Contribution A Letude Phytochimique Et Activites Biologiques Des Extraits de La Plante Ruta Chalepensis (Fidjel) de La Region DAinTemouchent

REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE
MINISTERE DE LENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE

UNI VERSI TE ABOU BEKR BELKAI D TLEMCEN
FACULTE DES SCI ENCES DE LA NATURE ET DE LA VI E ET DES SCI ENCES
DE LA TERRE ET DE LUNIVERS
DEPARTEMENT DE BI OLOGI E

MEMOIRE EN VUE DE LOBTENTION DU DIPLOME
DE MAGI STER EN BI OLOGI E

Option : Produits naturels : Activits biologiques et synthses

Prsente par

ATTOU Amina

Contribution ltude phytochimique et activits
biologiques des extraits de la plante Ruta chalepensis
(Fidjel) de la rgion dAin Tmouchent

Soutenue publiquement le devant le Jury compos de :

Prsident Mme. ATIK ne BEKKARA F. Professeur
Promoteur Mr. BENMANSOUR A. Professeur
Examinateur Mr. LAZOUNI H.A. Matre de confrences
Examinateur Mr. ABDELOUAHED D. Professeur

Anne universitaire : 2010-2011

i

RESUME

Notre travail porte sur ltude de la phytochimie et des activits antioxydant et antimicrobienne de
Ruta chalepensis de quatre stations de la wilaya dAin Tmouchent.
Ruta chalepensis L. est une plante aromatique, appartenant la famille des rutaces, appele
communment par la population locale Fidjel . Elle est spontane, largement rpandue en Afrique du
nord, particulirement en Algrie.
La rue est une plante aromatique mdicinale encore utilise dans la mdecine traditionnelle de
nombreux pays comme laxatif, anti-inflammatoire, analgsique, antispasmodique, abortif,
antipileptique, emmnagogue et pour le traitement de pathologies cutanes.
Le screening phytochimique a mis en vidence la prsence de coumarines, flavonodes, dalcalodes,
tanins et de strols et triterpnes. Cette richesse est confirm par des rendements comprises entre 5.7-
32.15%, 1-5.6% et 0.26-2.39 successivement pour les extraits bruts, des flavonodes et des alcalodes
qui sont extrait partir des trois parties de la plante par des solvants appropris (le mthanol absolue
pour lextrait bruts, mlange alcool/eau 70% et lactate dthyle/eau : V/V pour lextraction des
diffrents types de flavonodes mise en vidence, extraction par lacide actique/thanol 10% des
alcalodes puis leur prcipitation par lammoniac).
Les extraits bruts, flavoniques et alcalodiques ont montrs des pouvoirs moyens de rduction de Fer
et de pigeage de radical libre DPPH. Les IC50 sont comprises entre 1 et 12 mg/ml.
Les huiles essentielles de la parie arienne de la plante, obtenues par hydrodistillation ont rvls des
rendements importants (avant floraison : 0.40-1.80, pendant floraison : 0.48-1.90) comparativement
parlant aux tudes ralises sur la mme espce dans dautres pays.
Les huiles essentielles des quatre stations ont de bonnes activits antibactriennes. Lhuile essentielle
de la station dAin Tolba est la plus active contre Pseudomonas sp (19 mm de diamtre dinhibition).
Celle de la station de Sidi Safi est la plus active contre Staphylococcus sp et Candida albicans, et celle
de Beni Rhanane est plus active contre Bacillus sp et Escherichia sp (CMI de 15 et 125 g/ml
successivement).

Mots cls : Ruta chalepensis, mtabolites secondaires, huile essentielle, pouvoir antioxydant, FRAP,
pigeage du DPPH, activit antimicrobienne.

ii

SUMMARY

Our work focuses on the study of phytochemicals, antioxidant and antimicrobial activities of
Ruta chalepensis from four stations in the wilaya of Ain Temouchent.

Ruta chalepensis L. is an aromatic plant belonging to the family of Rutaceae, commonly called by
locals Fidjel. It is spontaneous, largely spread in North Africa, especially Algeria.

The rue is a medicinal aromatic plant still used in traditional medicine in many countries as a
laxative, anti-inflammatory, analgesic, antispasmodic, abortifacient, antiepileptic, emmenagogue and for
the treatment of skin diseases.

The phytochemical screening revealed the presence of coumarins, flavonoids, alkaloids, tannins and
sterols and triterpenes.

The preparation of crude extracts, of flavonoids and alkaloids from the three parts of the plant by
specific solvents and the extraction of essential oil of the whole plant have revealed significant returns.

These extracts (crude extracts, flavonoids and alkaloids) have shown a medium powers to reduce
Iron and free radical scavenging (DPPH), which means the IC50 is between 1 and 12 mg / ml.
The essential oil of the four stations has a good antibacterial activity against several species including
Bacillus sp, Escherichia sp, Staphylococcus sp and even against Pseudomonas sp, especially the
essential oil of the station of Ain Tolba. The essential oil of Sidi Safi has the most activity against
Staphylococcus sp and Candida albicans and the Beni Rhananes one is the most active against
Bacillus sp and Escherichia sp.

Keywords: Ruta chalepensis, secondary metabolites, essential oil, antioxidant power, FRAP, free radical
scavenging DPPH, antimicrobial activity.

iii

.

Rutaces
.

.

.

.

( )
( DPPH ) 00 1 12 / .

.

: .

iv

DEDICACE

A mes parents,
Pour vos mains qui ont tant travailles,
Pour votre cur qui ma tant donn
Pour votre sourire qui ma tant rchauff,
Pour vos yeux qui furent parfois mouills,
Pour vous qui mavez tant aim.
A mes surs : Amel, Ghania, Soria et Aicha.
A mes frres: Djamel, Amar et Larbi.
A mes belles surs.
A mes beaux frres.
A mes neveux et nices.
A mes amies que jai vcu avec elles des beaux moments au cours de mon cursus luniversit: Aicha,
Asmaa, Imene, Nadia, Wafaa,
Sans oublier : Zahera, Latifa et Naziha
A mes amies de la promotion de magister de Produits Naturelles : Ikram, Khadidja, Meriem, Nabila et
Malika.
A: Wahiba, Nacera, Fouzia, Meriem, Ilham, Tarek et Yasser
A tous qui me connaisse de prs ou de loin.

v

REMERCIEMENTS

La connaissance est la seule chose qui saccrot lorsquon la partage .

Avant toute chose, je remercie Dieu, le tout puissant, pour mavoir donne la force et la patience.

.
Jadresse tout dabord mes sincres remerciements Monsieur le Professeur BENMANSOUR
Abdelhafid. Merci davoir accept de diriger cette thse au sein du laboratoire de Produits Naturelles :
activits biologiques et synthse lUniversit Abou Bekr Belkaid Tlemcen. Merci pour votre
encadrement sans faille tout au long de ces trois annes.

A Madame CHAOUCHE ne HADDOUCHI Farah, quil fut agrable et motivant davancer
dans ce long et prilleux travail de thse mais tellement enrichissant et stimulant avec toute ta
bienveillance, ta disponibilit, et ton savoir.

Je remercie le Professeur ATIK ne BEKKARA F. davoir accept de prsider mon jury de thse.
Quil soit assur de ma plus entire reconnaissance pour mavoir accueilli au sein de son laboratoire.

Je remercie vivement Mr. LAZOUNI H.A. maitre de confrences luniversit de Tlemcen pour
avoir accept de juger ce travail et de faire partie du jury de cette thse. Cest un trs grand honneur et
un trs grand plaisir davoir pu faire votre connaissance et de pouvoir aujourdhui vous soumettre mes
travaux de recherche.

Jadresse mes profonds remerciements Mr. ABDELOUAHED D. pour avoir accept de juger ce
travail et de faire partie de mon jury de thse. Consciente de vos nombreuses responsabilits, je suis
particulirement touche du temps que vous mavez accord.

Cest un grand merci que jadresse tous les membres du Laboratoire de Produits Naturelles :
activits biologiques et synthse de lUniversit de Tlemcen pour leur gentillesse, leur coute et leurs
conseils: Professeurs, matres de confrences, techniciens et secrtaires et tudiants.

***

Je remercie tout particulirement ma famille qui ma toujours soutenu dans mes choix, et qui t
prsente chaque fois que cela a t ncessaire. Merci Maman, Merci Papa, Merci mes Surs, mes
Frres. Cest avec vous que jai partag mes joies, mes peines, vous mavez soutenu grce votre
prsence, votre sourire, votre amiti.

Et enfin, il y a les compagnons de route, ceux avec qui lon partage les joies du quotidien, les doutes,
je suis heureuse de vous avoir rencontr. Un grand merci Aicha, Asmaa, Imene, Nadia, Wafaa,
Zahera, Latifa et Naziha. A ma promotion de magister, et tous les tudiants du Laboratoire de
Produits Naturelles Tlemcen.
f

vi

LISTE DES TABLEAUX

Tableau n 1: Les diffrentes classes des composs phnoliques. 9
Tableau n 2: Les principales espces oxygnes ractives gnres dans les systmes
Biologiques. 31
Tableau n3 : Situation gographique des quatre stations dtude. 37
Tableau n 4: Les souches microbiennes. 48
Tableau n 5: Influence du lieu de rcolte et la partie de la plante sur la teneur
en eau (exprime en %). 50
Tableau n 6: Les groupes chimiques dans la poudre de feuilles de Ruta
dans les 4 stations dtudes. 51
Tableau n 7: Les groupes chimiques caractristiques de la poudre de tige
des quatre stations. 51
Tableau n 8: Les groupes chimiques dans la poudre de fleur. 52
Tableau n 9: Rendement en extraits bruts. 53
Tableau n 10: Rendements en extraits flavoniques (%). 54
Tableau n 11: Rendements en extraits alcalodiques. 54
Tableau n 12: Rendement en huile essentielle (en %). 55
Tableau n 13: Les indices physicochimiques de lhuile essentielle de Ruta chalepensis. 56
Tableau n 14: les indices physicochimiques de lhuile essentielle de R.chalepensis
de la rgion de Tlemcen (Beni Mester) obtenus par ltude de MERGHACHE et al, 2009. 56
Tableau n 15: Valeurs des IC50 (en mg/ml) des extraits de Ruta chalepensis et de
lAcide Ascorbique. 64
Tableau n 16: Les souches microbiennes. 67
Tableau n 17: Les diamtres des zones dinhibition des diffrentes souches (en mm)
par la mthode de disques. 67
Tableau n 18: Concentration minimale inhibitrice (CMI) des huiles essentielles
des quatre stations. 68
Tableau n 19: Classification biochimique des huiles essentielles. 88

vii

LISTE DES FIGURES

Figure n1 : Ruta chalepensis. 5
Figure n 2: Classification biogntique des alcalodes des Rutaces. 7
Figure n3 : La rutine. 8
Figure n 4: Biosynthse des terpnes. 10
Figure n 5: Biosynthse des composs azots. 10
Figure n 6: Biosynthse des mtabolites secondaires. 11
Figure n7: Structure des diffrentes classes des flavonodes. 12
Figure n8: Lorigine biosynthtique du squelette flavonique. 12
Figure n 9: Biosynthse des flavonodes. 13
Figure n10: Schma gnral de synthse dalcalodes. 17
Figure n11: Schma des tapes de lhydrodistillation. 21
Figure n12: Principe schmatis de lappareillage dextraction par entranement
la vapeur de leau. 22
Figure n13 : Schma du systme dextraction CO2 des solides. 23
Figure n 14: Formation dIPP par la voie de lacide mvalonique. 24
Figure n 15: Formation dIPP partir du deoxyxylulose phosphate. 25
Figure n16 : Biosynthse des terpnes partir dIPP. 26
Figure n17 : Le passage entre les diffrents types de terpnes. 26
Figure n18: Illustration de la mthode des aromatogrammes sur bote de Ptri. 28
Figure n19 : Illustration de la mthode des microatmosphres. 29
Figure n20 : Les principales sources cellulaires des espces oxygnes ractives. 32
Figure n21: Cibles biologiques et endommagement oxydatifs induits par les
espces oxygnes ractives. 33
Figure n22: Rgulation de la production despces ractives de loxygne par
les systmes de dfenses antioxydants. 34
Figure n23 : Schma du mcanisme ractionnel invoqu dans
la dtoxification enzymatique. 35
Figure n 24: La carte de situation des diffrentes zones dtudes. 37
Figure n 25: Protocole dextraction des flavonodes. 41
Figure n26 : Protocole dextraction des alcalodes. 42
Figure n27: Schma dutilisation dune microplaque. 49
Figure n 28: Pouvoir rducteur des extraits bruts et de lacide ascorbique. 57
Figure n 29: Pouvoir rducteur des extraits flavoniques et de lacide ascorbique. 57
Figure n 30: Pouvoir rducteur des extraits alcalodiques et de lacide ascorbique. 58
viii

Figure n 31: Pouvoir rducteur de tous les extraits de Ruta chalepensis. 58
Figure n 32: Raction dun antioxydant avec le radical DPPH. 59
Figure n 33: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH de lAcide Ascorbique. 59
Figure n 34: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH des extraits bruts des tiges. 60
Figure n 35: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH des extraits bruts des feuilles. 60
Figure n 36: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH des extraits bruts des fleurs. 61
Figure n 37: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH des extraits flavoniques
des tiges. 61
des feuilles. 61
des fleurs. 62
Figure n 40: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH des extraits alcalodiques
des tiges. 62
des feuilles. 63
des fleurs. 63
Figure n 43: Les IC50 des diffrents extraits de Ruta chalepensis et de lacide ascorbique. 64
Figure n 44: Biogramme aromatique. 87
Figure n 45: Distillateur de lre moyenne. 87

LISTE DES PHOTOS
Photo n1: Montage dhydrodistillation. 43
Photo n 2: Rduction du fer ferrique en fer ferreux. 47
Photo n 3: Raction de cyanidine positive. 91
Photo n 4: Raction de WAGNER et MAYER positive. 91
Photo n 5: Raction de Stiasny positive pour les tanins catchiques. 91
Photo n 6: Raction de Lieberman-Burchard positive. 91
Photo n 7: Spectrophotomtre. 92
Photo n 8: Rotavapor. 92
Photo n 9: Centrifugeuse. 92
Photo n 10: Balance analytique. 93
Photo n 11: Etuve. 93
Photo n 12: Activit huile essentielle contre Bacillus cereus. 94
Photo n 13: Activit huile essentielle contre Escherichia coli. 94
ix

Photo n 14: Activit huile essentielle contre Pseudomonas aeruginosa. 95
Photo n15: Microplaque avec les CMI. 89
Photo n16: Station dAin Tolba. 90
Photo n17: Station de Sidi Safi. 90
Photo n18: Station de Beni Rhanane. 90
Photo n19: Station de Sidi Ben Adda. 90
Photo n20: Les huiles essentielles des quatre stations. 91
Photo n21: Extraits bruts de tige (T), feuille (F) et fleur (Fl) de la station
de Sidi Ben Adda (4). 91
Photo n22: Extraits flavoniques de tige (T), feuille (F) et fleur (Fl) de la station
de Sidi Safi (2). 91
Photo n23: Extraits alcalodiques de tige (T), feuille (F) et fleur (Fl) de la station
de Sidi Ben Adda (4). 91
Photo n24: Tous les extraits raliss sur Ruta chalepensis. 92

LISTE DES ABREVIATI ONS
O.M.S : Organisation Mondiale de la Sant
DPPH : 2,2-diphnyle-1-picrylhydrazyl
% : Pourcent
m : Mtre
cm : Centimtre
CO
2
: Dioxyde de carbone
INSA : Institut Scientifique dAromatologie
H.E.B.B.D : Huile Essentielle Botaniquement et Biochimiquement Dfinie
IPP : Isopentenyl pyrophosphate
C : Degr Celsius
K
+
: Ion potassium
ATPase: Adnosine triphosphatase
AMP: Adnosine monophosphate
ADP: Adnosine diphosphate
ADN: Acide dsoxyribonuclique
ARN: Acide ribonuclique
O
2
: Anion superoxyde
OH
: Radical hydroxyle
NO
: Monoxyde dazote
H
2
O
2
: Peroxyde dhydrogne
x

HOCl: Acide hypochlorique
1
O
2
: Oxygne singulier
ONOO: Peroxynitrite
RO: Radical alcoxy
ROO: Radical peroxy
SOD: Superoxyde dismutase
CAT: Catalase
GPx: Glutathion peroxydase
GSH: Glutathion
GR: Glutathion rductase
H
2
O
2
: Eau oxygn
Fe : Fer
Cu : Cuivre
Mn : Manganse
CAT : Catalase
NADPH: Nicotinamide adnine dinuclotide phosphate
Fe
2+
: Fer ferreux
Fe
3+
: Fer ferrique
Cu
2+
: Ion cuivrique
Cu
+
: Ion cuivreux
UV: Ultra violet
g : Gramme
ml: Millilitre
H
2
SO
4
: Acide sulfurique
KI: Iodure de potassium
HgCl
2
: Chlorure de mercure
I
2
: Iode
N: Normal
mn: Minute
NH
4
OH: Ammoniac
FeCl
3
: Chlorure de fer
NaOH: Hydroxyde de sodium
HCl : Acide chlorhydrique
T : Temprature
m/V : Masse Volume
V/V : Volume Volume
xi

KHz : Kilohertz
NaHCO
3
: Bicarbonate de sodium
mole/l : Mole par litre
FRAP: Ferric Reducing Antioxidant Power
nm: Nanomtre
M: Molaire
K
3
Fe (CN)
6
: Ferricyanure de potassium
H
2
O : Eau
l : Microlitre
IC
50
: Concentration inhibitrice de 50 %
NCCLS: National Committee for Clinical Laboratory Standars
UFC : Unit formant colonie
g : Microgramme
mm : Millimtre
CMI : Concentration minimale inhibitrice
CA-SFM: Comit de lAntibiogramme de la Socit Franaise de Microbiologie.
DMSO: Dimethylsulfoxide
IM: Indice de Mousse
CG: Chromatographie en phase gazeuse
CG/SM: Chromatographie en phase gazeuse couple la spectromtrie de masse

xii

TABLE DE MATIERES

Rsum i
Ddicace iv
Remerciement v
Liste des tableaux vi
Liste des figures vii
Liste des photos viii
Liste des abrviations ix
Table de matires xii
Introduction 1
Premire partie : Synthse bibliographique
Introduction la phytothrapie 2
I. Description de plante 3
1. Rutaceae 3
2. Ruta (rue) 3
3. Ruta chalepensis 4
4. Systmatique 5
5. Usage et toxicit 6
6. Composition chimique 7
II. Mtabolites secondaires 9
1. Dfinition et fonction 9
2. Classification des mtabolites secondaires 9
2.1. Les composs phnoliques 9
2.2. Les isoprnodes : (strodes et terpnodes) 10
2.3. Les composs azots (drivs des acides amins) : alcalodes 10
3. Biosynthse des mtabolites secondaires 11
4. Les flavonodes 11
4.1. Dfinition, classification et biosynthse 11
4.2. Proprits pharmacologiques des flavonodes 14
5. Les alcalodes 15
5.1. Dfinition, classification et distribution des alcalodes 15
5.2. Activits pharmacologiques 16
5.3. Biosynthse des alcalodes 17
6. Les huiles essentielles 18
6.1. Introduction laromathrapie 18
xiii

6.2. Quest-ce quune huile essentielle? 19
6.3. Comment utiliser les huiles essentielles? 20
6.4. Les mthodes dextraction 21
6.4.1. Lhydrodistillation 21
6.4.2. Extraction par entranement la vapeur deau 22
6.4.3. Lexpression au solvant volatil 22
6.4.4. Expression froid 22
6.4.5. Lenfleurage 23
6.4.6. Lextraction au CO
2
supercritique 23
6.5. Critres de qualit des huiles essentielles 23
6.6. La biosynthse 24
6.7. Proprits pharmacologiques des huiles essentielles 27
6.7.1. Activit antimicrobienne lie la composition chimique 27
6.7.1.1. Lvaluation de lactivit antibactrienne des huiles essentielles 27
6.7.1.2. Les principes actifs antibactriens 29
6.7.1.3. Le mode daction antimicrobienne des huiles essentielles 30
III. Radicaux libres et antioxydants 31
1. Les radicaux libres dans les systmes biologiques 31
2. Implications pathologiques des espces oxygnes ractives 32
3. Stress oxydant et ses consquences biologiques 33
4. Les antioxydants 33
4.1. Systmes enzymatiques 34
4.2. Systmes non enzymatiques 35
5. Antioxydants naturels 35
5.1. Les flavonodes 35
5.2. Les tanins 36
5.3. Les coumarines 36
5.4. Les phnols 36
5.5. Les xanthones 36
Deuxime partie : Matriels et mthodes
I. Le matriel vgtal 37
II. Les tests phytochimiques 38
1. La teneur en eau 38
2. Les alcalodes 38
3. Les drivs anthracniques 39
4. Les saponosides 39
xiv

