Polycopié Electrophorèse Master Agro Alimentaire

Electrophorèse Master agroalimentaire
Module analyse des biomolécules
ELECTROPHORESE
Illustration des différentes étapes de déroulement de l’électrophorèse verticale

sur gel de polyacrylamide
Année Universitaire 20/21 Page 24 Pr Ghailani Nourouti Naima

ELECTROPHORESE
1) Définition
2) Mobilité électrophorétique
2-1) Facteurs influençant la mobilité électrohorétique
2-1-1) Force ionique du tampon
2-1-2) pH du tampon
2-1-3) Température
2-1-4) Intensité
3) Supports utilisés en électrophorèse.

4) Types d’électrophorèse
4-1) Electrophorèse horizontale
4-1-1) Electrophorèse horizontale sur la bande d’acétate de cellulose
4-2) Electrophorèse verticale
4-2-1) Préparation du gel de polyacrylamide PAGE
4-2-1-1) Composition
4-2-2) Formule du gel
4-2-3) Relation entre la taille des macromolécules à séparer et la
concentration du gel
4.3.1) Notion de gel de concentration et gel de séparation
4.3.1.1 ) Définition du gel de concentration
. 4.3.1.3 ) Outils nécessaires pour former le gel
4-3-2) Electrophorèse de protéines sur un gel de polyacrylamide
4-3-2-1) Native PAGE
4-3-2-2) SDS-PAGE ou dénaturante
5) La révélation
5-1) Coloration avec le bleu de coomassie
5.2) La décoloration
5.3) Résultat de la révélation de SDS-PAGE
5.4) Exploitation du gel
6) Application de SDS PAGE: Détermination du poids moléculaire

1) Définition
C’est une méthode d’analyse et de fractionnement, basée sur la migration différentielle

de particules chargées électriquement sous l’effet d’un champ électrique.
Lélectrophorèse concerne les macromolécules ionisables telles que les protéines et les acides
nucléiques.
2) Mobilité électrophorétique
Champ électrique
E
Force de frottement
Force de Coulomb
f Particules
F
+ q
Sens de déplacement
Figure 1: Les forces exercées sur une particule chargée
Sous l'action d'un champ électrique E, la particule se déplace avec une vitesse
électrophorétique (Ve) qui est proportionnelle au champs électrique, la formule qui relie les
deux grandeurs est la suivante :
Ve = µ Ee (1)
Ve : la vitesse électrophorétique (m.s-1

µ : la mobilité électrophorétique ( m2.s-1.volt-1)
E : le champs électrique (volt.m-1
µ : la mobilité électrophorétique
A partir de la formule précédente (1), nous déduisons que la mobilité

electrophorétique s’écrit comme suit
µ = Ve / Ee (2)
A savoir que le champs électrique (E) crée entre les 2 électrodes exerce une force (F)
force de Coulomb selon la formule suivante,
F = q Ee (3)
q : la charge de la particule

La force de frottement (f) va s'opposer à la migration de la particule et va la freiner.
f = 6   r Ve (4)  : cœfficient de la viscosité du milieu

Ve : vitesse électrophorétique de la
protéine,
r : rayon de la particule
A l’état stationnaire, c'est-à-dire à l’équilibre, les deux forces s’égalisent,
F –f=0 ou F=f
q Ee = 6   r Ve (4)
Comme déjà écrit (2) la mobilité électrophorétique est le rapport entre Ve/ Ee,
Et à partir de la formule (4) le même rapport s’écrit de la manière suivante :
Ve / Ee = q / 6   r (5)
Et selon la formule (3) ce rapport correspond à µ d’où l’expression de la mobilité
électrophorétique en fonction de la charge, le rayon de la particule et la viscosité du milieu.
Ve /Ee = µ d’où µ = q / 6  r
Selon la formule ci-dessus, la mobilité électrophorétique dépend de plusieurs facteurs,

