Spectrophotomtrie

Spectrophotomtrie

La spectrophotomtrie permet l'tude de solutions colores dans l'infrarouge (1 100 nm au

maximum), dans le visible et dans l'ultraviolet (190 nm).

Spectre d'absorption de la chlorophylle

On remarque que la chlorophylle ab-

sorbe dans le rouge et dans le bleu et que
la lumire verte nest pas absorbe.

1) Grandeurs spectrophotomtriques : dfinitions

Solution
Flux incident : o colore Flux mergent :

Cuve de longueur l

Transmission : T = /o (%)

Opacit : O = o/

Absorbance (ou densit optique D.O) : A = log10 0 = log10 (T )

TP Spectrophotomtrie.doc 40 C. Baillet ENCPB / RNChimie

 Spectrophotomtrie
2) Loi de Beer-Lambert : A = c l

l = longueur de la cuve (1 cm en gnral, avec une prcision de 1 %)

c = concentration de la solution
= absorbance linique dcimale ou coefficient d'extinction spcifique qui dpend de la
longueur d'onde. varie galement en fonction des forces intermolculaires et donc du
solvant utilis.

Conditions de validit de la loi de Beer-Lambert

la lumire utilise est monochromatique

la concentration n'est pas trop leve : c 10-2 mol.L-1 en gnral pour que les interac-
tions entre molcules soient ngligeables.

Domaine de
linarit

c
la solution n'est pas fluorescente : pas de rmission de lumire dans toutes les direc-
tions
la solution n'est pas trop concentre en sels incolores
la dilution n'entrane pas un dplacement de l'quilibre chimique :

Cr2O72-(orange) + H2O 2 HCrO4- (incolore en milieu acide)

la solution doit tre limpide (pas de prcipit ou de trouble qui entraneraient une diffu-
sion de la lumire)

Il faut travailler en lumire monochromatique car est fonction de la nature du corps absor-
bant, de la temprature et de la longueur d'onde.
Pour avoir une bonne sensibilit, il faut dterminer la longueur d'onde que la solution absorbe
le plus, c'est dire la longueur d'onde dont la teinte est complmentaire de celle de la solu-
tion.

Deux couleurs sont complmentaires lorsqu'elles donnent du blanc par addition.

Couleurs primaires Couleurs complmentaires

Rouge (650 nm) Cyan (vert-bleu) (500 nm)

Vert (550 nm) Magenta (rouge violac) (420 nm)

Bleu (480 nm) Jaune (580 nm)

TP Spectrophotomtrie.doc 41 C. Baillet ENCPB / RNChimie

 Spectrophotomtrie
Diagramme de chromaticit CIE (Commission internationale d'clairage)

Le point C reprsente le blanc talon. La rgion qui l'entoure comprend tous les autres blancs,
incluant les lampes incandescence et les lampes fluorescentes.

2 couleurs sont complmentaires si leur mlange donne du blanc. Cela signifie qu'elles sont
situes de part et d'autre de la rgion neutre.

TP Spectrophotomtrie.doc 42 C. Baillet ENCPB / RNChimie

 Spectrophotomtrie
3) Additivit des absorbances

Si 2 solutions absorbent la mme longueur donde, labsorbance du mlange est gale

la somme de leurs absorbances : A = A1 + A2

1
Solution 1 Solution 2

Solution 1

+

Solution 2

A = (1c1 + 2c2) l = A1 +A2

4) Mesure de labsorbance dune solution

Essai blanc Essai proprement dit

Solut
1
Solvant +

Solvant

Absorbance : Ao Absorbance : A1 = Ao + A

Absorbance du solut : A = A1 - Ao

Mesure de labsorbance dune solution

a) Rglage du zro optique ou de la ligne de base de faon avoir : Ao = 0, la cuve
tant remplie avec le solvant.

b) Lessai proprement dit donne directement labsorbance du solut, la cuve tant rem-
plie avec le solvant et le solut.

c) Le zro optique doit tre refait pour chaque longueur donde car labsorbance du sol-
vant varie.

