Sciences du vivant

La croissance microbienne (suite)

Réaliser un bilan élémentaire (bilan matière)

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 Analyse d’une réaction en bioréacteur
 Caractérisation cinétique : substrats, produits et biomasse
 vitesse moyenne : cinétique globale du bioréacteur/de la réaction : rs, rp, rx
 exemple : rEtOH à quelle vitesse s’accumule l’éthanol au cours d’une bioréaction ?
s’exprime en g EtOH/L/h (se calcule tout au long d’une bioréaction car pas constant)

 vitesse spécifique : cinétique spécifique d’une « unité » cellulaire vs, vp, vx

 Exemple : vETOH : à quelle vitesse le microorganisme (biomasse X) produit-il de
l’éthanol au cours de la bioréaction en gETOH/gX/h (reflète le comportement métabolite
d’un g de biomasse, idem se calcule tout au long de la réaction car variable)

 Caractérisation stœchiométrique : substrats, produits et

biomasse
 Rendement transformation substrat /produit – substrat
biomasse… « Yp/s » ou «  Yx/s »
Ex : Quelle quantité d’EtOH est produit pour un g de substrat consommé ?
 Vérification du bilan élémentaire : C, H, O, N
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 Bilan élémentaire C, H, O, N = bilan matière
Substrat(s) Produit(s)
 Source de Carbone
Quasiment toujours organiques : Très
glucides (glucose/fructose/saccharose) nombreux
Sauf micro algues et quelques bactéries produits :
molécules
 Source d’azote N
organiques
Organiques (acides aminés, peptides)
Ou inorganiques ((NH4)2SO4 dont
biomasse.
 Sources minérales
• Phosphate (via composés avec phosphore
K2HPO4)
• Calcium, Magnésium
• oligo-éléments : sels de Cu, Zn, Co,
Ni, B, Ti 

 Vitamines (selon le cas)

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 Bilan élémentaire C, H, O, N = bilan matière

Substrat(s) Produit(s)
Ex TD : C6H1206  2 CO2 + 2 C2H5OH
(glucose) (Ethanol)

 Équation bilan « modèle » de plus de 10 réactions – (slide 7-8 cours métabolisme)

Ne reflète pas toujours la

réalité
 Bilan élémentaire C, H, O, N = bilan matière

Substrat(s) Produit(s)
Ex TD : C6H1206 + …..  …. CO2 + … C2H5OH + … biomasse + …..
(glucose) + source N

 ne pas essayer de l’équilibrer à la méthode « chimie »

C6H1206 + a …..  b CO2 + c C2H5OH + d biomasse (CwHxOyNz) + e …..

Car :
- Beaucoup plus complexe  bilan de plusieurs dizaines voir centaines de
réactions du métabolisme
- Solution potentielle :
 Risque de ne pas refléter la réalité des stœchiométries des réactions
biologiques
 Si oubli de mesure d’un produit : risque de ne pas s’en rendre compte…
 Bilan élémentaire C, H, O, N = bilan matière

Substrat(s) Produit(s)
Ex TD :… C6H1206 + …..  …. CO2 + … C2H5OH + … biomasse + …..
(glucose) + source N
Réalisation de mesures réelles :
 dosages HPLC, GC pour les molécules g/L
organiques

 Dosage de la biomasse X (micro-

organismes) : mesure du poids secs/ de
la densité optique/ comptage au microscope

 Mesure de gaz de sortie/entrée :

CO2 / O2 (analyseur gaz specto masse, ou
suivi du débit/volume)

Concentrations massiques  concentrations molaires (MM)

 Calcul des Cmoles, Hmoles, Omoles et N moles
Ex TD : C6H1206 + …..  …. CO2 + … C2H5OH + … biomasse + …..
(glucose) + source N

Concentrations molaires de chaque molécule  concentration molaire de

chaque atome …
Ex : si j’ai 9 g/L de glucose consommé, j’aurai 9/180 (MMglucose)= 0,05 mol/L de
glucose consommé .
Donc 0,05 C6H1206
Combien de moles d’atome de C aura-t-on dans ce cas dans le glucose ?
 6 fois plus car j’ai 6 C dans le glucose Donc 6*0,05 mole de C consommé