- En premier lieu, la mobilité varie en fonction de la charge de la particule,
d’où la nécessité de garder un pH constant durant l’électrophorèse. Le cas le plus important et
celui des acides aminés et des protéines dont la charge change en fonction du pH ainsi que le
sens de la migration.
- La viscosité du milieu, agit également sur la qualité et la vitesse de la
migration des particules. Il faut signaler que la température modifie la viscosité du milieu, en
effet une élévation de la température lors de l’éléctrophorèse induit l’évaporation du tampon
et par conséquent sa concentration et l’augmentation de sa viscosité. Ceci se traduit par
l’opposition à la migration des particules par l’augmentation de la force de frottement. Il est
donc impératif d’éviter l’élévation de la température lors de la migration des particules. Dans
cet objectif les cuves d’électrophorèse sont munies de couvercles et d’un système de
refroidissement externe qui baisse de la température du tampon de migration.
- La taille de la particule influence également la mobilité électrophorétique,
effectivement les particules volumineuses auront une migration réduite par apport aux
particules de petite taille. En tout cas les particules de petite taille migre loin.
2-1) Facteurs influençant la mobilité électrohorétique

- 2-1-1) Force ionique du tampon
Correspond à la somme du produit des concentrations des ions multipliée par leur valence au
carré, l’unité de la force ionique est le mol par litre comme la concentration.
µ (mol/l) =  Ci (Vi)2 / 2

À savoir qu’a courant et à voltage précis, plus la concentration en électrolytes du

tampon d’électrophorèse ou la force ionique du tampon d’électrophorèse est forte plus la
migration des molécules de l'échantillon sera lente. Ceci signifie que la résistance à la
migration des molécule augmente avec l’augmentation de la force ionique du tampon et
inversement. Il faut donc bien préparer le tampon d’électrophorèse.
2-1-2) pH du tampon
En électrophorèse la charge de la macromolécule est un critère très important, elle

détermine le sens de la migration de la particule c'est-à-dire vers l’anode ou vers la cathode
Les molécules biologiques et plus particulièrement les acides aminés et les protéines
qui contiennent plusieurs groupements ionisables, leur charge est dépendante du pH du
milieu.
Pour une protéine, la charge nette dépend de la différence entre le pH du milieu et le

point isoélectrique, pH– pI, le pI point isoélectrique et le pH qui confère aux protéines une
charge globale neutre.
Si le pH est > au pI la charge nette est négative (anion) et la migration aura lieu vers
l'anode
Si le pH est < au pI la charge nette est positive (cation) et la migration aura lieu vers la
cathode
Si le pH est = au pI à la charge nette est nulle et la particule ne migrera pas , elle sera focalisée
2-1-3)Latempérature
Au cours de l’electrophorèse, le passage du courant s'accompagne d'un échauffement
du support (par effet Joule), ce qui entraîne l'évaporation de l'eau de la phase liquide,
l’évaporation s’accompagne de la concentration du tampon et l’augmentation de sa viscosité
et la résistance à la migration. Pour limiter ce phénomène, la cuve est fermé par un couvercle;
on utilise aussi des cuves réfrigérées.
2-1-4) Intensité
Le courant électrique en mA,plus le courant est intense plus la migration se fera vite.
3) Supports utilisés en électrophorèse.
Il existe différents types d’électrophorèse en fonction de la nature du support de la

séparation.
- Electrophorèse libre en veine liquide
Nous allons donner une simple description de ce type d’électrophorèse. La migration
s'effectue au sein d'un liquide de composition déterminée contenu dans un tube en U de
section carrée qui permet la prise de mesures optiques au travers du tube. Elle est dite
également électrophorèse en veine liquide ou encore électrophorèse de frontières car la
séparation n’est pas complète mais il se forme des frontières mises en évidence par des
méthodes optiques telles que l'absorption ultra-violette pour les protéines.

