VERSION 1 – DATE EFFECTIVE : 01/01/2016

EXAMEN MICROSCOPIQUE DES FROTTIS

MINCES ET DES GOUTTES ÉPAISSES
POUR L’IDENTIFICATION DE PARASITES
DU PALUDISME

DIAGNOSTIC MICROSCOPIQUE DU PALUDISME

MODES OPÉRATOIRES NORMALISÉS ­– DMP-MON-08

1. OBJECTIF ET CHAMP D’ACTION

Fournir une description détaillée de la procédure à suivre pour une détection et une identification correcte
des parasites du paludisme par microscopie optique dans les étalements de sang colorés au Giemsa.
Cette procédure ne peut être modifiée qu’avec l’approbation du coordonnateur national pour l’assurance
de la qualité du diagnostic microscopique du paludisme. Toutes les procédures exposées ici sont
obligatoires pour tous les techniciens de la microscopie travaillant dans les laboratoires nationaux de
référence, dans les laboratoires des hôpitaux ou dans les laboratoires médicaux de base au sein des
établissements sanitaires où sont effectués des examens microscopiques pour le diagnostic du paludisme.

2. HISTORIQUE
L’identification des espèces et des stades des parasites du paludisme, ainsi que le calcul de leur densité,
sont des éléments cruciaux dans la prise en charge clinique des cas de paludisme, les études évaluant
l’efficacité thérapeutique des médicaments, les enquêtes épidémiologiques sur le paludisme et les
programmes de lutte. Par conséquent, le diagnostic du paludisme fondé sur l’examen des étalements
sanguins doivent être corrects et fournir une numération parasitaire exacte.
L’examen des étalements sanguins permet également de détecter plusieurs agents pathogènes
sanguicoles, de poser un diagnostic morphologique d’anémie et d’identifier plusieurs troubles
hématologiques, qui doivent être notifiés par le technicien de la microscopie.

