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Journal de l'Association des universités arabes pour les sciences fondamentales et appliquées (2016) 21, 31–37

Université de Bahreïn
Journal de l'Association des universités arabes pour
Sciences fondamentales et appliquées
www.elsevier.com/locate/jaaubas
www.sciencedirect.com

ARTICLE ORIGINAL

Méthode spectrophotométrique pour la détermination de

la prégabaline : une approche de conception expérimentale pour
le développement de méthodes

un b
Dipak D. Patil a, *, Mukesh S. Patil , Yogita B.Wani

un
Department of Quality Assurance, HR Patel Institute of Pharmaceutical Education and Research, Karwand Naka, Shirpur, Dhule (Maharashtra State)
425405, India Department of Pharmaceutical
b
Chemistry, RC Patel Institute of Pharmaceutical Education and Research, Karwand
Naka, Shirpur, Dhule (État du Maharashtra) 425405, Inde

Reçu le 12 septembre 2014 ; révisé le 6 janvier 2015 ; accepté le 11 mars 2015

Disponible en ligne le 15 juin 2015

MOTS CLÉS
Résumé Une méthode spectrophotométrique simple, sensible et reproductible est développée pour
Prégabaline; déterminer la teneur en prégabaline (PGB) en vrac et sous forme posologique en capsule en utilisant
p­diméthylamino une approche de conception expérimentale. La méthode proposée est basée sur la réaction de
benzaldéhyde; condensation de PGB (amine primaire) avec le p­diméthylaminobenzaldéhyde (PDAB) en milieu acide
Approche de conception pour former un complexe PGB­PDAB. Le complexe PGB­PDAB montre une absorption maximale à
expérimentale ; 395,80 nm. La méthode proposée est validée selon les directives ICH Q2 (R1) pour la validation des méthodes analytiqu
OVA
Le pourcentage de pureté de la PGB sous forme de gélule, tel que déterminé à l'aide de la méthode proposée, est de 100,05
± 1,48, tandis que la valeur correspondante selon la méthode officielle (Indian Pharmacopoeia, 2010) est de 100,46 ± 0,41. La
valeur t et la valeur F sont calculées à des fins de comparaison statistique et sont respectivement de 0,60 et 0,08. La méthode
proposée peut recommander une analyse de contrôle qualité de routine de la PGB sous sa forme posologique pharmaceutique.
ª 2015 Université de Bahreïn. Services de publication par Elsevier BV Cet
article est en libre accès sous la licence CC BY­NC­ND (http://creativecommons.org/licenses/by­nc­nd/4.0/).

1. Introduction en rapport (Pharmacopée

pharmacologiquement la gabapentine pour indienne, 2010). Le
PGB est officiellement approuvé dans la pharmacopée indienne (2010) et

La prégabaline (PGB), [S­[+]­3­isobutyl GABA ou acide (S)­3­(aminométhyl)­5­ l'utilisation d'une méthode de chromatographie en phase liquide (LC) pour
méthylhexanoïque, nom commercial Lyrica] est un médicament déterminer la teneur en PGB en vrac et en capsules a été décrite. Diverses
anticonvulsivant et analgésique qui est structurellement et méthodes LC ont été rapportées dans la littérature (Vermeij et Edelbroek,
2004 ; Dousˇa et al., 2010 ; Kannapan et al., 2010 ; Karavadi et Challa, 2014).
* Un certain nombre de méthodes spectrophotométriques UV ont également
Auteur correspondant. Tél. : +91 9960878673 ; télécopie : +91 2563 257599.
été développées pour déterminer la teneur en PGB en utilisant différents

Adresses e­mail : dipakpatil888@rediffmail.com (DD Patil), mukeshpatil577@gmail.com

réactifs de dérivation. Les réactifs comprennent l'iodate de potassium et
(MS Patil), yogita33339@gmail.com (YB Wani). l'iodure de potassium (Gujral et al., 2009), la fluo rescamine, le 2,4­
diclorofluorobenzène et le 2,3,5,6­tétrachloro­1,
Examen par les pairs sous la responsabilité de l'Université de Bahreïn.