- Electrophorèse sur support solide (papier, acétate de cellulose et autres),

- Electrophorèse sur gels, (polyacrylamide, agarose, amidon, ...).
Nous allons étudier largement les deux dernières catégories d’électrophorèse
4) Types d’électrophorèse
On distingue deux types d’électrophorèse : électrophorèse horizontale et
électrophorèse verticale et ceci en fonction de la cuve et surtout de la disposition du support
de la séparation (membrane ou gel).
4-1) Electrophorèse horizontale
Elle est nommée ainsi car le support sera déposé horizontalement, ça peut être un gel
ou une membrane
Figure 2 : Cuve pour la réalisation d’électrophorèse horizontale
4-1-1) Electrophorèse horizontale sur la bande d’acétate de cellulose
Nous allons citer le cas de la séparation des protéines sérique sur la membrane
d’acétate de cellulose, pour cette technique les étapes de la migration et de la révélation se
passent comme suit :
La bande d’acétate de cellulose est préparée en la trempant dans le tampon tris-véronal à pH
8.6 puis les échantillons sont déposés et soumis à la migration.
Trempage da la membrane dans le tampon Dépôt préalable et migration
Figure 3 : Illustration d’électrophorèse horizontale
Une fois la migration est terminée, la membrane sera placée dans un bain de colorant
renfermant par exemple le Rouge ponceau. La coloration est suivie d’une décoloration à
l’aide d’une solution d’acide acétique à 5 %.

Coloration Décoloration
Figure 4: Les étapes d’électrophorèse sur la bande d’acétate de cellulose
Pour la quantification des protéines sérique la membrane peur être transparisée dans
du méthanol afin de la lire à l’aide d’un densitomètre. Cet appareil obéit au même principe
qu’un spectrophotomètre (loi de Beer- Lamber)t. Avec cet appareil il y a une relation entre
l’intensité de la coloration des bandes d’électrophorèse et la densité optique. Cet appareil est
étalonné au préalable.
a b
Figure 5: Résultat d’électrophorèse des protéines sériques sur la bande d’acétate de

cellulose (a) et lecture densitométrique (b)

4-2) Electrophorèse verticale

Cette technique est dite verticale car le support d’électrophorèse est disposé vérticalement
4-2-1) Préparation du gel de polyacrylamide PAGE
Le polyacrylamide est un copolymère d’acrylamide et de bis acrylamide. Il est très
utilisé car il est transparent et par conséquent lisible en spectrophotométrie et ultraviolet. Il
permet une bonne résolution car on peut adapter la taille des pores. Il sert à la fois à la
séparation des protéines et des acides nucléiques.
4-2-1-1) Composition
CH2=CH-CO-NH2 acrylamide
(CH2=CH-CONH)2CH méthylène bis acrylamide ou agent de pontage
La polymérisation de l'acrylamide est initiée par l'addition de
– persulfate d'ammonium : initie la polymérisation
– TEMED (NNN'N'-tétraméthyléthylènediamine). Catalyse la polymérisation
–
Figure 6 : Structure d’acrylamide, de bisacrylamide et la structure du gel de

polyacrylamide
4-2-2) Formule du gel
La porosité des gels obtenus dépend de la concentration totale en monomères et de la
proportion d'agent monomère réticulant (le bisacrylamide).
Les gels sont définis selon leur teneur en acrylamide et bisacrylamide. La nature du gel est
déterminé par T (exprimé en %) la concentration totale en acrylamide et bisacrylamide :
T s’écrit sous la forme suivante :
T% = (a+b) x 100 / V
a : masse d'acrylamide en gramme,
b: masse de bisacrylamide en gramme
V : volume total de solution en ml.
Le pourcentage C ou la proportion d'agent réticulant est le rapport du Bis
acrylamide par rapport à l''acrylamide total:
C % = [poids (Bis acrylamide) / poids(de polyacrylamide)]x 100.

