 Protéine kinase A ou PKA

 Protéine kinase B ou PKB ou encore Akt

 Protéine kinase C ou PKC
 Protéine kinase G ou PKG
 Protéine kinase M ou PKM

Protéine Kinase A
Comme les autres protéines kinases, la protéine kinase A (également connue sous le
nom de protéine kinase ou A kinase dépendante de l'AMP cyclique) est une enzyme
qui décore de manière covalente les protéines avec des groupes phosphate. La
caractéristique unique de la protéine kinase A est que son activité est régulée par la
fluctuation des niveaux d'AMP cyclique dans les cellules (d'où son alias de protéine
kinase dépendante de l'AMP cyclique). Cette enzyme joue donc le rôle d'effecteur
final pour diverses hormones qui fonctionnent via une voie de signalisation de l'AMP
cyclique. En d'autres termes, la protéine kinase A est finalement responsable de la
quasi-totalité des réponses cellulaires dues au second système de messager de
.l'AMP cyclique

Structure
L'holoenzyme de la protéine kinase A est un hétérotétramère composé de deux
:types de sous-unités

Sous-unité catalytique: cette sous-unité contient le site actif de l'enzyme. Il contient

également un domaine qui lie l'ATP (la source de phosphate) et un domaine qui lie la
.sous-unité régulatrice

Sous-unité régulatrice: Deux molécules de cette sous-unité se lient dans une

orientation anti-parallèle pour former un homodimère; pour les sous-unités de type I
(voir ci-dessous), cette liaison est covalente via des liaisons disulfure. Cette sous-
unité comporte également deux domaines qui se lient à l'AMP cyclique, un domaine
qui interagit avec une sous-unité catalytique et un domaine "auto-inhibiteur" qui
sert de substrat ou de pseudosubstrat à la sous-unité catalytique. Les sous-unités de
régulation peuvent également avoir une activité biologique distincte de leur rôle
.dans la modulation de l'activité des sous-unités catalytiques
Les sous-unités de régulation existent sous deux formes principales, RI et RII, chaque
forme comportant deux sous-types nommés alpha et bêta. Chacun des quatre
isotypes de la sous-unité régulatrice est codé par un gène différent. En outre, trois
isotypes de la sous-unité catalytique ont été identifiés (alpha, bêta et gamma). Les
différents isotypes ont tendance à avoir des distributions différentes dans les cellules
et parmi les tissus. Les enzymes de type I habitent des fractions solubles
cytoplasmiques de la cellule, alors que les enzymes de type II tendent à s'associer
.aux membranes cellulaires

Régulation de l'activité
La concentration intracellulaire d’AMP est le contrôle le plus fondamental sur
:l’activité de la protéine kinase A

Lorsque les niveaux d'AMP cyclique sont faibles, les sous-unités catalytiques sont -
.liées à un dimère de sous-unité régulatrice et sont inactives

Lorsque la concentration en AMP cyclique augmente, elle se lie aux sous-unités -

régulatrices, ce qui entraîne un changement allostérique de la conformation qui
.provoque le déchaînement des sous-unités catalytiques

Les sous-unités catalytiques libres sont actives et commencent à phosphoryler leurs -

.cibles

La protéine kinase A agit souvent au niveau de domaines très discrets dans les
cellules. Ce ciblage spatial résulte de l'interaction de sous-unités régulatrices de type
I avec des protéines appelées protéines d'ancrage de kinase A (AKAP). Un grand
nombre d'AKAP distincts ont été identifiés et montrés pour colocaliser la protéine
kinase A avec certains de ses substrats spécifiques, notamment les canaux ioniques,
les éléments cytosquelettiques et les centrosomes. Dans certains cas, les AKAP lient
également d'autres molécules impliquées dans la voie de signalisation de l'AMP
cyclique, y compris différentes phosphodiestérases, qui détruisent l'AMP cyclique. En
séquestrant à la fois la protéine kinase A et une enzyme qui la désactive à des
endroits spécifiques, les événements de phosphorylation peuvent être contrôlés très
.soigneusement
L'activité de la protéine kinase A est également modulée par un groupe de protéines
appelées inhibiteurs de la protéine kinase. Ces molécules agissent souvent comme
des pseudo substrats pour la sous-unité catalytique, la "détournant" des cibles de
.phosphorylation légitimes