5. Les coumarines 40
6. Les strols et triterpnes 40
7. Les tanins 40
8. Les flavonodes 40
8.1. Anthocyanes 40
8.2. La raction la cyanidine 40
III. Lextraction des principes actifs 41
1. Prparation de lextrait brut 41
2. Prparation de lextrait flavonique 41
3. Prparation de lextrait alcalodique 42
4. Lextraction dhuile essentielle 43
IV. Les indices physicochimiques des huiles essentielles 44
1. Les indices chimiques 44
1.1. Lindice dacide 44
1.2. Lindice dester 44
1.3. Lindice de peroxyde 45
2. Les indices physiques 45
2.1. La miscibilit lthanol 45
2.2. La densit relative 20 C 45
2.3. Lindice de rfraction 46
V. Lvaluation de lactivit antioxydante 47
1. Rduction du fer : FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power) 47
2. Pigeage du radical libre DPPH (2,2-diphnyle-1-picrylhydrazyl) 47
VI. Tests de lactivit antimicrobienne 48
1. Souches 48
2. Evaluation de lactivit sur milieu glos 48
3. Dtermination des CMI (concentration minimale inhibitrice) 49
Troisime partie : Rsultats et discussion
I. Phytochimie de Ruta chalepensis 50
1. Teneurs en eau 50
2. Groupes chimiques caractriss 50
3. Rendement des extractions 53
3.1. Extrait brut mthanolique 53
3.2. Extraits flavoniques 54
3.3. Extraits alcalodiques 54
3.4. Huile essentielle 55
xv

4. Les indices physicochimiques de lhuile essentielle de Ruta chalepensis 56
II. Tests, in vitro, de lactivit antioxydante 57
1. Rduction du fer (FRAP) 57
2. Pigeage du radical libre DPPH (2,2-diphnyle-1-picrylhydrazyl) 59
2.1. Acide ascorbique 59
2.2. Extraits bruts mthanoliques 60
2.3. Extraits flavoniques 61
2.4. Extraits alcalodiques 62
3. Calcul des IC50 64
4. Conclusion de lactivit antioxydante 65
III. Evaluation de lactivit antibactrienne 67
Conclusion 70
Rfrences bibliographiques 71
Annexes 82
50

1

u travers des ges, lhomme a pu compter sur la nature pour subvenir ses besoins de base tel
que, nourriture, abris, vtements et aussi pour ses besoins mdicaux. Les plantes possdent
dextraordinaires vertus thrapeutiques. Leurs utilisations pour le traitement de plusieurs maladies chez
les tres vivants et en particulier lhomme est trs ancienne et a toujours tait faites de faon empirique
(SVOBODA et SVOBODA, 2000).
De nos jours, nous comprenons de plus en plus, que les principes actifs des plantes mdicinales sont
souvent lis aux produits des mtabolites secondaires. Leurs proprits sont actuellement pour un bon
nombre reconnue et rpertori, et donc mises profit, dans le cadre des mdecines traditionnelles et
galement dans la mdecine allopathique moderne (BOURGAUD et al, 2001 ; KAR, 2007).
Aujourdhui, on estime que les principes actifs provenant des vgtaux reprsentent environ 25%
des mdicaments prescrits. Soit un total de 120 composs dorigine naturelle provenant de 90 plantes
diffrentes. En Afrique, prs de 6377 espces de plantes sont utilises, dont plus de 400 sont des plantes
mdicinales qui contribues pour 90% du traitement mdicales. Jusquen 2004, on a estim que prs de
75% de la population africaine ont toujours recours aux plantes pour se soigner. De plus ce type de soin
est considr souvent comme faisant partie de la mdecine douce (KAR, 2007).
Notre plante Ruta chalepensis, (Fidjel) est connue pour sa richesse en produits du mtabolisme
secondaire et particulirement en huiles essentielles et alcalodes (BABA AISSA, 1999). Aussi dans
notre tude, on se propose de :

- Faire un screening phytochimique des mtabolites secondaires existant dans les diffrentes
parties de la plante (fleurs, feuilles et tiges).
- Raliser plusieurs extraits : extrait brut, flavonique, alcalodique et huile essentielle, pour les
stations retenue dans notre tude, afin de pouvoir en faire des comparaisons.
- Etudier lactivit antioxydant, par deux mthodes, la rduction du Fer et le pigeage du radical
libre DPPH pour les extraits : brut, flavonique, alcalodique;
- Etudier galement le pouvoir antimicrobien de ses huiles essentielles.

A
50

2

Introduction la phytothrapie
Depuis la nuit des temps, les hommes apprcient les vertus apaisantes et analgsiques des plantes.
Aujourdhui encore, les deux tiers de la pharmacope ont recours leurs proprits curatives. A travers
les sicles, les traditions humaines ont su dvelopper la connaissance et lutilisation des plantes
mdicinales. Si certains pratiques mdicales paraissent tranges et relvent de la magie, dautres au
contraire semblent plus fondes, plus efficaces. Pourtant, toutes ont pour objectif de vaincre la
souffrance et damliorer la sant des hommes (SCHILLER et SCHILLER, 1994).
***
Toutefois, malgr les normes progrs raliss par la mdecine moderne, la phytothrapie offre de
multiples avantages. N'oublions pas que de tout temps, l'exception de ces cent dernires annes, les
hommes n'ont eu que les plantes pour se soigner, qu'il s'agisse de maladies bnignes, rhume ou toux, ou
plus srieuses, telles que la tuberculose ou la malaria.
***
Aujourd'hui, les traitements base de plantes reviennent au premier plan, car l'efficacit des
mdicaments tels que les antibiotiques (considrs comme la solution quasi universelle aux infections
graves) dcrot.
***
La phytothrapie, qui propose des remdes naturels et bien accepts par l'organisme, est souvent
associe aux traitements classiques. Elle connat de nos jours un renouveau exceptionnel en Occident,
spcialement dans le traitement des maladies chroniques, comme l'asthme ou l'arthrite. De plus, les
effets secondaires induits par les mdicaments inquitent les utilisateurs, qui se tournent vers des soins
moins agressifs pour l'organisme (ISERIN ; 2001).
***
Lexploitation des ressources naturelles, et notamment du monde vgtal, est encore capitale
lheure actuelle. Elle est ralise par :
Etude chimiotaxonomique qui consiste rechercher des catgories de molcules dans les plantes en
fonction de leur appartenance botanique. Ainsi les Apocynaceae, les Rutaceae, les Rubiaceae
renferment souvent des alcalodes et cest parmi ces familles que lon recherche dabord les alcalodes.
Etude ethnopharmacologique qui consiste recueillir des renseignements sur lutilisation des plantes
auprs des populations vivant encore prs de la nature en Amrique du Sud, dans les les du Pacifique,
en Afrique ou dans le Sud- Est Asiatique.
Etude pharmacologique est caractrise par lobservation du comportement des plantes dans leur
environnement naturel. Les interactions plantes-plantes (alllopathie), plantes-microorganismes,
plantes-insectes, plantes-animaux sont associes des signaux chimiques (BARNES et al, 2007).

3

I. Description de plante
1. Rutaceae (famille de la rue ou des agrumes) :
Gnralement arbres ou arbustes, parfois pines ou aiguillons ; composs amers triterpniques,
alcalodes, et composs phnoliques ; lacunes scrtrices dissmines (points translucides) contenant
des huiles essentielles aromatiques (WIART, 2006).
Genres/espces : 150/1500.
Principaux genres: Zanthoxylum (200 spp), Agathosma (180 spp), Ruta (60 spp).
Intrt conomique : plusieurs espces de Citrus sont apprcies pour leurs fruits comestibles. Ruta,
Zanthoxylum, Citrus et Casimiroa, ont des usages mdicaux. Les rsines caractristiques des Rutaces
sont inflammables do lutilisation du bois comme carburant ou en torches (JUDD et al ; 2002).
2. Ruta (rue) :
Ruta vient du grec rhyt qui signifie sauv, prvenir, ou de re qui signifie qui coule faisant
certainement rfrence ses vertus emmnagogues (DOERPER, 2008).
Ce genre comprend 8 espces darbustes, de sous-arbrisseaux et de vivaces herbaces souche ligneuse,
caducs ou persistants, vivants dans les lieux secs et rocailleux, de la rgion mditerranenne, et du nord-
est de lAfrique jusquau sud-ouest de lAsie. Les fleurs et le feuillage aromatiques, sont le principal
attrait des rues. Les feuilles sont alternes, parfois opposes, ovales, larges, arrondies et pennatisques
ou pennes. Les fleurs, jaunes, fimbries ou dentes, quatre ou cinq ptales, spanouissent en cymes
terminales (MIOULANE, 2004).
Le feuillage a parfois un usage mdicinal. Ne consommer aucune partie de la rue, la plante entire tant
toxique. Eviter de toucher le feuillage, sous peine de provoquer une raction cutane, se traduisant par
des taches brunes (indolores) qui foncent au soleil (DODT, 1996).
- Rusticit : variable selon les espces (MIOULANE, 2004).
- Culture : en plein soleil ou lombre partielle, de mme au sec, dans un sol assez riche, de
prfrence trs bien drain, mais la rue accepte bien les terres argileuses, fortes. La
multiplication se fait par semi ou bouturage (DOERPER, 2008).
- Ennemis et maladies : pourriture des racines (Phytophthora) (MIOULANE, 2004).
- Appellations en diffrents langues :
En franais : rue ;
En allemand : raute ;
En italien : ruta ;
En anglais : rue (BONNIER, 1999).
En espagnol : ruda (DUKE et al, 2008).

4

Les espces de Ruta les plus connues sont trs proches en forme, composition et en proprits
pharmacologiques :
Ruta chalepensis (dcrite si dessous).
Ruta montana : cest la rue des montagnes (synonymes : Ruta legitima Jacq. ; Ruta tenuifolia
Gouan) ou bonne rue (BONNIER, 1999), appele vulgairement en Algrie : fidjlet el-djbel
( ) ou Fidjela (), a une odeur ftide trs intense, se trouve sur les coteaux arides et
dans les endroits secs et pierreux de la rgion mditerranenne (BABA AISSA, 1999).
Ruta graveolens : [graveolens vient du latin gravis qui signifie fort et du verbe olere
qui veut dire sentir, donc odeur forte et dsagrable (DOERPER, 2008)]. Appele aussi rue-
officinale, rue-puante, rue ftide, rue des jardins, Herbe la belle-fille, Rue des murailles
(BONNIER, 1999) et galement pganion (LE MOINE, 2001), cette espce est appele
vulgairement Fidjen (ABDULBASSET et ABDE TAWAB, 2008).

3. Ruta chalepensis : (dans le reste du document le mot rue reprsente Ruta chalepensis)
La rue dAlep, plante herbace tige ligneuse la base, pouvant atteindre 1 m (BABA AISSA, 1999).
Les feuilles de 6 12 cm de long, sont aromatiques, ovales, larges, pennatisques, bleu-vert, elles
prsentent de nombreux lobes oblongs, lancols ou aborales. En t, spanouissent des fleurs de 1 2
cm de diamtre, en coupe, de couleur jaune fonc, portant quatre ou cinq ptales frangs de longs poils.
Elles sont runies en cymes lches (MIOULANE, 2004).
Cest une espce mditerranenne, relativement commune dans toute lAlgrie septentrionale (BABA
AISSA, 1999), au nord-est de lAfrique, sud de lEurope et le sud-ouest de lAsie (MIOULANE, 2004).
Appele aussi: Ruta angustifolia / Ruta graveolens var. angustifolia (DUKE et al, 2008).
La rue est cite sous le terme de sadzab par ABDULBASSET et ABDE TAWAB, 2008, elle est
aussi dite en berbre: aouermi, Issel, Issin (BABA AISSA, 1999). Autres noms sont indiqus par
DUKE et al en 2008: Al Shathap ( ( , Bou Ghans, en grec : Pigam, zent.

5

4. Systmatique: (WIART, 2006; BONNIER, 1999; TAKHTAJAN, 2009)
Rgne : Plantae
Sous rgne : Tracheobionta (plantes vasculaires)
Super division : Spermatophyta (plantes graine)
Division : Magnoliophyta (plantes fleurs)
Sous division : Angiospermae
Classe : Magnoliopsida (dicotyldons)
Sous classe : Rosidae
Super ordre : Rutanae
Ordre : Sapindales
Famille : Rutaceae
Genre : Ruta
Espce : chalepensis

Figure n1: Ruta chalepensis (DUKE et al, 2008).

6

5. Usage et toxicit :
Plante ornementale des jardins, la rue est considre comme mellifre et sa prsence loigne les vipres.
Elle repousse les insectes (LE MOINE, 2001) et est utilise contre la gale et les parasites de la tte
(BONNIER, 1999).
Les parfumeurs utilisent son huile essentielle comme arme. Dans le langage des fleurs, la rue est le
symbole de la grce (LE MOINE, 2001).
On rcolte les feuilles toute lanne et les fleurs la fin de lt. Les feuilles fraches, quoique trs
amres, sont comestibles, on les utilise dans des sauces et pour aromatiser le gibier ou le fromage blanc,
mais en petite quantit ; cest un condiment pris des Anglo-Saxons. Elle entre dans la prparation dun
beurre aux herbes. Elle aromatise aussi certaines boissons alcoolises. Consommes fraches de
prfrences, les tiges feuillues de conservent par schage. On fabrique avec cette plante le vinaigre de
rue et l huile de rue en la faisant infuser dans du vinaigre ou dans lhuile (BILDERBACK, 2007).
Cultive en Europe centrale depuis le X
me
sicle, elle servit de contre poison. Les Grecs considrent
quelle amliorait la vue (LE MOINE, 2001 ; BALCH et STENGLER, 2004) en utilisant lessence
extraite de la plante frache (SCHAUENBERG et PARIS, 1977). Cest une plante importante dans
lIslam, et trs utilise dans le cure par le Coran pour dbarrasser le corps de linfluence du gin. Cest
une plante manier avec prcaution car son huile essentielle est toxique. Elle contient des alcalodes, de
flavonodes, de la vitamine C et des furo-coumarines. Ctait autrefois une plante emmnagogue et
abortive (LE MOINE, 2001) en effet la rue exerce une action excito-motrice nette sur lutrus (MERAD
CHIALI, 1973). Sa sve irrite les peaux sensibles. On lemploie pour les problmes oculaires et en
gargarisme pour les maux de gorge. Les feuilles soignent les phlbites et les varices. Son utilisation est
dconseille pour les femmes enceintes (LE MOINE, 2001).
Lessence est stupfiante : cest elle qui dtermine une lgre phase dexcitation puis rapidement
ivresse lourde avec obtusion sensitivo-sensorielle, tristesse et somnolence. A trs fortes doses cest un
vritable toxique. Le principe toxique est la mthylnonylctone (MERAD CHIALI, 1973).
Plusieurs espces de Ruta sont sources de diverses classes de produits naturels avec des activits :
antifongiques, phytotoxique et antivnneux (OLIVA et al, 2003).
Autres activits cites par (DUKE et al, 2008 ; GUTIERREZ-PAJARES et al, 2003 ; KONG et al,
1989 ; CHIU et FUNG, 1997 ; FOSTER et TYLER, 1999): Abortif ; Analgsique; Anti fertilit; Anti-
inflammatoire; Antiseptique (contre : Bacillus, Candida, Escherichia, Microsporium, Pseudomonas,
Staphylococcus) ; Antispasmodique ; Aphrodisiaque; Arachnifuge; Bactricide; Candidicide;
Cardiotonique; Decongestant; Digestive; mtique; Embryotoxique; Emmnagogue; Fbrifuge;
Immunomodulateur; Insectifuge; Molluscicide; Sdative; Stomachique; Sudorifique; Vermifuge;
Vulnraire ; antipyrtique, antiparasitaire, antihelminthique ; lextraits aqueux de la rue a une activit
hypotensive par un effet direct sur le systme cardiovasculaire.

7

Utilisation populaire en Algrie : La rue est trs utilise des fins diverses : Fbrifuge,
antivenimeux local, contre les nauses et les vomissements, dans les constipations, dans le
paludisme, pour soigner les anmies (MERAD CHIALI, 1973), le rhumatisme, contre les
douleurs gastriques, les vers intestinaux (BABA AISSA, 1999), dans les accouchements
difficiles, les maux des yeux et des oreilles, dans lasthme, les nvroses (MERAD CHIALI,
1973).
6. Composition chimique :
Alcalodes (0.4- 1.4%): (FOSTER et TYLER, 1999)
Furoquinoline alcalodes: skimmianine, gamma-fagarine, dictamnine, kokusaginine, pteleine
Acridine alkaloids: arborinine- 2-arylquinoline, rutacridone, Gravacridiol (WATERMAN, 1975),
chaloridone [4,5-dioxymethylene-11-methylfuro (2,3-c) acridin-6 (11H)-on] (ULUBELEN et TEREM,
1988).
Quinazoline alcalodes : comme larborine
Quinoline alcalodes: parmi eux: graveoline, graveolineine (WATERMAN, 1975).
- Alcalodes des Rutaces :

Prcurseur Produit
Tyrosine/Phenylalanine

Acide anthranilique 2-quinolones

Tryptophane
Histidine
1-Benzyltetrahydroisoquinolines
Amines/Amides
Oxazoles
2-Aryl-quinazolines
2-Aryl-quinolines/ones
Carbazoles
Furoquinolines

Furoquinolones

Pyranoquinolones linaire
Pyranoquinolones angulaire
Acridones
2-Allyl-quinolines/ones
Carbazoles
-Indolo-quinazolines
Canthinones
Imidazoles

Figure n 2: Classification biogntique des alcalodes des Rutaces (WATERMAN, 1975).

Huile volatile (0.2-0.4%): (FLEMING et al, 2000)
Le rendement en huile essentielle et le compos majoritaire diffrent selon le lieu de rcolte mais
gnralement les composs les plus rencontrs sont le 2-nonanone et le 2-undecanone (MEJRI et al,
2010, MERGHACHE et al, 2009).

8

Flavonodes:
Le composant majoritaire est la rutine (2-5%) (FLEMING et al, 2000): Touts les parties de la plante
renferment un glucoside, la rutine, (BONNIER, 1999) ou rutoside qui est la vitamine P
(SCHAUENBERG et PARIS, 1977 ; DEWICK, 2002) isomre de la quercitrine, identique un
glucoside quon trouve dans le Cprier (BONNIER, 1999).

Figure n3 : la rutine (DEWICK, 2002).
Coumarines : (MILESI et al, 2001)
Hydroxy-coumarines: umbelliferone, herniarin, gravelliferon, rutacultin
Furo-coumarines: bergapten, psoralen, xanthotoxin, chalepensin, isopimpinellin, isoimperatorin, rutarin,
rutaretine
Pyrano-coumarines: parmi eu: xanthyletine.

Lignans : savinine, helioxanthine (FLEMING et al, 2000).

9

II . Mtabolites secondaires:
1. Dfinition et fonction :
Les mtabolites secondaires sont un groupe de molcules qui interviennent dans ladaptation de la
plante son environnement ainsi que la rgulation des symbioses et dautres interactions plantes-
animaux, la dfense contre les prdateurs et les pathognes, comme agents alllopathiques ou pour
attirer les agents chargs de la pollinisation ou de la dissmination des fruits (JUDD et al ; 2002).
En gnral, les termes, mtabolites secondaires, xnobiotiques, facteurs antinutritionnels, sont utiliss
pour dtermins ce groupe, il existe plus de 200.000 composs connus qui ont des effets
antinutritionnels et toxiques chez les mammifres. Comme ces composs ont des effets toxiques, leur
incorporation dans lalimentation humaine peut tre utile pour la prvention contre plusieurs maladies
(cancer, maladies circulatoires, les infections viral), car la diffrence entre toxicit et effet bnfique
est gnralement soit dose ou structure- dpendant (MAKKAR, SIDDHURAJU et BECKER, 2007).
2. Classification des mtabolites secondaires :

2.1. Les composs phnoliques :
Les composs phnoliques sont une vaste classe de substances organiques cycliques trs varies,
dorigine secondaire qui drivent du phnol C
6
H
5
OH qui est un monohydroxybenzne. Les composs
phnoliques sont fort rpandus dans le rgne vgtal ; on les rencontre dans les racines, les feuilles, les
fruits et lcorce. La couleur et larome, ou lastringence des plantes dpendent de la concentration et
des transformations des phnols. Ces composs reprsentent 2 3% de la matire organique des plantes
et dans certains cas jusqu 10% et mme davantage. Dans la nature, ces composs sont gnralement
dans un tat li sous forme desters ou plus gnralement dhtrosides. Ils existent galement sous
forme de polymres naturels (tanins).
Le groupe le plus vaste et plus rpandu des phnols est celui des flavonodes (WALTON et BROWN,
1999). Plusieurs classes de composs polyphnoliques sont dfinies selon le squelette de base (tableau
n1).
Tableau n 1: les diffrentes classes des composs phnoliques (DAAYF et LATTANZIO, 2008).
Squelette carbone Classes de composs phnoliques
C
6

C
6
-C
1

C
6
-C
2

C
6
-C
3

C
6
-C
4

C
6
-C
1
-C
6

C
6
-C
2
-C
6

C
6
-C
3
-C
6

(C
6
-C
1
)
2

(C
6
-C
3
)
2

(C
6
-C
3
-C
6
)
2

(C
6
-C
3
)
n

(C
6
)
n

(C
6
-C
3
-C
6
)
n

Phnols simples et benzoquinones
Acides phnoliques
Actophnones et les acides phenylactiques
Acides hydroxy-cinnamiques, coumarines, phnylpropnes, chromons
Naphthoquinones
Xanthones
Stilbnes et anthraquinones
Flavonodes et isoflavonodes
Tannins hydrolysables
Lignanes et nolignanes
Biflavonodes
Lignines
Catchols
Tannins condenss

10

2.2. Les isoprnodes : (Strodes et Terpnodes) :
Les terpnodes sont des mtabolites secondaires synthtiss par les plantes, organismes marins, les
champignons et mme les animaux, ils rsultent de lenchainement de plusieurs units isoprnique
(BHAT, NAGASAMPIGI et SIVAKUMAR, 2005). Ils ont deux voies de biosynthse : celle de lacide
mvalonique et du desoxyxylulose phosphate.