Plus le T est élevé plus le gel est concentrée c‘est à dire plus les mailles sont serrées et
le gel servira à la séparation des protéines de petites taille voir tableau II.
4-2-3) Relation entre la taille des macromolécules à séparer et la concentration du

gel
En électrophorèse, il faut adapter la structure des mailles du gel à la taille des
macromolécules à séparer. Le tableau ci-dessous montre qu’il existe une relation
inversement proportionnelle entre la taille des particules à séparer et la concentration
du gel. Pour séparer des particules de grosses tailles, il faut utiliser un gel peu concentré qui
possède des mailles du réseau lâches.
Tableau I : La relation entre la concentration du gel et le poids moléculaire des

macromolécules (valeurs approximatives)
Polyacrylamide (T%) Poids moléculaire (KDa)
15-20 10-40
10-15 40-100
5-10 100-300
5 300-500
2-5 > 500
Figure 7: Illustration de la relation entre la concentration du gel, les mailles du réseau

et la gamme de poids moléculaire des molécules à séparer
La figure 7 montre que le gel de polyacrylamide est constitués de canalicules sinueux

dans les quels les particules circulent. Les petites particules traversent aisément ces
canalicules et arrivent en un temps court à des distances lointaines, par contre les grosses

particules seront arrêtées au début du gel. C est le passage sélectif des molécules à travers les
pores du gel qui permettra la séparation de ces macromolécules.
Figure 8 : Schéma d’électrophorèse verticale et la séparation en fonction du poids

moléculaire
4.3) Electrophorèse verticale sur gel de polyacrylamide

Préparation du gel de polyacrylamide
Il faut préparer certaines solutions tampons et autres ingrédients indispensabls dont les
proportions seront définies en fonction de la concentration désirée du gel
- Polyacrylamide ,la solution mère à 30% (29.02 :0.8)

- Tampon ( exemple tris HCl M? pH ?)
- SDS 10% ( µl)
- Eau distillée (ml)
- Persulfate d’ammonium (µl)
- Temed (µl) (dernier réactif à ajouter)
4.3.1) Notion de gel de concentration et gel de séparation
-
Figure 9 : Localisation de gel de concentration et gel de séparation


Sera coulé en second lieu après la polymérisation du gel de séparation
Donc se trouve au-dessus , il est le plus proche de la cathode
IL est généralement peu concentré en polyacrylamide
Son rôle est de concentrer ou de focaliser l’échantillon
Il occupe une faible proportion du gel
Les puits sont formés au niveau du gel de concentration de concentration
Tableau II : Exemple de composition dugel
Solution Volume
Polyacrylamide à 30
5 ml
% (solution mère)
Tris 0,5 M pH 6,8 5 ml
SDS 10 % 600 µl
Eau distillée 10 ml
Persulfate
200 µl
d’ammonium 10 %
Temed 30 µl
Figure 10 : Position et rôle du gel de concentration
4.3.1.2 ) Définition du gel de séparation ou de migration
Le premier à couler
Se trouve au dessous, il couvre une grande proportion du gel
Il est généralement plus concentré en polyacrylamide
C est le support de la séparation des protéines
Renferme le front de migration des protéines
Tableau III : Exemple de composition de gel de séparation
Solution Volume
Polyacrylamide à 30 %
18 ml
(solution mère)
Tris 1,5 M pH 8,8 11,27 ml
SDS 10 % 600 µl
Eau distillée 15,4 ml
Persulfate
200 µl
d’ammonium 10 %
100
Temed
µl
Figure 11 : Position et rôle du gel de migration

Tableau IV : Comparaison entre la composition du gel de séparation et gel de concentration
Solution Gel de séparation

Gel de concentration
Polyacrylamide à 30 % (Solution
5 ml 18 ml
mère)
Tris 1,5 M pH 8,8 11,27 ml
Tris 0,5 M pH 6,8 5 ml
SDS 10 % 600 µl 600 µl
Eau distillée 10 ml 15,4 ml
Persulfate d’ammonium 10 % 200 µl 200 µl
Temed 30 µl 100 µl
. 4.3.1.3 ) Outils nécessaires pour former le gel
Pour confectionner un gel de polyacrylamide, il faut préparer au préalable les solutions