http://dx.doi.org/10.1016/j.jaubas.2015.03.002
1815­3852 ª 2015 Université de Bahreïn. Services d'édition par Elsevier BV
Ceci est un article en libre accès sous licence CC BY­NC­ND (http://creativecommons.org/licenses/by­nc­nd/4.0/).
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32
4­benzoquinone (Shaalan, 2010), ninhydrine (Bali et Gaur, 2011), 1,2­
naphtoquinone­4­sulfonate et 2,4­dinitrofluoro benzène (Walash et al., 2011),
acide ascorbique et salicylaldéhyde (Hammad et Abdallah, 2012) et le vert
de bromocrésol (Merin et al., 2013). Dans la littérature actuelle, Ismail et al.
(2016) et Kumble et Narayana (2016) ont également développé des
méthodes spectrophotométriques pour la détermination du bifonazole et du
feban
tél, respectivement. Dans les procédés mentionnés ci­dessus, les variables
expérimentales, telles que la concentration de réactif, le volume de réactif,
la température de chauffage, le temps de chauffage et le pH du mélange
réactionnel ont été optimisées en utilisant la méthode une variable à la fois
(OVAT). Comme son nom l'indique, une variable expérimentale est optimisée
à la fois en faisant varier sa concentration ou sa valeur dans une plage
donnée, en maintenant constantes les valeurs des paramètres restants.
Ainsi, certains paramètres ne sont pas optimisés.
Pour cette raison, la méthode OVAT donne des résultats trompeurs et est
inefficace pour optimiser les variables expérimentales (Lewis et al., 1999).
Par conséquent, l'utilisation de cette méthode pour optimiser les variables
expérimentales doit être évitée.
Un autre inconvénient de la méthode OVAT est que le nombre
d'expériences nécessaires est important, de sorte que le temps requis et les
dépenses engagées sont élevés, avec une forte consommation de réactifs
et de matériaux dans les expériences.
Un système systématique et statistique, c'est­à­dire une approche de
conception expérimentale, est nécessaire pour surmonter les limites de la
méthode OVAT et optimiser les variables expérimentales afin d'obtenir des
résultats analytiques significatifs et précis. Par conséquent, dans la présente
étude, nous avons utilisé l'approche de conception expérimentale pour le
dépistage et l'optimisation des variables expérimentales impliquées dans la
réaction entre le PGB et le PDAB. L'APDB est
utilisé pour dériver PGB car il manque de chromophore.
Auparavant, nous avions déterminé la teneur en trihydrate de céfixime en
utilisant la ninhydrine comme agent de dérivation (Wani et Patil, 2013). La
méthode était basée sur la réaction du groupe amino de la céfixime avec la
ninhydrine en milieu alcalin pour former un dérivé de couleur jaune (kmax
436 nm). L'approche de conception expérimentale a été utilisée pour
sélectionner et optimiser les variables expérimentales impliquées dans le
développement de la méthode spectrophotométrique UV­Visible.
Dans les travaux en cours, nous avons prévu de déterminer la teneur
en PGB en vrac et sous une forme posologique pharmaceutique en utilisant
le PDAB comme réactif de dérivation. Un composé aminé dépourvu de
chromophore peut être dosé par spectrophotométrie à l'aide d'un réactif
carbonyle approprié. L'un des réactifs PDAB les plus fréquemment utilisés,
connu sous le nom de réactif d'Ehrlich (Beckett et Stenlake, 1997). Par
conséquent, nous avons sélectionné PDAB comme réactif de dérivation
pour PGB dans le présent travail. Le but du présent travail était d'utiliser une
