Responsable du TP/TD: Benhamouche N.

Responsable du Module: Midoun N.

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L’ensemencement: Consiste à disperser l’échantillon
contenant le microorganisme à la surface d’un milieu solide
afin d’obtenir des colonies séparées.

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L'isolement: Consiste à séparer les divers microorganismes
d'un mélange. C’est une technique qui permet de:

Séparer les bactéries d'un échantillon et d'obtenir des

colonies différentes, espacées les unes des autres.

Vérifier la pureté d'une souche étudiée : une souche pure

ne donnera qu'un type de colonie.

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• Colonie : masse visible à l’œil nu de bactéries qui
proviennent toutes d’une même cellule mère (clones)

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Matériel utilisé pour l’ensemencement et
l’isolement :

Une Anse en platine

Une pipette Pasteur
Un écouvillon
Un étaloir

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Aspect des colonies sur Boite

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 I. Ensemencement sur Boîte de Pétri :

1.Ecrire son numéro de poste,

2.La date et l’identifiant du mélange ou de la souche sur le coté
de la boîte.
3.Noter la Température et la durée d’incubation

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Technique des Stries

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 Technique des 4 quadrants
Prélever la suspension bactérienne à l'aide d'une anse ou d'une
pipette Pasteur boutonnée stérilisée en effleurant une colonie isolée
ou en trempant dans la suspension.
Ouvrir la boîte et déposer la pointe de l'anse ou de la pipette au
point initial (partie 1).
Faire des stries serrées sans rayer la gélose sur la partie 1.
Eventuellement, stériliser l’anse si la suspension est trop dense
Tourner la boîte d'un quart de tour et faire des stries serrées sur
la partie 2.
Tourner la boîte d'un quart de tour et faire des stries larges sur la
partie 3.
Stériliser l'anse ou jeter la pipette. Refermer la boîte et la
déposer dans l'étuve, couvercle vers le bas.

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1 2

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L’ensemencement par Etalement
(Etaloir)

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 II. Ensemencement sur Bouillon
 
L’utilisation d’un bouillon permet une pousse rapide et
homogène des bactéries. Cependant, il est impossible de
différencier les différentes espèces bactériennes puisque les cellules
se trouvent en milieu liquide donc mélangée.
 
La technique d’ensemencement  :
 
Stériliser l’instrument servant à prendre la souche bactérienne,
Prélever la souche à ensemencer
Stériliser l’ouverture du tube du bouillon
Ensemencer le bouillon à l’aide de la Pipette Pasteur
Re-stériliser l’ouverture du tube contenant le bouillon
Stériliser la Pipette

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 III. Ensemencement sur gélose
inclinée

Ensemencer toujours de bas en haut par des stries serrées avec

Pipette Pasteur boutonnée ou l’Anse en Platine.

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Technique d’ensemencement sur
gélose inclinée

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Gélose Inclinée

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