ROYAUME DU MAROC

Département de Biologie
Filière : Sciences de la Vie - S3
Année universitaire : 2021- 2022
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TD 2 : Dénombrements bactériens
1-Nécessité et intérêt du dénombrement en Bactériologie :
Donner trois exemples montrant la nécessité et l’intérêt des dénombrements bactériens.

2- Différents types de dénombrement :

On distingue généralement deux grands types de méthodes de dénombrements :
- Les méthodes directes
- Les méthodes indirectes.
Précisez la différence entre ces deux méthodes.
Donnez quelques exemples de techniques de dénombrement directes.

3- Technique dilution-étalement : Exercices d’application

Exercice I :
L'analyse bactériologique d'une urine infectée donne le tableau de résultats suivant, sachant que l'on a ensemencé 0,1 ml
de chaque dilution par boite de milieu de culture.
__________________________________________________________
-1 -2 -3 -4
Dilution 10 10 10 10
__________________________________________________________
Essai 1 INC 490 95 2
Essai 2 INC 501 110 0
Essai 3 INC 520 120 5
__________________________________________________________
INC: incomptable = Trop nombreuses pour être comptées)

a) Définissez une colonie ;

b) Que signifie un facteur de dilution= 102 par rapport à la solution mère?
c) Quelle dilution doit-on utiliser pour réaliser le dénombrement ?
d) Déterminez le nombre de bactéries par ml de l'urine analysée.

1
Exercice II :

25 grammes d’une pomme ont été additionnés à 225 ml d’eau physiologique stérile. Après homogénéisation de ce
mélange, 12 ml ont été de nouveau pris et mis dans un volume de 108 ml d’eau physiologique stérile. Après
homogénéisation de ce nouveau mélange 0,1 ml est ensemencé sur une boite de gélose nutritive. Après 24 heures
d’incubation à 37°C, le nombre total des colonies dénombrées sur cette boite, a été de 182.

a) Quel est le type des bactéries dénombrées ? justifiez votre réponse ?

b) Quel est le nombre total (ufc) des bactéries dénombrées par gramme de pomme analysé ? détaillez vos
calculs.

Exercice III
Les dilutions suivantes ont été réalisées pour déterminer la concentration de bactéries dans une solution mère (stock).
Selon le résultat obtenu (150 colonies), quelle était la concentration de bactéries dans cette solution mère ?

Exercice IV
Considérez le schéma de dilution suivant :

5ml 1 ml 0.5ml 2 ml 0.1ml

100 ml 45 ml 9 ml 4.5ml 18 ml 0.9 ml

Solution mère

0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml

Boite de
Pétri

Nombre INC 435 52 7 0

de colonies

Indiquez le nombre total d'UFC dans la totalité de la quantité de 100 mL de la solution mère.

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