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Matière : Mycologie Algologie Virologie

TP 03
Purification et identification des
moisissures / Etudes macro-
microscopique des mycètes

2023/2024

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 But du TP :
Maîtriser les techniques de purification des micromycètes isolées, à identifier les genres
par la culture sur lame, et à mener une étude des caractéristiques macro et microscopiques
des moisissures.

Introduction :
Les moisissures sont des champignons microscopiques qui se développent dans des
environnements humides et chauds, et qui sont présentes dans tous les milieux, y compris
le sol, l'air et l'eau. Elles peuvent être bénéfiques ou nuisibles à la santé humaine, étant
utilisées dans la production de certains aliments, de médicaments et de sources de
biocarburants, mais pouvant également être responsables de maladies respiratoires,
cutanées et alimentaires.

L'identification des moisissures est importante pour comprendre leur rôle dans
l'environnement et pour les contrôler si elles sont nuisibles, et se fait sur la base de
critères culturaux et morphologiques vise à purifier et identifier les moisissures, ainsi qu'à
étudier leur morphologie macroscopique et microscopique, en suivant un protocole
comprenant la purification des micromycètes isolées, l'identification des genres par la
technique de culture sur lame, et l'étude macro-microscopique des mycètes.

1 – Les Equipements et Matériels Utilisés :

•boîte de Petri,microscope, lames, lamelle, anse de platine, Beck benzène, des tiges de
verre, pinces.
•L’eau distillée stérilet, milieu de culture Sabourand, colorant rouge Congo, culture
fongique sur boîte de Petri.

2 - Mode Opératoire :

•Assurez-vous que tous les instruments que vous utilisez sont bien stérilisés, et allumez le
bec benzène et commencez le travail.

•Expérience (1) «purification des micromycètes isolées» :

- Prenez un échantillon de la culture fongique présente dans la boîte de Pétri à l'aide

d'une anse et cultivez-la dans une autre boîte de Pétri contenant le milieu culturel
Sabourand.

- Placez la boîte de Pétri dans l'incubateur pendant 5 à 7 jours à une température de

30 degrés Celsius.

•Expérience (2) «identification des genres par la technique de culture sur lame “la
micro-culture”» :

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- Procurez-vous une boîte de Pétri vide et placez-y deux tiges de verre, puis placez une
lame dessus.

- Placez sur la lame un petit carré (1,5 × 1,5 cm) de Sabourand

inoculé avec la culture fongique que vous souhaitez étudier (M3),
puis couvrez-le d'une lamelle. (Fig1)

- Versez un peu d'eau distillée stérile dans le fond de la boîte

de Pétri, puis fermez-la et placez-la dans l'étuve à une
température de 30 degrés Celsius.

• Étude macroscopique (à l'œil nu) :

•Expérionce (1):

- Étudiez le champignon qui a poussé dans la boîte de Pétri que vous avez préparée à
l'étape 1 (M7) à l'œil nu en observant la forme, les bords, la texture, la couleur, la
présence d'un pigment diffusible, la taille, etc. (Les résultats de l'étude sont indiqués dans
le tableau ci-joint).

•Expérience (2):

- Si vous remarquez une contamination de la culture que vous avez préparée à l'étape 2
(apparition de spores), passez directement à l'étude microscopique.

• Étude microscopique (à l'aide du microscope lumineux) :

Où l'on observe les spores, l'aspect des spores, l'aspect des filaments ...

•Expérience (1) :

- Dans des conditions stériles, placez une goutte d'eau distillée sur une lame (si la culture
fongique est incolore, la goutte d'eau peut être remplacée par une goutte de colorant
comme le bleu de coton ou le rouge congo).

- Prenez une petite quantité de la culture fongique à l'aide d'une anse et placez-la dans
la goutte d'eau (ou de colorant) et mélangez légèrement.

- Couvrez le tout d'une lamelle puis examinez-le au microscope lumineux.

•Expérience (2) :

- Retirez la lamelle et placez-la sur une goutte de colorant présente sur une lame et
examinez-la à l'aide du microscope lumineux.

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3 – Les questions :

1) L’étude macroscopique d’une culture fongique :

Code de la Couleur de la Couleur du revers Texture

culture surface
M7 Blanc Rouge Laineuse

Marge Taille Pigment diffusible Identité

Irrégulière Envahissante Présence d’un Fusarium

pigment diffusible «
rouge » (fusarubine)
2) Un schéma avec légende du filament missiliant et des organes de la fructification
observée au microscope : Situé dans la dessin d’observation.
3) Une classification taxonomique des champignons identifiés :

Règne : Fungi / Phylum : Ascomycota / Classe : Sordariomycetes / Ordre :

Hypocreales
/ Famille : Nectriaceae / Genre : Fusarium / Espèce : Il pourrait être Fusarium
oxysporum

4 - Conclusion :
Ce travail pratique nous a permis de mettre en pratique les techniques de purification
et d’identification des moisissures, ainsi que d’acquérir les connaissances nécessaires pour
réaliser une étude macro-microscopique des mycètes. Nous avons pu observer une grande
diversité de formes et de structures, ce qui souligne l’importance de ces organismes dans
la nature et dans de nombreux domaines d’application.