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CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE

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1.Dfinition et appareillage.
La chromatographie sur couche mince (CCM) repose principalement sur des phnomnes dadsorption : la phase mobile est un solvant ou un mlange de solvants, qui progresse le long dune phase stationnaire fixe sur une plaque de verre ou sur une feuille semi-rigide de matire plastique ou daluminium. Aprs que lchantillon ait t dpos sur la phase stationnaire, les substances migrent une vitesse qui dpend de leur nature et de celle du solvant. Les principaux lments dune sparation chromatographique sur couche mince sont : la cuve chromatographique : un rcipient habituellement en verre, de forme variable, ferm par un couvercle tanche. la phase stationnaire : une couche denviron 0,25 m de gel de silice ou dun autre adsorbant est fixe sur une plaque de verre laide dun liant comme le sulfate de calcium hydrat (pltre de Paris) lamidon ou un polymre organique. lchantillon : environ un microlitre (l) de solution dilue ( 2 5 %) du mlange analyser, dposer en un point repre situ au-dessus de la surface de lluant. lluant : un solvant pur ou un mlange : il migre lentement le long de la plaque en entranant les composants de lchantillon. 2.Principe de la technique. Lorsque la plaque sur laquelle on a dpos lchantillon est place dans la cuve, lluant monte travers la phase stationnaire, essentiellement par capillarit. En outre, chaque composant de lchantillon se dplace sa propre vitesse derrire le front du solvant. Cette vitesse dpend dune part, des forces lectrostatiques retenant le composant sur la plaque stationnaire et, dautre part, de sa solubilit dans la phase mobile. Les composs se dplacent donc alternativement de la phase stationnaire la phase mobile, laction de rtention de la phase stationnaire tant principalement contrle par des phnomnes dadsorption. Gnralement, en chromatographie sur couche mince, les substances de faible polarit migrent plus rapidement que les composants polaires. 3. Applications de la CCM. Lorsque les conditions opratoires sont connues, elle permet un contrle ais et rapide de la puret dun compos organique. Si lanalyse, ralise avec divers solvants et diffrents adsorbants, rvle la prsence dune seule substance, on peut alors considrer que cet chantillon est probablement pur. De plus, tant donn que la chromatographie sur couche mince indique le nombre de

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composants dun mlange, on peut lemployer pour suivre la progression dune raction. 4. Adsorbants et plaques chromatographiques. Par ordre dimportance dcroissante, les adsorbants employs en CCM sont : le gel de silice, lalumine, le kieselguhr et la cellulose. Les plaques vous seront fournies prtes lemploi. 5. Choix de lluant. Lluant est form dun solvant unique ou dun mlange de solvants. Un luant qui entrane tous les composants de lchantillon est trop polaire ; celui qui empche leur migration ne lest pas suffisamment. Choix de lluant dans le cas danalyses : dhydrocarbures : hexane, ther de ptrole ou benzne. de groupements fonctionnels courants : hexane ou ther de ptrole mlangs en proportions variables avec du benzne ou de lther dithylique forment un luant de polarit moyenne. de composs polaires : thanoate dthyle, propanone ou mthanol. 6. Dpt de lchantillon. Lchantillon est mis en solution (2 5 %) dans un solvant volatil, qui nest pas forcment le mme que lluant : on emploie frquemment le trichloromthane (chloroforme), la propanone ou le dichloromthane. La solution est dpose en un point de la plaque situ environ 1 cm de la partie infrieure. Il est important que le diamtre de la tache produite au moment du dpt soit faible; idalement, il ne devrait pas dpasser 3 mm. Ce sont gnralement les dpts les moins tals qui permettent les meilleures sparations. Pour augmenter la quantit dpose, il est toujours prfrable deffectuer plusieurs dpts au mme point, en schant rapidement entre chaque application plutt que de dposer en une seule fois un grand volume dchantillon qui produirait une tache plus large. Lchantillon est dpos laide dune micropipette ou dun tube capillaire en appuyant lgrement et brivement lextrmit de la pipette sur la couche dadsorbant en prenant soin de ne pas le dtriorer. On vrifie lidentit des composants prsums dun chantillon, en procdant un dpt spar dune solution de chacun deux puis celui de leur mlange. Ces solutions

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tmoins permettent de comparer la migration de chaque compos avec celle de lchantillon analyser. 7. Dveloppement de la plaque. Le dveloppement consiste faire migrer le solvant sur la plaque. Dans les analyses usuelles de laboratoire, le principal type de dveloppement est la chromatographie ascendante : la plaque est place en position verticale dans une cuve et le solvant qui en recouvre le fond monte par capillarit. Le niveau de liquide est ajust environ 0,5 cm du fond de la cuve puis on introduit la plaque. Pendant le dveloppement du chromatogramme, la cuve doit demeurer ferme et ne pas tre dplace. Lorsque la position du front du solvant arrive environ 1 cm de lextrmit suprieure, la plaque est retire de la cuve, le niveau atteint par le solvant est marqu par un trait fin, puis la plaque est sche lair libre ou laide dun schoir. 8. Rvlation. Lorsque les composants de lchantillon analys sont colors, leur sparation est facilement observable sur la plaque ; dans le cas contraire, on doit rendre les taches visibles par un procd de rvlation. Les taches sont ensuite cercles au crayon. Les mthodes usuelles de rvlation sont les suivantes : radiations UV , fluorescence , iode , atomisation. Sauf indications contraires, nous utiliseront les radiations UV. En exposant la plaque une source de radiation UV, certains composs apparaissent sous forme de taches brillantes. Si un indicateur fluorescent est incorpor ladsorbant, la plaque entire devient fluorescente lorsquelle est soumise une radiation UV ; les composs y sont rvls sous forme de taches sombres. 9. Calcul de Rf (retarding factor ou rapport frontal).

di : distance parcourue par le compos (mesur au centre de la tache) ds : distance parcourue par le front du solvant 10. Description dune analyse par CCM selon lordre chronologique.

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Prparation de la cuve chromatographique. Introduire lluant ou le mlange de solvants. Ajuster le niveau environ 0,5 cm du fond de la cuve. Garnir lintrieur de la cuve dun papier filtre imprgn dluant et plaqu contre les parois ; une ouverture est mnage dans le filtre pour observer le dveloppement du chromatogramme. Fermer le rcipient (la cuve doit tre sature de vapeur de solvant) Dpt de lchantillon sur la plaque. Procder au nettoyage de la plaque si ncessaire. Dissoudre lchantillon dans un solvant appropri en solution de 2 5 % . Dposer environ 0,5 ml de la solution en un point situ 1 cm de lextrmit infrieure de la plaque; le diamtre de la tache doit tre denviron 2 mm pour la disposition de plusieurs produits. Scher laide dun schoir ; ventuellement faire de nouvelles applications. Dveloppement du chromatogramme. Placer la plaque dans la cuve en position verticale. Refermer le rcipient qui ne doit plus tre dplac. Lorsque le front du solvant se trouve environ 1 cm de lextrmit suprieure de la plaque, la retirer et marquer cette position. (le trait peut tre trac lavance et servir de repre pour arrter llution). Rvlation et calcul de Rf. Scher la plaque laide dun schoir Rvler les taches sous une lampe U V Cercler les taches et pointer leur centre. Calculer les Rf