Université des Sciences et de la Technologie d’Oran « Mohamed Boudiaf »

Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie

Département de Biotechnologie

Mercredi 21 Avril 2024

Compte rendu du TP n02 :

Coloration de Gram .

Module : Ecologie Microbienne

L’étudiante : Hammouche Hanene

Licence 03 « BGV »

Groupe 01

Enseignante :Dr . Nadjia BENHAMED

Plan de travail :
• Introduction
• Le but de cette coloration
• Matériel utilisé
• Mode de l’emploi :
 Avoir une culture bactérienne .
 Préparation de Frottis .
 La coloration .
 L’observation
 Dessin
• L’interprétation .
• Conclusion .
Introduction :
une coloration qui permet de mettre en évidence les propriétés de
la paroi bactérienne, et d'utiliser ces propriétés pour distinguer et
classifier les bactéries. Son avantage est de donner une
information rapide, facile et bon marché sur les bactéries
présentes dans un produit ou un milieu, tant sur le type que sur la
forme.
Le but de cette coloration :
Elle permet de visualiser facilement les bactéries et de donner des
indications sur leurs formes et leurs tailles.
La coloration permet de distinguer les bactéries GRAM à + des
GRAM à – grâ ce à leurs différences de nature de paroi.
Le matériel utilisé :
Des colonies bactériennes .
Bec bunsen .
Pipette Pasteur .
Pissette de l’eau distillée .
Lame et lamelle .
Colorant violet de Giantian .
L’ugol .
L’alcool .
Colorant de Fushine .
Microscope optique .
Mode d’emploi :
Avoir une culture bactérienne :
Nous avons obtenu des colonies de bactéries croissant à partir des
milieux de culture préparés à l'avance à partir de différents
échantillons bactériens Ces bactéries sont matures et prêtes pour
une utilisation expérimentale en laboratoire, pour la coloration et
l'observation microscopique .
la préparation de frottis :
Premièrement on met la bactérie échantillon sur un coté d’une
lame propre et stérile .
On met quelques gouttes d’eau distillée stérile sur la lame.
En suit on Prélever à l’aide d’une pipette Pasteur une parcelle
d’une colonie bactérienne poussée sur milieu gélosé .
On émulsionner cette colonie dans les gouttes d’eau sur lame.
Les frottis doivent être étalés en couche mince et régulière pour
bien séparer les cellules bactériennes .
La coloration :
Sur le frottis Faire couler la solution de Violet de Gentiane sur la
lame jusqu'à ce que tout le frottis soit recouvert; laisser en contact
1 minute. Après jeter le colorant et finir de la chasser par la
solution de Lugol ; laisser le agir environ 1 minute.
Jeter le Lugol et faire couler l’alcool goutte à goutte pendant 10
secondes sur la lame inclinée
Rincer immédiatement à l’eau distillée (ne pas diriger le jet d’eau
directement sur le frottis)
Recouvrir la préparation de la Fuchsine (ou Safranine), laisser agir
1 minute.Rincer abondamment la lame à l'eau distillée, jusqu'à
élimination du colorant en excès.
L’observation :
Pour observé les cellules bactérienne colorée aux microscope
optique à grossisement X100 il faux utilisé L’huile à immersion .
Le dessin (page suivante)
Interprétation des résultats obtenus :
Image 1: Schéma de bactéries Gram à négatif par observation
microscopique Gx1000 . la forme des bactéries est basile et de
taille petite ; Mode d’association est monobasille et diplobasile .
Image 2: Schéma de bactéries Gram à positif par observation
microscopique Gx1000 . la forme des bactéries basille et la taille
grand ; mode d’association est en amas .
Image 3: Schéma de bactéries Gram à négatif par observation
microscopique Gx1000 . la forme des bactéries basille et la taille
grand ;mode d’association est en chaine .
Chez les bactéries à GRAM à négatif, dont la paroi est riche en
lipides, pauvre en peptidoglycane, l’alcool dissout ces lipides ce
qui aboutit à une augmentation de la perméabilité de la paroi.
L’alcool pénètre facilement au cytoplasme et le décolore (l’alcool
dissout le violet de gentiane).
Chez les bactéries à GRAM à positif, dont la paroi est pauvre en
lipides, riche en peptidoglycane, ce dernier constitue une barrière
imperméable à l'alcool et le cytoplasme demeure alors coloré en
violet.
Conclusion :
La coloration de Gram est la coloration différentielle la plus
utilisée en microbiologie. Elle permet en colorant l'intérieur des
bactéries de les différencier sur échantillon selon leur forme
(paires, groupes, chaînes…) et leur affinité pour les colorants.
"Grace aux colorants utilisés, on affine la caractérisation du type
de bactéries à Gram positif