Protéine Kinase c 
Structure

Les membres de la famille de la protéine kinase C sont un seul polypeptide, composé d’une
région régulatrice N-terminale (environ 20 à 40 kDa) et d’une région catalytique C-terminale
(environ 45 kDa) (figure 1). Le clonage des premières isozymes au milieu des années 1980 a
révélé quatre domaines conservés: C1-C4 (8). Chacune est un module fonctionnel, et de
nombreuses protéines non apparentées ont l’une ou l’autre (9). La fonction de chacun de
ces domaines a été établie par une analyse biochimique et mutationnelle poussée. le
domaine C1 contient un motif riche en Cys, dupliqué dans la plupart des isozymes, qui forme
le site de liaison diacylglycérol / ester de phorbol (figure 1, en orange) (7); ce domaine est
immédiatement précédé d'une séquence de pseudosubstrat auto-inhibitrice (Fig. 1, verte)
(10); le domaine C2 contient le site de reconnaissance des lipides acides et, dans certaines
isozymes, le site de liaison CaGraphic (Fig. 1, jaune) (9). Les domaines C3 et C4 forment les
lobes du noyau de la kinase liés à l'ATP et au substrat (Fig. 1, rose et cyan) (11). Les moitiés
régulatrice et catalytique sont séparées par une région charnière qui devient labile sur le
plan protéolytique lorsque l'enzyme est liée à la membrane (6); le domaine kinase généré
par protéolyse (protéine kinase M), libéré de l'inhibition par le pseudosubstrat, est
.constitutivement actif (12)

:Figure 1

Représentation schématique de la structure primaire de la protéine kinase Cs

conventionnelle, nouvelle et atypique. Le domaine pseudosubstrat (vert), le domaine C1
comprenant un ou deux motifs riches en Cys (orange), le domaine C2 (jaune) dans la moitié
régulatrice, ainsi que le lobe de liaison à l'ATP (C3, rose) et le lobe de liaison au substrat ( C4,
bleu sarcelle) de la région catalytique. Le domaine C2 de la nouvelle protéine kinase Cs est
dépourvu des acides aminés impliqués dans la liaison du calcium, mais possède des résidus
conservés clés impliqués dans le maintien du repliement de C2 (d'où sa description en tant
que "type C2"). La protéine kinase C atypique n'a qu'un seul motif riche en Cys et la liaison
.ester de phorbol n'a pas été détectée

À ce jour, 11 isoenzymes de protéine kinase C ont été identifiées et classées en trois groupes
en fonction de leur structure et de la régulation de leur cofacteur (3). Les mieux
caractérisées et les premières découvertes sont la protéine kinase Cs classique: α, deux
variants épissés alternativement βI et βII et Graphic. Cette classe se distingue des autres en
ce que sa fonction est régulée par CaGraphic; son domaine C2 contient un site putatif de
liaison CaGraphic (voir ci-dessous). La prochaine protéine bien connue est la nouvelle
protéine kinase Cs: Graphique, Graphique, Graphique (L), Graphique et µ. La structure de ces
isozymes est similaire à celle de la protéine kinase Cs conventionnelle, à la différence que le
domaine C2, tout en maintenant des résidus structurels, ne possède pas les groupes
fonctionnels qui semblent médier la liaison CaGraphic (voir ci-dessous). Les isozymes les
moins comprises sont les protéines kinases atypiques Cs: Graphic et Graphic (I). Celles-ci
diffèrent de manière significative de la structure des deux autres classes; Premièrement, le
domaine C1 ne contient qu'un seul motif riche en Cys (pas deux), et deuxièmement, les
résidus de clé qui conservent le pli C2 ne semblent pas être présents. De plus, il a été
rapporté que ces isoenzymes ne répondaient pas aux esters de phorbol in vivo ou in vitro
(3). Peut-être en ajoutant aux trois groupes, deux kinases avec un domaine C2 similaire à
.celui de la nouvelle protéine kinase Cs, mais sans domaine C1, ont été identifiées (13, 14)

