Cours 4 BDV 2014

Le méristème apical
Shoot Apical meristem: SAM

Méristème apical d’A.thaliana
lp lp
Plantule de 5 jours
Vue de méristèmes
Tailles et formes variables
Extreme modifications of the shoot apex occurred during the evolution of the
cactus family
500µm
500µm
70µm Pereskia sacharosa
Oroya peruviana
500µ
m
500µm
Echinocactus platyacanthus
Mauseth annals of Botany 2004
Phyllotaxie
Dominance apicale
IPT: enzyme nécessaire pour la synthèse des CK
CKX: enzyme responsable de la dégradation des CK
Application: taille des ligneux
Le méristème apical (ou SAM): une organisation complexe
1. Historiques et propriétés du méristème apical
a. Comment est caractérisé le SAM
b. Une histoire déjà ancienne
2. Architecture du méristème apical
a. Organisation en secteur du méristème apical
b. Analyse clonale: 1940s
c. Définitions de territoires spécifiques par des gènes marqueurs.
d. Modèle d’organisation du méristème apical.
e. Fonctionnement du SAM: devenir des couches L1, L2, L3.
3. Mutation affectant l’organisation du méristème
a. Mutant ne pouvant pas mettre en place le méristème apical: cas du
mutants stm et wus.
b. Les gènes Clavata ou le contrôle de la taille du méristème.
c. Modèle de fonctionnement du méristème apical.
4. La transition méristème apical/méristème floral
a. Transition du SAM vers méristème d’inflorescence
b. Le déterminisme génétique de la transition SAM méristème
d’inflorescence.
5. La définition de l’identité des organes floraux
a. Rappel structure des fleurs.
b. Le développement des différents organes d’une fleur
c. Déterminisme génétique de la formation d’un fleur

a. Comment est caractérisé le SAM.
 Fonction double: formation de nouveaux organes et régénération des

cellules du méristème.
Formation des primordium des organes de la tige
Activité itérative.
Les méristèmes sont capable de se réorganiser.
Croissance indéterminée.
Une fonction double
Génère de nouveaux
organes: des fleurs
Se régénère lui-même


Formation des organes de la tige
Formation des primordia
Three-dimensional reconstruction of vegetative shoot apex of lupin showing central dome and spirally arranged leaf
primordia on flanks.
(Based on Williams 1974; reproduced with the premission of Cambridge University Press)
Formation des organes


Le méristème a une action réitérée
1
Entre noeud
2
3 Phytomères
Bourgeon 2
4
Feuille


Croissance indéterminée/déterminée.
Régénération du SAM Fig. 2. Organ formation and meristem
maintenance after ablations of the
CZ. Yellow arrowheads indicate the
position of the lesion.
(A) Longitudinal section through a
meristem immediately after ablation.
The ablation eliminated the entire CZ
and projected more
than 100 mm into the meristem..
(D,F,H) Transverse sections;
(C,E,G,I,J) scanning electron
micrographs. (C) Scanning electron
micrograph of a meristem with
2 days ablated CZ, in top view. (D)
Transverse section of a meristem
after ablation of the CZ. (E-J)
Development of the meristem after
ablation of the CZ. After 2 days, a
new primordium was formed at the
expected site (E), and the hole closed
(F). After 4 days, four new primordia
had been formed (G), the lesion was
4 days displaced from the centre towards the
flank, and a new meristem centre
(star) was established (G,H). After 6
Ablation laser d’une days, the lesion was removed from
the meristem and displaced onto the
partie du méristème stem (I), or two new meristem
centres had been established on
apical (tomate) either side of the lesion (J). P3, P2,
and P1 indicate leaf primordia that
(C, A) Ablation of the entire CZ. were present at the beginning of
the experiment; I1, I2, I3, and I4
indicate primordia formed after the
ablation. In some cases, primordia
were removed to allow manipulation
or visualisation. Scale bars: 100 mm.
Remplacement du méristème par un nouveau méristème. La lésion est déplacée vers

la tige


Croissance indeterminée/croissance déterminée

SAM indéterminé/ déterminé
Indéterminé
déterminé
Le méristème apical: une histoire ancienne
Theorica Generationis
WOLF (1896)
Considérer comme celui ayant découvert le
« point de croissance » (Punctum
vegetationis) de la plante
Premier à suggérer que la

croissance de la plante procède
par épigenesis (formation de
novo) et non par préformation et
que les fleurs sont des feuilles
modifiées
Observation réalisée grâce aux premiers microscopes

Le méristème apical: une histoire ancienne
Méristème: 1848 (Nageli)

a. Modèle zonal du méristème apical
b. Analyse clonale: 1940s
mutants stm et wus.
d’inflorescence.
Le méristème apical est organisé en plusieurs zone
Zone centrale: Taux de division faible. Les

cellules restent non différenciées. Cellules
initiales.
Zone périphérique: Divisions rapides.