3. FOURNITURES, MATÉRIEL ET ÉQUIPEMENTS

• Un microscope composé, équipé d’une paire d’oculaires 10x ; des objectifs 10x, 40x et 100x ;
une platine mobile (un marqueur à objectif, ainsi qu’un objectif 60x peuvent être montés le
cas échéant).
• Les étalements sanguins colorés au Giemsa que vous devez examiner.
• De l’huile à immersion de type A d’excellente qualité.
• Du papier pour objectif.
• Un stylo et un crayon.
• Un formulaire d’enregistrement ou un registre du paludisme.
DMP–MON–08 : EXAMEN MICROSCOPIQUE DES FROTTIS MINCES ET DES GOUTTES ÉPAISSES POUR L’IDENTIFICATION DE PARASITES DU PALUDISME
4. PROCÉDURE
SCHÉMA
4.1. Examen microscopique d’une goutte
épaisse
1. Mettez
l’étalement de sang
coloré au Giemsa sur la platine,
en positionnant la goutte épaisse sur
l’axe de l’objectif 10x, étiquette
du côté gauche.
2. Allumez le microscope et réglez
la lumière jusqu’à ce que l’éclairage
soit optimal.
3. Mettez une goutte d’huile à
immersion sur la goutte épaisse.
4. Cherchez et sélectionnez la partie de
l’étalement qui est bien colorée et lisse.
5. Passez à l’objectif 100x à immersion
et laissez l’objectif entrer en contact avec
l’huile à immersion.
6. Avec la vis de mise au point fine,
réglez le microscope sur l’étalement.
DESCRIPTION DE L’ACTIVITÉ
4.1. Examen microscopique d’une goutte
épaisse
1. Mettez l’étalement de sang coloré au
Giemsa sur la platine, étiquette du côté
gauche. Positionnez la goutte épaisse sur
l’axe de l’objectif 10x.
2. Allumez le microscope, réglez la lumière
jusqu’à ce que l’éclairage soit optimal et
faites la mise au point en regardant à
travers l’oculaire et l’objectif 10x.
3. Recherchez dans la lame la présence
de parasites et d’éléments sanguins.
Sélectionnez la partie de l’étalement qui
est bien colorée et dont la répartition des
leucocytes est homogène.
4. Mettez une petite goutte d’huile à
immersion sur la goutte épaisse. Pour éviter
toute contamination croisée, veillez à ce
que l’applicateur de l’huile à immersion
n’entre jamais en contact avec la lame.
Ne faites pas entrer l’objectif 40x en contact
avec l’huile.
5. Faites passer l’objectif 100x à immersion
audessus de la partie de la goutte épaisse
sélectionnée. Utilisez la vis de mise au
point fine pour voir une image nette.
Remontez la platine mécanique pour éviter
d’endommager la lame.
6. Avec la vis de mise au point fine, réglez le
microscope sur les éléments cellulaires et
confirmez que la partie de la goutte épaisse
convient bien à un examen de routine : une
densité de 15 à 20 leucocytes par champ
de la goutte épaisse indique une épaisseur
satisfaisante de l’étalement. Les étalements
ayant moins de leucocytes par champ
nécessiteront un examen plus approfondi.
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SCHÉMA
7. Commencez par examiner le champ
situé dans la partie supérieure gauche
de l’étalement, puis déplacez la lame sur
la droite, champ par champ.
8. Lorsque vous parvenez à l’autre
extrémité de la lame, déplacez la lame
vers le bas, puis sur la gauche, champ
par champ, et ainsi de suite.
DESCRIPTION DE L’ACTIVITÉ
7. Soyez systématique dans votre examen
de la lame. Commencez par la partie
supérieure gauche de l’étalement (indiqué
à l’aide d’une flèche verticale verte sur la
Figure 1) et commencez à la périphérie
du champ, avant de déplacez la lame
sur la droite, champ par champ, dans un
mouvement horizontal.
8. Lorsque vous parvenez à l’autre extrémité
de la lame, déplacez la lame légèrement
vers le bas, puis sur la gauche, champ par
champ, et ainsi de suite (voir ci-dessous).
Pour un examen efficace, réglez en
permanence la mise au point fine pour
l’examen de chaque champ.
Figure 1. Examen microscopique d’une
goutte épaisse (légendes : goutte épaisse ;
champ avec l’huile à immersion)
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SCHÉMA
4.2. Déterminer si une goutte épaisse contient
des parasites du paludisme et identifier
les espèces.
1. Examinez
la goutte épaisse sous
l’objectif à immersion, champ
par champ, horizontalement
ou verticalement.
2. Examinez au minimum 100 champs
avant de déclarer qu’une lame
est négative.
3. Si l’on observe des parasites, il est
recommandé d’examiner 100 champs
de plus pour augmenter les chances
d’identifier des infections mixtes.
4. Le frottis mince devrait toujours
être examiné pour confirmer
l’espèce de parasite trouvée.
5. Déterminez
toutes les espèces et
tous les stades, et enregistrez
vos observations.
DESCRIPTION DE L’ACTIVITÉ
4.2. Déterminer si une goutte épaisse contient
des parasites du paludisme et identifier
les espèces.
1. Continuez à examiner la lame pour
100 champs à fort grossissement ou à