Figure n 4: Biosynthse des terpnes. DMAPP : dimethylallyl diphosphate ; DXP : desoxyxylulose
phosphate ; FPP : farnesyl diphosphate ; GGPP : geranygeranyl diphosphate ; GPP : geranyl
diphosphate ; IPP : isopentenyl diphosphate ; MVA : mevalonate (OSBOURN et LANZOTTI, 2009).

2.3. Les composs azots (drivs des acides amins) : Alcalodes
Les alcalodes sont les composs azots les plus connus. Ils ont une distribution restreinte car ils sont
rencontrs chez 20% des angiospermes seulement. En plus des alcalodes, on trouve dans ce groupe :
les acides amins non protiques, les glycosides cyanogniques et les glucosinolates (WALTON et
BROWN, 1999).

Figure n 5: Biosynthse des composs azots (WALTON et BROWN, 1999).

Peptides Acides amins non protiques

Acides amins protiques Amines
Glycosides cyanogniques

Alcalodes Aldoximes

Glucosinolates
11

3. Biosynthse des mtabolites secondaires :
Les mtabolites secondaires rsultent gnralement de trois voies de biosynthse : la voie de shikimate,
la voie de mevalonate et du pyruvate (VERPOORTE et ALFERMANN, 2000).

Figure n 6: Biosynthse des mtabolites secondaires (VERPOORTE et ALFERMANN, 2000 ; WINK,
2010).

4. Les flavonodes :
4.1. Dfinition, Classification et biosynthse :
Les flavonodes reprsentent une classe de mtabolites secondaires largement rpandus dans le rgne
vgtal. Ce sont des pigments quasiment universels des vgtaux qui sont en partie responsables de la
coloration des fleurs, des fruits et parfois des feuilles (RICE-EVANS et PACKER, 1998).
Ce groupe de composs est dfini par une structure gnrale en C15, caractrise par un
enchanement de deux noyaux aromatiques A et B lis une unit de trois carbones Ar (A)-C3-Ar (B)
(WALSH, 2003), les diffrents classes sont dtermines par le degr doxydation de lunit de liaison
(C
3
), tandis que, les composs de la mme classe sont dtermins par le point dhydroxylation, ou
dautre substitution, du noyau A ou B. Ils sont gnralement soluble dans leau (VERPOORTE et
ALFERMANN, 2000) et stocker dans des vacuoles ainsi que dans les chloroplastes (BRUNETON,
1987). Dans la nature, les flavonodes sont gnralement glycosyls, ces sucres ainsi que les groupes
hydroxyles augmentent leur solubilit dans leau, dautres substitutions tels les methyls et isopentyls,
rendent les flavonodes lipophiles (CROZIER, CLIFFORD et ASHIHARA, 2006).
Voie de
shikimate
Voie de
mevalonate
Voie de
pyruvate
12

Les flavonodes ont tous une origine biosynthtique commune. Les flavonodes comprennent les
flavonodes au sens strict (flavones, flavonols, flavanones, flavanonols, flavanes, flavan-3-ols,
flavylium, chalcones, aurones) et les isoflavonodes (CSEKE, KIRAKOSYAN et al, 2006).

Figure n7: Structure des diffrentes classes des flavonodes (MARTINEZ et al, 2005).

Les flavonodes drivent d'une structure 1,3-diphnylpropane.
L'enchanement propanique est le plus souvent sous forme d'htrocycle pyranique, l'exception de
deux groupes : les chalcones et les aurones (VERPOORTE et ALFERMANN, 2000).
Au plan biosynthtique, ltape cl de la formation des flavonodes est la condensation de trois
molcules de malonyl- CoA avec un ester du coenzyme A et dun acide hydroxycinnamique, en rgle
gnrale le 4- coumaroyl-CoA, pour obtenir la 4, 2, 4, 6-tetrahydroxychalcone (raction catalyse par
la chalcone synthase). Dans les conditions physiologiques normales, cette chalcone tend sisomriser
en flavanone sous laction de la chalcone isomrase qui induit une fermeture strospcifique du cycle
conduisant la seule (2S)-flavanone. Cette chalcone peut galement se cycliser en aurone. Il est le
prcurseur de toutes les classes de flavonodes.

Figure n8: Lorigine biosynthtique du squelette flavonique (CROZIER, CLIFFORD et ASHIHARA,
2006).

De la voie de lacide
shikimique via phenylalanine
De la voie de malonate
Le pont carbon
13

Figure n 9: Biosynthse des flavonodes.
CS : chalcone synthase ; CI : chalcone isomrase ; F3H : Flavanone 3-hydroxylase ; IFS :
isoflavone synthase ; DRF : dihydroflavonol reductase ; FS : flavonol synthase ; AS :
anthocyanin synthase. R=-H, -OH ou -OCH3 et OG= -O-sucre (PORTET, 2007 ; GROTEWOLD, 2006).

14

4.2. Proprits pharmacologiques des flavonodes :

- Lactivit la plus remarquable cest quils sont thermodynamiquement capables de rduire les
radicaux libres oxydants comme le superoxyde, le peroxyle, lalkoxyle et lhydroxyle par
transfert dhydrogne (VAN ACKER et al, 1996) ou par la chlation des ions mtalliques
impliqus dans la production des espces oxygnes ractives. Autres tudes aussi ont montr
que les flavonodes sont des bons inhibiteurs denzymes responsables de la production des
radicaux libres comme la xanthine oxydase, la cyclooxygnase et la lipooxygnase (DI CARLO
et al, 1999).
- Leffet antiallergique des flavonodes sur la production de lhistamine, par linhibition des
enzymes (lAMP cyclique phosphodiesterase et ATPase Calcium-dpendante) responsables de la
libration de lhistamine partir des mastocytes et des basophiles.
- Des tudes ont montr que certains flavonodes comme : querctine, myrictine, lapignine et la
chrysine ont des effets anti-inflammatoires par laction inhibitrice des enzymes responsables du
mtabolisme de lacide arachidonique.
- Dautres flavonodes : rutine et kaempfrol ont montr une action inhibitrice sur le PAF (Platelet
Activating Factor), agent ulcrogne potentiel, et ainsi la rduction des dommages gastro-
intestinaux.
- Effets anticancreux par diffrents modes : linactivation du t-PA (tissue-type plasminogen
activator) en lui greffant la laminine, une molcule de la matrice extracellulaire qui joue un rle
important durant la mort cellulaire. Le blocage de certaines phases du cycle cellulaire ou des
sites rcepteurs des hormones, la stabilisation du collagne, laltration de lexpression des
gnes.
- Les flavonodes prviennent le diabte en inhibant laldose rductase.
- La rduction du risque des maladies cardiovasculaires en entravant lathrosclrose.
- On attribue aux flavonodes dautres proprits: veinotonique, anti tumorale, analgsique,
antispasmodique, antibactrienne, hpato-protectrice, etc. (TRINGALI, 2001).

15

5. Les Alcalodes :
Les alcalodes reprsentent un groupe de mtabolites secondaires trs diversifis retrouvs chez les
organismes vivants, ils ont un large rang de types structuraux, de voies de biosynthse et dactivits
pharmacologiques.
En 1803, DEROSNE a isol le premier alcalode semi-pur du latex sec de lopium (Papaver
somniferum), une drogue utilise depuis des sicles pour des proprits analgsiques et narcotiques. En
1805, SERTRNER a caractris cet alcalode et la nomme morphine, et puis, entre 1817 et 1820
plusieurs alcalodes comme la strychnine, brucine, et quinine ont t isols sous forme cristalline au
laboratoire de PELLETIER et CAVENTOU en France (WALTON et BROWN, 1999).
5.1. Dfinition, Classification et distribution des alcalodes :
- Selon PELLETIER en 1983, les alcalodes sont des composs cycliques contenant un ou
plusieurs atomes d'azote (ROBERTS et WINK, 1998), typiquement comme les amines
primaires, secondaires, ou tertiaires et cela confre la basicit l'alcalode, en facilitant leur
isolement et purification comme sels solubles dans l'eau forms en prsence des acides
minraux. Pourtant, le degr de basicit varie beaucoup, selon la structure de la molcule
d'alcalode et la prsence et l'endroit des autres groupes fonctionnels ;
- Cette dfinition inclue les alcalodes avec un azote inclue dans lhtrocycle et aussi les
alcalodes avec un nitrogne extra cyclique comme la colchicine, les alcalodes peuvent tre de
nature terpnique, strodique ou aromatique ;
- L'activit biologique de beaucoup d'alcalodes dpend souvent de la fonction amine tant
transforme en systme quaternaire par ionisation aux pHs physiologiques (DEWICK, 2002).
Alors quatre groupes de composs azots sont dfinis :
Amines secondaires ou tertiaires qui sont hydrophiles pH<7.0 ou plus gnralement
lipophiles pH>8.0, se sont les alcalodes classiques.
Amines quaternaires, sont trs polaires et chargs nimporte quel pH, et sont isols
sous forme de sels, ex : berberine et sanguinarine.
Composs amins neutres, incluent les amides-type alcalodes comme la colchicine,
capsaicine et la majorit des lactames comme la ricinine.
N-oxides, sont gnralement trs soluble dans leau, retrouvs dans plusieurs classes
dalcalodes, tel le groupe des pyrrolizidines.
- Depuis leur dcouverte et jusqu maintenant plus de 10.000 alcalodes ont t isols ou dtects
chez les plantes, les champignons et mme les animaux, pour cela et cause de la grande
diversit de ce groupe de mtabolites, leur classification est base sur plusieurs critres :
lorigine biologique, la voie de biosynthse, la structure et les proprits
spectroscopiques/spectromtriques (chromophores dans la spectroscopie UV) (HESSE, 2002).
16

- La classification la plus adapte est base sur lorigine biogntique, par exemple, les indoles
drivent du tryptophane, sous le mme groupe on peut trouver les indoles non terpniques et
terpniques (irridodes). Le groupe est aprs divis en plusieurs sous groupes dpendant ainsi sur
le mode de cyclisation de la partie non glucidique de lalcalode.
- Les alcalodes ne sont pas tous drivs des acides amins, et ainsi quatre groupes sont reconnus :
1. Les alcalodes drivs des acides amins comme lornithine/arginine, lysine, histidine,
phnylalanine/tyrosine, tryptophane, lacide anthranilique ou nicotinique ;
2. Alcalodes purines, comme la xanthine caffine ;
3. Terpnes amins, ex : diterpne aconitine ou triterpne solanine ;
4. Alcalodes poly-ctoniques o lazote est inclus dans le squelette poly-ctonique comme
la coniine et la coccinelline.
Remarque : Les deux derniers groupes sont rencontrs mme chez les insectes et les organismes
marins.
- Avant quelques annes, la majeure source des alcalodes tait les plantes fleurs, les
angiospermes, o 20% des espces y contiennent (WALTON et BROWN, 1999). Actuellement,
plusieurs alcalodes proviennent des animaux, insectes, organismes marins, microorganismes et
les plantes infrieures, ex : muscopyridine de cerf porte musk, bufotaline du crapaud
(amphibien), les Arthropodes sont aussi une bonne source des alcalodes qui jouent un rle de
phromone, ex : phromone de trace, methyl-4-methylpyrrole-2-carboxylase, dAtta.sp (espce
de fourmi), les microorganismes y contiennent aussi : les alcalodes dAspergillus, pyocyanine
de Pseudomonas aeruginosa, chanoclavine-I de la moisissure de lergot (Claviceps purpurea)
(ROBERTS et WINK, 1998).

5.2. Activits pharmacologiques :
Les alcalodes exercent gnralement leurs activits pharmacologiques sur les mammifres comme
lHomme. Jusqu aujourdhui, plusieurs mdicaments utiliss sont des alcalodes naturels, ils affectent
chez ltre humain le systme nerveux, particulirement les transmetteurs chimiques tels lacetylcholine,
epinephrine, norepinephrine, acide -aminobutyrique (GABA), dopamine et la serotonine.
Les alcalodes jouent plusieurs activits pharmacologiques :
Analgsique (cocaine), anti-cholinergique (atropine, scopolamine, galanthamine), anti-malaria
(quinine), anti-hypertensive (reserpine), antitussive (codeine), dpressant cardiaque, stimulant centrale
(caffeine), diurtique, anesthsiant local (cocaine), narcotique (morphine), anti-tumeur,
sympathomimtique (ephedrine), ect (BHAT, NAGASAMPAGI et SIVAKUMAR, 2005).
Plusieurs alcalodes servent de model pour la synthse danalogues avec des proprits meilleures.

17

5.3. Biosynthse des alcalodes :

Figure n10: Schma gnral de synthse dalcalodes (ANISZEWSKI, 2007 ; WINK, 2010).

18

6. Les huiles essentielles :
6.1. Introduction laromathrapie :
Laromathrapie (tym: lat aroma , grec arma = arme; grec therapeia = soin, cure) est
l'utilisation mdicale des extraits aromatiques de plantes (essences et huiles essentielles). Cela la
diffrencie de la phytothrapie qui fait usage de l'ensemble des lments d'une plante (BELAICHE;
1979).
Le terme aromathrapie a t formul en1928, par Ren Maurice GATTEFOSS, btisseur de la
recherche scientifique sur les huiles essentielles, commena ses recherches sur le pouvoir de gurison
des huiles essentielles aprs avoir brl sa main dans son laboratoire et lavoir immerge dans lhuile de
lavande. Il a t impressionn de la rapidit de gurison de sa brlure (PITMAN, 2004). partir des
annes 1970, quelques avances scientifiques et thrapeutiques sur les huiles essentielles, dmontres
par des chercheurs et des mdecins (tels que VALNET, BELAICHE, DURAFFOURD, SEVELINGE,
PELLECUER, PENOL, FRANCHOMME, MAILHEBIAU, etc.), ont permis laromathrapie de se
positionner en tant que mdecine de lavenir et de sortir de son image dutilisation issue de la tradition.
Les chercheurs ont voulu lui donner une valeur scientifique en tudiant la composition des huiles
essentielles et en attribuant aux molcules quelles contiennent des proprits thrapeutiques (ZHIRI ;
2006).
Laromathrapie consiste donc en lutilisation des huiles essentielles pour prvenir ou traiter les
maladies et amliorer la sant et le bien-tre. Cest une thrapeutique naturelle dune remarquable
efficacit, qui repose sur la relation existant entre les principes actifs contenus dans les huiles
essentielles et les proprits thrapeutiques qui en dcoulent (WILSON; 2002).
Laromathrapie scientifique est une science qui utilise les mthodes et les techniques scientifiques du
laboratoire pour mettre en vidence la relation entre la structure chimique des molcules actives des
huiles essentielles et leurs activits biologiques (ZHIRI ; 2006).
On appelle plantes aromatiques les plantes capables de synthtiser une essence. Parmi les
800.000 espces vgtales, seules environ 10% possdent cette facult. Selon les espces, les organes
scrteurs dessence peuvent se trouver dans les sommits fleuries, les graines, les fruits, les feuilles, les
rhizomes, les racines, le bois, lcorce ou encore lolorsine (CHASSAING; 2006).

19

6.2. Quest-ce quune huile essentielle ?
Selon sa profession, chacun rpondra la question dune manire diffrente. Une huile essentielle
peut tre un ensemble de molcules pour un chimiste, un arme pour un parfumeur ou encore la
quintessence ou lesprit dun vgtal pour un alchimiste (MORO BURONZA, 2008).
En ralit, une huile essentielle est lensemble de tout cela, car il sagit dun produit odorant,
gnralement de composition complexe, obtenu partir dune matire premire vgtale botaniquement
dfinie, soit par entranement la vapeur deau, soit par distillation sche, soit par un procd
mcanique appropri sans chauffage. Lhuile essentielle est le plus souvent spare de la phase aqueuse
par un procd physique nentranant pas de changement significatif de sa composition (CLARKE,
2008).
Selon la monographie de la Pharmacope europenne, la matire premire vgtale peut tre
frache, fltrie, sche, entire, lexception des fruits du genre Citrus qui sont toujours traits ltat
frais.
Les huiles essentielles peuvent subir un traitement ultrieur appropri. Elles peuvent tre
commercialement dnommes comme tant dterpne, dsesquiterpne, rectifie ou prive de x .
Une huile essentielle dterpne est une huile essentielle prive, partiellement ou totalement,
des hydrocarbures monoterpniques.
Une huile essentielle dterpne et dsesquiterpne est une huile essentielle prive,
partiellement ou totalement, des hydrocarbures mono- et sesquiterpniques.
Une huile essentielle rectifie est une huile essentielle qui a subi une distillation fractionne dans
le but de supprimer certains constituants ou den modifier la teneur.
Une huile essentielle prive de x est une huile essentielle qui a subi une sparation partielle
ou complte dun ou plusieurs constituants (AFSSAPS ; 2008).
Pour tre de qualit optimale, une huile essentielle doit tre 100% naturelle (c'est--dire non
dnature par des molcules de synthse chimique), 100% pure (c'est--dire non mlange avec dautres
huiles essentielles ayant des caractristiques proches) et 100% intgrale (cest--dire que le distillateur
aura recueilli la totalit des molcules contenues dans la matire vgtale distille). La dtermination du
chmotype permet de le garantir (CHASSAING; 2006).
Une huile essentielle contient souvent de 50 100 molcules diffrentes et peut lextrme en
comprendre jusqu 300 travaillant en synergie pour donner lhuile essentielle ses proprits
(LAHLOU, 2004). Sa composition biochimique nest par ailleurs jamais rigoureusement identique. Il
est impossible de reproduire en laboratoire cette complexit prsente ltat naturel. Cest ce qui
explique notamment la grande efficacit des huiles essentielles dans le cadre de la lutte contre les
bactries, les champignons ou les virus (CHASSAING; 2006).
Les huiles essentielles sont habituellement liquides temprature ambiante et volatiles, ce qui les
diffrencie des huiles dites fixes. Elles sont plus ou moins colores et leur densit est en gnral
20

infrieure celle de leau. Elles ont un indice de rfraction lev et la plupart dvient la lumire
polarise. Elles sont liposolubles et solubles dans les solvants organiques usuels, entranables la
vapeur deau, trs peu solubles dans leau. Elles sont composes de molcules squelette carbon, le
nombre datomes de carbone tant compris entre 5 et 22 (le plus souvent 10 ou 15) (AFSSAPS ; 2008).
Les huiles essentielles sont des mlanges complexes de constituants varis en concentration variable
dans des limites dfinies. Ces constituants appartiennent principalement mais pas exclusivement deux
groupes caractriss par des origines biogntiques distinctes : les terpnodes et les substances
biosynthtises partir de lacide shikimique (donnant naissance aux drivs du phnylpropane)
(PNOL, 2002).
Les seules plantes aromatiques dont on peut extraire directement lessence sont les agrumes (oranges,
citrons, pamplemousses, mandarines ). Cette extraction seffectue par expression froid des zestes
frais. On parle dans ce cas dessence dorange, dessence de citron, etc. Pour les autres plantes
aromatiques, lextraction sopre par distillation la vapeur deau des organes scrteurs. On parle dans
ce cas d huiles essentielles (CHASSAING; 2006).

6.3. Comment utiliser les huiles essentielles ?
Les huiles essentielles peuvent ragir avec le corps via trois voies, quand vous ouvrez un flacon dhuile
essentielle la premire sens affect cest lodorat ce qui excite lappareil olfactif qui est directement li
au cerveau, donne ces composs volatiles leur effet de soulager le corps.
Quand vous inhalez les huiles essentielles, ils entrent aussi travers la voie respiratoire, dans les
poumons quelques molcules peuvent ragir avec loxygne et ainsi pouvant gagner la circulation
sanguine puis les cellules. La troisime voie o les huiles essentielles peuvent tre absorb cest la peau,
les minuscules molcules pntrent via les pores des glandes sbaces, passent ainsi dans le fluide
intercellulaire puis la circulation sanguine (en ce cas, elles sont appliques sur une base d'huile vgtale
comme la noisette, amande, etc., cause de leur effet irritant).
A travers ces capacits de pntration, les huiles essentielles peuvent aider le corps amliorer ses
moyens de dfense contre les agents stressants.
Ladministration orale ou rectale, doit tre suivie par un phytothrapeute ou un aromathrapeute, cause
de la complexit constitutive et la puissance de ces formes volatiles dune plante (WILSON, 2002 ;
WORWOOD, 1995 ; SNYDER et LINDQUIST, 2010 ; SCIMECA, 2006).

21

6.4. Les mthodes dextraction :
6.4.1. Lhydrodistillation :
Cette mthode est ralise en 2 tapes :
La partie de la plante contenant la molcule extraire est place dans un ballon avec de leau et
quelques morceaux de pierre ponce pour assurer le brassage de la solution. En chauffant, leau
svapore entranant avec elle les molcules aromatiques. En passant dans un rfrigrant, leau
se condense et tombe dans un erlenmeyer o il est possible de distinguer 2 phases bien distinctes
: lhuile essentielle et, dessous, leau aromatique (ou hydrolat) charge despces volatiles
contenues dans la plante et ayant une densit plus leve ;
On rcupre les 2 phases huile essentielle / eau aromatique, charge despces volatiles, dans
une ampoule dcanter. Aprs avoir laiss reposer le contenu quelques secondes, il est possible
dliminer totalement leau aromatique. Il ne reste alors plus que lhuile essentielle dans
lampoule dcanter (LUCCHESI, 2005 ; MORO BURONZO, 2008).