Les cellules peuvent se différencier et
sont à l’origine des organes latéraux.
Zone Rib.: Zone de division rapide. A l’origine

de la partie centrale de la tige
Le méristème apical est organisé en plusieurs zone
b. Analyse clonale: 1940s. Mise en évidence des couches L1, L2, L3
mutants stm et wus.
d’inflorescence.
Les chimères: un outil pour l’analyse de l‘organisation des méristèmes.
A la poursuite des chimères
L1
L1 L2
L2 L3
Gène marqueur de la couche cellulaire L1
Hybridation in situ avec le gène ATML1

Ce gène est exprimé uniquement dans la couche L1.
Marqueur moléculaire de la couche L1

mutants stm et wus.
d’inflorescence.
Modèles d’organisation du SAM
PS: Chez les monocotylédons, il

n’y a que deux couches cellulaires
L1, L2 uniquement
Ex: Maïs
The fundamental cell layers of Angiosperms and tissues derived from them in
the embryo and shoot.
mutants stm et wus.
d’inflorescence.
Formation des feuilles
Poethig, 1997
Primordia foliaire
Leaves are formed at the shoot apical meristem (SAM)
The tiny leaves

SAM that surround SAM
the meristem
are called leaf
primordia
SAM
Nicotiana tabacum (tobacco) Arabidopsis thaliana
The meristem is usually

0.1 – 1 mm in diameter Oryza sativa (rice)
Image sources: Poethig , R.S. and Sussex ,I.M. (1985) The developmental morphology and growth dynamics of the tobacco leaf. Planta 165: 158-169. Copyright (1985)
Planta. Reprinted with kind permission of Springer Science+Business Media; Itoh, J.-I., Kitano, H., Matsuoka, M., and Nagato, Y. (2000) SHOOT ORGANIZATION
genes regulate shoot apical meristem organization and the pattern of leaf rrimordium initiation in rice. Plant Cell 12:2161-2174; Reprinted by permission from Macmillan
Publishers, Ltd:. Long, J.A., Moan, E.I., Medford, J.I., and Barton, M.K. (1996) A member of the KNOTTED class of homeodomain proteins encoded by the STM gene
of Arabidopsis. Nature 379: 66-69.
Analyse des chimères
L1
L2
L3
ZP ZP
ZC
ZM
Origine des différentes parties de la feuille
A. Dicotylédones
L1 vert, L2 blanc, L3 vert
Limbe marginal blanc car issu de L2
Limbe marginal
provenant
essentiellement de la Limbe marginal
couche L2 provenant de cellules
L1 ayant envahi L2
Analyse du devenir des cellules des couches L1, L2, L3
Méristème apical et formation des feuilles
Cellules de l’épiderme
Bordure des feuilles
Partie centrale
des feuilles
Partie centrale de la tige

Le fonctionnement du méristème nécessite un équilibre
entre l’entrée des cellules dans un processus de
différentiation et le maintien d’un pool de cellules non
différenciées.
Peut-on identifier les mécanismes responsables du

maintien de cet équilibre?
Recherche de mutants.
a. Mutant ne pouvant pas mettre en place le méristème apical: cas des
mutants stm, wus
d’inflorescence.
De nombreux gènes altèrent la formation et le maintien du
méristème apical
Mutant stm (Knox 1 gene) : absence de méristème apical
Long et al, 1996, Nature, 379:66
Jeunes feuilles
Trichomes
Cotylédons
Absence de feuille
Reprinted by permission from Macmillan Publishers, Ltd:. Long, J.A.,

Moan, E.I., Medford, J.I., and Barton, M.K. (1996) A member of the
KNOTTED class of homeodomain proteins encoded by the STM gene
of Arabidopsis. Nature 379: 66-69.
Plantules âgés d’une semaine