 On parle alors de Cmoles

 On va faire de même pour tous les substrats et produits, dans chaque

molécule, on recherche le nombre de Cmoles (moles d’atomes de C)

 On va ensuite sommer les C moles « coté Substrats », puis les Cmoles

« coté produits », et vérifier si tout le C en entrée (Substrat) est retrouvé
 Calcul des Cmoles, Hmoles, Omoles et N moles
Ex TD : C6H1206 + …..  …. CO2 + … C2H5OH + … biomasse + …..
(glucose) + source N

Sommer les Cmoles/Hmoles/Omoles/Nmoles en entrée et sortie puis faire

le calcul d’erreur (Entrée-Sortie)/Entrée
Exemple : 2, 15 C moles entrée 2, 20 C moles sortie
0, 41 H moles entrée 0, 20 H moles sortie
1,31 O moles entrée 1, 28 O moles sortie
0, 12 N moles entrée 0, 12 N moles sortie

 Calcul erreur :
• sur le C : (2,15-2,20)/2,15 = -0,023 => 2,3 % erreur (le signe indique juste de quel
coté il manque l’élément)
• Sur le C erreur < 5 %  on valide le bilan C
• De la même façon, les erreurs sur l’O et l’N sont < à 5 %  on valide bilans O et N
• Par contre le bilan H ne sont pas validables… il manque de l’hydrogène en sortie… 
s’interroger à ce moment car soit erreur de mesure, soit potentiel produit non
comptabilisé qui pourrait être valorisé comme co-produit…
 A vous….
 
On utilise une bactérie du genre Klebselliae pour produire industriellement du butanediol (2,3
BDO utilisé comme additif dans l’essence) à partir de glucose en aérobiose. Le volume mis en
jeu est de 100 litres. Les dosages réalisés en début et fin de fermentation donnent :
 
Début Fin
glucose 100 g/L 1 g/L
NH3 1 g/L non dosé
Biomasse 0.1 g/L 5 g/L
butanediol 0 g/L 49 g/L
CO2 0 51 g/l
 
On accepte pour la biomasse la formule brute suivante : CH1.73N0.24 O0.43.
On rappelle : glucose : C6H12O6 ; butanediol : C4H10O2.
 
3.1 : Faire le bilan matière sur le carbone. Commenter 
3.2 : Calculer la quantité de source d’azote qui a été consommée au cours de la réaction
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 indications
1.
a. Regarder tout ce qui est substrat consommé contenant du C  comme
sur la slide 7, le convertir en « C mol »
Ex : pour le glucose : 99 g/L consommé (100 -1)
b. Le passer En mol/L cela fait 99/180 =0,55 mol/ L de glucose (180 est la
masse molaire du glucose)
c. On regarde ensuite les moles de C du glucose et on calcule ainsi les
Cmoles  comme 6 C dans le glucose : 6* 0,55 =3,3 Cmol consommé
 Pas autres substrats contenant du C
d. Regarder en sortie et appliquer la même méthode : attention ici 3
produits, donc il faut calculer les Cmoles de chacun puis les additionner.
(0,20 Cmole pour biomasse; 1,16 Cmole pour CO2; 2,18 Cmoles pour
butanediol  attention bien penser que le butanediol à 4 C)
donc en sortie 3,54 Cmoles produites
e. Enfin réaliser le calcul erreur (E-S)/E (cf slide 8), et conclure  ici l’erreur
est inférieur à 10 %  le bilan carbone boucle … on peut conclure sur la
répartition du C dans les différents produits
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2. On a ici le raisonnement « inverse », on recherche en la quantité de NH3
consommé…
En terme de production, la seule molécule contenant de l’azote est la
biomasse, on calcule donc le nombre de Nmoles formée…
4,9 g/L biomasse formée, soit 0,20 moles/L, soit 0,048 Nmoles/L d’azote
formée (d’après la formule brute de la biomasse)
Ce qui veut dire qu’en entrée, on s’attend à trouver 0,048 Nmoles/L
consommée.
La seule source de N est le NH3, comme N=1 dans la formule brute, cela
revient à 0,048 moles/L de NH3. Si on le transforme en concentration
massique, cela représente 0,816 g/L de NH3 consommé…
(et donc comme il y en avait 1g/L en entrée, la valeur en sortie sera de
0,184 g/L)

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