TP Spectrophotomtrie.doc 43 C. Baillet ENCPB / RNChimie

 Spectrophotomtrie
5) Principe du spectrophotomtre

Fente
Dtecteur
o
S Monochromateur
Amplificateur

Collimateur
Cuve de 1 cm de largeur

S : source lumineuse spectre continu :

lampe filament de tungstne utilisable entre 300 nm et 1 100 nm,
lampe dcharge dans le deutrium, utilisable en UV entre 190 nm et 350 nm.

Le monochromateur rseau permet de slectionner une longueur donde et de balayer

lensemble du spectre lorsque lon fait tourner le rseau.

0
Si A = 1, = 10, cest dire que 90 % de la lumire incidente a t absorbe par

lchantillon contenu dans la cuve.

0
Si A = 2, = 100, cest dire que 99 % de la lumire incidente a t absorbe par

lchantillon contenu dans la cuve.

On est donc limit par la sensibilit du dtecteur.

Dtecteurs utiliss :
Cellule photolectrique
Barette de diodes CCD
Photomultiplicateur

Les meilleurs spectrophotomtres mesurent des absorbances maximales gales 3.

TP Spectrophotomtrie.doc 44 C. Baillet ENCPB / RNChimie

 Spectrophotomtrie - Dcoloration du violet de mthyle
Dcoloration du violet de mthyle en prsence de soude
Cintique chimique dordre 1 par rapport au violet de mthyle

1) Spectre d'absorption du violet de mthyle (500 nm < < 650 nm)

a) Prparation

Dans une cuve, mettre le solvant (eau distille) sur lequel on fera le "zro optique".
Dans une autre cuve, mettre une solution de violet de mthyle 10 mg.L-1.
Pour cette concentration, l'absorbance A ne dpasse pas 2.
Suivre la notice du spectrophotomtre pour raliser les rglages.

b) Mesures

A partir de = 500 nm, faire une mesure tous les 10 nm ou moins quand l'absorbance varie
rapidement, dans le sens croissant des longueurs d'onde, jusqu 650 nm.

Pour chaque longueur d'onde, ne pas oublier de refaire le zro

optique avec une cuve remplie d'eau.

Tracer le spectre dabsorption : A = f(). Utiliser un crayon papier pour relier les points.
Inutile de donner le tableau des valeurs exprimentales trouves.

Pour quelle longueur d'onde max l'absorbance est-elle maximale ? La noter sur le graphe.
Quelle est la couleur du violet de mthyle ?
La longueur donde max correspond-elle la couleur complmentaire du violet de mthyle ?
Le vrifier sur le diagramme de chromaticit.

Pour la suite de la manipulation, on se placera la longueur d'onde max donne par votre
spectrophotomtre (max ~ 589 nm sur les tables de rfrences).

H3C CH3
N
Violet de mthyle : C25H30N3+ , Cl -
M = 408 g

H3C
+ -
N C + Cl
H3C

N
H3C CH3

TP Spectrophotomtrie.doc C. Baillet 45
 Spectrophotomtrie - Dcoloration du violet de mthyle
2) Dcoloration du violet de mthyle en prsence de soude

Cintique d'ordre 1 par rapport au violet de mthyle

1) Principe

En prsence de soude, le violet de mthyle se dcolore :

violet de mthyle + soude solution incolore

Temps [violet] [soude] Absorbance

t=0 a excs Ao = a l

t a-x excs A = (a - x) l

t 0 excs A = 0

Vitesse de raction : v = - d(a - x)/dt = ko (a - x)n (soude)p = k (a - x)n

La soude tant en excs, on pose : k = ko (soude)p

Si la cintique est du premier ordre par rapport au violet de mthyle : n = 1

v = k (a - x) = - d(a - x)/dt k : constante de vitesse

Aprs intgration : ln(a - x) = - kt + ln a

D'aprs la loi de Beer-Lambert, l'absorbance A est proportionnelle la concentration :