approche de conception expérimentale pour développer une méthode
spectrophotométrique UV­visible pour déterminer la teneur en PGB en
utilisant PDAB comme réactif de dérivation. Le criblage des variables
expérimentales et leur optimisation ont été réalisées à l'aide d'un plan
factoriel fractionnaire à deux niveaux et d'une méthodologie de surface de
réponse, respectivement (Minitab Release, 1997).
2. Matériels et méthodes
Un échantillon de PGB a été obtenu auprès de Wockhardt Pharmaceutical
Ltd., Aurangabad, Inde. Le PDAB et l'acide chlorhydrique concentré (HCl)
de qualité analytique ont été achetés auprès de Loba Chemie, Mumbai, Inde.
Une pharmacie commerciale
DD Patil et al.
forme posologique en capsule de PGB (PREGEB 75) a été achetée dans un
magasin médical local. Un trophotomètre Shimadzu UV­visible spec (modèle
1700) avec une paire de cellules de quartz de 1 cm assorties et un logiciel
UV­Probe a été utilisé pour l'absorbance
des mesures.
2.1. Réactifs et solutions
2.1.1. Solution d'APDB (1,5 %, p/v)
Une quantité pesée avec précision d'environ 150 mg de PDAB a été dissoute
dans 10 mL de méthanol. La solution a été fraîchement préparée et protégée
de la lumière.
2.1.2. Solution APDB (1M)
Une quantité pesée avec précision d'environ 1,63 g de PDAB a été dissoute
dans 10 ml de méthanol.
2.1.3. Phase mobile
Une phase mobile ternaire constituée de dihydrogénophosphate de
potassium 0,022 M (pH 6), de méthanol et d'acétonitrile dans la proportion
de 92:5:3, v/v/v a été utilisée pour l'analyse HPLC.
La phase mobile a été utilisée comme diluant pour l'analyse HPLC.
2.1.4. Solution étalon de PGB (1000 lg/mL)
Une quantité pesée avec précision d'environ 10,0 mg de PGB a été dissoute
dans 10 ml de méthanol.
2.1.5. Solution étalon de PGB (1M)
Une quantité pesée avec précision d'environ 1,58 g de PGB a été dissoute
dans 10 ml de méthanol.
2.1.6. Solution standard de PGB pour analyse HPLC (4000 lg/mL)
Une quantité pesée avec précision d'environ 40,0 mg de PGB a été dissoute
dans 10 ml de la phase mobile.
2.1.7. Solution d'échantillon de PGB pour analyse HPLC (4000 lg/mL)
Le contenu de 20 gélules a été prélevé et pesé. Une quantité de cette poudre
équivalente à 40,0 mg de PGB a été transférée dans une fiole jaugée de 10
mL (flacon). La phase mobile a été ajoutée et le contenu du flacon a été
soniqué pendant 10 min. Le volume du flacon a été complété au trait avec la
phase mobile. La solution a été filtrée à travers un papier filtre de 0,45 um.
2.2. Optimisation des variables de réaction à l'aide d'une approche de
conception expérimentale
Un plan factoriel fractionné à deux niveaux a été utilisé pour cribler l'effet de
la concentration de réactif PDAB (% p/v) (X1 (A)), du volume de réactif PDAB
(ml) (X2 (B)), du volume de HCl concentré ( ml) (X3 (C)), température de
chauffage (C) (X4 (D)) et temps de chauffage (minutes) (X5 (E)) sur
l'absorbance (R) du complexe PGB­PDAB. Sur la base d'expériences
préliminaires réalisées à l'aide de la méthode conventionnelle, les plages de
valeurs suivantes ont été utilisées dans la conception­X1 : 1 à 2 % p/v ; X2 :
1,5 à 3,5 ml ; X3 : 0,05 à 0,15 ml ; X4 : 50 à 70 °C et X5 : 5 à 15 min (tableau
1). La matrice de conception du fractionnaire à deux niveaux
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Méthode spectrophotométrique pour la détermination de la prégabaline 33