Figure n11: schma des tapes de lhydrodistillation
(LAGUNEZ RIVERA ; 2006).
Maintenant, dautres mthodes dhydrodistillation sont inventes, on peut citer :
- Hydrodistillation sous pression : pour les essences difficilement distillables. Bien que le
procd sous pression conduise une amlioration du rapport dentranement, donc, des
conomies dnergie, linfluence dune temprature leve (suprieure 100C) sur la qualit de
lhuile essentielle donne lieu certains artfacts.
- Le systme de thermopompage : consiste pomper la chaleur du condenseur et lutiliser pour
la production de vapeur. Les conomies dnergie calorifique et deau de refroidissement se
situeraient entre 60 et 90%.
- Turbodistillation : Pour activer la distillation la pression atmosphrique, lalambic est quip
dune turbine qui permet dune part, la dilacration des matires vgtales, dautre part une
agitation turbulente, do un meilleur coefficient de transfert thermique et une augmentation de la
surface de vaporisation (CU et al, 1999).
Extraction Des deux phases
Sparation
Rfrigrant (ou condenseur)
Thermomtre
Dcoction
Chauffe-ballon
Support lvateur
Erlenmeyer
Huile essentielle
+ Eau
22

- Lhydrodistillation assiste par ultrasons : Il sagit dans ce cas prcis dun traitement pr
ou post opratoire. En effet, les micros cavitations gnres par les ultrasons, dsorganisent la
structure des parois vgtales, les rendements en huile essentielle sont augments et les cintiques
acclres (SKARIA et al, 2007).
6.4.2. Extraction par entranement la vapeur deau :
Dans ce systme dextraction, le matriel vgtal est soumis laction dun courant de vapeur sans
macration pralable. Les vapeurs satures en composs volatils sont condenses puis dcantes.
Linjection de vapeur se fait la base de lalambic.

Figure n12: Principe schmatis de lappareillage dextraction par entranement la vapeur de leau
(PEYRON et RICHARD, 1992)
6.4.3. Lexpression au solvant volatil :
Le matriel vgtal dont on veut extraire une huile est plac sur des grilles puis dans des cuves appeles
extracteurs. On les rempli de solvant et on effectue ainsi plusieurs lavages successifs. Le mlange est
ensuite envoy dans un dcanteur o on le laisse reposer : cette phase de repos va permettre dobtenir
deux phases. Celle au fond contiendra leau contenue dans les plantes, leau tant plus lourde que le
solvant celui-ci sera la surface. Les huiles essentielles tant trs solubles dans le solvant, elles se
retrouvent dans la mme phase. Il suffit donc dliminer leau. Ensuite on fait svaporer le solvant afin
dobtenir un compos pur (WERNER, 2002). En fonction de la technique et du solvant utilis on
obtient: des hydrolysats, alcoolats, teintures, rsinodes, olorsines et des concrtes.
6.4.4. Expression froid :
Ce mode dobtention ne sapplique quaux fruits dagrumes (Citrus spp.) par des procds mcaniques
temprature ambiante. Le procd consiste exercer sous un courant deau une action abrasive sur toute
la surface du fruit. Aprs limination des dchets solides, lhuile essentielle est spare de la phase
aqueuse par centrifugation (WILSON, 2002).
La plupart des installations industrielles permettent en fait la rcupration simultane ou squentielle
des jus de fruits et de lhuile essentielle (AFSSAPS ; 2008).
23

6.4.5. Lenfleurage :
Cette mthode se rapproche quelque peu de lextraction par solvants volatils mais dans ce cas on utilise
des graisses comme solvant, ces dernires ayant elles aussi une forte affinit avec les composs
odorants, cette mthode peut tre ralise froid ou chaud, et on obtient ainsi des absolues de
pommade (LARDRY et HABERKORN, 2007).
6.4.6. Lextraction au CO
2
supercritique :
Le terme supercritique signifie que le CO
2
, sous pression et une temprature de 31C, se trouve entre
ltat liquide et ltat gazeux. Lorsquil est dans cet tat, il est capable de dissoudre les huiles
essentielles. La matire vgtale est charge dans lextracteur o est ensuite introduit le CO
2

supercritique sous pression et rfrigr. Le mlange est ensuite recueilli dans un vase dexpansion o la
pression est considrablement rduite. Le CO
2
svapore et il ne reste plus que lhuile essentielle qui est
proche du naturel et sans trace de solvant.
De plus le CO
2
est non toxique, incolore, inodore et ininflammable, ce qui permet des conditions de
scurit suprieures (KEVILLE et GREEN, 1995 ; BAYSAL et STARMANS, 1999).

Figure n13 : Schma du systme dextraction CO2 des solides (LAGUNEZ RIVERA ; 2006).

6.5. Critres de qualit des huiles essentielles:
Les caractristiques physiques, organoleptiques, chimiques et chromatographiques des huiles
essentielles sont dfinies par lInstitut Scientifique dAromatologie (INSA) qui a cr le label
H.E.B.B.D : Huile Essentielle Botaniquement et Biochimiquement Dfinie. Exigez la mention de ce
label. Il dfinit notamment trois critres certifiant l'origine et la nature exacte des huiles essentielles
(GROSJEAN ; 2004).
Une mme plante aromatique peut scrter des essences de composition totalement diffrente dans ses
diffrents organes (par exemple, lessence contenue dans le zeste doranger amer est diffrente de celle
prsente dans la fleur ou dans la feuille) ou selon le lieu gographique ou le biotope (nature du sol,
climat, altitude, autres plantes prsentes proximit) dans lequel elle est cultive. Les essences
scrtes peuvent galement varier en fonction du degr densoleillement, de la saison ou du moment du
24

cycle vgtatif (CHASSAING; 2006). Do limportance de connatre avec prcision lorigine exacte
dune huile essentielle (type de plante, origine gographique, moment de la rcolte, partie de la plante
distille, technique de distillation utilise, etc.) avant den envisager une quelconque utilisation des
fins thrapeutiques.
6.6. La biosynthse :
Il ya deux groupes de composs contenus dans une huile essentielle : les hydrocarbures et les
hydrocarbures oxygns, ainsi plusieurs groupes peuvent sy existent (voir annexe n1).
Le groupe le plus important est celui des terpnodes drivant de la voie de mevalonate ou pyruvate via
le prcurseur isopentenyl pyrophosphate (IPP), et dautres composs drivant de la voie de shikimate
(phnyl-propanoides et drivs) (CLARKE, 2008).
La synthse des terpnodes est gnralement associe la prsence de structures histologiques
spcialises, souvent situes sur ou proximit de la surface de tissus des plantes. Les principales
structures cellulaires sont : des cellules essence (Lauraces, Zingibraces..), des poils scrteurs
stipits (Pelargonium) ou sessiles (Labies), des poches scrtrices schizognes (Myrtaces) ou
schizolysignes (Rutaces, Bursraces), soit enfin des canaux scrteurs (Trbinthaces,
Ombellifres) (MALEKEY ; 2008).

Figure n 14: Formation dIPP par la voie de lacide mvalonique (DEWICK, 2002 ; VERPOORTE et
ALFERMANN, 2000 ; BHAT, NAGASAMPAGI et SIVAKUMAR, 2005).
25

Figure n 15: Formation dIPP partir du deoxyxylulose phosphate (DEWICK, 2002 ; HELDT, 2005).
TPP
Rgnr
26

Figure n16 : Biosynthse des terpnes partir dIPP (MALEKEY ; 2008 ; HELDT, 2005).

Figure n17 : Le passage entre les diffrents types de terpnes (DEWICK, 2002).
27

6.7. Proprits pharmacologiques des huiles essentielles :
Les huiles essentielles sont employes pour leur saveur et odeur en industrie des produits naturels et en
industrie des parfums ;
Elles ont des proprits antiseptiques pour les poumons et les reins ou comme bain de bouche,
dpuratives, cicatrisantes, analgsiques et anti-inflammatoire, des activits antimicrobiennes,
antifongiques, antiparasitaires et antihelminthiques; et aussi des proprits antioxydantes (effet
cleansing),
Leffet irritant/anesthsiant des huiles essentielles est utilis pour soigner les douleurs rhumatismales;
Action stimulant sur lutrus (exemple : lhuile essentielle de rue), effet abortif en cas dintoxication ;
Action sur le systme nerveux central, en exerant des effets sdative ou narcotique, relaxant et
dstressant ;
Effet anticancer, en stimulant lapoptose des cellules tumorales (CAPASSO et al, 2003; DANIEL, 2006;
WORWOOD, 1995; HSN CAN BASER et BUCHBAUER, 2010).
Plusieurs tudes ont montrs que lutilisation dhuile essentielle peut diminuer les troubles menstruels,
le stress post-partum ainsi que les troubles mnopausiques (LARDRY, 2007).

6.7.1. Activit antimicrobienne lie la composition chimique :
Lorsque lon parle dactivit antimicrobienne, on distingue deux sortes deffets : une activit ltale
ou bactricide et une inhibition de la croissance ou activit bactriostatique. Le plus souvent laction des
huiles essentielles est assimile un effet bactriostatique. Cependant, certains de leurs constituants
chimiques semblent avoir des proprits bactricides.
Lactivit biologique dune huile essentielle est lie sa composition chimique aux groupes
fonctionnels des composs majoritaires (alcools, phnols, composs terpniques et ctoniques) et leurs
effets synergiques (ZHIRI ; 2006).

6.7.1.1. Lvaluation de lactivit antibactrienne des huiles essentielles :
Linsolubilit des huiles essentielles dans leau et dune manire gnrale dans les milieux aqueux
largement utiliss en microbiologie, est une explication de la varit des techniques dvaluation
de lactivit antimicrobienne.
Les diffrents protocoles peuvent ainsi tre classs : (PIBIRI ; 2005)
selon le milieu dans lequel se fait la diffusion de lhuile essentielle, soit liquide, solide ou
gazeux,
selon la nature du contact de lhuile essentielle avec le germe : diffusion sur disque,
solution alcoolique ou dispersion dans un mulsionnant.

28

Laromatogramme :
Laromatogramme est la Phytothrapie ce que lantibiogramme dcrit par la Pharmacope
franaise des antibiotiques est la mdecine .
Cest une mthode de mesure in vitro du pouvoir antibactrien des huiles essentielles chmotypes.
Diffrents types daromatogrammes, en milieu solide, liquide, sont exploitables. Cependant, en pratique
quotidienne, cest le milieu solide qui est le plus simple et le plus facilement reproductible (PIBIRI ;
2005).
Placs dans une tuve 37,5 C, dans des conditions optimales de culture, les germes pathognes se
dveloppent rapidement sur le milieu nutritif. Sur ces colonies microbiennes, plusieurs sries (6 8 par
bote) de petits disques de papier buvard imprgn de diffrentes huiles essentielles tester sont ensuite
disposes. Aprs un temps de latence 37,5 C, le diamtre du halo dinhibition entourant les disques
est alors mesur. Chaque halo, une zone claire, montre la destruction des germes pathognes et donne
une indication prcise de lactivit antibactrienne des huiles utilises.
Laromatogramme reprsente cependant un point de repre essentiel puisque sa technique est identique
celle utilise pour mesurer lactivit bactricide des antibiotiques (ZHIRI ; 2006).

Figure n18: illustration de la mthode des aromatogrammes sur bote de Ptri (PIBIRI ; 2005).

Microatmosphres :
Driv de la mthode prcdente le protocole des microatmosphres est techniquement proche de celle
des aromatogrammes. La diffrence rside principalement dans la position du disque imprgn.
Dans cette technique, le disque imprgn est dpos au centre du couvercle de la bote de Ptri,
renverse pendant la dure de lexprience. Celui-ci nest donc plus en contact avec le milieu glos
(PIBIRI ; 2005).
Boite de Ptri

Souches test

Milieu de culture glos (Agar)

Disque imbib dhuile essentielle

Zone dinhibition

Croissance microbienne

29

Figure n19 : Illustration de la mthode des microatmosphres (PIBIRI ; 2005).

6.7.1.2. Les principes actifs antibactriens (ZHIRI ; 2006).
Les phnols sont les composs avec la plus grande efficacit antibactrienne et le plus large spectre:
thymol, carvacrol et eugnol.
Les phnols entranent notamment des lsions irrversibles sur les membranes et sont utiles dans les
infections bactriennes, virales et parasitaires, quelle que soit leur localisation.
Le thymol et leugnol sont responsables des activits fongicides et bactricides des huiles
essentielles qui en contiennent. La molcule de thymol exerce un effet inhibiteur et ltal sur
diffrentes souches et, parmi elles, Escherichia coli et Staphylococcus aureus, sur lesquelles elle
provoque des fuites dions potassium. Par contre, elle nest pas active sur Pseudomonas aeruginosa.
Les alcools avec 10 atomes de carbone (ou monoterpnols) viennent immdiatement aprs les
phnols, en terme dactivit, avec le graniol, linalool, thujanol, myrcnol, terpinol, menthol et
pipritol pour les plus connus. Molcules large spectre, elles sont utiles dans de nombreuses
infections bactriennes.
Les aldhydes sont galement quelque peu bactricides. Les plus couramment utiliss sont le nral
et le granial (des citrals), le citronnellal et le cuminal.
Les groupes molculaires avec les plus puissantes actions antibactriennes sont galement des
antifungiques efficaces mais ils doivent tre utiliss sur de plus longues priodes. Des tudes
fondamentales ont galement montr que les alcools et les lactones sesquiterpniques avaient une
activit antifungique.
De nombreuses familles de molcules ont montr in vitro une activit antivirale et, parmi elles, les
monoterpnols et les monoterpnals. Les virus sont gnralement fortement sensibles aux
molcules aromatiques et de nombreuses pathologies virales svres montrent des amliorations
importantes avec leur utilisation.
30

6.7.1.3. Le mode daction antimicrobienne des huiles essentielles
Du fait de la variabilit des quantits et des profils des composants des huiles essentielles, il est
probable que leur activit antimicrobienne ne soit pas attribuable un mcanisme unique, mais
plusieurs sites daction au niveau cellulaire.
Le mode daction des huiles essentielles dpend en premier lieu du type et des
caractristiques des composants actifs, en particulier leur proprit hydrophobe qui leur
permet de pntrer dans la double couche phospholipidique de la membrane de la cellule
bactrienne. Cela peut induire un changement de conformation de la membrane, une perturbation
chmo-osmotique et une fuite dions (K
+
): ce mcanisme a t observ avec lhuile de larbre
th sur les bactries Gram+ (Staphylococcus aureus) et Gram -(E. coli) et levure (Candida
albicans) in vitro.
Certains composs phnoliques des huiles essentielles interfrent avec les protines de la
membrane des micro-organismes comme lenzyme ATPase, soit par action directe sur la partie
hydrophobe de la protine, soit en interfrant dans la translocation des protons dans la membrane
prvenant la phosphorylation de lADP. Une inhibition de la dcarboxylation des acides amins
chez Enterobacter aerogenes a aussi t rapporte.
Les huiles essentielles peuvent aussi inhiber la synthse de lADN, ARN, des protines et des
polysaccharides.
Le mode daction des huiles essentielles dpend aussi du type de microorganismes: en
gnral, les bactries Gram - sont plus rsistantes que les Gram + grce la structure de leur
membrane externe. Ainsi, la membrane extrieure des Gram - est plus riche en
lipopolysaccharides et en protines que ceux de Gram+ qui la rend plus hydrophile, ce qui
empche les terpnes hydrophobes dy adhrer. Nanmoins, certains composs phnoliques de
bas poids molculaire comme le thymol et le carvacrol peuvent adhrer ces bactries
(MALECKY ; 2008).

31

III. Radicaux libres et antioxydants :
Loxygne est un lment essentiel pour les organismes multicellulaires parce quil permet de
produire de lnergie en oxydant de la matire organique. Mais nos cellules convertissent une partie de
cet oxygne en mtabolites toxiques : les radicaux libres organiques. Les radicaux libres ne sont pas
toujours nfastes ; en fait, ils permettent au corps de contrler la tonicit des muscles lisses, de
combattre les inflammations et de lutter contre les bactries. Cependant, lopration bnfique des
radicaux libres dpend dun quilibre dlicat qui peut tre dtruit par de nombreux facteurs, notamment
les polluants prsents dans lair que nous respirons et leau et les aliments que nous consommons. Les
rayons ultraviolets du soleil, dautres radiations, la fume de tabac, lexercice excessif et le stress sont
galement des facteurs qui augmentent considrablement la prsence des radicaux libres dans notre
systme (DESCHEEMAEKER, 2004).

1. Les radicaux libres dans les systmes biologiques :
Parmi toutes les espces radicalaires susceptibles de se produire dans les cellules, il convient de
distinguer un ensemble restreint de ces composs qui jouent un rle particulier en physiologie et que
nous appellerons radicaux primaires. Les autres radicaux libres, dits radicaux secondaires, se forment
par raction de ces radicaux primaires sur les composs biochimiques de la cellule.
Par dfinition, un radical libre est tout atome, groupe datomes ou molcules possdant un lectron non
appari (clibataire), sur leur orbitale externe. Il sagit despces chimiques trs ractives qui cherchent
dans leur environnement un lectron pour sapparier (pour former une liaison chimique)
(PASSWATER, 1997 ; JADOT, 1994).
Lappellation espces oxygnes ractives (EOR) inclut les radicaux libres de loxygne ou radicaux
primaires (radical superoxyde, radical hydroxyle, monoxyde dazote, etc) mais aussi certains drivs
ractives non radicalaires dont la toxicit est plus importante tels que loxygne singulier, le peroxyde
dhydrogne et le peroxynitrite peuvent tre des prcurseurs de radicaux libres (COOPER, 1997).
Tableau n 2: Les principales espces oxygnes ractives gnres dans les systmes biologiques
(BARTOSZ, 2003 ; JADOT, 1994)

Nom Symbole

Anion superoxyde
Radical hydroxyle
Monoxyde dazote
Peroxyde dhydrogne
Acide hypochlorique
Oxygne singulier
Peroxynitrite
Radical alcoxy
Radical peroxy

O
2

OH

NO

H
2
O
2

HOCl
1
O
2

ONOO
RO
ROO

32

Linstabilit des espces oxygnes ractives rend difficile leur mise en vidence au niveau des
diffrents milieux biologiques. Leurs constantes de vitesse ractionnelle varient selon leurs natures
(BONNEFONT-ROUSSELOT et al, 2003). La dure de vie des espces oxygnes ractives est
extrmement trs courte de la nano la milli seconde (LEHUCHER-MICHEL et al, 2001).
En effet, la toxicit des espces oxygnes ractives nest pas ncessairement corrle avec leur
ractivit, dans plusieurs cas des espces peu ractives peuvent tre lorigine dune grande toxicit en
raison de leur demie vie longue qui leur permet de se diffuser et gagner des locations sensitives o elles
peuvent interagir et causer des dommages longue distance de leurs sites de production (KOHEN et
NYSKA, 2002). Les radicaux libres sont principalement produits par des sources endognes, telles que
les chaines de transport dlectron, les peroxysomes et le systme de cytochrome P-450.

Figure n20 : Les principales sources cellulaires des espces oxygnes ractives (KOHEN et NYSKA,
2002).
2. Implications pathologiques des espces oxygnes ractives :
Ces radicaux sont responsables de laltration de lADN, du vieillissement cellulaire, et de diverses
pathologies allant de lathrosclrose au cancer tout en passant par les maladies inflammatoires,
cardiovasculaires, neurodgnratives et le diabte (CADENAS et PACKER, 2002).

33

3. Stress oxydant et ses consquences biologiques :
Le stress oxydatif rfre une perturbation dans la balance mtabolique cellulaire durant laquelle, la
gnration doxydants accable le systme de dfenses antioxydantes, que ce soit par une augmentation
de la production doxydants et/ou par une diminution des dfenses antioxydantes.
Ce dsquilibre peut avoir diverses origines, citons la surproduction endogne dagents prooxydants
dorigine inflammatoire, un dficit nutritionnel en antioxydants ou mme une exposition
environnementale des facteurs pro-oxydants (tabac, alcool, mdicaments, rayons gamma, rayons
ultraviolets, herbicides, ozone, amiante, mtaux toxiques). Laccumulation des espces oxygnes
ractives a pour consquence lapparition de dgts cellulaires et tissulaires souvent irrversibles dont
les cibles biologiques les plus vulnrables sont les protines les lipides et lacide dsoxyribonuclique
(SMIRNOFF, 2005).

Figure n21: Cibles biologiques et endommagement oxydatifs induits par les espces oxygnes
ractives (KOHEN et NYSKA, 2002).

