Le système HLA et les

greffes d’organes

MARIE-JOELLE APITHY

LABORATOIRE D’HISTOCOMPATIBILITÉ, STRASBOURG

19/10/21
2
 PLAN
1. Généralités sur le système HLA
2. L’activité au laboratoire « HLA » la recherche d’anticorps: techniques
3. Application à la transplantation d’organe

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1.HLA et transplantation
d’organe: généralités

4
 1.HLA et transplantation
d’organe: généralités
CMH: appelé aussi système HLA chez l’homme (1965 Dausset)

•c’est un ensemble de gènes situés sur le bras court du chromosome 6

codant pour des glycoprotéines
–gènes de classe I : A, B, C
–gènes de classe II : DR, DQ, DP

•polymorphisme(variation antigénique)et leur expression codominante

•il s’agit d’une « véritable carte d’identité biologique»

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 1.HLA et transplantation
d’organe: généralités
-chromosome 6
-très haut degré de
polymorphisme,
-Combinaison Haplotype (1
paternelle et 1 maternelle)
-Expression co-dominante:
-Déséquilibre de liaison:
Ex: l’haplotype A1 B8 DR3

Les gènes du CMH chez l'homme (système HLA) forment un groupe multigénique,
multiallélique et d'expression codominante
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1.HLA et transplantation
d’organe: généralités
Les haplotypes HLA

Expression à la surface des cellules

•Molécules HLA classe I: sur toutes les cellules nucléées

•Molécules HLA classe II: expression restreinte aux cellules
présentatrices d’antigènes (dont les Ly B)

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1.HLA et transplantation
d’organe: généralités

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1.HLA et transplantation
d’organe: généralités

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Molécules du CMH de classe I Molécules du CMH de classe II
Exprimées à la surface de toutes les Exprimées exclusivement à la surface
cellules nucléées des cellules présentatrices d’antigènes

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1.HLA et transplantation
d’organe: généralités

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1.HLA et transplantation
d’organe: généralités

12
1.HLA et transplantation
d’organe: généralités

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 2.L’activité au laboratoire HLA
Le suivi du patient:

➔Typage HLA

➔Recherche d’anticorps anti-HLA

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2.L’activité au laboratoire HLA

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2.L’activité au laboratoire HLA

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2.L’activité au laboratoire HLA

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 2.L’activité au laboratoire HLA
PCR SSP (SEQUENCE SPECIFIC
PRIMERS)
-Amplification avec paires d’amorces spécifiques
d’allèles,Migrations sur gel d’agarose et
interprétation en fonction des bandes
amplifiées obtenues
PCR SSO (SEQUENCES SPECIFICS
OLIGOPROBES)
-Amplification avec paires
d’amorces spécifiques d’allèles
-Dénaturation et hybridation sur des sondes
Spécifiques détectées par CMF
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2.L’activité au laboratoire HLA
NOMENCLATURE

19
2.L’activité au laboratoire HLA
NGS

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2.L’activité au laboratoire HLA
ANTICORPS

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22
23
 La technologie Luminex
LES LIMITES DE LA TECHNIQUE LUMINEX

- Mise en évidence de réactivités non spécifiques

contre des sites cryptiques (antigènes
dénaturés)
- Détection d’anticorps «naturels »
- Effet prozone
- Détection dans le test de routine de toutes les
IgG indépendamment de leur capacité à fixer le
complément
- La reproductibilité intra et inter-laboratoire Le
test n’est pas quantitatif
- L’interprétation ne peut pas se faire uniquement
avec le seuil (intérêt de l’analyse des épitopes)

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2.L’activité au laboratoire HLA

25
2.L’activité au laboratoire HLA
EPREUVE DE COMPATIBILITE
=CROSMATCH

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 2.L’activité au laboratoire HLA
COMPTE RENDU TYPAGE COMPTE RENDU ANTICORPS

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3.HLA et transplantation

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 Transplantation d’organe,
Indications
Déficience de l’organe:

◦ Insuffisance Rénale chronique terminale, en dialyse: meilleure qualité de vie,

survie et coûts avec la tranplantation

◦ Insuffisance hépatique,

◦ Insuffisance cardiaque,

◦ Insuffisance respiratoire,
◦ …

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 HLA et transplantation
Même si le HLA est impliqué
fonctionnellement dans la réponse
immunitaire

Nous nous intéressons ici au HLA

en tant qu’AlloAntigène
(c’est-à-dire comme cible
antigénique)

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31
 Différents types de rejets
humoraux
Rejet Hyper Aigu:
◦ Dans les 24 1er heures voir Immédiat sur table, anticorps préformés
◦ Cause: anti-ABO ou antiHLA préformés
◦ Thrombose des vaisseaux en quelques minutes ou heures après rétablissement de la vascularisation

Rejet Aigu:
◦ Dans les 90 jours

Rejet à médiation cellulaires+++ (Rôle important des LT CD4 de type Th1 avec reconnaissance

des molécules HLA de classe II (HLA-DR++) ou humorales

→ réponse immune de novo

Rejet chronique après plusieurs années:

▪Néphropathie chronique de l’allo-transplantation

▪Réponse immunitaire mixte cellulaire et humorale
▪Diminution de la durée de vie du transplant
▪Mauvaise réponse au traitement

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 Ce que nous voulons éviter à tout
prix:
Le rejet:
– Cellulaire
– Humoral: →la réaction Antigène / Anticorps !