2.2.3. Etude de linéarité

Tableau 1 Facteurs expérimentaux et variable de réponse pour un plan
factoriel complet à deux niveaux Des aliquotes de la solution standard de PGB (environ 0,05 à 0,6 ml) ont été
transférées dans une série de flacons de 10 ml. Dans chaque flacon, 2,5 ml
Facteurs expérimentaux Niveaux de code Valeur P
de solution de PDAB à 1,5 % p/v et 0,1 ml de HCl concentré ont été ajoutés.
Bas Haut La solution a été soigneusement mélangée, chauffée au bain­marie à 60°C
1 2 0,084 pendant 10 min. Le mélange réactionnel a été refroidi dans un bain de glace
Concentration de réactif PDAB (% w/ X1
v)
et le volume final a été complété au trait avec du méthanol. La solution a été
Volume de réactif PDAB (ml) X2 Volume de 1,5 3,5 0,05 0,973 mélangée et l'absorbance a été mesurée à 395,80 nm contre un blanc.
Conc. HCl (ml) X3 0,15 50 70 5 0,741
Température de chauffage (C) X4 15 0,695
Temps de chauffe (min) 0,026
2.2.4. Procédure de dosage
Réponse X5 R Formation de PGB–PDAB
Maximum Le contenu de 20 capsules a été pesé. Une quantité de poudre équivalente
complexe (absorbance) à 25 mg de PGB a été transférée dans un flacon de 25 mL. Du méthanol a
été ajouté et le contenu du ballon a été soniqué pendant 10 min afin de le
dissoudre. Le volume a été complété jusqu'au trait dans le ballon avec du
méthanol. La solution a été filtrée sur papier filtre Whatman. Une aliquote
la conception factorielle (fraction 1/2, résolution V, 2(5­1) et 16 runs) est d'environ 0,1 ml de la solution a été transférée dans cinq flacons de 10 ml
présentée dans le tableau 2. Tous les runs expérimentaux ont été effectués
en triple et l'absorbance moyenne est fournie dans le tableau 2. flacons. Environ 2,5 ml de solution de PDAB (1,5 % p/v) et 0,1 ml de HCl
concentré ont été ajoutés à chaque flacon. La solution
2.2.1. Optimisation à l'aide de la méthodologie de surface de tion a été soigneusement mélangé et chauffé dans un bain­marie à 60 C
pendant 10 min et refroidi dans un bain de glace. Le volume était alors
réponse Un plan composite central à trois niveaux (tableau 3) a été utilisé
pour optimiser X1 et X5. Les conditions expérimentales suivantes ont été Compléter au trait avec du méthanol. La solution a été mélangée et
maintenues constantes­X2 : 2,5 mL ; X3 : 0,1 ml ; X4 : 60°C et solvant de l'absorbance à 395,80 nm a été mesurée par rapport à un blanc. La teneur
dilution : méthanol. L'expérience a été réalisée en triple et l'absorbance en PGB de la forme posologique pharmaceutique a été calculée à l'aide des
moyenne est fournie dans le tableau 3. formules suivantes :
Les variables expérimentales optimisées, telles que déterminées à l'aide des
ðAU WStd WAvgÞ
conceptions composites factorielles fractionnaires et centrales à trois niveaux, XEst ¼
ðAS WSamÞ
ont été utilisées dans les expériences ultérieures.
XEst
%Revendication labellisée ¼ 100
2.2.2. Optimisation des variables de réaction par méthode conventionnelle
XLC
(OVAT)
où XEst = teneur en PGB présente dans la poudre par capsule ; AU =
Différents paramètres expérimentaux, tels que X1, X2, X3, X4 et
absorbance de la solution d'échantillon ; AS = absorbance de la solution
X5, ont été optimisés en utilisant la méthode conventionnelle pour
standard ; WStd = poids de l'étalon (mg) ; WSam = poids de l'échantillon
obtenir le produit de réaction maximum ou l'absorbance (R). Les
(mg) ; WAvg = poids moyen de la poudre dans la gélule (mg) ; et XLC =
solutions résultantes ont été scannées dans la gamme 200–800
contenu étiqueté de PGB par capsule (mg).
nm. L'absorbance maximale du complexe se situe dans cette
gamme, à 395,80 nm.

