1re STL

Fiche technique n22

LE MILIEU HAJNA-KLIGER
1. Intrt
Ce milieu didentification permet de mettre en vidence :
la fermentation du glucose avec ou sans production de gaz
la dgradation du lactose
la production de H2S
Il permet aussi la recherche de la -galactosidase en 2me jour.
2. Composition
Composant

Quantit (g/L)

Rle

Extrait de viande de buf, de

levures, peptones

15

Apport de facteur de croissance, source

dN, de C.

Chlorure de sodium

Maintien de lisotonie

Thiosulfate de sodium
Citrate ferrique
Lactose
Glucose
Rouge de phnol

0,3
0,2
10
1
0,0024

Agar

11

pH

7,1

Lecture dun caractre biochimique

Lecture dun caractre biochimique
Lecture dun caractre biochimique
Indicateur de pH
glifiant

3. Principe
Mise en vidence de la dgradation du glucose et du lactose
Ce milieu contient deux glucides, le glucose et le lactose prsents des concentrations
diffrentes : [glucose] < [lactose]

le glucose est toujours utilis en premier par la bactrie, jusqu puisement car le
glucose inhibe les enzymes ncessaires lutilisation du lactose.

On distingue deux zones dans le milieu :

dans le culot, en anarobiose, le glucose, en faible concentration, est dgrad par la
bactrie par voie fermentative. Sa dgradation entrane la formation de produits
acides. Lacidification au niveau du culot est rvle par le virage de lindicateur color
(le rouge de phnol) sa teinte acide (jaune).

Il y a ventuellement production de gaz (H2 ou CO2) plus ou moins abondants formant des
bulles ou dcollant la glose.
sur la pente, en arobiose, le glucose est dgrad par voie oxydative. Lacidification
produite sera donc faible, dautant que la quantit de glucose prsente est faible.
Deux cas peuvent alors se prsenter :
o la bactrie ne peut pas dgrader le lactose : lorsque le glucose est puis,
elle dgrade alors les peptones entranant la formation de produits basiques.
Lalcalinisation est rvle par le virage de lindicateur color (le rouge de
phnol) sa teinte basique (rouge).
o la bactrie peut utiliser le lactose : aprs puisement du glucose, elle
dgrade le lactose, entranant ainsi la formation de produits acides en grande
quantit. Dans ce cas, lindicateur de pH reste sa teinte acide au niveau de la
pente.
Remarque : une bactrie glucose est forcment lactose -.

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Fiche technique n22

Mise en vidence de la production de H2S

La prsence de thiosulfate de sodium dans le milieu et de fer III permet galement
dapprcier la capacit des bactries produire de lH2S partir du thiosulfate.

le H2S forme un prcipit noir avec le Fer III.

4. Technique densemencement

A partir dune suspension bactrienne, ensemencer

laide dune pipette Pasteur ferme:
o la pente par stries serres
o le culot par piqre centrale

Incuber 24 heures 37C, bouchon dviss

5. Lecture et interprtations

Zone du tube

Caractre
recherch

Observation
Culot
jaune

Interprtation

Acidification du culot

Glucose
Culot
couleur
inchange

Pente
rouge
Pente

(arobiose)

Le glucose a t utilis par voie

fermentative.
La bactrie est dite glucose +

Culot

(anarobiose)

Conclusion

Le glucose na pas t utilis.

Absence dacidification
La bactrie est dite glucose -

Absence dacidification (la

bactrie utilise les peptones
avec alcalinisation du milieu)

Le lactose na pas t utilis.

La bactrie est dite lactose-

Lactose
Pente
jaune

Le lactose a t utilis.
Acidification de la pente
La bactrie est dite lactose +

Production
de gaz
Culot ou
jonction
pente culot

Production
dH2S

Prsence de bulles

Production de gaz

La bactrie produit du gaz en

fermentant le glucose, elle est
dite gaz +

Absence de bulle

Pas de production de gaz

La bactrie est dite gaz -

Prsence dun
prcipit noir

La bactrie a rduit le
thiosulfate de sodium en
H2S qui a form un prcipit
noir avec le fer III

La bactrie est dite H2S +

Absence de
prcipit noir

La bactrie na pas rduit le

thiosulfate de sodium en H2S

La bactrie est dite H2S -