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Diagnostic de rejet humoral
Clinique: augmentation de la
créatininémie  protéinurie
Immunologie: présence
d’anticorps anti HLA dirigés
contre le donneur (DSA)
Histologie: capillarite péri
tubulaire et glomérulite, +/-
présence de C4d sur les
capillaires péritubulaires

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Les allo-anticorps anti-HLA : circonstances
d’apparition

Immunogénicité: probabilité d’induire l’apparition des anticorps HLA :

transplantation > grossesse> transfusion

(déleucocytation des produits sanguins /EFS depuis avril 1998)

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Les anticorps « naturels »

37
Les anticorps non HLA

38
 Quelques chiffres

Arias et al, Transplantation, 2014

Evolution de la survie des greffons entre 1982 et 2010

39
63%

35%

40
 La présence de DSA au moment du
diagnostic de rejet aigu est associé à une
augmentation de la perte du greffon

DSA: souvent le critère le plus précoce

Loupy et al,2012

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La réduction du taux d’anticorps prévient la perte du greffon

Everly et al, 2009, AJT

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 Survie du greffon selon le type
de donneur
Exprimée en demie vie, soit le délai
de la perte de 50% des greffons:

1. Donneur cadavérique: 12 ans

2. Donneur vivant
Impact de la moindre durée d’Ischémie froide
haploidentique: 17 ans du greffon
3. Donneur vivant non
apparenté: 16 ans
4. Donneur vivant HLA identique: Impact compatibilité
30 ans greffon/receveur

43
 La réaction Antigène /
Anticorps
Les Antigènes: Les Anticorps:
◦ ABO Anti-A/B naturels
◦ HLA Anti-HLA (« RAI des lymphocytes »)

Sélection des donneurs et receveurs

1. Groupe sanguin ABO

2. « Groupe » HLA

3. Anticorps anti-HLA

(seuls les « critères immunologiques » sont

cités ici)
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 Groupe sanguin ABO →
transplanter en Isogroupe ABO

Le gène ABO:
◦ 1 locus
◦ 3 allèles A, B et O
soient 6 combinaisons possibles: 4 groupes:
◦ O/O
◦ A/0 ou A/A
◦ B/O ou B/B
◦ A/B

→ Transplanter en Isogroupe ABO, c’est Facile !

45
« Groupe » HLA → transplanter en
Isogroupe HLA (???)

On voudrait bien mais..!

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 On ne choisit pas le HLA du
greffon (solide)
-Cristal (ABM) attribue un
greffon à un receveur, en
fonction –entre autres- de
leurs typages HLA
Même dans le programme
de transplantation à
donneur vivant…
→
¼ de HLA identique dans la
fratrie (mais n’assure pas
l’Isoidentité ABO!!!)

47
L’activité au laboratoire, aspect
chronologique

48
Les différents types d’anticorps
par rapport à la greffe
Les anticorps peuvent être spécifiques du greffon (DSA) ou non
spécifiques
Par rapport au jour de la greffe, les DSA peuvent

◦ Exister avant la greffe : anticorps préformés, ils sont ou pas présents le jour
de la greffe

◦ Etre formé après la greffe : anticorps de novo

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 Si présence d’Anticorps anti-
HLA, 2 situations
Présent déjà en pré greffe: Absent en pré greffe :

Le but est alors de les « éviter »: Le but est de:

transplanter avec un greffon dont prévenir l’apparition des DSA
les antigènes HLA incompatibles ne (Donor Specific Antibody)
correspondent pas aux anticorps du → grâce à l’immunosuppression
receveur
Détecter leur apparition le +
précocement pour induire
un traitement (IS, aphérèse,…)

50
 L’activité au laboratoire, aspect
chronologique

-Inscription sur liste d’attente de transplantation dans Cristal immunologie, logiciel national
d’attribution des greffon (Agence de la biomédecine)