2.2.5. Procédure de dosage de la méthode

officielle Une méthode LC est recommandée dans la pharmacopée indienne,
2010 pour déterminer la teneur en PGB dans une forme posologique en
Tableau 2 Matrice de conception du plan factoriel fractionnaire et valeur gélule. L'analyse du PGB a été effectuée sur une colonne Luna C18 (250
de réponse mm ∙ 4,6 mm, 5 lm) en utilisant une phase mobile ternaire constituée de
dihydrogénophosphate de potassium 0,022 M (pH 6), de méthanol et
Courir X1 X2 X3 X4 X5 R (n = 3)
d'acétonitrile (92:5:3, v/v/v) à un débit de 1 mL/min. Les solutions standard et
2 3,5 0,15 70 15 0,651 échantillon ont été injectées pour analyse HPLC. La détection de PGB a été
1 2 1,5 0,05 70 15 0,630 effectuée à 205 nm. Le chromatogramme a été enregistré pour la PGB. Cela
2 2 1,5 0,05 50 5 0,715
a montré un temps de rétention de 13,42 min. Les calculs ont été faits
3 1,5 0,15 50 5 0,632
4 12 3,5 0,05 50 15 0,571
à partir des zones de pic des chromatogrammes standard et échantillon.
5 2 1,5 0,15 50 15 0,622
67 1 1,5 0,15 70 15 0,588
8 1 3.5 0,15 50 15 0,561
9 1 1.5 0,05 70 5 0,695 2.2.6. Précision La
dix 2 3.5 0,05 70 5 0,721 précision de la méthode proposée a été déterminée par une étude de
11 1 3.5 0,15 70 5 0,531
récupération. Une quantité connue de PGB pure a été ajoutée à une
12 1 1.5 0,05 50 15 0,493
formulation de capsule pré­analysée. L'analyse de PGB a été effectuée à
13 2 3.5 0,15 50 5 0,741
des concentrations de 80 %, 100 % et 120 % et une concentration de la
14 1 3.5 0,05 50 5 0,681
15 1 3.5 0,05 70 15 0,500 solution de travail d'environ 18 lg/mL, 20 lg/mL et 22 lg/mL, respectivement.
16 2 1.5 0,15 70 5 0,571 La détermination de la teneur en PGB a été effectuée en utilisant la formule
mentionnée dans
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34 DD Patil et al.

Tableau 3 Matrice de conception pour l'optimisation des paramètres de la méthode

OrdreStd ExécuterCommande TypePt Blocs X1 X5 R(n = 3)

11 1 0 1 0 0 0,870
13 2 0 1 0 0 0,875
12 0 1 0 0 0,891
4 34 1 1 1 1 0,886
dix 5 0 1 0 0 0,893
6 6 1 1 1.414214 0 0,785
7 7 11 0 1.41421 0,675
1 8 11 1 1 0,676
9 9 0 1 0 0 0,642
2 dix 1 1 1 1 0,640
8 11 1 1 0 1.414214 0,588
3 12 1 1 1 1 0,565
5 13 1 1 1.41421 0 0,536

la section 2.2.4 intitulée ''Procédure de dosage''. Le pourcentage de travail présent. L'approche de conception expérimentale a été utilisée pour
récupération de la méthode proposée a été calculé à l'aide de la formule sélectionner et optimiser les variables expérimentales impliquées dans la
suivante : méthode proposée. La réaction a eu lieu entre le groupe fonctionnel
E carbonyle de PDAB et le groupe amino libre de PGB donne la base de
%Récupération ¼ 100 Schiff. La réaction se déroule via une attaque du groupement –NH2 sur le
TþP
carbone carbonyle de l'O‚CHA pour former AN‚CA avec élimination d'une
où E = quantité totale de PGB estimée (mg); T = quantité de PGB provenant molécule d'eau (Fig. 1) (Beckett et Stenlake, 1997). Le produit de réaction
de la poudre pré­analysée de la gélule (mg) ; et P = quantité de PGB pure PGB­PDAB a montré l'absorption maximale à 395,80 nm contre le blanc
ajoutée (mg). (Fig. 1).

