EFFET D’UN BIOPESTICIDE

D’ORIGINE VÉGÉTALE ET DE
BIOPESTICIDE MICROBIEN SUR
BOTRYTIS CINEREA
Réalisé par :

LACHGAR Ayyoub
 PLAN

1 • Introduction

2 • Matériels et méthodes

3 • Résultats et discussion

4 • Conclusion
 INTRODUCTION

La tomate ?

La tomate et une plante herbacées de la famille des

Solanacées, originaire du Nord-Ouest de l'Amérique du
Sud, largement cultivée pour son fruit rouge et comestible.
 INTRODUCTION
• Importance de la production de la tomate:

• A l’échelle internationale:
16ème rang parmi les producteurs de la tomate

• A l’échelle nationale:
 Superficie: 15 640 hectares (FAO, 2015).

 Production: 1,22 millions de tonnes (FAO, 2015).

 Secteur pourvoyeur d’emploi de 75% de la population active du milieu rural

• A l’échelle régionale:
 Production : 798 000 tonnes (APEFEL, 2013).
 Production régionale exportée : 403 833T tonnes en 2012 (APEFEl, 2013).
 INTRODUCTION

 Problèmes phytosanitaires de la tomate influence l’alimentation

et l’économie du Maroc : La tomate (Lycopersicon esculentum) est
sujette à l’attaque de nombreux ravageurs et maladies
notamment :

Agent causal de
Botrytis cinerea la pourriture
grise
 INTRODUCTION
• Botrytis cinerea:
Taxonomie:
Classe Leotiomycetes

Ordre Helotiales

Famille Sclerotiniaceae

Genre Botrytis
Nom scientifique Botrytis cinerea

Ce champignon infecté plusieurs hôtes:

capable d’attaquer plus de 230 espèces de plantes .

 INTRODUCTION
Symptômes :
Botrytis est responsable de pourritures de fruits, de tâches
foliaires, de chancres sur tiges, de pourritures racinaires et de
fontes de semis.
 INTRODUCTION

. L’utilisation des biopesticide et des microorganismes

antagonistes s’avère une voie très prometteuse.
 INTRODUCTION

Objectifs

Détermination de l’effet Détermination de l’effet

fongicide d’un extrait de antagoniste de quatre

plante contre Botrytis Pseudomonas fluorescentes

cinerea. contre Botrytis cinerea.

 MATÉRIELS ET MÉTHODES

• Matériel biologique :
 4 souches de Pseudomonas ssp
fluorescentes .

 Les spores du champignon

Botrytis cinerea.

• Matériel végétale :
 Extrait de plante .
 PROTOCOLE EXPÉRIMENTAL

Effet d’extrait de Effet de

plante Pseudomonas

Extraction des Préparation des

spores bactéries

Dénombrements Extraction des

des spores spores

Confrontation Confrontation
 MATÉRIELS ET MÉTHODES

Effet de l’extrait de plante sur Botrytis cinerea :

 MATÉRIELS ET MÉTHODES
• Extraction des spores de champignon :

Repiquage de champignon Ajoute 5ml d’eau distillé

dans différent boit contient plus 2 goutes de tween
Milieu PDA 80,puis raclé par une once

On verser la solution
sur une papier filtre
 MATÉRIELS ET MÉTHODES

• Dénombrement des spores:

On prend 1 ml de filtrat, on le
met sur une cellule de mallassez
Puis vue par microscope.

On compte le nombre des spores

par carrer pour obtient la quantité
qui nous intéressent .
 MATÉRIELS ET MÉTHODES

• Dénombrement des spores:

On utilisant la relation suivante pour démontrera le

nombre des spores,
Si nombre total = 200 spore.
Alors 200/20(nombre de carreaux) =
10 * 105 = 106 spore
 MATÉRIELS ET MÉTHODES

• Confrontation d’ extrait de plante et de champignon :

 Apres l’obtention des spores,

on préparent un milieu PDA ,
et on lisse refroidir a 45°c
sur la plaque chauffant .
 On prend un erlynmeyer stérile,
on ajout 50ml de milieu PDA ,
plus 50µl de filtrat qui contient
les spores.
 MATÉRIELS ET MÉTHODES

• Confrontation d’ extrait de plante et de champignon :

 On collé le solution (PDA+spores)

dans boites de pétri.

 On met des billes dans le milieu,

puis on attend qu’il gélifier.
 MATÉRIELS ET MÉTHODES
• Confrontation d’ extrait de plante et de champignon :

On ajoute 30 µl Témoin
de biopesticide
dans chaque trou.
Incubation à 24°c pendant
72h
PROTOCOLE EXPÉRIMENTALE

Effet de Pseudomonas sur

Botrytis cinerea :
 PROTOCOLE EXPÉRIMENTALE
• Préparation des bactéries :

Après
stérilisation
de milieu de
culture et de
Matériels
Préparation de milieu de Coulage de milieu de
culture culture dans les boites de
(BN + Agar dans de l’eau pétri
distillé )

Repiquage du bactéries
dans Les boites de pétri
 PROTOCOLE EXPÉRIMENTALE
• Extraction des spores :

En verse le mélange
Après l’ajoute de 10 ml dans un entonnoir que
d’eau distillé stérile + contient de papier filtre .
une goutte de tween 80
en racle le champignon
avec une anse
Récupération du
filtrat dans un
pulvérisateur
 PROTOCOLE EXPÉRIMENTALE

• Confrontation du bactérie et de champignon :

Pulvérisation des
spores sur les
Bactérie déjà incubé
pendant 2 jour
 RÉSULTATS ET DISCUSSION

Effet de l’extrait des plantes (bio pesticides) sur le champignon

Botrytis cinerea :

Les résultats montrent un Effet remarquable de l’extrait des plantes

comme des bio pesticides sur la croissance de champignon Botrytis
cinerea dans le milieu de culture PDA
 RÉSULTATS ET DISCUSSION

 Cet effet a été remarque par un halo clair (zone d’inhibition)

autour de puits contenant l’extrait à tester après une semaine
d’incubation.

L’effet d’extrait est plus marqué sur la germination des spores.

 RÉSULTATS ET DISCUSSION

 La plupart des extraits ont présenté un pourcentage d’inhibition

importante .Certains ont même inhibé totalement la sporulation,
et d’autres agit sur la germination des spores et sur la langueur
de tube germinatif.

 L’inhibition des colonies mycéliennes d’isolats en présence de

l’extrait de plante montre qu’il existe un principe actif aux
propriétés antifongiques qui inhiberait la croissance des
Botrytis.
 RÉSULTATS ET DISCUSSION

Effet de bactérie Pseudomonas sur le champignon Botrytis

cinerea.
Les résultats de cette partie ne montrent aucun effet significatif
des bactéries du genre Pseudomonas sur le botrytis cinerea.
 RÉSULTATS ET DISCUSSION

 Ce la peut être explique par l’absence de la matière actives

vis-à-vis de botrytis chez les Pseudomonas.
 CONCLUSION

 L’efficacité des différents extraits de plante sur un

pathogène important de la tomate présente une alternative
par rapport aux fongicides synthétiques peu biodégradables
Merci pour votre
attention