A = (a - x) l Ao = a l

ln(A) = - kt + ln(Ao) A = Ao e -kt

Le temps de demi raction T ,temps au bout duquel la moiti du violet de mthyle a disparu,
est gal T = ln(2)/k et est indpendant de la concentration initiale en violet de mthyle.
A
Ao

(Ao/2)
A = Ao exp(-kt)

temps
0 T

TP Spectrophotomtrie.doc - C. Baillet 46
 Spectrophotomtrie - Dcoloration du violet de mthyle
2) Manipulation

a) Prparation : 3 solutions doivent tre prpares.

Prparer la solution de violet de mthyle dans un bcher.

Dans un autre bcher, prparer la solution de soude.

violet de mthyle soude

Solution 1 25 cm3 de 20 mg.L-1 25 cm3 0,1 mol.L-1

Solution 2 25 cm3 de 10 mg.L-1 25 cm3 0,1 mol.L-1

Solution 3 25 cm3 de 20 mg.L-1 25 cm3 0,05 mol.L-1

b) Mesures

Mlanger rapidement les 2 bchers et mettre la solution dans une cuve bien propre que l'on
introduit dans le spectrophotomtre.

Dclencher le chronomtre au moment du mlange et non au moment o la cuve est intro-

duite dans le spectrophotomtre, de manire bien connatre le temps : t = 0.

Relever l'absorbance A toutes les 15 secondes pendant 240 secondes.

Temps Solution 1 Solution 2 Solution 3

15
30
45
60
75
90
105
120
135
150
165
180
195
210
225
240

La raction est-elle termine au bout de 240 s ?

TP Spectrophotomtrie.doc C. Baillet 47
 Spectrophotomtrie - Dcoloration du violet de mthyle
c) Exploitation des donnes ( faire pour les 3 solutions)

Proposer pour l'absorbance un modle de la forme : A = Ao*exp(-k*t)

La premire manipulation doit vous permettre de connatre Ao.
Noter Ao et t = 0 sur le graphe.
Dterminer et reporter sur la courbe : A = f(t), le temps de demi-raction, temps pour lequel
l'absorbance est gale : A = Ao/2.
ln 2
Vrifie-t-on : T =
k

d) Comparaison des 3 solutions tudies

Ao k (s-1) T (s)

Solution 1

Solution 2

Solution 3

Les valeurs de Ao devraient tre identiques pour les solutions 1 et 3 : A10 = A30. Pourquoi ?
Les valeurs de Ao devraient tre telles que A20 = A10/2 pour les solutions 1 et 2. Pourquoi ?
Si elles ne le sont pas exactement, pourquoi ?

k1 et k2 devraient tre identiques si la cintique est d'ordre 1 ? Pourquoi ?

d) Ordre p de la raction par rapport la soude

k = ko (soude)p
Montrer que l'tude des cintiques 1 et 3 permet de dterminer p.
Dmontrer la relation : k1/k3 = 2p
k
ln 1
En dduire : p = 3
k
ln(2 )

TP Spectrophotomtrie.doc - C. Baillet 48
 Violet de mthyle
Dtermination du coefficient de partage du violet de mthyle,
entre l'eau et l'octan-1-ol

Calcul du coefficient de partage

Soit no le nombre de moles de violet de mthyle initialement prsentes dans la solution. Lors de
l'extraction, le violet de mthyle se partage entre la phase aqueuse et la phase organique.

no = naq + norg

Si les volumes des 2 phases sont gaux, alors :

co = caq + corg

corg co - caq
Kd = =
caq caq

1) Trac de la courbe d'talonnage

a) Prparation

A partir de la solution de base : c = 10 mg.L-1, prparer une gamme de solutions.

c (mg.L-1) 0 2 4 6 8 10 12 14

b) Mesures

Se placer max, longueur d'onde pour laquelle l'absorbance est maximale (max ~590 nm).
Faire le "zro optique" (ou ligne de base) du spectrophotomtre avec de l'eau distille.
Relever l'absorbance des diffrentes solutions prpares.

c) Courbe d'talonnage

Tracer la courbe d'talonnage : A = f(c) = k c, en traant galement les barres dincertitude.

