Série 1 : Méthodes chromatographiques

Exercice 1
On effectue la chromatographie sur couche mince de l’huile essentielle de peaux d’orange. On réalise alors
les dépôts suivants: dépôt 1 : limonène, dépôt 2: linalol, dépôt 3 : citral,dépôt 4 : huile essentielle de peaux
d’orange. La plaque est placée verticalement dans un fond d’éluant. Après élution et révélation, on obtient le
chromatogramme ci-dessous.
1. Rappeler le principe de la chromatographie et Définir les termes: éluant, ligne de dépôt, front
du solvant, rapport frontal.
2. On dit que la chromatographie est une technique de séparation et d’identification. Expliquer en
quelques lignes comment peut-on identifier des espèces chimiques grâce à la chromatographie.
3. Quel est le rôle de l’éluant ? Décrire les interactions mises en jeu lors de la séparation.
4. Quelle précaution expérimentale doit-on prendre à propos du volume de l’éluant ?
5. Définir le terme « révélation » et justifier son intérêt dans ce cas.
6. Faire un schéma du chromatogramme après élution à l’échelle 1/1 en justifiant les positions des
tâches.
7. De quels paramètres dépend la valeur du rapport frontal ?
8. Quels sont les constituants de l’huile essentielle de peaux d’orange ? Justifier votre réponse par le calcul
des rapports frontaux.

Exercice 2
Soit un mélange de trois substances organiques a, b et c. La polarité décroît du composé a au
composé c. L'analyse par CCM de ce mélange en utilisant une plaque de gel de silice a donné les
résultats suivants: x= 3 cm, x= 0,5 cm et x= 2 cm (x étant la distance parcourue par le dépôt). Le
déplacement de l'éluant à partir de la ligne de dépôt est de 4 cm.
1. Prévoir les Rf des trois substances et tracer le chromatogramme obtenu.
2. Quel est le paramètre qui permet de prédire la facilité de séparation sur une colonne?
3. Proposer un protocole opératoire permettant la séparation de ce mélange sur colonne.

Exercice 3
L'analyse d'un médicament de la famille des tranquilisants (Valium) par HPLC a été réalisée dans
les conditions opératoires suivantes: deux comprimés de dosage inconnu ont été finement broyés
puis solubilisés dans 10 ml d'acétonitrile. A cette solution, 20 mg de p-chlorophénol ont été ajoutés
pour servir en tant que référence interne. A partir de cette solution, 5µl ont été prélevés et injectés
dans l'appareil de HPLC. Le chromatogramme obtenu est donné ci-après.
Déterminer le dosage du comprimé en principe actif sachant qu'il existe trois types de
conditionnements 2, 5 et 10 mg/comprimé.