La structure cristalline de la seconde répétition riche en Cys du domaine C1 de la protéine

kinase C a été résolue récemment avec (Fig. 2A) et sans ester de phorbol lié par Hurley et ses
collaborateurs (15), de même que la structure RMN du gène correspondant. répéter à partir
de la protéine kinase C α, en l'absence de ligand (16). De manière frappante, ce domaine
riche en feuille ß ne subit aucun changement de conformation lors de la liaison du ligand. Au
lieu de cela, la liaison de l'ester de phorbol obture le site de liaison hydrophile (une rainure
formée par deux brins β non zippés), de sorte que le tiers supérieur du domaine présente
.une surface hydrophobe contiguë (15)

La structure cristalline du domaine C2 de la synaptotagmin, élucidée par Sprang et ses

collaborateurs (17), révèle comment l'autre moitié de la région régulatrice de la protéine
kinase C se replie. La figure 2B montre le cœur de ce domaine («clé C2»): 5 résidus
d'aspartate forment le site de liaison à la CaGraphic (rose); sur la face arrière de cette fente
se trouvent des aromatiques volumineux (violets) adjacents à une surface de base formée de
deux brins β (bleus). Sossin et Schwartz (18) ont noté que la nouvelle protéine kinase C
contient un domaine C2. La structure résolue élucide comment cette protéine kinase C peut
avoir ce domaine sans être régulée par CaGraphic; le domaine C2 de la nouvelle protéine
kinase Cs a les résidus conservés qui maintiennent le pli du domaine (par exemple, Fig. 2B,
orange), mais les oxygènes de coordination dans le site de liaison à la CaGraphic sont
.principalement absents (9)
Une structure modélisée du domaine catalytique de la protéine kinase C βII, avec
pseudosubstrat lié, basée sur la structure cristalline de la protéine kinase A avec un peptide
inhibiteur lié (19) est montrée sur la figure 2C (20). La séquence primaire du noyau de kinase
de la protéine kinase Cs conventionnelle est approximativement identique à 40% à celle du
noyau de la protéine kinase A. Le résidu N-terminal du modèle se situe juste avant la région
charnière; la chaîne peptidique continuerait sur les domaines C2, puis C1 et se connecterait
ensuite au pseudosubstrat. La modélisation de cette dernière dans la cavité de liaison au
substrat révèle qu'elle y est maintenue, en partie, par un groupe de résidus acides unique à
la famille de la protéine kinase C (20). La séquence de pseudosubstrat a été identifiée par
House et Kemp (10) en fonction de l'aptitude d'un peptide synthétique de cette séquence à
.inhiber la protéine kinase C

Une fonction

Enzymologie

La chimie du noyau catalytique de la protéine kinase C est similaire à celle de la kinase

archétypale, la protéine kinase A. La kinase utilise MgATP comme substrat, avec un KGraphic
pour l'ATP dans la plage des bas µM (21). Il a été rapporté que la vitesse catalytique
maximale de l'enzyme et KGraphic pour un substrat peptidique basé sur son pseudosubstrat
était de 8 μmol de phosphate hydrolysé par minute par mg de protéine (correspondant à 10
réactions / s) et 0,2 μM, respectivement (10). Ceci correspond à un kGraphic / KGraphic de 5
× 10Graphic sGraphicMGraphic, révélant une efficacité remarquable. La plupart des autres
peptides synthétiques ont des valeurs KGraphic dans la gamme des bas µM et des valeurs
VGraphic comprises entre 1 et 8 µmol minGraphic mgGraphic (22, 23, 24, 25, 26), ce qui
suggère qu'un graphique kGraphic / KGraphic de 10Graphic sGraphicMGraphic est plus
représentatif de ce fait. famille d'enzymes. Le graphique kGraphic / KGraphic de la protéine
kinase A pour la kemptide, un peptide synthétique basé sur la séquence de phosphorylation
.consensus de la kinase (27), est comparable (28)

La protéine kinase C phosphoryle généralement les résidus sérine ou thréonine dans les
séquences basiques mais présente une spécificité significativement inférieure à celle de la
protéine kinase A (29). Premièrement, contrairement à la protéine kinase A (29), l'analyse
des séquences autour des sites de phosphorylation (30, 31, 32) ou l'analyse de substrats
peptidiques synthétiques (23, 26, 33) n'indiquent pas clairement la nécessité d'une charge
positive. Deuxièmement, la protéine kinase C présente une stéréospécificité inférieure à
celle de la protéine kinase A (25), phosphorylant les stéréoisomères D et L des isomères de
configuration α de plusieurs alcools (24). Lawrence et ses collaborateurs (24) ont suggéré
que le manque de stéréospécificité de la protéine kinase C pourrait refléter la liaison du
substrat dans un sens ou dans l'autre (c'est-à-dire C à N ou N à C) dans la cavité de liaison au
.substrat (24)

