ANALYSE PHARMACEUTIQUE

M2 PHARMA

Préparation de l’échantillon

NOV 2021

PHARMACIE M2 ANA PHARMA 2020-2021

 Préparation de l’échantillon
Analyse de médicaments:
• Préparation des échantillons est un passage
souvent obligatoire.
But principal:
- Elimination des constituants interférents avec
la méthode d'analyse utilisée, et parfois
également
- Augmentation de la concentration des
composés à déterminer.
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 Préparation de l’échantillon
• La préparation de l'échantillon est
souvent indispensable et est
aujourd’hui considérée comme une
étape fondamentale du processus
analytique.

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 Préparation de l’échantillon
Processus analytique
• L’analyse de composés dans des matrices complexes
par des techniques spectroscopiques ou
chromatographiques nécessite une préparation de
l’échantillon.

Préparation des Analyse des

Séparation Détection données
Echantillons

Extraction Liquide-Liquide / Extraction Solide – Liquide

Centrifugation/ Dialyse / Ultrafiltration / Evaporation
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 Préparation de l’échantillon
Objectifs
• Avant toute analyse, il est nécessaire d'obtenir
l'échantillon sous une forme compatible avec la
méthode choisie. La plupart des dosages étant
effectués avec des solutions, l'échantillon doit tout
d'abord subir un prétraitement afin de le solubiliser
dans un solvant compatible avec la méthode
analytique.

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 Préparation de l’échantillon
Objectifs
• Comme l’analyste est généralement confronté à
diverses matrices, la préparation d’échantillon revêt
un caractère fondamental du processus analytique.

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Préparation de l’échantillon
Comprimés Pommades

?
Gélules Crèmes
?
Suspensions Suppositoires

Collyre Injectables

Sirop Pilules

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 Préparation de l’échantillon
Objectifs
Avant toute analyse, la préparation d'un
échantillon peut être considérée comme une
suite d'opérations unitaires
1. Stabilisation et/ou mise en solution de
l'analyte
2. Elimination de composés interférents
3. Augmentation de la sensibilité et de la
sélectivité de l'analyse.
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 Préparation de l’échantillon
1. Stabilisation et/ou mise en solution
• Par exemple, dans les matrices biologiques, il est
nécessaire de s'assurer que le composé à tester
se trouve sous la forme désirée pour son
extraction et/ou son dosage.
• Ceci peut se faire suivant les cas, par une réaction
enzymatique ou par hydrolyse acide ou basique
afin de cliver le complexe.

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 Préparation de l’échantillon
1. Stabilisation et/ou mise en solution
• Dans le cas d'une matrice solide, comme un
comprimé par exemple, il est nécessaire de
broyer puis de solubiliser la préparation au
moyen d'un solvant.

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 Préparation de l’échantillon
2- Elimination de composés interférents
• C'est la partie essentielle dans la préparation d'un
échantillon. Les techniques pouvant être utilisées sont de
natures très diverses:
• - Précipitation
• - Dialyse
• - Lyophilisation
• - Extraction Liquide-Liquide
• - Extraction Liquide-Solide
• - Extraction sur support solide
• - etc.

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 Préparation de l’échantillon
3- Augmentation de la sensibilité et de la
sélectivité de l'analyse.

• Dans certains cas, il est nécessaire de modifier

chimiquement le composé avant son analyse
afin de pouvoir le doser.
• Cette opération est appelée dérivatisation ou
dérivation.

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 Préparation de l’échantillon
3- Augmentation de la sensibilité et de la
sélectivité de l'analyse.
• Il est également possible d'utiliser des
détecteurs particuliers couplés à la méthode
analytique.
• Dans le cas des chromatographies par exemple,
de nombreux détecteurs ont été développés
permettant de déterminer sélectivement et avec
une grande sensibilité les analytes séparés.

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 Préparation de l’échantillon
• 3- Augmentation de la sensibilité et de la
sélectivité de l'analyse.
• Lors de toute analyse, de nombreuses
manipulations sont effectuées. Celles-ci peuvent
engendrer de nombreuses pertes et contaminations.

• Il est donc nécessaire lors de l'élaboration d'une

méthode de minimiser ces manipulations.
L'automatisation et le couplage de techniques sont
des solutions à ce problème.

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 Préparation de l’échantillon
Extraction liquide-liquide

• Correspond à une extraction par un solvant non miscible

• Ces extractions sont parmi les méthodes les plus
utilisées en chimie analytique.

• Elles permettent de réaliser le transfert d'un soluté

initialement contenu dans une phase, solide ou liquide,
vers un solvant non miscible au premier milieu.

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 Préparation de l’échantillon
Extraction liquide-liquide simple (LLE)
• Le principe est fondé sur la distribution d'un
soluté donné entre deux solvants non miscibles
en fonction de sa solubilité dans chacun d'entre
eux. Cette technique est généralement utilisée
entre une phase aqueuse et une phase
organique.