4. Les antioxydants :

Pour chapper aux consquences du stress oxydant, il est ncessaire de rtablir lquilibre oxydant /
antioxydant afin de prserver les performances physiologiques de lorganisme.
Les antioxydants font actuellement lobjet de nombreuses tudes car, en plus dun intrt certain dans la
conservation des denres comestibles, ils pourraient savrer utiles dans la prophylaxie et le traitement
des maladies dans lesquels le stress oxydant est incrimin.
Les risques et les effets nfastes des antioxydants synthtiques utiliss comme additifs alimentaires
ont t questionns au cours des dernire annes et la ncessite de les substituer par des antioxydants
naturels, issus de plantes mdicinales, est apparente.
Le maintien dun niveau non cytotoxique des espces oxygnes ractives est assur par des
systmes dantioxydants.
34

Un antioxydant peut tre dfini comme toute substance capable, concentration relativement faible,
dentrer en comptition avec dautres substrats oxydables et ainsi retarder ou empcher loxydation de
ces substrats. Les cellules utilisent de nombreuses stratgies anti-oxydantes et consomment beaucoup
dnergie pour contrler leurs niveaux despces ractives de loxygne. La nature des systmes
antioxydants diffre selon les tissus et les types cellulaires et selon quon se trouve dans le milieu
intracellulaire ou extracellulaire. Les dfenses antioxydantes de notre organisme peuvent se diviser en
systmes enzymatiques et systmes non enzymatiques (SHAHIDI, 1997).

Figure n22: Rgulation de la production despces ractives de loxygne par les systmes de dfenses
antioxydants (MILBURY et RICHER, 2008).

4.1. Systmes enzymatiques : (PIQUET et HEBUTERNE, 2007 ; SMYTHIES, 1998).
Il sagit principalement de trois enzymes ;
Le superoxyde dismutase (SOD) [acclre la dismutation de l'anion superoxyde en
peroxyde dhydrogne, Il existe plusieurs isoenzymes de SOD ; SOD ferreux (Fe-SOD), SOD
cuivre (Cu-SOD) et SOD manganse (Mn-SOD)],
La catalase (CAT) [Prsente en particulier dans les hmaties et les peroxysomes
hpatiques. Elle agit en synergie avec la SOD puisque son rle est d'acclrer la dismutation du
peroxyde d'hydrogne en eau et en oxygne molculaire]
La glutathion peroxydase (GPx) [La glutathion peroxydase est une slnoenzyme (Se-
GPx) joue un rle trs important dans la dtoxification du peroxyde dhydrogne, de
lhydroperoxyde rsultants de loxydation du cholestrol ou des acides gras en couplant la rduction
de ces drivs ractifs avec loxydation de substrats rducteurs comme le glutathion (GSH). La
glutathion rductase (GR), quant elle, a pour rle de rgnrer le GSH partir du GSSG tout en
utilisant le NADPH comme un cofacteur.
Ces enzymes ont une action complmentaire sur la cascade radicalaire au niveau du O2
-
et du H
2
O
2
,
conduisant finalement la formation de leau et de loxygne molculaire.
35

Figure n23 : schma du mcanisme ractionnel invoqu dans la dtoxification enzymatique (PIQUET
et HEBUTERNE, 2007).

4.2. Systmes non enzymatiques :

Ce groupe de systmes antioxydants renferme de nombreuses substances endognes parmi lesquelles
on peut citer le glutathion, lacide urique, la bilirubine, la mlanine, la mlatonine, lacide lipoque. De
tous ces composs endognes synthtiss par les cellules, le plus important est sans doute le glutathion
rduit (thiol majeur au niveau intracellulaire). La bilirubine est, quant elle, capable de piger les
radicaux peroxyles et loxygne singulier, protgeant ainsi lalbumine et les acides gras lis
lalbumine des attaques radicalaires.
Les protines chlatrices de mtaux de transitions comme lhaptoglobine, la ferritine, lalbumine et la
cruloplasmine agissent en diminuant la disponibilit dagents pro-oxydants, comme les ions Fe
2+
/Fe
3+

ou Cu
2+
/Cu
+
permettant par ce biais de prvenir la production des radicaux libres par la raction de
Fenton (TRIVALLE, 2002).
Dautres substances exognes apportes par lalimentation, telles que les vitamines E (tocophrol), C
(acide ascorbique), Q (ubiquinone), ou les carotnodes agissent en pigeant les radicaux et en
neutralisant llectron non appari, les transformant ainsi en molcules stables. La vitamine pigeuse
devient son tour un radical qui sera dtruit ou rgnr par un autre systme. A titre dexemple, la
vitamine E est rgnre par la vitamine C, elle-mme rgnre par les ascorbates rductases. Des
composs comme les alcalodes, les polyphnols et les phytates, huiles essentielles (BRUNETON,
1999). Flavonodes apports galement par lalimentation, jouent un rle similaire de pigeurs de
radicaux libres.

5. Antioxydants naturels :

5.1. Les flavonodes :
Prsentes dans la plupart des plantes, les flavonodes sont des pigments polyphnoliques qui sont
responsable dans la plupart des colorations des fleurs et des fruits. Ils possdent de nombreuses vertus
thrapeutiques. Ils sont particulirement actifs dans le maintien dune bonne circulation. Certains ont
aussi des proprits anti-inflammatoires et anti virales, dautres ont des effets protecteurs sur le foie.
Des flavonodes comme lhespridine et la rutine, prsentes dans plusieurs plantes, dont le Sarrasin et le
Citronnier, renforcent les parois capillaires et prviennent linfiltration dans les tissus voisins.
36

Les relations structure activits antioxydantes des flavonodes et des composs phnoliques ont montr
que lactivit antioxydante tait dtermine par la position et le degr dhydroxylation (LECERF et
RAGOT, 2006).

5.2. Les tanins:
Toutes les plantes en contiennent des degrs diffrents. Ce sont des composs polyphnoliques qui
permettent de stopper les hmorragies et de lutter contre les infections.
Les plantes riches en tanins sont utilises pour retendre les tissus souples, comme dans le cas des veines
variqueuses, pour drainer les scrtions excessives, comme dans la diarrhe et pour rparer les tissus
endommags par un eczma ou une brlure.
Ces tanins sont des donneurs de protons aux radicaux libres lipidiques produits au cours de la
peroxydation. Des radicaux tanniques plus stables sont alors forms, ce qui a pour consquence de
stopper la raction en chane de lauto oxydation des lipides (SMYTHIES, 1998).
5.3. Les coumarines :
Les coumarines, de diffrents types, se trouvent dans de nombreuses espces vgtales et possdent
des proprits trs diverses.
Ils sont capables de prvenir la peroxydation des lipides membranaires et de capter les radicaux
hydroxyles, superoxydes et peroxyles. Les conditions structurales requises pour lactivit
antiperoxydante des coumarines sont similaires celles signales pour les flavonodes (MADHAVI et
al, 1996).
5.4. Les phnols :
Il existe une trs grande varit de phnols, de composs simples comme lacide salicylique,
molcule donnant par synthse laspirine, des substances plus complexes comme les composs
phnoliques auxquels sont rattachs les glucosides. Les phnols sont anti-inflammatoires et
antiseptiques. On suppose que les plantes, en les produisant, cherchent se prmunir contre les
infections et les insectes phytophages. Les acides phnoliques, comme lacide rosmarinique, sont
fortement antioxydants et anti-inflammatoires et peuvent avoir des proprits antivirales.
Parmi les drivs phnoliques, le resvratrol est le compos qui est le plus tudi. En effet, ce stilbne,
isol du raisin possde de fortes proprits antioxydantes (PACKER et al, 1999).
5.5. Les xanthones :
Les proprits pharmacologiques reconnues des xanthones sont essentiellement : leur activit
antimicrobienne, leur cytotoxicit et surtout linhibition de la monoamine-oxydase.
La manguifrine est une xanthone qui possde la proprit dinhibition envers la peroxydation des
lipides, ainsi que des proprits de capteurs de radicaux libres contre les anions super oxydes
(PANGLOSSI,2006).
50

37

I. Le matriel vgtal:
La plante a t rcolte dans la priode allant du mois de DECEMBRE 2009 au mois de MAI 2010, de
quatre stations de la wilaya dAIN TEMOUCHENT (AIN TOLBA, SIDI SAFI, SOUK LETHNIN et
SIDI BEN ADDA) (voir annexe n5).

Figure n 24: La carte de situation des diffrentes zones dtudes (ENCARTA, 2009).

La situation gographique des stations figure dans le tableau n3:
Tableau n3 : situation gographique des quatre stations dtude (ENCARTA, 2009).
Station Longitudes Ouest Latitudes Nord Altitudes (m)
Station 1 (Ain Tolba) 1 16' 35 16' 350
Station 2 (Sidi Safi) 1 19' 35 16' 700
Station 3 (Beni Rhanane) 1 25' 35 14' 100
Station 4 (Sidi Ben Adda) 1 17' 35 18' 500

La plante, frachement rcolte, est lave puis laisser scher lombre dans un endroit sec et ar pour
lutilisation ultrieur pour les diffrents extractions des principes actifs, notant quavant le lavage une
quantit est rcupre pour la dtermination de la teneur en eau (taux dhumidit).

38

II. Les tests phytochimiques :
(RAFFAUF, 1996 ; DOHOU et al, 2003 ; JUDITH, 2005 ; BRUNETON, 1993 ; TIMBO, 2003 ;
DIALLO, 2005 ; BEKRO et al, 2007 ; HOUGHTON et RAMAN, 1998 ; KAR, 2007).
1. La Teneur en eau :
Elle est dtermine par la Mthode gravimtrique qui consiste en la dtermination de la perte de masse
par dessiccation ltuve.
Matriel :
- Balance analytique de prcision, Etuve rgle 110C, Verre de montre, Pince, Spatule mtallique,
Capsules en verre, Dessiccateur.
Technique :
- Nous avons opr sur un chantillon homogne, broy ou concass.
- Faire une prise dessai de 1 2 g (peser au mg prs).
- Desscher de faon obtenir une masse constante aprs plusieurs peses conscutives.
- Le refroidissement avant pes se fait dans un dessiccateur renfermant un desschant (Chlorure
de calcium, anhydride phosphorique)
- Calcul: Masse drogue essai = masse avant tuve - tare
Masse eau =masse avant tuve masse aprs tuve
% Eau = (masse eau masse drogue essai) 100
2. Les Alcalodes :
- Macration
La poudre vgtale (10 g) dans un erlenmeyer de 250 ml+ 50 ml de H
2
SO
4
dilu au 1/10 (50 ml).
Agitation et macration pendant 24 heures la temprature ambiante du laboratoire. Filtration sur papier
lav leau distille de manire obtenir environ 50 ml de filtrat.
- Ractions de caractrisation (voir annexe n2)
- 1 ml de filtrat + 5 gouttes du ractif de MAYER (5 g de KI et 1,358 g de HgCl
2
solubiliss dans 100
ml d'eau distille) s'il apparat un prcipit c'est qu'on est en prsence d'alcalodes. (Prcipit blanc-
jauntre)
- 1 ml de filtrat+ 5 gouttes de ractif de WAGNER (2 g de KI et 1,27g d'I
2
solubilis dans 100 ml d'eau
distille) sil apparait un prcipit brun cest quon est en prsence dalcalodes.
- Test de confirmation
Nous procdons une extraction de la poudre vgtale en milieu acide.
Dans un ballon de 500 ml contenant 5 g de poudre vgtale on verse 25 ml d'acide chlorhydrique 0,05N.
Le mlange est laiss en macration sous agitation magntique la temprature ambiante du
laboratoire (environ 25 C) pendant 24 heures; puis filtr et lav l'eau distille. La solution obtenue est
ensuite ajuste 20 ml avec de l'eau distille, et aprs raliser les tests de caractrisation prcdents.

39

3. Les Drivs Anthracniques : y compris les quinones et les anthraquinones
- Extrait chloroformique : A 1 g de drogue en poudre, ajouter 10 ml de chloroforme et chauffer
au bain-marie pendant 3 mn, filtrer chaud et complter 10 ml si ncessaire.
- Hydrolyst : A une partie du rsidu de la poudre puise par le chloroforme, ajouter 10 ml deau
distille et 1 ml dacide chlorhydrique concentr. Maintenir le tube essai dans le bain-marie
bouillant pendant 15 mn. Refroidir sous un courant deau et filtrer. Complter 10 ml avec leau
distille.
- Caractrisation :
Drivs anthracniques libres : 1 ml dextrait chloroformique + 1 ml de NH
4
OH dilu puis
agitation; la coloration plus ou moins rouge indique la prsence danthraquinones libres.
Drivs anthracniques combins :
O-htrosides (anthraquinones):
Prlever 5 ml dhydrolyst et agiter avec 5 ml de chloroforme, soutirer la phase organique et lintroduire
dans un tube essai, ajouter 1 ml de NH
4
OH dilu. Agiter, la prsence danthraquinones est rvle par
la coloration rouge plus ou moins intense.
O-htrosides gnines rduites :
Ou bien 5 ml dhydrolyst + 3 4 gouttes de FeCl
3
10 %, chauffer pendant 5 mn au bain-marie.
Refroidir, agiter avec 5 ml de chloroforme. Soutirer la phase chloroformique et lintroduire dans un tube
essai, ajouter 1 ml de NH
4
OH dilu et agiter. En prsence de produits doxydation des anthranols ou
anthrones, la coloration rouge est plus intense.
C-htrosides :
Reprendre la phase aqueuse qui a t conserve au cours de la caractrisation des O-hrosides par 10 ml
deau distille et ajouter 1 ml de FeCl
3
10%. Maintenir le tube essai dans un bain-marie bouillant
pendant 30 mn, refroidir et agiter avec 5 ml de chloroforme, soutirer la phase chloroformique dans un
tube essai. Ajouter 1 ml de NH
4
OH dilu et agiter. Une coloration rouge plus ou moins intense indique
la prsence de gnines de C-htrosides.

4. Les Saponosides :
Elle se fait sur le dcoct 10% de la drogue.
Dans une srie de 10 tubes essai de 160 16mm, rpartir 1, 2, , 10ml dextrait et ajuster le volume
10 ml dans chaque tube.
Agiter ensuite dans le sens de la longueur pendant 15 secondes en raison de 2 agitations par seconde,
laisser reposer 15 mn et mesurer la hauteur de la mousse dans chaque tube. Celui (X) dans lequel la
hauteur fait 1cm indique la valeur de lindice de mousse, il est gal
Lindice de mousse = hauteur de mousse (en cm) dans le X
e
tube x 5 / 0,0X.

40

5. Les Coumarines :
Placer 1 g d'chantillon de la plante humide dans un tube essai. Couvrir le tube avec un papier imbib
d'une solution de NaOH et le placer dans un bain marie pendant quelques minutes. Ajouter 0,5 ml de
NH
4
OH (10%). Mettre deux tches sur un papier filtre et examiner sous la lumire ultraviolette. La
fluorescence des tches confirme la prsence des coumarines.
6. Les Strols et Triterpnes : raction de Lieberman-Burchard (voir annexe n2).
Elle se fait sur une macration de 24h 5% dans lther. Lextrait thrique est ensuite vapor sec et
repris avec 1 ml de lanhydride actique puis 1 ml de chloroforme. Dposer au font du tube, contenant
lextrait, de lacide sulfurique. En cas de raction positive il se forme un anneau rouge-bruntre ou
violet la zone de contact des deux liquides, la couche surnageante tant verte ou violette.
7. Les Tanins :
- La prparation de linfus : La poudre sche (5 g) dans de leau distille bouillante (100 ml)
contenue dans un erlenmeyer de 250 ml puis infusion pendant 15 mn (infus 5%).
- A 30 ml dinfus 5%, nous avons ajout 15 ml de ractif de Stiasny (10 ml de formol 40%
plus 5 ml HCl concentr) et chauff au bain-marie 90C pendant 15 mn. Lobtention dun
prcipit montre la prsence de tanins catchiques. Filtrer et saturer le filtrat dactate de
sodium pulvris. Ajouter 1 ml dune solution de FeCl3 1%. Le dveloppement dune teinte
bleu noire indique la prsence de tanins non prcipits par le ractif de Stiasny : ce sont les
tanins galliques.
8. Les Flavonodes :
8.1. Anthocyanes :
A 5 ml dinfus 5% prsentant une coloration plus ou moins fonce ; ajouter 5 ml dacide
sulfurique puis 5 ml de NH
4
OH. Si la coloration saccentue par acidification puis vire au bleu violac en
milieu basique, on peut conclure la prsence danthocyane.
8.2. La raction la cyanidine : (voir annexe n2)
Nous introduisons dans un tube essai 5 ml dinfus, ajouter 5 ml dalcool chlorhydrique (alcool
95, eau distille, HCl concentr parties gales en volume) ; 1 ml dalcool iso amylique puis quelques
copeaux de magnsium. Il se produit une raction de prpitation pendant quelques minutes.
Lapparition dune coloration rose orange (flavones) ou rose- violace (flavanones) ou rouge
(flavonones, flavanonols) rassemble dans la couche surnageante dalcool iso-amylique indique la
prsence dun flavonode libre (gnine).
La raction la cyanidine sans ajouter de copeaux de magnsium et chauffer pendant 15 mn au
bain-marie. En prsence de leucoanthocyane, il se dveloppe une coloration rouge cerise ou violace ;
les catchols donnent une teinte brun-rouge.

41

III. Lextraction des principes actifs :
1. Prparation de lextrait brut :
2g de poudre de chaque partie de la plante est macr dans 20 ml de mthanol absolue, pendant une
nuit temprature ambiante, lextrait est ensuite filtr puis vapor sous pression rduite sec
(T=60C) par un vaporateur rotatif (Bchi Rotavapor R-200, voir annexe n3). Le rsidu sec est repris
par quelques millilitres de mthanol et conserv +4C (BENHAMMOU et al, 2009).
2. Prparation de Lextrait flavonique:
Pour lextraction des flavonodes, lutilisation de solvant appropri (selon sa polarit) est importante
pour sparer la classe souhaite, o les flavonodes les moins polaires (exemple : isoflavones,
flavanones, methylated flavones, et flavonols) sont extraits par : chloroforme, dichloromthane, ther
dithylique, ou lactate dthyle, puis les flavonodes glycosyls et les plus polaires aglycones sont
extraits avec lalcool ou les mlanges alcool-eau. Tandis que la solubilisation de certains flavanones
dpend du pH, et lacidification permet llimination des anthocyanes (ANDERSEN et MARKHAM,
2006).
Lextraction tait ralis par une macration sous agitation magntique, rcemment de nouveaux
procds sont tablis, pour acclrer lextraction et augmenter les rendements, tels : extraction liquide
sous pression (PLE Pressurized Liquid Extraction), Lextraction au liquide supercritique (SFE
Supercritical Fluid Extraction), extraction sous micro-ondes (MAE Microwave-Assisted Extraction) et
aussi lextraction par ultrasonication (Ultrasound-assisted extraction) (GARETH, 2007).
- Notre extrait flavonique est obtenu par la mthode de LEE et al, 1995 modifie la deuxime
tape par DRAGAN et al, 2007, le protocole est reprsent dans la figure n25.

Figure n 25: Protocole dextraction des flavonodes.
Poudre +
ethanol/eau
distille (70%) 1/10
m/V
Ultrasonication
40 1C pendant
20 min
(frquence=40
KHz)
Filtration
Extraction par n-
butanol (50 ml)
Acidification par
HCl 10% au
pH=3
Evaporation du
solvant dans le
rotavapor 40C
Rsidu sec
Extraction 3 fois
par actate
d'thyle/eau
distille (V/V)
pendant 1 heure
Phase organique
basifie par
NaHCO
3
au pH=9
Repos pendant 15
min
Evaporation du
solvant dans le
rotavapor 40C
Rsidu pes et repri
par du mthanol
42

3. Prparation de lextrait alcalodique:
Lextraction des alcalodes de la poudre vgtale est souvent ralise par un milieu acide, tel lacide
chloridrique (HCl), lacide sulfurique (H
2
SO
4
) ou lacide actique, la basification est ensuite faite par
lammoniac (NH
4
OH) pour librer les alcalodes qui sont enfin prcipits soit par les ractifs de
caractrisation (ractif de MAYER ou DRAJENDORFF) ou bien par lammoniac (KAR, 2007).
Dans notre tude lextraction est ralise selon le protocole dHARBORNE, 1998 :

Figure n26 : Protocole dextraction des alcalodes.

Calcul des rendements :
Nous pouvons dterminer le rendement de diffrentes parties de la plantes en extrait brut, flavonique
ou alcalodique avec le rapport :
Rendement (%)= (P
1
-P
2
/ P
3
) x 100
P
1 :
Poids du ballon aprs vaporation
P
2
: Poids du ballon avant vaporation (ballon vide)
P
3
: Poids de la poudre vgtale de dpart

Poudre + acide actique 10 % dans l'thanol (1/10: m/V)
Macration pendant 4 heures
Filtration
Concentration au 1/4 du volume initial
Prcipitation par NH
4
OH concentr (au pH=9)
Centrifugation 3000 g pendant 10 min
Lavage par NH
4
OH 1%
Schage du rsidu puis pese et reprise
par mthanol
43

4. Lextraction dhuile essentielle :
Elle effectue par hydrodistillation de la partie arienne de la plante, o 100g de la plante sche est
introduite dans un ballon bi ou tri cols, et imprgn deau, lensemble est port bullition pendant 2
3 heures. Les vapeurs deau charges dhuile essentielle, en traversant le rfrigrant, se condensent et
chutent dans une ampoule dcanter, leau et lhuile se sparent par diffrence de densit.
Calcul de rendement : on appel rendement le rapport entre le poids de lhuile essentielle extraite et le
poids de la plante traiter. Le rendement en pourcentage (R) est calcul par la formule suivante :
R= P
H
/ P
P
x 100 o
P
H
: poids de lhuile essentielle extraite en g
P
P
: poids de la plante traite en g

Photo n1: Montage dhydrodistillation.