La protéine kinase C s'autophosphoryle également in vitro (34, 35) par un mécanisme

intramoléculaire (36) au N-terminal, à la charnière et au C-terminal (37); ce dernier site est
un mauvais site in vitro car il est phosphorylé presque quantitativement in vivo (voir ci-
.dessous)

En plus de catalyser les réactions de phosphorylation, la protéine kinase C a une activité

ATPase et phosphatase. L'enzyme catalyse une hydrolyse de l'ATP (38) dépendante du
cofacteur et stimulée par le substrat, et elle peut agir en arrière (c'est-à-dire sous la forme
d'une phosphatase) en présence d'un excès d'ADP. (1)

Fonction biologique

Compte tenu de la pléthore de substrats et de l'efficacité des esters de phorbol dans la

modulation de diverses réponses cellulaires, une multiplicité de fonctions a été attribuée à la
protéine kinase C (4). Les thèmes récurrents sont que la protéine kinase C est impliquée
dans la désensibilisation des récepteurs, dans la modulation des événements de la structure
membranaire, dans la régulation de la transcription, dans la médiation des réponses
immunitaires, dans la régulation de la croissance cellulaire, dans l'apprentissage et la
mémoire, entre autres fonctions. Celles-ci et les fonctions d'isozymes spécifiques sont
.décrites dans un certain nombre d'excellentes critiques (1, 2, 3, 4, 39)

Un régulateur clé de la fonction de la protéine kinase C in vivo sera probablement la

distribution subcellulaire de l'enzyme et du substrat (40). Les isozymes de la protéine kinase
C sont distribuées de manière différentielle dans la cellule (et différemment parmi de
nombreux types de cellules) (39), et un certain nombre de protéines cibles ont été décrites
.(40)

Le déchiffrement des fonctions spécifiques des isozymes attend probablement le

développement d'inhibiteurs spécifiques d'isozymes (41). L'application de la chimie
combinatoire dans ce but a fourni le premier inhibiteur spécifique d'isoenzymes (42); une
.spécificité similaire utilisant l'ADN antisens a été démontrée pour des études in situ (43)

Protéine Kinase G 
Définition

La protéine kinase G (PKG) est une protéine kinase spécifique de la sérine / thréonine qui
dépend du GMP cyclique et catalyse la phosphorylation des résidus sérine ou thréonine des
.protéines
Découverte

Ruth P en 1999 a étudié les fonctions in vivo de la PKG par ciblage génique. La PKG
appartient à la famille des sérine / thréonine kinases AGC. Elle est l’un des principaux
récepteurs intercellulaires du GMPc. Deux gènes différents codent pour le type soluble de
type I (PKG I) et le type II lié à la membrane (PKG II) dans des cellules de mammifère. Deux
formes principales de PKG ont été identifiées dans des cellules de mammifère, PKG I et PKG
II. De plus, il existe deux variants d'épissage de la PKG I, désignés par les lettres Iα et Iβ1.
Haas B et al., En 2009, ont constaté que le PKGI contrôlait la signalisation de l'insuline dans
le tissu adipeux brun (BAT) en inhibant l'activité de RhoA et de la kinase associée à Rho
(ROCK), atténuant ainsi les effets inhibiteurs de ROCK sur le substrat – 1 du récepteur de
l'insuline. activation de la cascade de phosphoinositide 3-kinase-Akt en aval. PKGI relie les
signaux NO et cGMP aux voies RhoA-ROCK et insuline, contrôlant ainsi l’induction de
programmes adipogéniques et thermogéniques au cours de la différenciation des cellules
adipeuses brunes 2. En 2002, Sinnaeve P et al. Ont testé l’effet de la surexpression de PKG
.sur la réponse néo-intimiste lésion vasculaire 3

