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Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel

Frottis sanguin :
réalisation pratique et
méthode de lecture
C. Trumel
T. Lavabre

Jeudi 26 janvier 2017

scil Vet Academy

Pourquoi faire
un frottis?

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Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel

Pourquoi faire un frottis ?

 Confirmer les résultats de l’automate en cas d’anomalie


des résultats chiffrés et/ou des graphiques

 Rechercher les anomalies morphologiques des cellules


sanguines

 Rechercher des éléments positifs : parasites, autres


agents infectieux, cellules tumorales

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Comment faire
un frottis?

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Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel

Comment faire un frottis ?

 Sang veineux provenant d’un tube EDTA ou CTAD

 Etalement réalisé rapidement après le prélèvement

 Sang capillaire pour un enrichissement en parasites

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Comment faire un frottis ?
1- Réalisation du frottis :
Déposer une goutte de sang de petite taille à l’extrémité de la lame porte-objet.
Approcher une lame rodée devant la goutte de sang en formant un angle d’environ 45° avec la
lame porte-objet.

lame rodée
lame porte-objet 2- Etalement :
Ni trop rapide : frottis épais et court
Ni trop lent : frottis trop long,
Mouvement ferme et régulier.

Attendre que le sang se répartisse tout le long du bord de la lame rodée avant de la faire glisser
sur la lame porte-objet d’un mouvement ferme et régulier

3- Sécher énergiquement le frottis à l’air par agitation, immédiatement après avoir effectué
l’étalement.
4- Identifier la lame.
Le frottis doit normalement être contenu en totalité sur la lame, sa queue n’atteignant pas
l’extrémité de celle-ci.
C. Trumel - ENVT

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Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel

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Comment faire un frottis ?

OUI

NON

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Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel

Comment faire un frottis ?


Selon les pathologies possibles de l’animal,
le sang s’étale plus ou moins bien

Ex : hyperprotéinémie ++  sang + visqueux, moins bien étalé


anémie  sang – visqueux (+ « liquide »), frottis trop long qui risque de
sortir de la lame

A retenir :

 Pour étaler plus loin :


Diminuer l’angle entre la lame porte-objet et la lamelle
Ralentir son geste

 Pour ne pas « trop » étaler :


Augmenter l’angle entre la lame et la lamelle
Accélérer son geste
Déposer une très petite goutte
Si la goutte est importante, ne pas attendre que toute la goutte se répartisse sur
la lamelle avant d’effectuer l’étalement.

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Comment faire un frottis ?
Colorants acides = gris /rose / orangé = éosinophile

Colorants de type Romanovsky


Coloration rapide
Diff quick
RAL 555
MGG rapide (Giemsa R)
Autres
Wright, Giemsa
Colorants Basiques = bleu / violet = basophile

Colorants pour les réticulocytes


Bleu de crésyl brillant
Bleu de méthylène nouveau
TestSimplet (lames précolorées)

C. Trumel - ENVT
ARN / ADN
Corps de Heinz

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Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel

Comment faire un frottis ?

RAL, Diff-Quick MGG


Utilisation Plus rapide et souvent plus facile Plus long, mais pas plus
car habituel de matériel nécessaire

Romanowsky :
- Très bonne coloration des cytoplasmes, agents infectieux
- Bonne coloration des noyaux et nucléoles
Type de coloration
Mauvaise coloration des
granulations des basophiles
(aspect neutrophiles), lymphocytes Coloration granulations
à grains (aspect lymphocytes RAS
normaux) et mastocytes (aspect
macrophages ou plasmocytes)

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Comment faire un frottis ?

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Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel

Comment faire un frottis ?

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Comment faire un frottis ?

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Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel

Comment faire un frottis ?

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Comment faire un frottis ?