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 Préparation de l’échantillon
Extraction liquide-liquide simple (LLE)
• La LLE simple est obtenue en une seule
opération, en général à l'aide d'une ampoule à
décanter avec mise en contact vigoureuse des
deux solvants (favorise l'équilibre) et séparation
après décantation. La phase extraite est
appelée extrait et la phase résiduelle « raffiné ».

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 Préparation de l’échantillon
Extraction liquide-liquide simple (LLE)
• La plupart des applications sont développées
pour l'extraction de phases aqueuses par un
solvant organique hydrophobe.

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 Préparation de l’échantillon
Coefficient de partage Kp
• Soit un soluté S se répartissant entre 2 solvants A et
B totalement non miscibles entre eux.
• Le coefficient de partage est alors la constante
d'équilibre thermodynamique décrivant le partage du
soluté entre les 2 phases lorsque l'équilibre est
atteint.
• Partage du soluté entre les deux solvants A et B.

|S| = concentration
du soluté dans les
deux phases A et B

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 Préparation de l’échantillon
Coefficient de partage Kp
• Kp est une constante dans des conditions
données (P,T, pH, ...) et dans les cas idéaux où il
n'y a pas d'interaction entre le soluté et les
solvants.
• Le soluté se trouve sous la même forme dans
les deux solvants. Le corps se répartit à
l'équilibre de telle sorte que les concentrations
soient dans un rapport constant.

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 Préparation de l’échantillon
Coefficient de partage Kp
• Kp varie selon les substances et selon le couple
de solvants.
• Le but à atteindre est d'extraire la plus grande
quantité d'une substance avec la plus grande
pureté possible
• (Ceci peut se faire en se rappelant les principes
d'affinité quant au choix des solvants en fonction
des solutés).

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 Préparation de l’échantillon
Solvants d’extraction
• Affinités des solvants:
• Un solvant dissout bien un composé qui lui
ressemble:"like dissolves like" (qui se
ressemble s'assemble)

• Les solvants polaires et dissociants tels que

l'eau dissolvent les composés ioniques et/ou
polaires hydrophiles.

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 Préparation de l’échantillon
Solvants d’extraction
• Affinités des solvants:

• Les solvants organiques apolaires et peu

dissociants dissolvent les molécules et les
composés hydrophobes.

• On utilise généralement des solvants chlorés ou

des hydrocarbures.

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• Choix du solvant d’extraction
• Lipophilie ou hydrophobicité relative de l’analyte
• Solubilité de l’analyte
• Point d’ébullition le plus bas possible (évaporation)
• Solubilité dans l’eau

• D’une manière générale, plus le solvant est apolaire

plus il est sélectif. Le solvant choisi sera donc le
solvant le plus apolaire où l’analyte est encore
soluble.
• Pour des composés plus polaires, des mélanges de
solvants sont possibles.

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Préparation de l’échantillon

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 Préparation de l’échantillon
• Taux de distribution
• Lorsque le soluté se trouve sous plusieurs formes
dans l'un ou dans les deux solvants (dissociation,
dimérisation), on fait appel à un coefficient de
partage apparent, appelé taux de distribution.

• Toutes les formes doivent être prises en compte,

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 Préparation de l’échantillon
Taux de distribution

• Ex: molécules à caractère acide ou basique,

complexes organo-métalliques, solvatation,
dimérisation ou polymérisation.

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 Préparation de l’échantillon
• Rendement d’extraction
• Notion permettant de juger la qualité de
l'extraction. C'est un rapport de masses entre la
quantité extraite dans le solvant B (QB) et la
quantité initiale de soluté dans le solvant A (QAo).
Ce rapport est généralement exprimé en %.

• VA et VB = volumes des solvants A et B

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 Préparation de l’échantillon
• Rendement d’extraction

• D'après l'équation du rendement, l'extraction sera

d'autant meilleure que VB sera plus grand que VA.
• Afin d'améliorer les rendements d'extraction, il est
préférable de répéter l'opération d'extraction un certain
nombre de fois.

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 Préparation de l’échantillon
Applications de LLE
• Molécules organiques non polaires simples

• Généralement extraites sans intervention de

réactions chimiques spéciales. Les molécules
apolaires présentent souvent un Kp > 10
entre un solvant hydrophobe et l'eau.

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 Préparation de l’échantillon
• Applications de LLE
• Molécules organiques non polaires simples
Règles générales:

- Plus le nombre de -CH2 - augmente, plus Kp augmente

- Un composé ramifié présente un Kp inférieur au linéaire
- Un composé insaturé présente un Kp inférieur au saturé
- Un hétéroatome (O, N) diminue fortement Kp

- Un halogène augmente Kp

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• Applications de LLE
• Influence du pH
• Contrairement aux molécules neutres, les ions
ne sont pratiquement pas extractibles par les
solvants hydrophobes.
• Toutefois, pour les composés acides ou
basiques, en modifiant le pH, il est possible de
rendre ce composé sous sa forme moléculaire
(neutre) et donc extractible

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 Préparation de l’échantillon
• Applications de LLE

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• Applications de LLE

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• Applications de LLE

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• Applications de LLE

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• Applications de LLE

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