TP 2

Dosage d’un pesticide dans un jus de fruit par Chromatographie

Gazeuse : Détection par Spectrométrie de Masse

ETSE Mensah Eloge

0 OUEDRAOGO Abdoul-Rachid
SUZANNE Lucas
Table des matières
I- INTRODUCTION.............................................................................................................................2
II- ANALYSE DE PESTICIDES PAR CHROMATOGRAPHIE EN PHASE GAZEUSE......................................3
1) Solutions étalons.......................................................................................................................3
2) Solution d’extraction.................................................................................................................4
3) Extraction de l’atrazine dans le jus de pomme..........................................................................4
III- PROTOCOLE D’ANALYSE.............................................................................................................7
1) Identification des composés......................................................................................................7
2) Établissement de la droite d’étalonnage...................................................................................8
3) Dosage de l’atrazine dans le jus de fruit..................................................................................11
4) Répétabilité de la méthode GC-MS..........................................................................................11
IV- ANALYSE ET DISCUSSIONS DES RESULTATS..............................................................................14
V- CONCLUSION...............................................................................................................................15

1
 I- INTRODUCTION

L’utilisation d’herbicides pour le désherbage des cultures s'est surtout répandue après les
années 1950 et a facilité cette tâche qui autrefois exigeait un labeur long et pénible. Parmi
ces herbicides, on a L’atrazine, ou 2-chloro-4-(éthylamine) -6-(isopropylamine) -s-triazine
(C8H14ClN5) de la famille des triazines, produits de synthèse organique dans lesquels on
trouve aussi la simazine et le terbuthylazine, utilisés en agriculture. En France, l'utilisation
de l'atrazine est interdite par la réglementation depuis 2003, et par l'Union Européenne
depuis 2007 avec la décision 2004/141/CE, une interdiction faisant suite à l'inquiétude
provoquée par la fréquence et l'importance de la contamination des cours d’eaux par
ruissellement, et les eaux souterraines, par infiltration.

Figure 1;Formule de l’atrazine et son utilisation pour désherbage.

Notre travail consiste à déterminer la teneur en atrazine dans le jus de pomme commercial
sachant que la teneur ne doit pas dépasser 0,5 ppbt pour que ce jus soit réglementaire.

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 II- ANALYSE DE PESTICIDES PAR CHROMATOGRAPHIE
EN PHASE GAZEUSE

La chromatographie en phase gazeuse-spectrométrie de masse (GC-MS) est une méthode

analytique qui combine les caractéristiques de la chromatographie en phase gazeuse et la
spectrométrie de masse pour identifier différentes substances dans un échantillon jusqu’à
l’état de trace. Apres extraction liquide-liquide de l’atrazine du jus de pomme, on procède à
une analyse GC-MS directement. En effet, l’atrazine est suffisamment apolaire (Log= 2,71)
pour être analysé sans aucune étape de dérivation, le reste consiste à un choix judicieux de
la solution interne qui servira à corriger les erreurs d’injection mais aussi de préparation
d’échantillon.
Dans notre cas, l’étalon interne sera la simazine initialement absente dans le jus de pomme,
est un composé de la famille des triazines dans laquelle on trouve également l’atrazine, ces
deux molécules ont des propriétés physico-chimiques similaires et de temps de rétention
voisines.

Figure 2:Formule de la semi-développée de la simazine.

I- MODE OPERATOIRE

1) Solutions étalons

Une solution étalon est une solution qui contient une concentration spécifiée d'un
paramètre. Nous disposons d’une solution mère d’atrazine (50mg/L) avec laquelle nous
avons préparé dans des fioles de 10mL 5 solutions étalons dans du dichlorométhane. A ces
solutions, on y introduit un volume de solution d’étalon interne (SI), afin d’obtenir une
concentration en simazine de 0,5mg/L dans chaque solution étalon.
Le prélèvement de la solution mère se fera à travers la formule suivante.

3
 C f Vf
C0 V0 = Cf Vf alors V0 = ;
C0
Les résultats sont consignés dans le tableau suivant dans le tableau ci-dessous.

Concentration Volume de la solution à Volume de la solution de

(mg/L) d’atrazine(µL) simazine
0,10 20 100
0,25 50 100
0,50 100 100
0,75 150 100
1,00 200 100

Tableau 1 : préparation des solutions étalons

2) Solution d’extraction
La solution d’extraction contient 0,5mg/L d’étalon interne (SI) dans le dichlorométhane
utilisé pour la quantification de l’atrazine dans le jus de pomme.