2.2.7. Précision

La précision inter­journalière et la précision intra­journalière de la méthode
ont été déterminées. Une étude de répétabilité (précision intra­journalière)
a été réalisée en analysant une solution de PGB (10 µg/mL) à plusieurs
reprises au cours d'une journée. Une étude de précision inter­journalière a
été réalisée en analysant une solution de PGB (10 lg/mL) à plusieurs
reprises à des jours différents.
2.2.8. Limite de détection et limite de quantification La limite
de détection (LOD) et la limite de quantification (LOQ) ont été calculées à
l'aide des formules suivantes :
3.1. Optimisation des variables de réaction à l'aide d'une approche de
conception expérimentale
Un plan factoriel fractionnaire à deux niveaux ou plan de Plackett–Burman
(fraction 1/2, résolution V, 2(5­1) et 16 essais) a été utilisé pour évaluer les
principaux effets de cinq facteurs indépendants sur la réponse sélectionnée,
R. Diagramme de Pareto des effets, on a observé que les facteurs X1 et X5
avaient un effet direct sur la

LOD ¼ ð3:3 rÞ=S

LOQ ¼ ð10 rÞ=S

où r = écart type de la réponse ; et S = pente de la courbe d'étalonnage.

2.2.9. Etude de stoechiométrie

Un volume spécifique (environ 0,2 mL) de solution de PGB (1 M) a été
transféré dans une série de flacons de 10 mL. La solution de PDAB (1 M) a
été transférée en série (0,2 ml à 3,4 ml par étapes de 0,2 ml) dans les
flacons. Du HCl concentré (0,1 ml) a été ajouté à chaque flacon.
Le mélange réactionnel a été soigneusement mélangé et chauffé au bain­
marie à 60°C pendant 10 min. Le mélange réactionnel était
refroidi dans un bain de glace et le volume final a été complété au trait avec
du méthanol. L'absorbance de la solution colorée
a été mesuré à 395,80 nm contre le blanc de réactif.

3. Résultat et discussion

Une méthode spectrophotométrique a été optimisée pour déterminer

Teneur en PGB utilisant PDAB comme réactif de dérivation dans le Figure 1 Réaction et spectre UV de PGB avec PDAB.
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Méthode spectrophotométrique pour la détermination de la prégabaline 35

l'absorbance, tandis que les facteurs X2, X3 et X4 avaient également des

effets directs sur l'absorbance mais non significatifs (Fig. 2). À partir d'un
tracé normal et semi­normal des effets et de la valeur P, les facteurs X1 et
X5 se sont révélés significatifs (valeur P < 0,1) et les facteurs X2, X3 et X4
étaient insignifiants (valeur P > 0,1)
(Tableau 1).

3.1.1. Optimisation à l'aide de la méthodologie de surface de

réponse À l'aide d'une analyse de régression multivariée, un modèle
quadratique complet ajusté a été obtenu pour la réponse moyenne, R, qui est
donnée par l'équation suivante :

R ¼ b0 þ b1X1 þ b5X5 þ b11X2 þ b55X2

1 þ b15X1X5
5 ð1Þ

où R = réponse sélectionnée ; b0 = réponse moyenne arithmétique ; b1 et b5

= coefficients de régression des facteurs X1 et X5, respectivement.

Un plan composite central a été utilisé pour optimiser les variables de

réaction (X1 et X5). À partir du tracé de surface de réponse et du tracé de
contour (Fig. 3), il a été observé que l'absorbance augmente du coin inférieur
Figure 3 Diagramme de surface de réponse et diagramme de contour de la réponse R.
gauche au coin supérieur droit du tracé. En d'autres termes, l'absorbance
augmente à mesure que la concentration de PDAB et le temps de chauffage
augmentent simultanément. Ce graphique suggère que l'absorbance
maximale a été obtenue avec une plage de concentration comprise entre 1,5 Tableau 4 Analyse de variance pour la réponse
et 2 % p/v de PDAB et un temps de chauffage de 10 à 15 min (Fig. 3) Source DF Seq SS Adj SS Adj MS FP