Commencer la courbe (0,0).
Tracer la main les 2 droites de pente extrme et dterminer leurs pentes.
Vrifie-t-on la loi de Beer-Lambert : A = c l ?
Donner lquation de la droite et le coefficient de corrlation.
En dduire le coefficient d'extinction spcifique massique du violet de mthyle.
A partir du trac des 2 droites de pente extrme, dterminer l'incertitude commise sur ?
Prciser lunit de .

49
TP Spectrophotomtrie.doc C. Baillet - 2006
 Etude du violet de mthyle

2) Dtermination du coefficient de partage du violet de mthyle

a) Dans un tube essai, verser 5 ml de violet de mthyle 20 mg.L-1 et ajouter 5 ml d'octanol.

Dans un autre tube essai, verser 5 ml d'eau et ajouter 5 ml d'octanol.
Bien agiter les 2 tubes pendant 30 secondes.
Laisser dcanter. La phase aqueuse se trouve au-dessous de la phase organique. Pourquoi ?

b) A l'aide d'une pipette Pasteur, prlever la phase aqueuse de la solution qui ne contient pas de
violet de mthyle et effectuer le "zro optique" avec cette eau sature en octanol.

c) A l'aide d'une pipette, prlever la phase aqueuse de la solution qui contient le violet de m-
thyle et en mesurer l'absorbance.

d) Lire, sur la courbe d'talonnage, la concentration caq de la solution.

En dduire la valeur du coefficient de partage :

Kd = corg = co - caq Kd ~ 1,1 sur les tables

caq caq

3) Efficacit de l'extraction

L'extraction se fait l'aide de 2 volumes d'octanol successifs de 2,5 ml.

a) Dans un tube essai, verser 5 ml de violet de mthyle 10 mg.L-1 et ajouter 2,5 ml d'octanol.
Dans un autre tube essai, verser 5 ml d'eau et ajouter 2,5 ml d'octanol.
Bien agiter les 2 tubes pendant 30 secondes.
Laisser dcanter. La phase aqueuse se trouve au-dessous de la phase organique.
b) A l'aide d'une pipette, prlever la phase aqueuse qui ne contient pas de violet de mthyle et
effectuer le "zro optique" avec cette eau sature en octanol.
Ne pas jeter cette solution qui resservira lors de la deuxime extraction.
c) A l'aide d'une pipette, prlever la phase aqueuse qui contient le violet de mthyle et en mesu-
rer l'absorbance.
d) Lire, sur la courbe d'talonnage, la concentration c'aq de la solution.
e) Rcuprer toute la phase aqueuse violette : 5 ml et faire nouveau une extraction avec 2,5 ml
d'octanol.
f) Lire, sur la courbe d'talonnage, la concentration c''aq de la solution.

On dispose alors d'une solution aqueuse qui a t extraite avec la mme quantit d'octanol que
prcdemment, mais par 2 fois. La concentration obtenue lors de cette manipulation est plus pe-
tite que celle obtenue prcdemment.
L'extraction est donc meilleure si l'on procde par petites quantits de solvant successives que
par une seule grande quantit.

c''aq < caq < c'aq

En dduire la valeur du coefficient de partage aprs la premire extraction et aprs la deuxime

extraction ; la valeur de Kd devrait rester constante.

Kd = 2 co - c'aq Kd = 2 c'aq - c"aq

c'aq c"aq

50
TP Spectrophotomtrie.doc - C. Baillet