l’objectif à immersion. Déplacez l’étalement
d’un champ à fort grossissement à chaque
fois, comme illustré sur la Figure 1. Utilisez
la vis de mise au point fine pour avoir une
image nette.
2. Examinez au minimum 100 champs à fort
grossissement avant de déclarer qu’une
goutte épaisse est négative. Dans la mesure
du possible, l’étalement devrait être examiné
dans son entier.
3. Si l’on observe des parasites, 100 champs
supplémentaires doivent être examinés
avant d’identifier formellement l’espèce,
en veillant à ne pas passer à côté d’une
éventuelle infection mixte.
4. Le frottis mince devrait toujours être
examiné pour confirmer l’espèce de parasite
trouvée de façon définitive. Le frottis,
contrairement à la goutte épaisse, permet
de visualiser la morphologie des parasites et
des globules rouges. Examinez soit la partie
de la lame où l’étalement ressemble à une
plume, soit le bord du frottis mince, tel que
l’explique ci-dessous la procédure 4.3.
5. Identifiez et enregistrez toutes les espèces
et les stades observés dans le registre dédié
aux examens microscopiques du paludisme.
Voir DMP-MON 6b : Enregistrement et
notification des résultats de l’examen
microscopique.
Note : Veuillez-vous référer aux planches de
l’OMS pour le diagnostic du paludisme afin
d’identifier chaque espèce.
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SCHÉMA
4.3. Examen du frottis mince pour confirmer
l’espèce et les infections mixtes
1. Le
frottis doit être examiné pour
confirmer l’espèce et les infections
mixtes.
2. Déposez une goutte d’huile à
immersion sur l’extrémité en forme de
plume de l’étalement.
3. Passez de l’objectif 10x à l’objectif à
immersion 100x et faites la mise au point
sur le frottis mince.
4. Observez l’extrémité mince ou
en forme de plume de l’étalement,
en passant d’un champ à l’autre,
horizontalement ou verticalement.
5. Étudiez l’étalement jusqu’à ce que
toutes les espèces soient confirmées.
DESCRIPTION DE L’ACTIVITÉ
4.3. Examen du frottis mince pour confirmer
l’espèce et les infections mixtes
1. Pour confirmer une espèce parasitaire ou
des infections mixtes après avoir examiné la
goutte épaisse, examinez le frottis mince.
2. Déposez une goutte d’huile à immersion
sur l’extrémité en forme de plume
de l’étalement.
3. Passez de l’objectif 10x à l’objectif à
immersion 100x.
4. Observez l’extrémité en forme de plume de
l’étalement, ou l’extrémité où les globules
rouges sont côte à côte et se chevauchent le
moins possible. Examinez le frottis en suivant
le cheminement indiqué dans la Figure 2,
en vous déplaçant le long du bord du frottis,
puis d’un champ vers l’intérieur avant de
revenir latéralement, et ainsi de suite.
Figure 2. Examen microscopique d’un
frottis mince
5. Examinez le frottis mince jusqu’à pouvoir
confirmer la présence et l’espèce des
parasites du paludisme. Identifiez et
enregistrez toutes les espèces et les stades
observés dans le registre dédié aux
examens microscopiques du paludisme.
Voir DMP-MON-06b : Enregistrement
et notification des résultats de l’examen
microscopique.
Veuillez vous référer aux planches de
l’OMS pour le diagnostic du paludisme afin
d’identifier chaque espèce.
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5. REMARQUES
Vous pouvez compter les parasites sur un frottis mince lorsqu’il n’y a pas de goutte épaisse ou lorsque
cette dernière est mal colorée ou abîmée. De plus, lorsque la densité parasitaire est > à 100 parasites
pour chaque champ à l’objectif à immersion de la goutte épaisse, la parasitémie devrait être calculée en
observant le frottis mince. (Voir DMP-MON-09 : Numération des parasites).

6. FORMULAIRES ET DOCUMENTS
• Un formulaire de notification des résultats (peut varier d’un laboratoire à l’autre).
• Un registre pour les examens microscopiques des étalements à la recherche du paludisme (peut
varier d’un laboratoire à l’autre).

7. RÉFÉRENCES
OMS. Planches pour le diagnostic microscopique du paludisme. Genève, 2010.
OMS. Planches pour l’identification des filaires. Genève, 1997.
WHO. Bench aids for the morphological diagnosis of anaemia. Geneva; 2001.
OMS. QA manual for malaria microscopy, 2nd Edition. Genève, 2015.
OMS. Techniques de base pour le diagnostic microscopique du paludisme. Partie I : Guide du stagiaire.
Deuxième édition. Genève, 2010
WHO. National malaria slide bank standard operating procedures. Geneva; 2015 (en cours).

8. HISTORIQUE DU DOCUMENT
Date Personne responsable
Version Commentaires
(mois/année) (Nom, prénom)
Examiné et finalisé par Gonzales, Glenda
Janvier 2016 1 des experts, édité et mis Fonctionnaire technique,
en page WPRO

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