Colonne
Chauffe ballon
Ballon tri cols
Rfrigrant
Ampoule
dcanter
Entre deau
Sortie deau
44

IV. Les indices physicochimiques des huiles essentielles : (AFNOR, 1986).
1. Les indices chimiques
1.1. Lindice dacide :
Dfinition : lindice dacide est le nombre de milligrammes dhydroxyde de potassium ncessaire la
neutralisation des acides libres contenus dans 1g dhuile essentielle.
Mode opratoire :
- Dans un ballon ou une fiole introduire la prise dessai (2g 0.05), puis ajouter 5 ml dthanol
(95%) et 5 gouttes de solution de phnolphtaline (0.2%) ;
- Neutraliser le liquide avec la solution thanolique dhydroxyde de potassium (0.1 mole/l),
contenue dans une burette, jusqu obtention dune couleur rose ;
- On peut rserver ventuellement le ballon et son contenu pour la dtermination de lindice
dester ;
- Lindice est donc donn par la formule :
5.61 V/ m
O : V est le volume, en millilitres, de la solution dhydroxyde de potassium utilise
m est la masse, en grammes, de la prise dessai.
1.2. Lindice dester :
Dfinition : lindice dester est le nombre de milligrammes dhydroxyde de potassium ncessaire la
neutralisation des acides librs par lhydrolyse des esters dans 1g dhuile essentielle.
Principe : hydrolyse des esters par chauffage, en prsence dune solution thanolique titre dhydroxyde
de potassium, et dosage de lexcs dalcali par une solution titre.
Mode opratoire :
- Dans le ballon, contenant la solution provenue de lindice dacide, ajouter 25 ml dune solution
dhydroxyde de potassium 0.5 mole/l, puis on adapte le rfrigrant et on place sur le chauffe
ballon et on laisse chauffer pendant une heure ;
- Laisser refroidir, puis dmonter le rfrigrant et ajouter 20 ml deau puis 5 gouttes de la solution
de phnolphtaline 0.2%
- Titrer lexcs dhydroxyde de potassium avec la solution dacide chlorhydrique (0.5 mole/l) ;
- Paralllement, effectuer un essai blanc dans les mmes conditions, en remplaant la solution
provenue de lindice dacide par 5 ml dthanol.
Expression des rsultats :
Lindice est calcul par la formule :
28.05/ m (V
0
-V
1
) O :
V
0
est le volume, en millilitres, de la solution dacide chlorhydrique utilis pour lessai blanc
V
1
est le volume, en millilitres, de la solution dacide chlorhydrique utilis pour la dtermination
m est la masse, grammes, de la prise dessai
45

1.3. Lindice de peroxyde :
Dfinition : on entend par indice de peroxyde dun corps gras le nombre de microgrammes actif du
peroxyde contenu dans un gramme de produit et oxydant liodure de potassium avec libration diode.
Principe : traitement du corps gras, en solution dans lacide actique et du chloroforme, par une
solution diodure de potassium. Titrage de liode libr par une solution titre de thiosulfate de sodium.
Mode opratoire :
- Dans un flacon ou erlenmeyer on pse 1g dhuile essentielle, ajouter 10 ml de chloroforme puis
dissoudre rapidement lhuile essentielle en agitant ;
- Ajouter 15 ml dacide actique, puis 1 ml de solution diodure de potassium ;
- Boucher le flacon, lagiter pendant une minute et labandonner pendant cinq minutes labri de
la lumire ;
- Puis ajouter 75 ml deau distille. Titrer, en agitant vigoureusement et en prsence dempois
damidon comme indicateur, liode libr avec la solution de thiosulfate de sodium (0.01 N) ;
- Paralllement et simultanment effectuer sans lhuile essentielle un essai blanc.
Mode de calcul et formule :
Lindice de peroxyde, exprim en microgrammes doxygne actif par gramme, est gal :
8000 x V/E O :
V est le volume de la solution de thiosulfate de sodium utilise pour lessai, corrig compte tenu de
lessai blanc, exprim en ml.
E est la masse, en gramme, de la prise dessai.
2. Les indices physiques
2.1. La miscibilit lthanol :
Une huile essentielle est dite miscible V volumes et plus dthanol de titre alcoomtrique dtermin,
la temprature de 20 C, lorsque le mlange de 1 volume de lhuile essentielle considre avec V
volumes de cet thanol est limpide et le reste aprs addition graduelle dthanol de mme titre, jusqu
un total de 20 volumes.
2.2. La densit relative 20 C (d
20
20
) :
Dfinition : La densit relative 20 C dune huile essentielle est le rapport de la masse dun certain
volume dhuile, la masse dun gal volume deau distille.
Principe : laide dun pycnomtre, pes successivement de volumes gaux dhuile essentielle et deau
la temprature de 20 C.

46

La densit est ainsi donne par la formule :
m
2
m
0

m
1
m
0

O :
m
0
: est la masse, en grammes, du pycnomtre vide
m
1
: est la masse, en grammes, du pycnomtre rempli deau
m
2
: est la masse, en grammes, du pycnomtre rempli dhuile essentielle.
2.3. Lindice de rfraction :
Dfinition : lindice de rfraction dune huile essentielle est le rapport entre le sinus de langle
dincidence et le sinus de langle de rfraction dun rayon lumineux de longueur donde dtermine,
passant de lair dans lhuile essentielle maintenue une temprature constante.
- Utiliser un rfractomtre permettant la lecture directe dindices de rfraction situs entre 1.300 et
1.700, lappareil est ajust de manire donner, la temprature de 20 C, une valeur de 1.333
pour leau distille.

47

V. Lvaluation de lactivit antioxydante :
1. Rduction du fer : FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power) :
La mthode est base sur la raction de rduction du Fe
3+
prsent dans le complexe ferrocyanure de
potassium en Fe
2+
, la raction est rvle par le virement de couleur jaune du fer ferrique (Fe
3+
) en
couleur bleu vert du fer ferreux (Fe
2+
), lintensit de cette coloration est mesur par spectrophotomtrie
700 nm.

Photo n2: Rduction du fer ferrique en fer ferreux.

Le protocole exprimental utilis est celui de YILDIRIM, MAVI, et KARA (2001) o : 0.5 ml de
lchantillon diffrentes concentrations, est mlang avec 1.25 ml dune solution tampon phosphate
0.2 M (pH= 6.6) et 1.25 ml dune solution de ferricyanure de potassium K
3
Fe (CN)
6
1%. Le tout est
incub 50C pendant 20 min, puis refroidi la temprature ambiante. 2.5 ml dacide trichloractique
10% sont ajouts pour stopper la raction, puis les tubes sont centrifugs 3000g pendant 10 min. 1.25
ml du surnageant sont ajouts 1.25 ml deau distille et 250 l dune solution de chlorure de fer
(FeCl
3
, 6H
2
O) 0.1%. La lecture des absorbances se fait contre un blanc 700 nm laide dun
spectrophotomtre (voir annexe n3).

2. Pigeage du radical libre DPPH (2,2-diphnyle-1-picrylhydrazyl) :
Pour tudier lactivit antiradicalaire des diffrents extraits, nous avons opt pour la mthode qui utilise
le DPPH comme un radical libre relativement stable qui absorbe dans le visible la longueur donde de
515 520 nm.
Le test consiste mettre le radical DPPH (de couleur violette), en prsence des molcules dites
antioxydantes afin de mesurer leur capacit le rduire. La forme rduite (diphnyl picryl -hydrazine :
de couleur jaune) nabsorbe plus 515 nm, ce qui se traduit par une diminution de labsorbance
(SANCHEZ-MORENO, 2002).
Selon le protocole dcrit par MANSOURI et al (2005). La solution de DPPH est prpare par
solubilisation de 2,4 mg de DPPH dans 100 ml de mthanol (6x10
-5
M). 25 l des solutions dextraits ou
standard (acide ascorbique) sont ajouts 975 l DPPH, le mlange est laiss lobscurit pendant 30
48

min et la dcoloration par rapport au contrle ngatif contenant la solution de DPPH et du mthanol est
mesure 517 nm. Lactivit antiradicalaire est estime selon lquation ci-dessous :

Calcul des IC
50
:
IC
50
(concentration inhibitrice de 50 %), aussi appele EC50 (Efficient concentration50), est la
concentration de lchantillon test ncessaire pour rduire 50% de radical DPPH.
Les IC
50
sont calcules graphiquement par des pourcentages dinhibition en fonction de diffrentes
concentrations des extraits testes (TORRES et al, 2006).
N.B : Lacide ascorbique est utilis comme contrle positif, dans les deux mthodes de lvaluation de
lactivit antioxydantes (DPPH ou rduction du fer), et aux mmes conditions exprimentales.
VI. Tests de lactivit antimicrobienne :
1. Souches :
Les souches utilises sont cinq souches bactriennes et une levure de rfrence.
Tableau n 4: Les souches microbiennes
Etat frais Souches Gram
Bacille Escherichia coli ATCC 25922 Ngatif
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Bacillus cereus ATCC 11178
Positif Cocci

Staphylococcus aureus ATCC 25923
Enterococcus faecalis ATCC 29212
Levure Candida albicans ATCC 10231

2. Evaluation de lactivit sur milieu glos:
Lactivit biologique se manifeste par lapparition dun halo dinhibition de la croissance microbienne
autour du disque contenant lhuile essentielle. La lecture seffectue par la mesure du diamtre
dinhibition observ (BSSAIBIS et al, 2009).
Mthode des disques :
- Selon la NCCLS 1990, lactivit des huiles essentielles de Ruta chalepensis de diffrentes zones a
t value.
- Les diffrentes souches sont inocules sur glose nutritive pour les bactries et glose Sabouraud
pour la levure. Aprs incubation de 18 24 heures 37C, un inoculum est prpar pour chaque
souche dans leau physiologique, jusqu une densit microbienne de 10
6
et 10
4
UFC/ml pour les
bactries et la levure respectivement, puis ensemencement sur Mueller-Hinton.
- Les boites de ptri contenant le milieu glos (Muller Hinton) sont inocules par inondation, aprs
30 mn, les botes de ptri sont mises scher 15 mn 37C
49

- Les disques (6 mm de diamtre) imprgns dhuile essentielle (10 l) sont dposs aseptiquement
sur la glose inocule. Les botes sont ensuite incubes 24 heures 37 C.
- Les zones dinhibition des souches sont observes autour des disques (6 mm) puis mesures.
- Des disques standards dantibiotiques sont utiliss comme contrles positives, la gentamicine
(10g) pour les bactries et lamphotericine B (20g) pour la levure.
3. Dtermination des CMI (Concentration Minimale Inhibitrice):
Les CMI sont dtermines par la mthode standardise de micro-dilution en milieu liquide.
Ltude est ralise en microplaques en matire plastique comportant 96 puits fond U (8 ranges
de 12 puits numrots de 1 12) en bouillon Mueller- Hinton, avec un inoculum bactrien final de 5.10
6
UFC/ml, selon les recommandations de la CA-SFM.
Les microplaques sont incubes 18h 37C en arobiose.
Les dilutions dchantillons ont t distribues dans les cupules en partant de la concentration la plus
forte (250 g/ml) la plus faible (1.95 g/ml). Les dilutions de lhuile essentielle ont t ralises dans
le DMSO 10%, la premire concentration tant 250 g/ml puis des dilutions en cascade jusqu la
concentration 1.95 g/ml.
La CMI correspond la premire dilution o la croissance est ngative (pas de culture visible), la
suspension de la cupule correspondant est inocul sur glose pour dtermin lactivit exerce par
lhuile essentielle sur les souches testes, o leurs croissance correspondant lactivit bactriostatique,
tandis que leffet bactricide est rvl par une glose claire aprs incubation (DRAMANE, 2010).

A
B
C
D
E
F
G
H
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Figure n27: Schma dutilisation dune microplaque.
D
M
S
O

+

h
u
i
l
e

e
s
s
e
n
t
i
e
l
l
e

Rejeter 100l
100 l de bouillon Mueller Hinton +
100 l de lhuile essentielle dilue dans DMSO +
100 l de linoculum microbien
I
n
o
c
u
l
u
m

250 g/ml

1.95 g/ml
Concentration en
huile essentielle
50

50

I. Phytochimie de Ruta chalepensis :
1. Teneurs en eau
Le tableau n5 regroupe les teneurs en eau de nos chantillons.
Tableau n 5: Influence du lieu de rcolte et la partie de la plante sur la teneur en eau (exprime en %)
Station Station 1
(Ain Tolba)
Station 2
(Sidi Safi)
Station 3
(Beni Rhanane)
Station 4
(Sidi Ben Adda)
Altitude
Partie de la plante
350 700 100 500
Tige 45.97 62.14 59.16 40.18
Feuille 54.90 77.18 60.15 47.28
Fleur 78.15 53.17

Nous constatons que :
- Comme la plupart des vgtaux, notre plante est riche en eau.
- Les feuilles et les fleurs disposent dun plus grand rendement comparativement parlant aux tiges.
- Laltitude na aucune influence sur ce rendement. En effet, la station 2 situe 700 m et la plus
riche en eau, suivie de la station 3 (100 m), puis de la station 1 (350 m) et enfin de la station 4
500m daltitude.

2. Groupes chimiques caractriss
La mise en vidence des diffrentes classes des mtabolites secondaires constituants une plante,
nous permet davoir une bonne ide sur ses activits pharmacologiques. Pour cela nous avons ralis
les tests phytochimiques sur les trois parties de la plante (tiges, feuilles et fleurs),
Ces tests sont en relation avec lintensit du prcipit et de turbidit ou la coloration est
proportionnelle la quantit de la substance recherche.
Ainsi :
- Une raction franchement positive est reprsente par : +++
- Une raction moyennement positive est reprsente par : ++
- Une raction faiblement positive est reprsente par : +
- Labsence de la substance est reprsent par : .
Les ractions de caractrisation ont permis de mettre en vidence plusieurs groupes chimiques.
Les rsultats sont prsents dans les tableaux n6, 7 et 8.

Dans les tableaux n6, 7 et 8 : les Drivs anthracniques combins sont symboliss par :
- O: pour les O-htrosides
- C: pour les C- htrosides
- G: pour les O- htrosides gnines rduites.

51

Tableau n 6: Les groupes chimiques rencontrs dans les feuilles de Ruta des 4 stations dtudes
Stations
Constituants
Station 1 Station 2 Station 3 Station 4
C
o
m
p
o
s
s

p
h
n
o
l
i
q
u
e
s

Catchols - - -
Tanins catchiques + ++ + +
galliques - - - -
Flavonodes

Flavonones et
Flavanonols
+++

+++

++

++

Flavonodes libres + ++ + +
Leucoanthocyanes - - - -
Anthocyanes - - - -

Drivs
anthracniques
libres - - - -

Combins
O - - - -
C + - - -
G + + - -
Coumarines + +++ ++ +++
Compos
s azots
Alcalodes +++ ++ +++ ++
S
t
r
o
d
e
s

e
t

t
e
r
p
n
o
d
e
s

Strols +++ ++ ++ +++
Tritrpnes + + + +
Saponosides +
IM=118.75
+
IM= 125
++
IM= 150
++
IM=141.66
- IM : Indice de Mousse
Tableau n 7: Les groupes chimiques caractristiques de la tige de Ruta chalepensis des quatre stations
Stations
Constituants
Station 1 Station 2 Station 3 Stations 4
C
o
m
p
o
s
s

p
h
n
o
l
i
q
u
e
s

Catchols - - -
Tanins catchiques +++ +++ ++ ++
galliques - - - -

Flavonodes
Flavones + +
Flavonodes libres + + ++ ++
Leucoanthocyanes - - - -
Anthocyanes - - - -

Drivs
anthracniques
libres + + + -

Combins
O - - - -
C + + + +
G + - - -
Coumarines +++ + ++ ++
Composs
azots
Alcalodes ++ + +++ ++
S
t
r
o
d
e
s

e
t

t
e
r
p
n
o
d
e
s
Strols ++ ++ + +
Tritrpnes +++ +++ + +
Saponosides +++
IM= 225
- +++
IM= 237.5
++
IM= 150

52

Tableau n 8: Les groupes chimiques de fleur de Ruta chalepensis.
Stations
Constituants
Station 2 Station 4
C
o
m
p
o
s
s

p
h
n
o
l
i
q
u
e
s

Catchols - -
Tanins catchiques ++ +
galliques - -
Flavonodes Flavonodes libres +++ +++
Leucoanthocyanes - -
Anthocyanes - -

Drivs
anthracniques
libres - -

Combins
O - -
C - -
G - -
Coumarines +++ +++
Composs
azots
Alcalodes ++ ++
S
t
r
o
d
e
s

e
t

T
e
r
p
n
o
d
e
s

Strols + +
Tritrpnes + +
Saponosides +
IM= 66.66
+
IM= 50
Nous constatons que :
- Les flavonodes existent dans les trois parties de la plante. Ils sont en quantits plus
importantes dans les feuilles par rapport aux tiges et fleurs et cela pour toutes les stations
tudies. La raction de cyanidine confirme la prsence de flavonones, flavanonols et
flavonodes libres dans les feuilles. De flavones et flavonodes libres (gnines flavoniques)
dans les tiges et fleurs.
- Dans les quatre stations, les tanins catchiques sont prsents avec des quantits plus
importantes dans les tiges par rapport aux feuilles et aux fleurs. Leur prsence est confirme
par la raction de Stiasny.
- Les coumarines sont importants dans les trois parties de la plante et cela quelque soit la station.
- Dans toutes les stations, nous avons remarqu que les alcalodes sont plus importants dans les
feuilles et tiges par comparaisons aux fleurs.
- Les strols sont plus importants que les triterpnes dans les feuilles, et inversement dans les
tiges. Ils sont cependant en quantit quivalentes dans les fleurs dans toutes les stations.
- Les indices de mousses indiquent que lintensit des saponosides est plus importante dans les
tiges et les feuilles comparativement parlant aux fleurs dans les stations : 1, 3 et 4. Un cas
exceptionnel et enregistr dans la station 2 o nous constatons labsence des saponosides dans
les tiges.
- Enfin, il est noter que dans les quatre stations, les tanins galliques, les anthocyanes, les
Leucoanthocyanes et catchols ainsi que les drivs anthracniques dans les diffrentes parties
de la plantes sont absents ou rares.
- De faon gnral, les familles chimiques dtectes dans notre tude viennent confirmer les
travaux de HNATYSZYN et al en 1974 ; MOHR et al en 1982 ; ULUBELEN et TEREM en
1988 et aussi MANSOUR EL-SAID et al en 1990 sur la mme espce (Ruta chalepensis) de
provenance dEspagne, gypte, Turquie et dArabie saoudite respectivement.
53

- Des screening phytochimiques ont mis en vidence la prsence de coumarines: chalepensin,
chalepin, rutamarin, bergapten, isopimpinellin et xanthotoxin (ULUBELEN et TEREM, 1988),
augustifolin, scoparone et le 6,7,8-trimethoxy-coumarine (DEL CASTILLO et al, 1984), et
dalcalodes : kokusaginine, skimmianine , arborinine, y-fagarine, graveoline, 3'-
hydroxygraveoline (ULUBELEN et al , 1986), taifine, isotaifine and 8-methoxytaifine (MOHR
et al, 1982) en plus du chaloridone (ULUBELEN et TEREM, 1988).

3. Rendement des extractions
NB : La plante recueillie des stations dAin Tolba et Beni Rhanane na pas fleurie, de ce fait nous avons
rcolt la plante pour lextraction de lhuile essentielle, mais nous navons pas ralis les autres extraits
sur les fleurs.
3.1. Extrait brut mthanolique: (voir annexe n6)
Les rendements en extraits bruts (en %) dans les diffrentes parties de la plante dans les quatre stations
sont prsents au tableau n9:
Tableau n 9: Rendement en extraits bruts
Station Partie de la
plante
% en extraits
bruts
Station 1
(Ain Tolba)
Tige 8.2
Feuille 15.88
Fleur -
Station 2
(Sidi Safi)
Tige 5.75
Feuille 19.81
Fleur 32.15
Station 3
(Beni Rhanane)
Tige 17.49
Feuille 19.38
Fleur -
Station 4
(Sidi Ben Adda)
Tige 6.05
Feuille 13.52
Fleur 23.76

Les rendements en extraits bruts sont variables selon les stations et la partie de la plante. Cependant,
les rendements les plus importants sont enregistr dans les fleurs, suivis des feuilles et en dernier des
tiges.
Il est interressant de remarquer que Ruta chalepensis de la station de Sidi Safi est la plus riche en
substances solubles dans le mthanol.
Selon une tude mener par MANSOUR EL-SAID et al en 1990 sur la mme espce, le rendement
en extrait brut de la partie arienne entire est de 3.75%. Rendement nettement infrieure celui obtenu
dans notre tude. Cela est peut tre du lutilisation de soxlet o la temprature leve pendant
plusieurs heures qui peut dgrader certains constituants sensibles (tels les polyphnols) (ANDERSEN
et MARKHAM, 2006), ce qui nest pas le cas dans notre tude o lextraction est ralise froid par
simple macration.