Le méristème apical ne se forme pas au cours de l’embryogenèse
chez le mutant stm
Le gène STM exprimé dans l’embryon dans les cellules qui
sont à l’origine du méristème
Expression du gène STM dans le méristème apical
Genetic control of leaf identity: importance de STM
How does a leaf primordium

become a leaf, rather than
part of the meristem? Leaf primordium
Meristem
Leaf primordium
Poethig , R.S. and Sussex ,I.M. (1985) The developmental morphology and growth dynamics of the tobacco leaf. Planta 165: 158-169.
Figure 3 Copyright (1985) Planta. Reprinted with kind permission of Springer Science+Business Media.
Cells in the meristem are indeterminate
•Cells in the meristem are

functionally distinct from those in the
leaf primordia
•They are indeterminate and serve
as a stem-cell population
KNOX-1 genes maintain the meristem in an
indeterminate state
KNOX-1
Class I KNOX genes (KNOX-1)

•(KNOX means Knotted-like homeobox)
•Encode transcription factors
•Expressed in meristem
•Not expressed in incipient primordia
•Help maintain indeterminate growth
Knotted 1 : the first homeobox
gene identified in plants
KNOTTED expression
KNOTTED (a KNOX-1
gene) mRNA accumulates
in the meristem but not
the leaf primordia
(arrows) of Zea mays
Jackson, D., Veit, B., and Hake, S. (1994) Expression of maize KNOTTED1 related homeobox genes in the shoot apical meristem
predicts patterns of morphogenesis in the vegetative shoot. Development 120: 405–413. Reproduced with permission.
KNOX genes act in part by stimulating cytokinin
synthesis
stm1 mutant
Arabidopsis expressing IPT from
stm1 mutant STM promoter
STM IPT CK
The shootmeristemless1 mutant (stm1) fails to initiate a shoot apical meristem.

This mutant can be rescued by CK application or by expression of the cytokinin-
biosynthesis IPT gene at the SAM. STM is a transcription factor that induces
expression of an IPT gene.
Reprinted from Yanai, O., et al. (2005). Arabidopsis KNOXI Proteins activate cytokinin biosynthesis. Curr Biol. 15: 1566-1571, with permission from Elsevier.
Cells in leaf primordia become determinate
•Cells in the primordia are functionally

distinct from those in the meristem
•They become determinate
Primordium-specific genes promote differentiation
ARP
ARP
ARP genes
•“ARP” is derived from three genes, ASYMMETRIC
LEAF1, ROUGH SHEATH2, and PHANTASTICA
•ARP genes encode MYB transcription factors
•Expressed in cells of leaf primordia
• Promote determinate growth and differentiation
The activities of ARP and KNOX-1 genes are mutually
antagonistic
The two classes of transcription

factors are mutually repressive, and
help establish a separate identity for
the emerging leaf primordium
ARP
KNOX-1
ASYMMETRIC
LEAF1 (AS1) mRNA
is expressed in
cotyledons but not in
the meristem
ARP
KNOX-1
Reprinted by permission from Macmillan Publishers, Ltd:. Byrne, M.E., Barley, R., Curtis, M., Arroyo, J.M., Dunham, M., Hudson, A., and Martienssen,
R.A. (2000) Asymmetric leaves1 mediates leaf patterning and stem cell function in Arabidopsis. Nature 408: 967-971.
In the stm
mutant, AS1 is
expressed in
the meristem
Wild stm
type mutant (arrow)
ARP
Reprinted by permission from Macmillan Publishers, Ltd:. Byrne, M.E., Barley, R., Curtis, M., Arroyo, J.M., Dunham, M., Hudson, A., and Martienssen,
R.A. (2000) Asymmetric leaves1 mediates leaf patterning and stem cell function in Arabidopsis. Nature 408: 967-971.
Le gène STM est nécessaire à l’initiation et au
maintien du méristème
Le gène STM :
Bloque l’entrée en différentiation cellulaire

Maintien les cellules du méristème dans un état non différencié
Maintien les activités de prolifération cellulaire
Expression et fonction du gène STM
STM code pour un facteur de transcription homologue au

gène knotted 1 de maïs
Le gène STM est exprimé dans l’embryon dans les

cellules à l’origine du SAM.
L’expression de STM a lieu dans la CZ et dans la

PZ du SAM dans la plante adulte. Il n’est pas
exprimé dans les zones d’organogenèse
Zones d’organogenèse
Le mutant wuschel (wus) forme un méristème anormal
Les plantes wuschel ont un phénotype « stop and go »
Arrêt prématuré du fonctionnement

du SAM lié à une perte des cellules
« souches ».
Initiation occasionnelle de tiges et de
feuilles à partir de méristèmes
secondaires.
Analyse de l’expression du gène WUS au cours
de l’embryogenèse
Wus est exprimé dans la partie inférieure de CZ
CZ Cellules initiales
Wus est exprimé dans les cellules de la CZ situées sous les cellules
souches des couches L1, L2 dans la zone L3
Rôle de Wus dans le SAM
Cellules initiales des

couches L1, L2, L3
Zone d’expression de
Wus: îlot cellulaire
située sous les cellules
sc dans la zone L3.
Centre organisateur
Wus permettrait de déterminer l’identité des cellules SC