(Tableau 3). Au­dessus d'une concentration de 1,5 % w/v de réactif PDAB et Regression 5 0.199645 0.199645 0.039929 40.69 0.000 Linear 2
0.046618 0.046618 0.023309 23.75 0.001 X1 1 0.044698 0.044698
de plus de 10 min de chauffage, l'absorbance était constante.
0.044698 45.55 0.000 X5 1 0.001920 0.001920 0.001920 1.96 0.205
Par conséquent, une concentration de 1,5 % w/v de réactif PDAB et un temps
Square 2 0.123956 0.123956 0.061978 63.16 0.000 X1 X1 1 0.044423
de chauffage de 10 min sont les conditions optimisées.
0.060394 0.060394 61.55 0.000 X1 X5 1 0.079534 0.079534 0.079534
Les tableaux 4 et 5 montrent les valeurs des coefficients de régression et *
81.05 0,000
leurs valeurs P associées. D'après les tableaux 4 et 5, on peut observer que *
la concentration de PDAB a affecté la réponse, R, de manière significative Interaction 1 0,029070 0,029070 0,029070 29,63 0,001
* 1 0,029070 0,029070 0,029070 29,63 0,001
(valeur P < 0,1). X1 X5
Le tracé des effets principaux indique que la concentration du réactif Résiduel 7 0,006869 0,006869 0,000981
erreur
PDAB et le temps de chauffage ont des effets similaires sur la réponse. Pour
Manque de 3 0,003789 0,003789 0,001263 1,64 00315
les deux facteurs, la réponse augmente lorsque vous passez d'un niveau bas
adapter

à un niveau moyen, et la réponse diminue d'un niveau moyen à un niveau

Erreur pure 4 0,003079 0,003079 0,000770
élevé du Total 12 0,206513

Tableau 5 Coefficients de régression estimés pour la réponse

Terme Coef SECoef J P

Constant 0,87960 0,01401 62,789 0,000

X1 0,07475 0,01107 6,749 0,000
X5 0,01549 0,01107 1,399 0,205
* 0,09318 0,01188 7,845 0,000
X1 X1
* 0,10692 0,01188 9,003 0,000
X5 X5
* 0,08525 0,01566 5,443 0,001
X1 X5

facteur. Cependant, le diagramme d'interaction montre que l'augmentation de

la réponse est plus importante lorsque la concentration de réactif PDAB est
comprise entre 1,5 % w/v et 2,0 % w/v que lorsque la concentration de réactif
PDAB se situe entre 0,79 % w /v à 0,1 % p/v et 2,0 % p/v à 2,2 % p/v.

Le modèle développé a été validé. Les résultats expérimentaux et les

valeurs prédites obtenues à l'aide de l'équation du modèle polynomial ont
montré que la valeur prédite correspond raisonnablement à la valeur R­Sq
de 96,67 % et R­Sq (adj) de 94,30 % de la réponse sélectionnée, R.
Figure 2 Diagramme de Pareto des effets.
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36 DD Patil et al.

La distribution des résidus de la réponse suivait approximativement la

distribution normale ajustée, tandis que les résidus de la réponse étaient dispersés
au hasard dans les tracés des résidus. Dans le présent travail, les variables
expérimentales ont également été optimisées en utilisant la méthode
conventionnelle (OVAT).
Les conditions optimales requises pour le développement maximal de la couleur
se sont avérées être de 2,5 ml de solution de PDAB à 1,5 % p/v, 0,1 ml de HCl
concentré et 10 min de chauffage à 60 °C.

3.1.2. Dosage et comparaison statistique Les

résultats de l'analyse de la formulation commercialisée à l'aide des méthodes

proposées et officielles sont présentés dans le tableau 6.
Le pourcentage de pureté de la capsule de formulation commerciale PREGEB 75
tel que déterminé selon la méthode proposée était de 100,05 ± 1,48 et celui
déterminé selon la méthode officielle était de 100,46 ± 0,41. Les deux résultats
ont été comparés en calculant la valeur t et la valeur F, qui se sont avérées être
respectivement de 0,60 et 0,08. De ces résultats, il est conclu qu'il n'y a pas de
différence significative entre les méthodes proposées et officielles, ce qui indique
Figure 4 Stœchiométrie entre PGB et PDAB.
que la méthode proposée est aussi exacte et précise que la méthode officielle.

