métalliques ou agents de liaison covalents tels que le
glutaraldéhyde) appropriés. L'adsorption de cellules viables est réalisée via les forces de Van der Waals et les
interactions ioniques.
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Gluten De Blé Granulés (Saccharomyces Des billes de gels d'alginate de calcium pour la production de
cerevisiae, production d’ethanol), production d’oxytétracycline par Streptomyces rimosus
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Ø C’est la méthode la plus utilisée qui permet de l’incorporation des microorganismes dans une
matrice de polymères naturels (polysaccharides et protéines= gel) dans une colonne, dans
laquelle circule le milieu frais qui en ressort avec les produits de biosynthèse.
Ø Le gel peut être utilisé en batch ou culture continue dans des bioréacteurs
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Ø Les cellules qui s'agglomèrent naturellement et forment des Ø Elle repose sur l’immobilisation des cellules par la
granules ou floculent peuvent également être considérées filtration d'une suspension de cellules à travers d’une
comme immobilisées membrane préformée (systèmes à fibres creuses) ou formée
autour des cellules à immobiliser (microcapsules)
Ø Cette méthode a diverses applications telles que la
production d’éthanol par Zymomonas mobilis, l’enzyme Ø Les membranes synthétiques (préformée et formée) sont
d’α-Amylase par Aspergillus oryzae, la penicilline par des membranes polymères de microfiltration ou
Penicillium chrysogenum, certaines protéines d'ultrafiltration, bien que d'autres types des membranes ont
recombinantes par des animales Vero, et surtout dans le été utilisées (la céramique, le caoutchouc de silicone)
traitement des eaux résiduaires en boues activées
Tabl: Quelques exemples d'immobilisation de cellules dans des matériaux de support
poreux préformés
Matériel Microorganismes applications
Serviette en Propionibacterium Production d’acide
coton acidipropionici propioniques
Éponge de luffa Chlorella sorokiniana Élimination des métaux lourds
Saccharomyces cerevisiae Production de d’éthanol
Silicone carrier Lactobacillus rhamnosus Production d’exopolysaccharides
Mousse de Phanerochaete Production de peroxidase
polystyrène
Céramique Saccharomyces cerevisiae Production d’éthanol
Verre poreux Saccharomyces cerevisiae Maturation de la bière
Pellets d'alumine Zymomonas mobilis production d’ethanol 39
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4.3.5.-Bioréacteur à cellules
immobilisées
bioréacteurs à cellules
immobilisées peuvent être
retrouvés sous différentes
formes
fig: Types de bioréacteurs des cellules immobilisées : (a) réacteur à cuve agitée ; (b) réacteur à colonne à bulles ;
c) réacteur à élévation gaz / air; d) réacteur à lit fluidisé (à gauche); réacteur à fluide fluidisé conique (à droite);
e) réacteur à lit garni avec boucle de recyclage facultative; f) réacteur à lit ruisselant; g) réacteur à recyclage de
cellules à membrane. 40
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