54

3.2. Extraits flavoniques : (voir annexe n6)
Les rendements en extrait flavonique sont reprsents dans le tableau n10.
Tableau n 10: Rendements en extraits flavoniques (%)
plante
% en extraits
flavoniques
Station 1
(Ain Tolba)
Tige 1.03
Feuille 4.89
Fleur -
Station 2
(Sidi Safi)
Tige 1.63
Feuille 5.64
Fleur 3.83
Station 3
(Beni Rhanane)
Tige 2.32
Feuille 2.79
Fleur -
Station 4
(Sidi Ben Adda)
Tige 1.84
Feuille 2.48
Fleur 3.92

Les rendements sont en relation avec la partie de la plante ainsi quavec la station dtude.
Selon le protocole dextraction des flavonodes utilis, nous remarquons, qu lexception des tiges
ou ils sont les plus faibles, ces rendements sont indpendants de la partie de la plante. Notamment pour
les stations 2 et 4. En effet, nous notons bien une diffrence de proportion entre les fleurs et les feuilles
pour ces deux stations.
Le rendement le plus important est obtenu dans les feuilles de la station de Sidi Safi.
Nos rsultats sont confirms par FLEMING et al, 2000, o les flavonodes reprsentent selon ses
auteurs, 2 5% selon la partie de la plante utilise.
3.3. Extraits alcalodiques : (voir annexe n6)
Les rendements en extraits alcalodiques sont prsents selon la partie de la plante (tige, feuille ou fleur)
et selon les diffrentes stations de rcolte dans le tableau n11:
Tableau n 11: Rendements en extraits alcalodiques
plante
% en extrait
alcalodique
Station 1
(Ain Tolba)
Tige 0.81
Feuille 2.39
Fleur -
Station 2
(Sidi Safi)
Tige 0.26
Feuille 0.35
Fleur 0.60
Station 3
(Beni Rhanane)
Tige 1.17
Feuille 1.55
Fleur -
Station 4
(Sidi Ben Adda)
Tige 0.92
Feuille 0.47
Fleur 0.84
Nos rsultats montrent que nos rendements en alcalodes :
- Sont en ordre dcroissant allant des fleurs, feuilles puis tiges ; pour les stations 2 et 4 ; feuilles
et tiges pour les deux autres.
- Quils sont plus importants dans les stations dAin Tolba et de Beni Rhanane.
- Ce qui est en accord avec la bibliographie : WATERMAN (1975), FLEMING et al (2000).
55

3.4. Huile essentielle : (voir annexe n6)
Lhuile essentielle tait extraite de la plante entire dans deux priodes, avant et pendant la floraison, le
tableau n 12 reprsente les rendements en huile essentielle obtenus.
Tableau n 12: Rendement en huile essentielle (en %)
Priode
Station
Avant
floraison
Pendant
floraison
Station 1
(Ain Tolba)
0.42 0.51
Station 2
(Sidi Safi)
1.27 1.67
Station 3
(Beni Rhanane)
0.41 0.48
Station 4
(Sidi Ben Adda)
1.80 1.90
Il apparait au vu des rsultats du tableau n12 que les rendements sont meilleurs pendant la floraison.
De plus, il semblera quil y a une relation entre altitude et rendement. En effet, les stations de Sidi Safi
et Sidi Ben Adda respectivement situes 700 et 500 m daltitude enregistrent des rendements plus
important par rapport ceux des deux autres stations situes moins de 350 m. Ce qui est confirm par
ltude de MERGHACHE et al, 2009.
Les rendements de lhuile essentielle rencontrs dans nos chantillons, sont plus importants que ceux
enregistrs par MERGHACHE et al, 2009 (0.82 %), dINIGO et al, 1981 cite par MERGHACHE (0.1
1.13%) sur la mme espce, mais moins importants que ceux enregistrs par MEJRI et al, 2010
(jusqu 5.51% v/m) sur la mme espce du nord de Tunisie.

4. Les indices physicochimiques de lhuile essentielle de Ruta chalepensis
Les indices de lhuile essentielle, consigns dans le tableau n13, sont calculs avant et pendant
floraison de la plante.
Tableau n 13: Les indices physicochimiques de lhuile essentielle de Ruta chalepensis
Priode
de
cueillette
Indices
Stations
Densit

20C
Miscibilit
dans
lthanol
Indice de
rfraction
Indice
dacide
Indice
dester
Indice de
peroxyde
Avant
floraison
Station 1
(Ain Tolba)
0.9295 1V/1.5V 1.428 8.62 50.36 8623.78
Station 2
(Sidi Safi)
0.8812 1V/1.5V 1.429 4.82 47.87 6221.03
Station 3
(Beni Rhanane)
0.9013 1V/1.5V 1.500 9.53 30.90 9423.75
Station 4
(Sidi Ben Adda)
0.9133 1V/1.5V 1.398 2.15 18.98 7920.79
Pendant
floraison
Station 1
(Ain Tolba)
0.9115 1V/1.5V 1.344 8.50 52.44 9036.95
Station 2
(Sidi Safi)
0.8631 1V/1.5V 1.378 3.11 48.15 8905.08
Station 3
(Beni Rhanane)
0.8840 1V/1.5V 1.464 8.75 31.68 9800.50
Station 4
(Sidi Ben Adda)
0.8960 1V/1.5V 1.350 2.09 19.02 8031.23
56

Nous pouvons constater :
- Un volume dhuile essentielle de chaque station est miscible dans un volume et demi dthanol,
avant ou pendant floraison.
-Les densits 20C et les indices de rfractions des huiles essentielles des quatre stations sont
proches, avec des diminutions infimes pendant la floraison.
- Lhuile essentielle de Sidi Ben Adda a lindice dacide et dester les plus faibles par rapport aux
autres stations.
- Pour les densits 20C, les indices de rfraction et dacide de trs faibles diminutions sont
remarqus pour les huiles essentielles de la plante pendant floraison. Linverse est observ pour lindice
dester et de peroxyde. Cela est valable pour chaque station prise part.
- Nos rsultats sont dans lensemble conformes la littrature, o les proprits physicochimiques
dtermins par BASER et al, 1996 cit par MERGHACHE et de MERGHACHE et al, 2009 sont
proches (tableau n14).
Tableau n 14: les indices physicochimiques de lhuile essentielle de R.chalepensis de la rgion de
Tlemcen (Beni Mester) obtenus par ltude de MERGHACHE et al, 2009

Station
Indices

Priode
Densit

20C
Miscibilit
dans
lthanol
Indice de
rfraction
Indice
dacide
Rendement
(%)
Beni Mester Avant floraison 0.8273 1V/2V 1.4344 7.32 0.28
Pendant floraison 0.8312 1V/2V 1.4316 4.52 0.78
La composition chimique des huiles essentielles varie avec le lieu de rcolte. Il a t rapport
que le 2-undcanone est le constituant majoritaire de lhuile essentielle de Ruta chalepensis de
provenance lArgentine (38.1%), la Turquie (66.5%), lIran (52.5%) et lInde (4.3 - 67.8%). Quant
lhuile essentielle de lArabie Saoudite, le pourcentage en 2-undcanone est infrieur ou gal 4.5%.
Cependant lhuile essentielle de provenance lItalie contient deux constituants majoritaires le 2-
nonanone (49.9 %) et le 2-undcanone (30.0 %) (MERGHACHE et al, 2009).
Lanalyse par CG-SM de lhuile essentielle de rue de provenance Tunisie, 13 composs ont t
identifis, le constituant majoritaire est le 2-undecanone (77.18%), 2-decanone (8.96%) et 2-dodecanone
(2.37%) dans lhuile essentielle de la partie arienne, pour celui des fleurs le compos unique tait le 2-
Undecanone (100%), le pulegone dans les tiges (32.11%) et le camphore est exclusivement identifi
dans lhuile essentielle des feuilles (2.46%) (MEJRI et al, 2010).
Tandis que daprs ltude de MERGHACHE et al, 2009. Lanalyse par CG et CG/SM des constituants
volatils des diffrentes parties de la plante montre que les fleurs possdent un seul constituant
majoritaire : le 2-undcanone (68.95%) et que les feuilles et les tiges sont riches en 2-undcanone, 2-
nonanone et le 1-dcanol.

57

II. Tests in vitro de lactivit antioxydante
La capacit antioxydante des extraits de plante sont largement dpendant de la composition de ces
extraits ainsi que les conditions de manipulation des tests in vitro, lvaluation de lactivit est donc
ncessairement ralise par au moins deux mthodes diffrentes (WONG, LEONG et KOH, 2006).
Remarque : Dans toutes les figures qui suivent la nomination des extraits : T= tige, F= feuille, Fl=
fleur, les numros de 1 4 indiquent les stations (1 : Ain Tolba ; 2 : Sidi Safi ; 3 : Beni Rhanane ; 4 :
Sidi Ben Adda)
1. Rduction du fer (FRAP) :
Lvaluation de lactivit antioxydante par rduction de fer est une mthode facile et reproductible, pour
cela elle est trs utilise pour distinguer les extraits les plus actifs (LI et al, 2007).
Pour tous les extraits, des dilutions en cascade allants de 1 0.06 mg/ml, sont prpares, les pouvoirs
rducteurs sont mesurs 700 nm (AMAROWICZ et al, 2010 ; GLIN et al, 2010).

Figure n 28: Pouvoir rducteur des extraits bruts et de lacide ascorbique.

Figure n 29: Pouvoir rducteur des extraits flavoniques et de lacide ascorbique.
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2
A
b
s
o
r
b
a
n
c
e

7
0

n
m
Concentration (mg/ml)
Ac ascorbique
F1
F2
F3
F4
T1
T2
T3
T4
Fl2
Fl4
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2
A
b
s
o
r
b
a
n
c
e

7
0
0

n
m
Ac ascorbique
F1
F2
F3
F4
T1
T2
T3
T4
Fl2
Fl4
58

Figure n 30: Pouvoir rducteur des extraits alcalodiques et de lacide ascorbique.

Les pouvoirs rducteurs de tous les extraits bruts, flavoniques et alcalodiques sont reprsents dans
lhistogramme ci-dessus pour avoir une ide sur les extraits les plus actifs.

Figure n 31: Pouvoir rducteur de tous les extraits de Ruta chalepensis.
Daprs nos rsultats, pour tous les extraits tests une augmentation de la rduction du fer est
proportionnelle aux concentrations utilises.
Tous nos extraits des trois parties de la plante recueillie des quatre stations prsentent des
activits antioxydantes nettement infrieures que celle de la rfrence (acide ascorbique), pour
ce dernier la rduction est presque totale partir dune concentration de 0.6 mg/ml.
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2
A
b
s
o
r
b
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n
c
e

7
0
0

n
m
Ac ascorbique
F1
F2
F3
F4
T1
T2
T3
T4
Fl2
Fl4
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
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c
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b
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q
u
e
F
1
F
2
F
3
F
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T
1
T
2
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3
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2
F
l
4
F
1
F
2
F
3
F
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1
T
2
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3
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4
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2
F
l
4
F
1
F
2
F
3
F
4
T
1
T
2
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3
T
4
F
l
2
F
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4
A
b
s
o
r
b
a
n
c
e

7
0
0

n
m
1 mg/ml 0,5 mg/ml 0,25 mg/ml 0,125 mg/ml 0,06125 mg/ml
Extraits bruts
Extraits alcalodiques Extraits flavoniques
59

Les extraits bruts sont gnralement les plus actifs, puis les extraits alcalodiques et flavoniques,
dans les diffrentes stations.
Les extraits de fleurs sont les plus actifs comparativement parlant aux extraits de feuilles ou
tiges dans chaque station part (sauf exception pour les extraits bruts de feuilles des stations 2 et
4 qui sont plus actifs).

2. Pigeage du radical libre DPPH (2,2-diphnyle-1-picrylhydrazyl):
Lactivit antioxydante des diffrents extraits flavoniques et alcalodiques de Ruta vis--vis du radical
DPPH t value spectrophotomtriquement en suivant la rduction de ce radical qui saccompagne
par son passage de la couleur violette la couleur jaune mesurable 517 nm.

DPPH (violet) DPPH-H (jaune)
Figure n 32: Raction dun antioxydant avec le radical DPPH
Pour lvaluation de cette activit, on a prpar une gamme de dilutions allant de 0,046875 1.5 mg/ml
pour lacide ascorbique, de 0,46875 15 mg/ml pour les extraits bruts et alcalodiques, de 0,625 20
mg/ml pour les extraits flavoniques.
Les diffrentes densits optiques ont permis de tracer pour chaque extrait, une courbe dallure
exponentielle, ce qui signifie lexistence dune relation proportionnelle entre le pourcentage de
rduction du radical libre et la concentration de lextrait dans le milieu ractionnel.

2.1. Acide ascorbique :

Figure n 33: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH de lAcide Ascorbique.
y = 24,5ln(x) + 87,936
R = 0,994
0
20
40
60
80
100
120
0 0,5 1 1,5 2
%

d
'
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t

a
n
t
i
r
a
d
i
c
a
l
a
i
r
e
Acide ascorbique
60

Remarque : Dans toutes les figures qui suivent la nomination des extraits : T= tige, F= feuille, Fl=
fleur, les numros de 1 4 indiquent les stations (1 : Ain Tolba ; 2 : Sidi Safi ; 3 : Beni Rhanane ; 4 :
Sidi Ben Adda).
2.2. Extraits bruts mthanolique:
Les profils dactivits anti-radicalaires des extraits bruts de diffrentes parties de la plante des 4 stations
sont reprsents dans la figure.

Figure n 34: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH des extraits bruts des tiges.
Lextrait brut des tiges des stations 1, 2 et 3 ont montr des pouvoirs de pigeage du radical DPPH
presque similaires, tandis que les tiges de la quatrime station ont une activit moindre. De faon
gnrale, tous les extraits bruts des tiges des diffrentes stations ont atteint 50% dactivit.

Figure n 35: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH des extraits bruts des feuilles.
En vu de la figure si dessus, nous pouvons dire que les extraits bruts des feuilles ont tous des activits
similaires, et atteints 50% dactivit des concentrations infrieures 3 mg/ml
0
20
40
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0 5 10 15 20
%

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0 5 10 15 20
%

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F1
F2
F3
F4
61

Figure n 36: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH des extraits bruts des fleurs.
Les fleurs ont des pouvoirs rducteurs similaires, plus importants par rapport aux autres parties de la
plantes et ont atteint 50% de rduction avant une concentration de 2 mg/ml.

2.3. Extraits flavoniques :

Figure n 37: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH des extraits flavoniques des tiges.
Les extraits flavoniques des tiges ont rvls des activits moins importantes que les extraits bruts, ils
ont atteint 50% de rduction des concentrations proches de 5 mg/ml.

Figure n 38: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH des extraits flavoniques des feuilles.
0
20
40
60
80
100
120
0 5 10 15 20
%

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Fl2
Fl4
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30
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50
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70
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90
0 5 10 15 20 25
%

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T1
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0 5 10 15 20 25
%

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l
a
i
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e
F1
F2
F3
F4
62

Les extraits flavoniques des feuilles des quatre stations ont tous atteint 50% dactivit antiradicalaires
mais des concentrations diffrentes, les feuilles de la quatrime station ont montr lactivit la plus
importante, tandis que celles de la station trois les moindre.

Figure n 39: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH des extraits flavoniques des fleurs.
Les extraits flavoniques des fleurs ont atteint aussi 50% dactivit des concentrations infrieurs 3
mg/ml, avec des activits similaires pour les fleurs des deux stations o on a pu les cueillir.

2.4. Extraits alcalodiques :

Figure n 40: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH des extraits alcalodiques des tiges.
Les extraits alcalodiques des tiges ont montr des activits moyennes avec une atteinte de 50% de
rduction des concentrations situes entre 3 et 12 mg/ml.
0
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100
120
0 5 10 15 20 25
%

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Fl2
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T1
T2
T3
T4
63

Figure n 41: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH des extraits alcalodiques des feuilles.
Les extraits alcalodiques des feuilles des stations 2 et 4 ont montr des pouvoirs de rduction meilleurs
que celles des stations 1 et 3. Tous les extraits ont atteint 50% de rduction des concentrations
diffrentes.

Figure n 42: Pourcentages de rduction du radical libre DPPH des extraits alcalodiques des fleurs.
Les extraits alcalodiques des fleurs prpars selon la mthode dHARBORNE, ont atteint le seuil de
50% de rduction du radical libre DPPH des concentrations proches et infrieures 2 mg/ml.

0
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0 5 10 15 20
%

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Fl2
Fl4
64

3. Calcul des IC50 :
La capacit antioxydante de nos diffrents extraits a t dtermine partir des IC50. Cest la
concentration en extrait ncessaire pour rduire 50% du radical DPPH. LIC50 et lactivit antioxydante
de lextrait test sont inversement proportionnels (PRAKASH et al, 2007).
Nous avons calcul les IC50 pour chaque extrait partir de lquation logarithmique de la courbe trace,
les valeurs sont reprsentes dans le tableau n15,
Tableau n 15: Valeurs des IC50 (en mg/ml) des extraits de Ruta chalepensis et de lAcide Ascorbique.
EXTRAITS IC50 extraits
bruts
IC50 extraits
flavoniques
IC50 extraits
alcalodiques
T1 2,23320728 8,004962875 3,188674747
F1 2,60081804 3,788174845 4,926310927
T2 2,16844811 7,319435742 11,53318972
F2 1,33019767 4,57243077 2,462053518
Fl2 1,72494055 2,183671173 1,03812411
T3 7,78526629 10,69267189 4,651840474
F3 2,70050907 3,845749799 6,065272212
T4 2,89775631 4,011943191 7,776028805
F4 1,16591909 5,387620555 2,815928756
Fl4 1,50715176 2,465578239 1,710270345
Acide Ascorbique 0,06822943

Figure n 43: Les IC50 des diffrents extraits de Ruta chalepensis et de lacide ascorbique.
Daprs lhistogramme, nous remarquons en premier lieu que tous nos extraits ont des activits
moins importantes que la substance de rfrence, lacide ascorbique,
En second lieu, les extraits des fleurs sont gnralement les plus actives par rapport aux autres
extraits des feuilles et tiges,
0
2
4
6
8
10
12
I
C

5
0

e
n

m
g
/
m
l
IC50 extraits bruts IC50 extraits flavoniques IC50 extraits alcalodiques
65

Au sein des extraits bruts on peut les classer selon lordre dcroissant dactivit antioxydante
comme suit : Acide ascorbique> F4> F2> Fl4> Fl2> T2> T1>F1> F3> T4> T3 ;
Les extraits flavoniques peuvent tre classs par ordre dcroissant du pouvoir anti-radicalaire,
comme suit : Acide ascorbique> Fl2> Fl4> F1> F3> T4> F2>F4> T2> T1> T3 ;
Finalement, les extraits alcalodiques sont classs par ordre dactivit dcroissante comme :
Acide ascorbique> Fl2> Fl4> F2> F4> T1> T3> F1> F3> T4> T2.
Daprs les rsultats, le classement des extraits selon la mthode du pigeage du radical DPPH
est confirm par le classement obtenu par la mthode de rduction du fer.

4. Conclusion de lactivit antioxydante :
Les extraits bruts sont plus actifs que les extraits alcalodiques et flavoniques, cela est due
surement la complexit des extraits bruts en substances polyphnoliques et la synergie entre
eux pour une meilleure activit antioxydante (VERMERRIS et NICHOLSON, 2006).
BOLAND et TENHAVE ont postul en 1947 les ractions selon lesquelles les composs
phnoliques (AH) interfrent avec loxydation des lipides en cdant leurs hydrognes aux
radicaux lipidiques, puis entrent en comptition avec les ractions de propagation (SHAHIDI et
NACZK, 2004).
ROO
+AH ROOH+A

RO
+AHROH+A

ROO
+A
ROOA
RO
+A
ROA
RO
+RH ROOH+R

Lefficacit de lantioxydant (AH) augmente si la force de la liaison A-H est faible et le radical
(A) rsultant doit tre le plus stable possible, ce qui est le cas pour les compos phnoliques et
flavonodes, se sont des meilleurs donneurs dlectron ou dhydrogne (SHAHIDI et NACZK,
2004), chlateurs des ions mtalliques (PRATT et HUDSON, 1990 ; LADANIYA, 2008).
Plusieurs tudes ont montrs que les groupements hydroxyles dans les composs phnoliques et
flavonodes sont responsables de leurs pouvoirs antioxydants (HEIGNEN et al, 2001 ; HEIM et
al, 2002), et aussi les sites dhydroxylation des diffrents noyaux affectent la potentialit
antioxydante (URI, 1961). Pour les flavonodes, les formes aglycones sont plus actives que les
formes glycosyles (SHAHIDI et NACZK, 2004).
Les activits des extraits flavoniques sont gnralement proches de celles des extraits bruts.
Selon DJERIDANE et al (2006), les flavonodes reprsentent un groupe important de composs
phnoliques chez le genre Ruta.
En gnral, les activits de nos extraits sont moyenne en gnral, ce qui est confirm par ltude
de DJERIDANE et al, 2006 o il a trouv que lactivit dextrait phnolique de Ruta sp est
66

moins importante par rapport aux autres dix plantes tudies en mme temps, malgr que le
contenue en composs phnoliques est important, cela est due gnralement la synergie entre
les diffrents composs antioxydants existants, ce qui rend lactivit non seulement
concentration-dpendante.
Selon ltude de RATHEESH et al, 2010 sur une espce proche, Ruta graveolens rvle aussi
une activit antioxydante remarquable, en plus de lactivit anti-inflammatoire et prvention
contre les maladies cardiaques chez des rats obses.