Quel que soit le colorant utilisé, quelques précautions pour une


coloration optimale :

 Toujours utiliser des lames neuves et propres


Ne pas tenter de réutiliser une lame

 Filtrer et/ou changer régulièrement ses colorants


Afin d’éviter la formation d’artéfacts de coloration, ou de contaminer
les lames avec des débris provenant d’une lame précédente

 S’assurer que les lames sont bien sèches avant de colorer

 Ne jamais toucher la surface de la lame

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Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel

Envoi au laboartoire

Si besoin d’envoyer au laboratoire

 Préparer plusieurs lames

 Colorer une des lames pour vérifier la qualité de l’étalement

 Envoyer une ou plusieurs lames non colorées ; la lame déjà colorée peut
être gardée à la clinique (huile à immersion, archivage, comparaison des
résultats labo/clinique…)

 Envoyer dans une boite rigide, sans contact possible entre les lames et les
bords de la boite

 Joindre le tube EDTA, sous couvert du froid si voyage > 24h

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Envoi au laboratoire
Si besoin d’envoyer au laboratoire

Toujours joindre une feuille de demande d’analyse


avec l’anamnèse et les commémoratifs correctement
renseignés : l’interprétation des résultats et anomalies
en dépend :

 Lymphocytose jeune / adulte

 Microcytose raciale

 Polyglobulie brachycéphale

 Formule de stress si traitement corticoïdes

 Modifications post-prandiales

…

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Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel

Envoi au laboartoire

Si besoin d’envoyer au laboratoire

Joindre également les résultats chiffrés donnés par l’analyseur de la


clinique

 Résultats

 Graphiques / courbes

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Comment lire un
frottis?

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Comment lire un frottis ?

Trois étapes

1) Regarder toute la lame à x100


 confirmer les résultats chiffrés : apprécier les densités cellulaires
 apprécier les répartitions des cellules
 repérer la zone de lecture

2) Faire une formule à x400


 confirmer les résultats chiffrés

3) A x 1000
 Apprécier la morphologie des cellules
 Estimer une numération plaquettaire

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Comment lire un frottis ?

Regarder toute la lame à x100

Toute
la
lame
permet d’apprécier
- la quantité de rouges / de blancs / les agrégats plaquettaires
- la répartition : rouleaux / amas / agglutinats

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Comment lire un frottis ?
Apprécier la densité des rouges dans le corps de
frottis et la zone de lecture

Zone d’observation

Tête Corps Queue

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Comment lire un frottis ?


Apprécier la quantité de leucocytes

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Comment lire un frottis ?

Chercher les agrégats plaquettaires

Sur les bords, dans la goutte et


en queue de frottis

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Faire une formule à x 400

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Zone de lecture

Dans la zone de lecture repérée à x 100


Tête Corps Queue

Compter environ 100 GB, en créneaux

Si leucopénie: créneaux courts, en


bords de frottis

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Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel

Estimer la numération plaquettaire


à x 1000

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Numération plaquettaire x 1000

Si pas d’agrégats

Compter les plaquettes sur 10 champs

Calculer la numération plaquettaire


- Moyenne du nbre de plaquettes sur 10 champs : M
- M x 20.109 = num/L
- Ex ici : 5 plq sur 3 champs soit 25.109 /L

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Apprécier la morphologie cellulaire à


x1000

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Frottis normal

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Frottis normal

Aspect de la zone de lecture

 « Tapis » d’hématies régulièrement espacées, non


collées les unes aux autres.

 Hématies de taille homogène, bords lisses et réguliers.

 Pâleur centrale chez le chien

 Chez le chat : quelques corps de Howell-Jolly possible

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Frottis normal

Zone d’observation

Tête Corps Queue

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Frottis normal

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Frottis normal

Les leucocytes lymphocyte


normaux du chien

basophile

monocyte
neutrophile

éosinophile

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Frottis normal
lymphocyte

Les leucocytes
normaux du chat

basophile monocyte

neutrophile

éosinophile

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Conclusion

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Conclusion

Nécessité d’une vision intégrée : résultats chiffrés


et observation du frottis

Le frottis seul : gros risques d’erreurs ou de perte


de temps (sauf piro !!)

Le frottis envoyé au labo: pourquoi ?

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Conclusion

Lire un frottis : mode d’emploi

1) Lecture en cas d’anomalies des résultats chiffrés et/ou graphiques

2) Lecture systématisée
 Toute la lame à x100
apprécier la densité des rouges, leur répartition
chercher les agrégats plaquettaires
repérer la zone de lecture

 La zone de lecture à x400 (+ la queue de frottis)


apprécier la répartition des blancs
formule

 La zone de lecture à x1000


estimer la numération plaquettaire
apprécier la morphologie des cellules

 Dresser la liste des anomalies

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Frottis sanguin (Ep 1): réalisation Pr Cathy Trumel

Merci de votre attention !

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