déjà citées au dessus.Ces solutions de gels de polyacrylamide seront coulées entre deux lames
de verres qui serviront de moules et donneront la forme planaire au gel après la
polymérisation des solutions grace à la présence de persulfate d’ammonium et le TEMED.
Il y un ordre de confection de gel :
Le gel de séparation sera coulé en premier et après sa polymérisation, le
gel de concentration sera coulé. Il faut immédiatement déposer les peignes au niveau
du gel de concentrations. Après polymérisation du gel de concentration, les peignes seront
enlevés et ainsi les puits du dépôt d échantillon seront formés.
Le moule pour préparer le gel est constitué de deux lames de verre (voir figure11)
séparées du côté gauche et du coté droit par des espaceurs ou intercalaires, l’épaisseur des
espaceurs déterminera l’épaisseur du gel.
Pour renforcer l’adhésion des deux lames séparées par les espaceurs des pinces vont
serrerl’ensemble et ceci du côté gauche et droit

Figure 12 : Les lames de verres, les peignes et le upport pour couler la solution du gel
4-3-2) Electrophorèse de protéines sur un gel de polyacrylamide
Il existe deux types d’électrophorèse sur le gel de polyacrylamide , électrophorèse

native non dénaturante et l’ électrophorèse dénaéturante SDS- PAGE. 4.3) Electrophorèse
verticale sur gel de polyacrylamide
4-3-2-1) Native PAGE

L’électrophorèse Native est une technique réalisée en condition nos dénaturante de la
structure et la fonction des protéines. Il faut éviter tout type de dénaturation chimique,
physique et même des conditions extrêmes de pH et de force ionique. Avec cette technique
une révélation de l’activité enzymatique sur le gel est possible. Pour ce faire il faut fournir à
l’enzyme en question le substrat et les cofacteurs et la révélation se fera sur le gel. Le
précipité formé selon la réaction enzymatique aura lieu à l’endroit où existe l’enzyme.
Révélation spécifique
Isoenzyme 1
Isoenzyme 2
Zymorramme d’ alpha amylases
Figure 13: Révélation enzymatique après migration des échantillons sur un gel de
polyacrylamide
Principe de la coloration : L’amidon est coloré en général en bleu par le Lugol mais
l’enzyme alpha dégrade l’amidon en glucose, ce dernier n’est pas reconnu par le lugol est

donne des taches claires. La révélation à l’endroit de l’enzyme est sous forme de taches
incolores sur un fond foncé montrant que l’amidon est resté intact dans tout le gel.
4-3-2-2) SDS-PAGE ou dénaturante
Elle se pratique en présence d’agents dénaturants tel que le SDS dodécyl sulfate de
sodium. Le Sodium dodécylsulfate ou SDS voir figure 13 est un détergent anionique
dénaturant surfactant, il déroule les protéines en cassant toutes les liaisons de faible énergie, il
se fixe sur les protéines et leur confèrent une même densité de charge négative et dans ce
cas les protéines migreront qu en fonction de leur poids moléculaire. On peut également
chauffer l’échantillon .
(SDS : CH3 - (CH2)10 - CH2 - O - SO3-, Na+),
Figure 14: la structure de SDS dodécyl sulfate de sodium
Pour cette électrophorèse dénaturante on peut également utiliser des agents réducteurs
comme le beta mercaptoethanol ou dithiotreitol dtt qui coupent les ponts disulfures et ainsi
on peut déterminer le nombre des sous unités qui composent certaines macromolécules.
5) La révélation
Suite à l’électrophorèse sur le gel, il faut passer à la révélation c'est-à-dire à la
coloration des échantillons afin d’identifier les différents constituants. En réalité la révélation
peut se faire sur le gel ou réaliser un transfert des molécules séparés sur une membrane et
révéler sur la membrane et ceci nous amène à une autre technique ‘immunoblot ou westerblot)
La révélation sur le gel peut se faire de différentes manières mais nous allons citer que celle
qui utilise le bleu de Coomassie.
5-1) Coloration avec le bleu de coomassie
Le principe repose sur le fait que les protéines plongées dans un milieu acide sont
dénaturées et exposent les groupements azotés qui seront colorés avec le bleu de coomassie.
Le bleu de Coomassie permet de détecter un minimum de 100 ng de protéine et la
coloration est proportionnelle à la quantité de protéines. Néanmoins cette coloration est peu
spécifique car détecte toutes les protéines de manière générale, peu sensible peu couteuse ,
facile et donc très utilisée.