51
 L’activité au laboratoire, aspect chronologique
Avant la greffe :
◦ évaluation des anticorps anti-HLA
avec suivi régulier de
l’immunisation (tous les trois mois
chez les patients immunisés)
◦ Définition:
des spécificités des anticorps : tous les
anticorps de MFI >2000 sont interdits
(Strasbourg)
et des antigènes permis pour le choix du
greffon
◦ évaluation de l’accès à la greffe
Au moment de l’appel de greffe:
◦ Prédiction du résultat du crossmatch
= crossmatch virtuel et réalisation du
crossmatch réel,
◦ Évaluation du risque en cas de greffe
en présence de DSA : valeur de la
MFI, résultat du crossmatch
Si pas d’accès à la greffe : évaluation
de la possibilité d’une
désensibilisation
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Tableau de suivi des MFI+ Maj du dossier immunologique CRISTAL du
patient inscrit sur liste d’attente

Ce qu’on en fait (comment nous exploitons nous les résultats)

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 Receveuse : A2 B7 B27
Donneur : A2 A11 B7 B55
Conjoint : A2 A3 B7 B51

Propositions de greffe :
Donneur HLA-A2 A24 B7 B27 Cw7 Par Luminex SA : B51 B52 B35 B49 B50
Donneur HLA-A1 A3 B7 B8 Cw7 B63 B78 B57 B77 B75 B53 B62 B71 B72
Donneur HLA-A2 B7 B55 Cw7 CW1 B59 B56 B38 B8 A32 A24 A25 A23 Cw9 Cw10

Analyse des épitopes :

163LW : B51 B52 B35 B49 B50 B63 B77 B75
B77 B53 B62 B71 B72 B56 Cw9 Cw10
79RI : B51 B52 B49 B53 B57 B59 B38 A32 A23
A24 A25

54
Organes prélevés sur donneur cadavérique, les
étapes du décès à la transplantation

55
 L’activité au laboratoire, aspect
chronologique
Après la greffe:

◦ Suivi des anticorps pour un dépistage des anticorps de novo

◦ Pour le suivi de l’évolution de « l’intensité » des anticorps:

en cas de greffe en présence de DSA

en cas d’apparition de DSA de novo
Dans le cadre du traitement d’un rejet humoral (diagnostiqué)

56
 Sample ID 16/04/13
12/09/12 16/12/13 29/07/14 21/08/15

PC 7597 12250 12146 15508 13475

NC 167 255 51 278 264

A*01:01 (A1) 21 212 424 670 440

A*02:01 (A2) 5597 7590 8513 12472 16978
A*02:03 (A2) 2135 2866 3510 9975 14522
A*02:06 (A2) 1168 1698 2103 5813 13086
A*03:01 (A3) 17 284 160 781 742
A*11:01 (A11) 311 645 954 1132 1723
A*11:02 (A11) 496 976 702 1121 2450
A*23:01 (A23) 15 91 174 1051 5369
A*24:02 (A24) 74 306 710 1352 4508
A*24:03 (A24) 103 356 518 846 2659
A*25:01 (A25) 0 119 146 582 7623
A*29:01 (A29) 1542 2176 1688 1341 1376
A*29:02 (A29) 1066 1576 1460 1075 1220
A*31:01 (A31) 0 22 54 1734 5185
A*32:01 (A32) 32 210 293 495 10556
A*36:01 (A36) 104 339 353 863 690
A*43:01 (A43) 80 248 357 177 571
A*69:01 (A69) 17 205 269 576 2366
A*74:01 (A74) 29 175 229 286 380
A*80:01 (A80) 566 1320 8482 2155 3577
B*07:02 (B7) 17 183 239 235 4210
B*35:01 (B35) 431 667 922 1135 2266
B*42:01 (B42) 23 195 190 180 3486

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 Intérêt des méthodes sensibles
en pré greffe et post greffe
Meilleure définition de l’immunisation des patients
Définition des spécificités d’anticorps et des antigènes contre lesquels
le patient n’a jamais développé d’immunisation antigènes « permis »
pour le choix du greffon permettant d’évaluer l’accessibilité à la greffe
Crossmatch virtuel
Meilleur accès à la greffe des patients immunisés

Dépistage précoce des anticorps développés après le greffe (Ac de

novo)

Suivi des traitements du rejet humoral de greffe

58
 Stratification du risque
Capacité des DSA à fixer le complément

59
Conclusion

60
 Conclusion
L’interprétation nécessite de connaitre la structure des molécules HLA et leur
polymorphisme, les modes d’apparition des allo Ac
Elle part du principe que le patient ne peut pas développer d’anticorps contre
un antigène (ou des épitopes) qu’il porte.
Elle prend en compte le taux des anticorps évalué approximativement par la
fluorescence ou mieux par des tests en dilution
Elle s’appuie sur la connaissance des épitopes (réactions croisées).
Les résultats doivent être concordants avec les antériorités du patient
Les éléments cliniques (contexte de la demande) sont transmis

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Merci de votre attention…..

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