(stem cells).
Fonctions de WUS
Nécessaire au maintien du fonctionnement du méristème apical
Permet de maintenir les cellules centrales (cellules sc) du méristème

dans un état non différentié (exprimé dans les cellules ayant le rôle d’un
centre organisateur)?
Permet de définir l’identité des cellules souches

du méristème
Y a-t-il un lien entre l’action de Wus et de Stm?.
Les deux gènes jouent un rôle dans le maintien de

l’activité du méristème apical.
Pour répondre à cette question:
Analyse de leur expression
Expression ectopique de Stm et Wus

Les zones d’expression de WUS et STM sont
différentes
Suggère des modes d’action différents pour ces deux gènes
Expression dans toute la zone

Expression limitée à centrale, et dans une partie de
quelques cellules: la zone périphérique
centre organisateur
Expression ectopique de STM et/ou de
WUS.
Promoteur Séquence codante terminateur

STM /ou WUS
Introduction dans génome des plantes par transgenèse

Expression ectopique de STM/WUS
STM TER
Steroid binding domain of

rat Glucocorticoide receptor
Production constitutive d’une protéine de fusion cytosolique
+ dexaméthasone
Transfert de la protéine de fusion dans le noyau

Expression ectopique de STM
Stm mutant on medium without Dex

dans un
mutant
stm
4 days after gowth on +Dex medium.
No meristem formed in other part of the plant.
Knat2 gene expression is normally controlled

by STM in the meristem (A), but becomes
expressed in the cotyledons after transfert on
+Dex medium (B)
dans un
WT
Induction of some cyclin genes but not of cell
division after transfert to + Dex medium
Expression ectopique de STM dans les feuilles
limite la différentiation des cellules

Ne permet pas de former des cellules souches (sc) du méristème.
Expression ectopique de WUS
Expression constitutive de Wus bloque la formation des feuilles
Expression localisée de Wus dans certaines cellules

des feuilles
 Induit l’expression de gènes marqueurs des cellules souches (sc)

dans des cellules différenciées de la feuille
Expression mosaïque du gène gène WUS: système Cre lox
Cre-loxP-based system for

mosaic expression. (A) The
system was tested in plants
containing heat-shock-inducible
Cre recombinase (hsp18.2::Cre)
and a reporter construct
consisting of loxP-flanked uidA
inserted between the 35S
promoter and GFP (35S::lox-
uidA-lox-GFP). After a brief heat
shock, transient induction of Cre
caused excision of uidA and GFP
activation in random cells and
their descendants. (B,C) Optical
sections of GFPexpressing
sectors (arrows) on the
cotyledon epidermis (B) and in
hypocotyls (C) were recorded 7
days after heat shock.
Analyse de l’expression mosaïque de WUS
35S::lox-uidA-lox-WUS X hsp18.2::Cre line.
F1 plants contain both transgene

20°C Seed treatment 38°C for 2 min
L’expression ectopique simultanée de WUS et STM est
suffisante pour provoquer la néoformation de méristème
qui fonctionne de façon transitoire
Phenotype after induction of

mosaic WUS expression and
STM-GR activation, in
35S::lox-uidA-lox WUS;
hsp18.2::Cre; 35S::STM-GR
seedlings grown on medium
with 1 μM dexamethasone 10
days after heat shock.
STM bloque la différentiation des cellules et induit les divisions cellulaires
mais il ne confère pas aux cellules leur identité méristématique.
WUS ne joue aucun rôle au niveau de la prolifération mais il confère aux

cellules leurs caractères méristématiques.
Ils agissent indépendamment l’un de l’autre en activant des programmes

génétiques différents.
Ils coopèrent pour assurer le maintient d’un SAM fonctionnel.

mutants stm, wus
b. Transition du SAM vers méristème d’inflorescence
clavata ou la formation de « méristèmes géants »
Augmentation de la
taille du SAM
Augmentation du nombre
d’organes latéraux
Il existe 3 mutants mutants clavata
WT clavata 1
clavata 3 WT
WT clavata 2
Rôle des gènes clavata dans le contrôle du méristème
Les gènes clavata

limite l’activité
Les gènes MPA (meristeme
clavata promoting activity,
WUS)
limitent la
taille du
méristème
Mutant clv
apical
La taille de la zone centrale (CZ)
est augmentée chez les 3 mutants clavata.
WUS a le phénotype Perte de la

inverse zone centrale
Comment les différents gènes (3) clavata
agissent-ils sur le fonctionnement du
méristème?
Les 3 gènes Clavata sont exprimés dans différentes parties du SAM
Clavata 3 Clavata 1 (ou 2)