3.2. Validation de la méthode

3.1.3. Étude de stoechiométrie
Dans cette étude, la relation de poids entre PGB, PDAB et le complexe PGB­
PDAB a été déterminée. Le rapport de PGB à PDAB dans le complexe a été
déterminé en utilisant la méthode du rapport molaire (Miller et Miller, 1993). Un
graphique avec un nombre de moles de PDAB par mole de PGB sur l'axe X et
d'absorption sur l'axe Y montre qu'un rapport molaire de 4:1
(PDAB:PGB) est suffisant pour un développement maximal de la couleur (Fig. 4).
Tableau 6 Caractéristiques optiques, résultat du dosage et données
statistiques des paramètres de validation
Paramètre Observation
Un graphique d'étalonnage a été construit avec la concentration de PGB sur l'axe
X et l'absorbance sur l'axe Y en utilisant toutes les conditions optimisées décrites
ci­dessus. Une relation linéaire a été trouvée dans la plage de concentration à
partir de = 0,9960) (tableau 6). L'étude de précision, indi
2
5–60 lg/mL (r
indiqué que le pourcentage moyen de récupération pour les capsules de
PREGEB 75 était de 101,03 ± 0,94 (tableau 6). Les valeurs de précision inter­
journalière et intra­journalière étaient de 1,07 et 0,66 lg/mL, respectivement.
La valeur % RSD obtenue (<2) indique que la méthode proposée est précise. La
LOD et la LOQ se sont avérées être de 0,025 lg/mL et 0,076 lg/mL, respectivement.
La solution utilisée dans l'étude de précision a été stockée pendant 24 h à
température ambiante.
Pendant la période de stockage, l'absorbance de cette solution a été mesurée à
différents intervalles de temps (0 min, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 3 h, 4 h, 5 h et 24
h). L'intensité de la couleur de la solution était stable jusqu'à 6 h.

Moyen Jaune
Couleur acide 4. Conclusion
kmmax (nm) 395,80
Bière – Limite de la loi de Lambert (lg/ml) 5–60
Dans le présent travail, l'optimisation d'une méthode spectrophotométrique pour
Pente 1.252
déterminer la teneur en PGB a été optimisée en utilisant la méthodologie de
Intercepter 0,033
0,9960 conception expérimentale et la méthode conventionnelle (OVAT). Dans le plan
Coefficient de régression
factoriel, sur cinq facteurs (X1, X2, X3, X4 et X5), deux facteurs (X1 et X5) se
Résultats d'analyse (n = 5) sont avérés significatifs. Ces facteurs significatifs ont été optimisés à l'aide de la
Méthode proposée 100,05 ± 1,48
méthodologie de surface de réponse. Les résultats de l'optimisation des variables
Valeur t de la méthode 100,46 ± 0,41
de réaction par les deux méthodes se sont avérés identiques. Cependant,
rapportéea 0,60
Valeur Fb 0,08 l'approche de conception expérimentale était systématique, moins longue et plus
rentable par rapport à la méthode conventionnelle. Par conséquent, la méthode
Précision (n = 3) proposée utilisant une approche de conception expérimentale est meilleure pour
Niveau 80% 101,13 ± 0,15
déterminer la teneur en PGB et peut être utilisée pour l'analyse de contrôle
100% 101,89 ± 0,90
qualité de routine des formulations de PGB.
120% 100,01 ± 1,76
Moyenne 101,03 ± 0,94

Précision (%RSD, n = 5)
Infrajournalier 0,66
Remerciements
Entre­jour 1.07
un
t0,05 %, 4 = 2,776. Nous sommes reconnaissants à Wockhardt Pharmaceutical Ltd., Aurangabad
b
F0,05 %, 4 = 6,39.
(Inde) pour avoir fourni un échantillon cadeau de PGB pour
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Méthode spectrophotométrique pour la détermination de la prégabaline
nos travaux de recherche. Nous tenons également à adresser nos remerciements à
Dr SB Bari, Principal, HR Patel Institute of Pharmaceutical Education and Research,
Shirpur pour avoir fourni des installations de recherche pour mener à bien ce travail.
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