La coloration consiste à préparer la solution de la coloration renfermant les réactifs

suivants
bleu de coomassie à 2,5% (colore les groupement protéiques),
d'isopropanol à 20% ( fixe les protéines)
d'acide acétique à 20% (dénature les protéines les protéines)
d'eau à 57,5%
Le gel sera placé dans la solution de coloration pendant un certain temps et sous agitation de
préférence.
Figure 15 : Gel d électrophorèse coloré avec le bleu de coomassie
5.2) La décoloration
Le gel coloré sera placé dans une solution de décoloration composée des ingrédients
suivants :
Isopropanol ou méthanol 45%
Acide acétique de 10%
E'au 45%
La décoloration est obtenue après plusieurs bains de la solution décolorante
jusqu’apparition des bandes. Le résultat obtenu est représenté par la figure 16.

Figure 16 : Décoloration du gel d’électrophorèse coloré avec le bleu de Coomassie
5.3) Résultat de la révélation de SDS-PAGE

Sont sous forme de bandes
L intensité de la coloration est proportionnel à la quantité de protéines
La position des bandes ou la distance de migration est inversement proportionnelle à la taille
5.4) Exploitation du gel

Pour exploiter le gel il faut déterminer la mobilité relative de chaque protéine, cette
mobilité relative est désignée par « RF » elle est propre à chaque bande et les protéines qui la
composent
Pour calculer la RF
A partir du gel révélé, il faut relever ou mesurer le front de migration qui correspond
la distance de migration d’un colorant inerte (bleu de bromophénol), c est la distance
maximale de migration: désignée par d1 sur la figure 17
A partir du gel révélé, il faut relever d2 qui correspond à la mesure de la distance

de migration de la protéine X ou la distance parcourue par la protéine dans le gel.
Mobilité relative correspond au rapport des deux valeurs d2/ d1

Figure 17 : Illustration de la mobilité relative
5.5) Application de SDS PAGE: Détermination du poids moléculaire
Pour déterminer le poids moléculaire des protéines inconnues à l’aide de la technique SDS-
PAGE il faut faire migrer dans les mêmes conditions et sur le même gel des protéines de
références ou des standards de poids moléculaire connue. Après la migration est la révélation
du gel (voir techniques de révélation).
Pour l’exploiter le gel, il faut relever à partir du gel la distance de migration de chaque
protéine de référence et dresser la courbe étalon. Cette courbe correspond à la représentation
graphique du poids moléculaire en fonction de la distance de migration (voir la figure 14). La
courbe est une droite décroissante car plus la protéine est de faible poids moléculaire
plus elle migrera loin et inversement.

a b
Figure 18 : Electrophorèse SDS-PAGE et l’exploitation de la courbe étalon
Comme le montre la figure 18 b, le report de la distance de migration de la protéine

inconnue à partir du gel sur la courbe étalon et la projection du point sur l’axe des poids
moléculaire permet la détermination du poids moléculaire de la protéine en question.

Polycopié Electrophorèse Master Agro Alimentaire

Transféré par

Informations du document

Titre original

Copyright

Formats disponibles

Partager ce document

Partager ou intégrer le document

Options de partage

Avez-vous trouvé ce document utile ?

Ce contenu est-il inapproprié ?

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Polycopié Electrophorèse Master Agro Alimentaire

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Electrophorèse Master agroalimentaire

Module analyse des biomolécules

Illustration des différentes étapes de déroulement de l’électrophorèse verticale

Année Universitaire 20/21 Page 24 Pr Ghailani Nourouti Naima

3) Supports utilisés en électrophorèse.