3) Extraction de l’atrazine dans le jus de pomme

Dans une ampoule à décanter, on y introduit 10mL de jus de pomme et 10mL de
dichlorométhane afin de réaliser une séparation liquide-liquide. Ainsi après agitation on
récupère la phase organique contenant l’atrazine et on ajoute une pointe de spatule de
sulfate de sodium pour sécher les traces d’eau qui resteraient dans l’extrait.

(Phase aqueuse)

(Phase organique)

 Vérification de la présence ou pas de la simazine dans le jus.

4
Pour vérifier si le jus de pomme contient de la simazine, une première injection sera
effectuée avec l’extrait.

Figure 3: spectre montrant l'absence de simazine dans le jus

Figure 4:spectre montrant la présence l'atrazine dans le jus.

De ces deux spectres, on remarque simplement un bruit de fond à la figure 3, peut alors
confirmer clairement que ce jus de pomme ne contient pas de simazine, ce qui nous permet
de recommencer l’extraction avec la solution d’extraction préparée précédemment, cela
permettra de corriger les erreurs d’injection de et préparations.

5
 Injection avec la solution interne

Figure 5: spectres de simazine et atrazine lors de l'injection avec solution interne.

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 III- PROTOCOLE D’ANALYSE

1) Identification des composés

Afin d’identifier la simazine et l’atrazine par CG-MS, on injecte une solution contenant
10mg/L de simazine-atrazine. On observe les spectres suivants.

Simazine

7
 Atrazine

Pour l’atrazine, on a deux ions Caracterisques à m/z=200 et m/z =215.

Pour la simazine, on a m/z=201.

2) Établissement de la droite d’étalonnage

L'étalonnage consiste à utiliser un étalon (solution étalon) pour déterminer le rapport entre
la valeur affichée par l'instrument de mesure et la valeur vraie. Lorsque L'étalonnage d'un
instrument de mesure au moyen d'un étalon, s’il est bien établi, il permet de garantir la
fiabilité des résultats.
Les injections de nos 5 solutions d’étalons en mode SIM, donne les résultats suivants.

Concentration atrazine aire relative hauteur atrazine

En mg/L
0,1 0,22606383 83

0,25 0,658722593 332

0,5 0,969187675 337

0,75 1,17325228 576

1 1,643356643 1023

Tableau 2 : aires et hauteur relative d’atrazine des solutions

étalons

8
Pour le graphe, nous avons calculer l’aire et la hauteur relative de l’atrazine dans les étalons, nous
avons effectué les calculs suivants :

Aire (composé )
Aire (relative)composé = et Hauteur(relative)composé=
Aire (SI )Hauteur (relative)
Hauteur (composé )
Hauteur (SI )

On pourra vérifier ensuite quelle méthode est la plus efficace entre l’aire et la hauteur.

DROITE D’ETALONNAGE
2
hauteur rela-
1.8 tivef(x) = 1.57942046868649 x + 0.195962669552179
1.6
R² = 0.974090534668995
1.4
1.2
1 Series2
0.8 Linear (Series2)
0.6
0.4
0.2 concentra-
0 tion
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 mg/L

Droite 1 : hauteur relative =f (concentration d’atrazine)

DROITE D’ETALONNAGE
2.5

2
f(x) = 1.23347842323341 x − 0.214769880707585
R² = 0.974090534668995
1.5

0.5

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2

Droite 2 : hauteur relative =f (rapport de concentration d’atrazine)

9
 DROITE D'ETALONNAGE
1.8
1.6
R² = 0.968030718217877
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2

Droite 3 : aire relative =f (de concentration d’atrazine)

DROITE D'ETONNAGE
2.5

2
f(x) = 1.34632270643534 x − 0.217622394637487
R² = 0.968030718217877
1.5

0.5

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8

Droite 4 : aire relative =f (de rapport concentration d’atrazine)

 Analyse des droites d’étalonnages obtenues.

Toutes les droites d’étalonnages obtenues ont en moyenne R 2=0,967 ; cette valeur et
légèrement proche de 1, cela peut être causée par les erreurs de prélèvement lors des
préparations des étalons ou la température qui était très en dessous 25°C. cependant, cette
valeur de R2 obtenue est acceptable pour la continuité de notre travail.

