Compte-rendu de l’activité T.P 10: Le mode d’action des enzymes.

La carboxypeptidase (CPA) est une enzyme pancréatique impliquée dans la digestion des chaînes peptidiques. Son
substrat est le dipeptide (Gly-Tyr) dont elle catalyse l’hydrolyse pour donner deux acides aminés libres. Certains in-
dividus ont une CPA inactive ne parvenant pas à fixer ou à catalyser la transformation du substrat.
Problématique de l’activité :
➔ Comment expliquer cette inactivité moléculaire et son origine?

Ressources complémentaires:
➔ Informations sur la Carboxypeptidase bovine:
http://acces.ens-lyon.fr/biotic/gpe/dossiers/carboxypeptidase/html/synthese.htm#2

➔ Caractéristiques de la molécule de CPA normale : Compléter la légende du document 1, préciser le nombre de

chaînes polypeptidiques qui constituent la CPA et indiquer leur nombre d’acides aminés en retrouvant le pre-
mier et le dernier acide aminé .

Insérer votre première capture

d’écran ici
Document 1– Représentation de l’organisation moléculaire
de la carboxypeptidase seul par le logiciel Libmol.

➔ Le site actif de la CPA: Compléter la légende du docu-

ment 2 de la fiche réponse. Emettre une hypothèse sur la cause moléculaire de l’inactivité de la CPA et donc sur
son origine.

Insérer votre deuxième

capture d’écran ici
Document 2– Représentation de l’organisation moléculaire
de la carboxypeptidase avec son substrat par le logiciel Lib-
mol.

➔ Information complémentaire sur la mutation génétique de la CPA:

Description des mutations : deux triplets différents (les 69ème et 248ème) car deux nucléotides substitués par tri-
plet : C-A devient G-G pour les nucléotides 205 et 206 T-A devient G-G pour les nucléotides 742 et 743)
Description de la séquence d’acides aminés: 2 acides aminés différents GLY69 et GLY248 à la place de HIS69 et
TYR248
Ce sont deux acides aminés du site actif.
➔ Explication moléculaire de l’inactivité de la CPA : Légender le document 3. Puis à partir des informations précé-
dentes confrontées aux conséquences vérifiables de Michaelis et Menten donner à une explication moléculaire à
l’inactivité de la CPA et préciser son origine.

Insérer votre troisième capture

d’écran ici

Document 3– Représentation de l’organisation moléculaire

de la carboxypeptidase mutée et inactive par le logiciel Lib-
mol.

➔ Informations complémentaires :
En 1913, Leonor Michaelis et Maud Menten réalisent une série d’expériences afin de modéliser le méca-
nisme d’action de la saccharase de levure, une enzyme qui catalyse l’hydrolyse du saccharose en fructose
et glucose.
À l’époque de Michaelis et Menten, la nature protéique des enzymes n’était pas encore connue.
Ils supposent que la saccharase € forme un complexe avec le saccharose (S) qui se sépare ensuite pour
donner l’enzyme libre, du glucose (G) et du fructose (F) :

E+S⟶E+G+F

La partie de l’enzyme où se fixe le substrat et où a lieu la réaction chimique est appelée site actif de l’en-
zyme.

➔ En vous appuyant sur vos résultats et sur les informations complémentaires, représenter schémati-
quement (modèle conceptuel) les interactions enzymes / substrat expliquant la spécificité de
substrat.