Caractéristiques structurelles

Les domaines régulateurs et catalytiques de la PKG sont contenus sur une seule chaîne
polypeptidique. La dimérisation de la PKG est médiée par une fermeture éclair à la leucine.
Le domaine de dimérisation N-terminal de la PKG est connu pour fournir une surface
d'accueil stable pour les protéines en interaction qui ciblent les kinases à des emplacements
cellulaires spécifiques. Smith-Nguyen et al. Ont résolu une structure cristalline du domaine
N-terminal de la PKG Iβ à 1,9 angström et à 2,1 angström. La structure révèle deux hélices
parallèles se chevauchant l'une dans l'autre en une hélice pour gaucher et formant une
fermeture à glissière étendue leucine / isoleucine avec 10 paires de leucine / isoleucines
tassées de manière «boutons dans trous». Alors qu'un groupe de quatre leucines coiffe
l'extrémité N-terminale, une paire de résidus de tyrosine recouvre l'extrémité C-terminale
.de la fermeture à glissière

Mode d'action

Dans les cellules endothéliales, l'activation de la PKG I par le GMPc est associée à une
réduction des transitoires calciques induits par la thrombine et de la perméabilité
paracellulaire. La preuve directe des rôles fonctionnels de la PKG I dans la relaxation du
muscle lisse, l'inhibition des transitoires de Ca2 + et l'inhibition de l'adhésion et de
l'agrégation des plaquettes a été obtenue à partir d'études menées sur des souris knock-out
de la PKG I. La phosphoprotéine stimulée par les vasodilatateurs (VASP) est connue pour
être l’un des substrats de la PKG I et sa phosphorylation joue un rôle dans l’inhibition de
l’agrégation plaquettaire et de l’adhésion focale. La PKG II est principalement exprimée dans
la bordure en brosse de la muqueuse intestinale et dans des régions spécifiques du cerveau
et joue un rôle dans le transport transépithélial de Cl- et de Na + dans l'intestin. Il existe
également des preuves à l'appui que l'activation de la PKG par le GMPc dans les
cardiomyocytes, les cellules B pancréatiques et les cellules de muscle lisse en culture peut
provoquer une inhibition de la croissance et une apoptose. De plus, l'activation de la PKG
régule négativement la signalisation de l'interleukine-2 dans les lignées de cellules T. De
plus, des études récentes indiquent que la sulindac sulfone (Aptosyn), un métabolite du
médicament anti-inflammatoire non stéroïdien sulindac, et deux dérivés puissants
d’Aptosyn, OSI-248 et OSI-461, inhibent spécifiquement les PDE 2 et 5 spécifiques du GMPc.
On a également obtenu que l’augmentation des niveaux cellulaires de GMPc dans les
cellules cancéreuses du côlon humain entraîne l’activation de la PKG et par conséquent
l’induction de l’apoptose. Ces nouveaux effets d'Aptosyn et de médicaments apparentés
peuvent expliquer pourquoi ces composés exercent des effets anticancéreux dans divers
systèmes biologiques, même si, contrairement aux médicaments anti-inflammatoires non
.stéroïdiens classiques, ils n'inhibent pas l'activité de la cyclooxygénase 4,5

Les fonctions

La PKG en présence de 8-pCPT-cGMP (GMP) phosphorylait les deux principales isoformes de

titine cardiaque, N2BA et N2B, dans le ventricule gauche humain et canin.
L'autoradiographie et le transfert anti-phosphosérine de domaines de la titine humaine en
bande I recombinants ont permis d'établir que la PKG phosphorylait les domaines N2-B et
.N2-A de la titine 6

La PKG I est exprimée dans les plaquettes, les cellules du muscle lisse vasculaire, les
.fibroblastes, certaines cellules endothéliales, le poumon, le cervelet et le cœur 7

L'activation de la PKG conduit à l'apoptose et implique à la fois une diminution des taux
.cellulaires de β-caténine et l'activation de la kinase 1-8 NH2-terminale de c-Jun

La PKG est essentielle à la différenciation des cellules adipeuses brunes. L'induction de

marqueurs adipogéniques et le stockage de la graisse ont été altérés en l'absence de PKGI.
En outre, le PKGI a influencé la capacité de l'oxyde nitrique (NO) et de la guanosine 3 ', 5'-
monophosphate (GMPc) à induire une biogenèse mitochondriale et à augmenter
.l'abondance de UCP-1 2