Les gènes clavata ont été identifiés et leur fonction étudiée
Peptide (96 aa) qui sert de ligand?
Complexe activée
Complexe suite à l’interaction
clavata 1 et 2 extracellulaire
avec le peptide codée
Récepteur par le gène clavata 3
kinase
cytosol
Activation du complexe
limite l’expression du
gène WUS
Clavata 3 est localisée dans l’apoplasme et diffuse de
son lieu de synthèse jusqu’aux cellules qui expriment
le complexe Clavata 1
Expression de
WUS est bloquée
Zone d’expression de Wus

limitée à quelques cellules
L3
Comment explique-t-on le phénotype clavata?
Clav 3 Clav 1
WT
WUS
cla
Extension de la zone non

différenciée sous l’action
de Wus

mutants stm, wus
b. Transition du SAM vers méristème d’inflorescence.
Résumons avant de désespérer!
Organisation du méristème et contrôle des cellules souches
WT clv wus
Modèle de fonctionnement du
méristème apical
STM permet le
maintien dans un état
non différencié des
cellules de CZ et de PZ

Cours 4 BDV 2014

Transféré par

Informations du document

Titre original

Copyright

Formats disponibles

Partager ce document

Partager ou intégrer le document

Options de partage

Avez-vous trouvé ce document utile ?

Ce contenu est-il inapproprié ?

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Cours 4 BDV 2014

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Le méristème apical

Shoot Apical meristem: SAM

1. Historiques et propriétés du méristème apical

 Fonction double: formation de nouveaux organes et régénération des

Formation des primordium des organes de la tige

Les méristèmes sont capable de se réorganiser.

1. Historiques et propriétés du méristème apical

 Fonction double: formation de nouveaux organes et régénération des

Formation des organes de la tige

Les méristèmes sont capable de se réorganiser.

1. Historiques et propriétés du méristème apical

 Fonction double: formation de nouveaux organes et régénération des

Formation des primordium des organes de la tige

Les méristèmes sont capable de se réorganiser.

1. Historiques et propriétés du méristème apical

 Fonction double: formation de nouveaux organes et régénération des

Formation des primordium des organes de la tige

Les méristèmes sont capable de se réorganiser.

Remplacement du méristème par un nouveau méristème. La lésion est déplacée vers

1. Historiques et propriétés du méristème apical

 Fonction double: formation de nouveaux organes et régénération des

Formation des primordium des organes de la tige

Les méristèmes sont capable de se réorganiser.

Croissance indeterminée/croissance déterminée

Premier à suggérer que la

Observation réalisée grâce aux premiers microscopes

Méristème: 1848 (Nageli)

Zone centrale: Taux de division faible. Les

Zone périphérique: Divisions rapides.

Zone Rib.: Zone de division rapide. A l’origine

Hybridation in situ avec le gène ATML1

Marqueur moléculaire de la couche L1

PS: Chez les monocotylédons, il

The tiny leaves

Nicotiana tabacum (tobacco) Arabidopsis thaliana

The meristem is usually

Bordure des feuilles

Partie centrale de la tige

Peut-on identifier les mécanismes responsables du

Reprinted by permission from Macmillan Publishers, Ltd:. Long, J.A.,

Plantules âgés d’une semaine

How does a leaf primordium

•Cells in the meristem are

Class I KNOX genes (KNOX-1)

The shootmeristemless1 mutant (stm1) fails to initiate a shoot apical meristem.

•Cells in the primordia are functionally

The two classes of transcription

Bloque l’entrée en différentiation cellulaire

STM code pour un facteur de transcription homologue au

Le gène STM est exprimé dans l’embryon dans les

L’expression de STM a lieu dans la CZ et dans la

Arrêt prématuré du fonctionnement

Cellules initiales des

Wus permettrait de déterminer l’identité des cellules SC

Nécessaire au maintien du fonctionnement du méristème apical

Permet de maintenir les cellules centrales (cellules sc) du méristème

Permet de définir l’identité des cellules souches

Les deux gènes jouent un rôle dans le maintien de

Pour répondre à cette question:

Analyse de leur expression

Expression ectopique de Stm et Wus

Suggère des modes d’action différents pour ces deux gènes

Expression dans toute la zone