1re STL

Fiche technique n19

LE BOUILLON NITRATE
Recherche de la nitrate rductase

1. Intrt
Ce milieu liquide permet de mettre en vidence la prsence dune enzyme du
mtabolisme nergtique : la nitrate rductase.
2. Composition
Bouillon nutritif additionn de nitrate de sodium (1%)
3. Principe
Dans la respiration nitrate, NO3- est utilis comme accepteur final d'lectrons
provenant de l'oxydation d'un compos organique (ex : glucose). NO3- est
rduit par la nitrate rductase :
soit en nitrite NO2-

(1)

produits oxyds + n e-

Glucose
NO3- + 2 H+ +2 e-

NO2- + H2O

nitrate rductase
(stade nitrites)

soit en diazote N2

(1)

Glucose

produits oxyds + n e-

2 NO3- + 12 H+ + 10 e-

N2 + 6 H2O

nitrate rductase
(stade diazote)

La technique consiste donc :

- mettre en vidence, dans un premier temps, la prsence ventuelle de
nitrites grce au ractif de Griess (nitrite I = acide sulfanilique et nitrite
II = -naphtylamine) qui forme un complexe rouge fonc avec les nitrites.

Remarque : en prsence dautres composs azots (N2), le ractif conserve

sa couleur jaune.

- rechercher, en absence de nitrite, la disparition des nitrates en

ajoutant du zinc qui catalyse la rduction des nitrates en nitrites alors mis
en vidence par le ractif de Griess.

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Fiche technique n19

4. Technique densemencement
Ensemencer le bouillon
bactrienne.
Incuber 24h 37 C.

nitrat

avec

quelques

gouttes

de

suspension

5. Lecture
Aprs 24 heures dincubation 37C :

Vrifier que le bouillon est trouble (prsence de culture)

Ajouter le ractif de Griess (Nitrite I + Nitrite II).
Observer la couleur du milieu.
Ajouter du zinc selon le rsultat de ltape prcdente et interprter la
couleur du milieu.

Observation : coloration rouge

Interprtation : prsence de NO2- issus de la rduction des NO3-

Nitrite I
+ Nitrite II
(ractif de Griess)

Conclusion : NITRATE REDUCTASE + (stade NO2-)

Ajout de
poudre de Zn

Pas de
coloration

Observation : coloration rouge

Interprtation : le Zn a rduit NO3- encore
prsents en NO2- qui sont rvls par les
ractifs. Pas de rduction de NO3- en N2
Conclusion : NITRATE REDUCTASE -

Observation : pas de coloration rouge

Interprtation : pas de prsence de NO2issus des NO3-. Les NO3- t rduits en N2
par la bactrie
Conclusion : NITRATE REDUCTASE +
(stade N2)