67

III. Evaluation de lactivit antibactrienne :
Lvaluation de lactivit antimicrobienne des huiles essentielles de la plante Ruta chalepensis des
quatre stations a t effectue, et ce vis--vis de cinq souches bactriennes et une levure. Les souches
tudies sont reprsentes dans le tableau n16.
Tableau n 16: Les souches microbiennes.
Souches Etat frais Coloration de
Gram
Provenance
Escherichia coli ATCC 25922 Bacille - Laboratoire
LAPRONA
(Universit de
Tlemcen).
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Bacille -
Bacillus cereus ATCC 11178 Bacille +
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Cocci +
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Cocci +
Candida albicans ATCC 10231 Levure
Lvaluation de lactivit antimicrobienne a t ralise par deux techniques :
La technique de diffusion des disques sur milieu solide, qui est une technique qualitative base
sur la mesure des diamtres dinhibitions en mm. La quantit des huiles essentielles dpose sur
les disques est de 10 l (nous avons essay avec 3 l dhuile essentielle mais nous navons pas
eu dactivit importante).
La mthode de micro-dilution en milieu liquide est ralise pour les souches dont la zone
dinhibition est importante (>10 mm) (DRAMANE, WITABOUNA et KAGOYIRE, 2010).
Linoculation sur milieu glos est ncessaire pour dterminer la nature de lactivit
antimicrobienne (bactricide ou bactriostatique).
Tableau n 17: les diamtres des zones dinhibition des diffrentes souches (en mm) par la mthode de
disques. (voir annexe n4)
Souches Diamtre dinhibition (mm)
Lhuile essentielle Antibiotique de rfrence
Station 1
(Ain
Tolba)
Station 2
(Sidi
Safi)
Station 3
(Beni
Rhanane)
Station 4
(Sidi Ben
Adda)
Gentamicine
(10g)
Amphotricine
B (20g)
Escherichia coli
ATCC 25922
31 15 36 6 13
Pseudomonas
aeruginosa ATCC
27853
19 6 10 6 15
Bacillus cereus
ATCC 11178
24 6 48 15 23
Staphylococcus
aureus ATCC 25923
17 38 10 6 32
Enterococcus
faecalis
ATCC 29212
11 12 10 10 26
Candida albicans
ATCC 10231
13 18 10 12 22

68

En vu des rsultats, les huiles essentielles de Ruta chalepensis des quatre stations agissent
diffremment sur les souches testes.
Lactivit des huiles essentielles est plus importante contre Bacillus cereus, Staphylococcus
aureus et Escherichia coli o lhuile tait parfois plus actif que lantibiotique de rfrence, et
moindre contre les autres bactries et la levure Candida albicans.
Pseudomonas aeruginosa, malgr sa grande rsistance aux antibiotiques, elle est sensible vis--
vis de lhuile essentielle de la station 1, plus ou moins sensible vis--vis de lhuile essentielle de
celle de 3
me
station, et rsistante contre les huiles essentielle des stations 2 et 4.
Staphylococcus aureus et Escherichia coli sont rsistantes lhuile essentielle de la station 4.

Tableau n 18 : Concentration minimale inhibitrice (CMI) des huiles essentielles des quatre stations.
(voir annexe n4)
Microorganisme Huile essentielle CMI (g/ml)

Bacillus cereus ATCC 11178
Station 1 31,25
Station 3 15,625
Station 4 125

Escherichia coli ATCC 25922
Station 1 46,875
Station 2 93,75
Station 3 125
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Station 1 250
Station 2 93,75

Candida albicans ATCC 10231
Station 1 125
Station 2 125
Station 4 187,5
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Station 1 250
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Station 2 250

Les CMI des huiles essentielles des diffrentes stations sont comprises entre 15 et 250 g/ml.
Lhuile essentielle de Ruta chalepensis des stations 1,3 et 4 exerce une activit bactriostatique
sur Bacillus cereus. Cest la souche la plus sensible avec des CMI comprises entre 15 et 125
g/ml,
En second place vient Escherichia coli des concentrations dinhibitions allant de 46 125
g/ml.
Staphylococcus aureus est plus sensible vis--vis de lhuile essentielle de la deuxime station.
Les autres souches sont plus rsistantes.

69

Conclusion :
Lhuile essentielle de Ruta chalepensis exerce une bonne activit antimicrobienne contre les six
souches utilises dans notre tude, o nous remarquons une grande variation entre les huiles essentielles
de cette plante par rapport aux diffrentes stations de cueillette.
Plusieurs tudes ont montrs lefficacit dautres extraits de rue sur des souches microbiennes tels :
Lactivit antifongique (Aspergillus fumigatus, Aspergillus terreus, Microsporum canis, Paecilomyces
lilacinus, Scopulariopsis brevicaulis, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton rubrum) dextrait
thanolique de rue dmontre par les travaux de LAUK et al, 2000. Dautres travaux sur lactivit
antimicrobienne dextraits et mme dhuile essentielles des espces proches (Ruta montana et Ruta
graveolens) renforcent plus nos rsultats (IVANOVA et al, 2005 ; EMEA, 1999).
Malgr que nous nayons pas trouv dans la littrature des tudes sur lactivit antimicrobienne de
lhuile essentielle de rue mais le profil des composs volatile quil contient selon des travaux varis,
confirme lactivit quil peut lexercer.
La prsence de composs ctoniques, dacides aliphatiques, dalcools de mono et sesquiterpnes
rvle aux huiles essentielles des espces de Ruta (chalepensis, graveolens et montana) leurs activits
antibactriennes et antifongiques (DE FEO et al, 2002; OLIVA et al, 2003; IVANOVA et al, 2004 ;
BURGA, 2005).
70

70

uta chalepensis est une plante effet thrapeutique de la racine la tige, des feuilles aux fleurs,
prometteuse pour ses activits antimicrobienne et antioxydante, qui lui confrent toutes les
proprits pharmacologiques qui date de lre Hippocratique. A cette poque dj elle tait utilise
comme abortif, emmnagogue et contre des maladies pulmonaires, soit par administration interne par
tremper de la plante dans le vin, le miel ou ses drivs, soit par voie externe. Ce qui est le plus utilis
actuellement, cause de sa toxicit.
Le screening phytochimique ralis, a rvl la richesse de notre plante en mtabolites secondaires,
o nous avons constat la prsence des flavonodes, des tanins, des strols, des triterpnes, des
coumarines, des alcalodes et des huiles essentielles.
Les rendements des extraits raliss sur les diffrentes parties de la plante sont relativement
importants. Pour les extraits bruts, les fleurs ont les rendements les plus levs avec plus de 19%. Les
diffrentes parties de la plantes dans les quatre stations de rcolte ont des rendements en extrait
flavonique allant de 1 5%. Avec la station de Beni Rhanane, le rendement en alcalodes est important
1.17% pour les tiges et 1.55% pour les feuilles.
Le pouvoir antioxydant des extraits sont moyens faible en gnral, avec des IC50 infrieurs 12
mg/ml. Ces rsultats sont confirms par deux mthodes : la rduction du fer et le pigeage du radical
libre DPPH.
Lactivit antimicrobienne de lhuile essentielle est moyenne bonne sur les souches testes.
Bacillus cereus et Escherichia coli sont relativement sensibles avec des CMI comprises entre 15 et 94
g/ml pour les stations de Beni Rhanane, Ain Tolba et Sidi Safi. Staphylococcus aureus est sensible
lhuile essentielle des stations dAin Tolba et Sidi Safi avec respectivement 17 et 38 mm de diamtre
dinhibition. Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis et Candida albicans, sont plutt peu
pas sensibles
Ltude sur Ruta chalepensis dans les quatre stations selectionnes de Ain Tmouchent, nous a permis
de remarquer la diversit au sein de cette espce, de point de vue composition quactivit. Aussi nos
perspectives pour lavenir seront :
- Extraction et isolement des produits du mtabolisme secondaires avec un degr de puret
suffisant pour les constituants de chaque famille;
- Faire des tudes in vitro sur les activits des constituants de chaque famille cette plante
concernant le pouvoir antioxydant et antimicrobien en usant dautres souches microbiennes.
- Et il serait galement intressant, de tester les diffrentes familles ou molcules isoles, in vivo
sur diffrents modles biologiques, afin de trouver une application thrapeutique des molcules
actives isoles.
Par le biais de ce travail, nous esprons avoir apport notre modeste contribution la valorisation de
Ruta chalepensis comme plante mdicinale traditionnelle trs largement utilise par les populations du
nord de lAfrique.
R
77

71

-A-
1. ABDULBASSET M.E.S.et ABDE TAWAB A.H.; 2008; Mdicinal Herbal Guide; Ed: ALFA
PUBLISHING; p: 428 - 429.
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3. AFSSAPS (Agence franaise de scurit sanitaire des produits de sant) ; 2008 ; Recommandations
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82

82

Annexe n1 : Huile essentielle

Figure n 44: Biogramme aromatique (PITMAN, 2004)

Figure n 45: Distillateur de lre moyenne (PITMAN, 2004).

Electrongative, relaxation
Electropositive, stimulateur
M
o
l
c
u
l
e
s

P
o
l
a
i
r
e
s
,

h
y
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M
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a
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r
e
s
,

h
y
d
r
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p
h
o
b
e
s

83

Tableau n 19: Classification biochimique des huiles essentielles
(PRABUSEENIVASAN et al, 2006 ; SHIGEHARU et al, 2001 ; CHASSAING; 2006 ;
KEVILLE et GREEN, 1995 ; CLARKE, 2008 ; HIGLEY, 2005).
Groupe Exemples Proprits
Les hydrocarbures
mono terpniques

Noms des composants dont le
suffixe est en ne :
thuyne, Camphne,
Cymne et ses isomres,
Limonne, Ocimne, Pinne et
ses isomres, Terpinne et ses
isomres, Terpinolne.
A utiliser avec prcaution car elles peuvent
devenir dermocaustiques ;
Antalgique en usage percutan ;
Antiseptique atmosphrique : utiliser en
diffusion et relativement agressives pour les
muqueuses ;
Microbicide par contact.
Les hydrocarbures
sesquiterpniques

Aromadendrne, Bisabolne,
Cadinne et ses isomres,
Calamnne, Cdrne et ses
isomres, Chamazulne,
Curcumne, Zingibrne
Gnralement ces huiles sont colores, elles
donnent une couleur vert sombre ou bleue ;
Anti inflammatoire ;
Calmant ;
Lgrement hypotenseurs.
Les phnols

Australol, Carvacrol, Chavicol,
Eugenol, Gaiacol, Thymol.

Dsquilibrant haute dose
Leur emploi exige une association dune
huile vgtale (pour viter leur toxicit et
faciliter leur digestion) ;
Lusage dhuile essentielle phnol doit
tre associ labsorption dautres huiles
essentielles rgulatrices et
dcongestionnantes de la sphre hpato
biliaire afin de faciliter leur assimilation ;
Anti-infectieux puissant (bactricide,
virucide, parasiticides) ;
Dermocaustique ;
Excitant dose leve ;
Hpatotoxiques doses fortes et rptes
(leur emploi devrait tre restreint) ;
Hypertenseur ; Hyperthermisant ;
Immunostimulant ;
Irritant pour les muqueuses (utile dans les
congestions ORL) ;
Tonique faible dose
Les alcools mono
terpniques

Bornol, Carvol, Citronnellol,
Graniol, Lavandulol, Linalol,
Menthol, Myrtnol, Nrol,
Pinacarvol, Sabinol,
Terpinol et ses isomres,
Thuyanol.

Anti infectieux (bactricide, virucide,
fongicides) ;
Excellent immunostimulant ;
Faiblement hyperthermisant et
hypertenseur ;
Neurotonique (dose leve) ;
Tonique gnral ;
Hmolytiques fortes doses.
Les alcools
sesquiterpniques

Bisabolol et ses isomres,
Cadinol et ses isomres,
Carotol, Cdrol, Daucol
Farnsol, Santalol,
Faiblement anti infectieux ;
Immunostimulants ;
Non toxiques ;
Stimulants gnraux ;
Toniques.
84

Les alcools
diterpniques
Diol, Manool, Salviol,
Scalrol.
Rgulatrices hormonales ;
Faiblement volatiles.
Les aldhydes

Chmotypes dont les noms se
terminent par al :
Citral et ses isomres,
Citronnellal, Farsnal,
Myrtnal, Phellandral.
Agissent favorablement sur le systme
nerveux ;
Anti inflammatoires ;
Hypotenseur ;
Hypothermisant.
Les ctones

Artmisia ctone, Atlantone,
Bornone = camphre, Carvone,
Cryptone Menthonone,
Pinocamphone, Pinocarvone,
Pulgone,Thuyone,
Verbnone, Vtivone,
Vulgarone et ses drivs.

Leurs ventes sont rserves aux
pharmaciens ;
Faible dose : calmante, sdative,
hypothermisant ;
Forte dose : neurotoxique, stupfiante,
pileptisantes, abortive (les thuyones :
sauge) ;
Mucolytique; Lipolytique ;
Anticoagulant tout en activant le processus
de cicatrisation ;
Vermifuge ; Antimycosique.
Les diones

Dictone, Dimthyl, Mthyl,
Tetramthyl, Trimthyl et leurs
drivs.
Antispasmodiques ;
Anticoagulants.
Les Acides

Acides : Anglique, Anisique,
Campholnique, Cinnamique,
Citronnellique Granique,
Myrtnique, Phtalique,
Pinonique, Rosmarinique,
Salicylique.
Anti inflammatoire puissant ;
Diurtique ;
Hypotenseur ;
Hypothermisant.
Les esters

Diffrents actates, benzoates,
salicylates des chmotypes des
huiles essentielles

Antispasmodique ;
Calmant ;
Tonique ;
Rquilibrant nerveux ;
Dcongestionnant cutan en cas de
manifestations inflammatoires
Les thers

Apiol, Asarone, Elmicine,
Les diffrents mthyls et trans
des chmotypes des huiles
essentielles,
Myristicine, Safrol.

Spasmolytique puissant ;
Calmant : Sdatif (puissant),
Dcontractant ;
Antidpresseurs psychique (excellent
rquilibrant nerveux) ;
Lapiol et la myristicine : thers oxydes :
utro-toniques, spasmolytiques et toxiques
dose leve (abortif, hpato toxique).
Les oxydes

1.4 Cinol, 1.8 cinol =
eucalyptol, Ascaridol,
Diffrents oxydes des
chmotypes des huiles
essentielles.

Dcongestionnant tropisme broncho
pulmonaire ;
Mucolytique ;
Expectorant ;
Action hormonale (oxyde de
sesquiterpnols et diterpnols).
Les coumarines

Anglicine, Auraptne,
Bergamottine, Bergaptne,
Bergaptol, Byakanglicine
Clrine, Citroptne,
Umbellifrone.
Sdatif nerveux ; Anticonvulsif ;
Hypothermisant ;Hypotensif ;
Excellent anticoagulant ;
Les furocoumarines ne doivent pas tre
85

utilises sur la peau avant lexposition au
soleil car elles sont photosensibilisantes ;
Les pyrannocoumarines sont
hpatotoxiques.
Les lactones

Diffrents lactones des
chmotypes des huiles
essentielles, Hlnine ou
isoalantolactone, Santonine ou
santolactone.
Les lactones agissent en profondeur du
terrain du patient et certaines sont
allergnes par voie cutane ;
Mucolytiques ; Expectorant.

Les phthalides
(ou phthalydes)
Sdanolide, Ligustilide
sdannolide
Draineur des monctoires : foie, rein,
intestins ; Dtoxiquant.
Les composs
nombre de carbone
infrieur 10

Alcool benzylique, Haxanol,
Isoamylol, Octanone,
Nonanone, Anglate
disobutyle, Vanilline, Octanal,
Haxanal, Nonanal, Aldhyde
isovalrianique.
Se trouvent dans les hydrolats et en faible
quantit dans les huiles essentielles (sauf les
hydrocarbures) ;
Leurs proprits respectives sont celles
dues leurs fonctions biochimiques ci
haut indiques.
Les composs soufrs

diallyl disulfide, diallyl
trisulfide, allylpropyl disuflide,
mthylpropyl trisuflide,
thiobenzoate de s-mthyle.
Odeur trs forte, pour cela leur prescription
est dlaisse ;
Dermocaustiques (usage externe)
Rvulsives (en usage externe)
Irritant (en usage externe ;
Antibactriens ;
Anti parasitaires ;
Usage dans les affections respiratoires
Les composs azots

anthranilate de mthyle et ses
drivs, cynanide et ses
drivs, indole.
Calmante sur le systme nerveux

Les composs
bifonctionnels
(soufre +azote)
isothiocyanate dallyle
isothiocyanate dthyle
Toxique ;
Neurotoxiques ;
Dermocaustique.

86

Annexe n2 : Ractions de caractrisation positive

Photo n 3: Raction de cyanidine positive.

Photo n 4: Raction de WAGNER et MAYER
positive.

Photo n 5: Raction de Stiasny positive pour les
tanins catchiques.

Photo n 6: Raction de Lieberman-Burchard
positive.

87

Annexe n3 : Quelques Matriels de laboratoire

Photo n 7: Spectrophotomtre

Photo n 8: Rotavapeur

Photo n 9: Centrifugeuse

88

Photo n 10: Balance analytique

Photo n 11: Etuve

89

Annexe n4 : Activit antimicrobienne

NB :
S1 : Station 1 (Ain Tolba)

S2 : Station 2 (Sidi Safi)

S3 : Station 3 (Beni Rhanane)

S4 : Station 4 (Sidi Ben Adda)

Photo n 12: Activit huile essentielle contre Bacillus cereus

Photo n 13: Activit huile essentielle contre Escherichia coli
S1 S2
S3
S4
S2
S3
S4
S1
90

Photo n 14: Activit huile essentielle contre Pseudomonas aeruginosa.

Photo n15: Microplaque avec les CMI.

S1
S4
S3
S2
Candida albicans
Pseudomonas aeruginosa
Escherichia coli
Enterococcus faecalis
Staphylococcus aureus
Huile essentielle + DMSO
Souches
250 1.95
Concentration en
huile essentielle en
g/ml

S2
S1
S2
S3
S2
S1
S1
S1
S2
S4
Provenance d'huile
essentielle

91

Annexe n5: Stations dtude

Photo n16: Station dAin Tolba.

Photo n17: Station de Sidi Safi.

Photo n18: Station de Beni Rhanane.

Photo n19: Station de Sidi Ben Adda.

92

Annexe n6: Nos extraits

Photo n20: Les huiles essentielles des quatre stations.

Photo n21: Extraits bruts de tige (T), feuille (F) et fleur (Fl) de la station de Sidi Ben Adda (4).

Photo n22: Extraits flavoniques de tige (T), feuille (F) et fleur (Fl) de la station de Sidi Safi (2).

Photo n23: Extraits alcalodiques de tige (T), feuille (F) et fleur (Fl) de la station de Sidi Ben Adda (4).

93

Photo n24: Tous les extraits raliss sur Ruta chalepensis.

82

Rsum
Ruta chalepensis L. est une plante aromatique, mdicinale, appartenant la famille des rutaces,
appele communment par la population locale Fidjel . Elle est spontane, largement rpandue en
Afrique du nord, particulirement en Algrie.
Le screening phytochimique pour les trois parties de la plante recueillie de quatre stations de la
wilaya dAin Tmouchent a mis en vidence la prsence de coumarines, flavonodes, dalcalodes,
tanins et de strols et triterpnes. Lextraction par hydrodistillation, a permet lobtention dhuile
essentielle.
Les extractions slectives ont rvls des rendements importants comparativement parlant aux tudes
ralises sur la mme espce dans dautres pays...
Les extraits bruts, flavoniques et alcalodiques ont montrs des pouvoirs moyens de rduction de Fer
et de pigeage de radical libre DPPH. Les IC50 sont comprises entre 1 et 12 mg/ml.
Les huiles essentielles des quatre stations ont de bonnes activits antibactriennes contre Bacillus sp,
Escherichia sp, Staphylococcus sp et mme Pseudomonas sp.

Mots cls : Ruta chalepensis, mtabolites secondaires, huile essentielle, pouvoir antioxydant, FRAP,
pigeage du DPPH, activit antimicrobienne.
Summary
Ruta chalepensis L. is an aromatic plant belonging to the family of Rutaceae, commonly called
by locals Fidjel. It is spontaneous, largely spread in North Africa, especially Algeria, it is a medicinal
plant still used in traditional medicine in many countries as a laxative, anti-inflammatory, analgesic,
antispasmodic, abortifacient, antiepileptic, emmenagogue and for the treatment of skin diseases.
The phytochemical screening of the plant from four stations in the wilaya of Ain Temouchent
revealed the presence of coumarins, flavonoids, alkaloids, tannins and sterols and triterpenes.
The preparation of crude extracts, of flavonoids and alkaloids from the three parts of the plant by
specific solvents and the extraction of essential oil of the whole plant have revealed significant returns.
These extracts (crude extracts, flavonoids and alkaloids) have shown a medium powers to reduce
Iron and free radical scavenging (DPPH), which means the IC50 is between 1 and 12 mg / ml.
The essential oil of the four stations has a good antibacterial activity against several species including
Bacillus sp, Escherichia sp, Staphylococcus sp and even against Pseudomonas sp.

Keywords: Ruta chalepensis, secondary metabolites, essential oil, antioxidant power, FRAP, free radical
scavenging DPPH, antimicrobial activity.

.
Rutaces

.
.

.
( )
( DPPH ) 0 0 1 12 / .

.

: .

Contribution A Letude Phytochimique Et Activites Biologiques Des Extraits de La Plante Ruta Chalepensis (Fidjel) de La Region DAinTemouchent

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