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 3) Dosage de l’atrazine dans le jus de fruit
Après avoir établi la droite d’étalonnage, nous pouvons déterminer à présent la concentration de
l’atrazine dans l’extrait du jus de pomme. Sachant que les droites d’étalonnages donnent
( y −b)
une fonction affine de degré 1 sous forme y=ax+b alors x= ; le résultat obtenu après
a
analyse est contenu dans tableau ci-dessous.

Aire hauteur hauteur teneur

aire si aire relative teneur (mg/L) hauteur si
atrazine atrazine relative (mg/L)
162 305 0,531147541 0,214446327 89 136 0,654411765 0,292181223

La teneur d’atrazine est déterminée par la relation établie précédemment

Tableau 3 : aires et hauteur relatives d’atrazine dans l’extrait de jus de pomme

( y −b)
Teneur d’atrazine (mg/L) = x=
a

Le tableau donne la concentration d’atrazine dans le jus de pomme en fonction des aires et
hauteurs relatives, on a teneur =0,214446327(mg/L) par rapport à l’are relative et
teneur=0,292181223mg/L avec la hauteur relative qui légèrement supérieur.

4) Répétabilité de la méthode GC-MS

Cette partie nous permettra de voir graphiquement l’évolution des différents spectres et
parallèlement nous permettra de calcul l’incertitude de la teneur d’atrazine.

Figure 5: spectre d'atrazine et simazine 1ère injection

11
 Figure 6: spectre d'atrazine et simazine 2ème injection

Figure 7: spectre d'atrazine et simazine 3ème injection

Figure 8 : spectre d'atrazine et simazine 4ème injection

12
 Figure 9: spectre d'atrazine et simazine 5ème injection

Les spectres des 5 injections trouvés donnent la même allure en intensité. Les résultats des aires et
hauteurs relatives sont contenus dans le tableau ci-dessous.

Aire
n° injection aire si air relative teneur (mg/L)
atrazine
1 162 305 0,531147541 0,214446327
2 166 273 0,608058608 0,262949239
3 188 302 0,622516556 0,272066946
4 271 387 0,700258398 0,321093774
5 196 306 0,640522876 0,283422385
Teneur
moyenner 0,270795734
en mg/L

Tableau 4 : Répétabilité aires et hauteur relatives d’atrazine dans l’extrait de jus de pomme

A travers ce tableau, on constate une petite variation de l’aire relative et la concentration de

l’atrazine, cette variation peut être liée à des erreurs d’injection car la façon dont-on injecte ne peut
pas être identique.

IV- ANALYSE ET DISCUSSIONS DES RESULTATS

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La teneur moyenne obtenue
C moyenne atrazine = 0,270795734mg/L soit
C moyenne atrazine=2,7.105ng/l =2,7.108ppt

Calcul des incertitudes ΔC :

Le calcul de l’incertitude se fera par détermination de t exp à l’aide de la loi de Student,
Pour 5 injections, N’=5-1=4 et si on prend 95% de confiance alors on a 5% de risque de se tromper.
Ce qui nous donne t exp= 2,77 et SEXP =0,038495988

U= SEXP/racine(N)= 0,017215929 mg/L alors ΔC= (SEXP/racine(N)) *texp= 0,048mg/l

ΔC= 0,048mg/L

Ainsi la teneur moyenne en atrazine est C atrazine =0,271mg/L +/- 0,048mg/L.

C’est-à-dire C atrazine=0,223mg/L ou C atrazine=0,319mg/L.

1ng/L=1000ppt.

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 V- CONCLUSION
Le but notre travail consistait à déterminer la teneur de l’atrazine dans le jus de pomme commercial
tout en sachant que sa teneur ne doit pas excéder 0,5ppt selon la réglementation.

Ce TP nous a permis de mettre en pratique notre connaissance théorique en chromatographie en

phase gazeuse avec la spectrométrie de masse comme détection, nous avons appris à l’issu de ce TP,
les bonnes manières d’injecter les solutions et comment effectuer les différentes techniques de
l’analyse de GC-MS. Au cours de notre travail, nous avons obtenus une concentration

C =0,271mg/L +/- 0,048mg/L =2,7.108ppt ce qui très supérieur à la valeur limite de la

atrazine
réglementation, alors notre jus de pomme n’est pas utilisable.

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