Année Universitaire 20/21 Page 25 Pr Ghailani Nourouti Naima

C’est une méthode d’analyse et de fractionnement, basée sur la migration différentielle

Figure 1: Les forces exercées sur une particule chargée

Ve : la vitesse électrophorétique (m.s-1

A partir de la formule précédente (1), nous déduisons que la mobilité

Année Universitaire 20/21 Page 26 Pr Ghailani Nourouti Naima

La force de frottement (f) va s'opposer à la migration de la particule et va la freiner.

f = 6   r Ve (4)  : cœfficient de la viscosité du milieu

Ve /Ee = µ d’où µ = q / 6  r

Selon la formule ci-dessus, la mobilité électrophorétique dépend de plusieurs facteurs,

2-1) Facteurs influençant la mobilité électrohorétique

Année Universitaire 20/21 Page 27 Pr Ghailani Nourouti Naima

À savoir qu’a courant et à voltage précis, plus la concentration en électrolytes du

En électrophorèse la charge de la macromolécule est un critère très important, elle

Pour une protéine, la charge nette dépend de la différence entre le pH du milieu et le

Il existe différents types d’électrophorèse en fonction de la nature du support de la

Année Universitaire 20/21 Page 28 Pr Ghailani Nourouti Naima

- Electrophorèse sur support solide (papier, acétate de cellulose et autres),

Figure 2 : Cuve pour la réalisation d’électrophorèse horizontale

4-1-1) Electrophorèse horizontale sur la bande d’acétate de cellulose

Figure 3 : Illustration d’électrophorèse horizontale

Année Universitaire 20/21 Page 29 Pr Ghailani Nourouti Naima

Figure 4: Les étapes d’électrophorèse sur la bande d’acétate de cellulose

Figure 5: Résultat d’électrophorèse des protéines sériques sur la bande d’acétate de

Année Universitaire 20/21 Page 30 Pr Ghailani Nourouti Naima

4-2) Electrophorèse verticale

Figure 6 : Structure d’acrylamide, de bisacrylamide et la structure du gel de

C % = [poids (Bis acrylamide) / poids(de polyacrylamide)]x 100.

Année Universitaire 20/21 Page 31 Pr Ghailani Nourouti Naima

4-2-3) Relation entre la taille des macromolécules à séparer et la concentration du

Tableau I : La relation entre la concentration du gel et le poids moléculaire des

Polyacrylamide (T%) Poids moléculaire (KDa)

Figure 7: Illustration de la relation entre la concentration du gel, les mailles du réseau

La figure 7 montre que le gel de polyacrylamide est constitués de canalicules sinueux

Année Universitaire 20/21 Page 32 Pr Ghailani Nourouti Naima

Figure 8 : Schéma d’électrophorèse verticale et la séparation en fonction du poids

4.3) Electrophorèse verticale sur gel de polyacrylamide

- Polyacrylamide ,la solution mère à 30% (29.02 :0.8)

Année Universitaire 20/21 Page 33 Pr Ghailani Nourouti Naima

4.3.1.1 ) Définition du gel de concentration

Tris 0,5 M pH 6,8 5 ml

Tris 1,5 M pH 8,8 11,27 ml

Eau distillée 15,4 ml

Année Universitaire 20/21 Page 34 Pr Ghailani Nourouti Naima

Tableau IV : Comparaison entre la composition du gel de séparation et gel de concentration

Solution Gel de séparation

Tris 1,5 M pH 8,8 11,27 ml

Tris 0,5 M pH 6,8 5 ml

SDS 10 % 600 µl 600 µl

Eau distillée 10 ml 15,4 ml

Persulfate d’ammonium 10 % 200 µl 200 µl

. 4.3.1.3 ) Outils nécessaires pour former le gel

Pour confectionner un gel de polyacrylamide, il faut préparer au préalable les solutions

Année Universitaire 20/21 Page 35 Pr Ghailani Nourouti Naima

4-3-2) Electrophorèse de protéines sur un gel de polyacrylamide

Il existe deux types d’électrophorèse sur le gel de polyacrylamide , électrophorèse

4-3-2-1) Native PAGE

Zymorramme d’ alpha amylases