TP N°9 : doser les anticorps produits lors d’une vaccination pour déterminer la

nécessité d’un rappel de vaccination

Un individu adulte, se promenant s’est écorché la jambe sur une clôture rouillée abandonnée dans
les herbes hautes sur le bord du chemin de randonnée. Il a été vacciné contre le tétanos lorsqu’il
était enfant mais il ne se souvient pas de la date du dernier rappel.

Problématique : On cherche à savoir si cet individu est encore immunisé contre la toxine
responsable du tétanos ou s’il doit de nouveau être vacciné.

On réalise alors un test Elisa afin de déterminer la concentration en anticorps du sérum de patient.

Matériel nécessaire :

! Une barrette de 8 puits au fond desquels sont fixées les toxines tétaniques
! 1 sérum, noté S, de l’individu à tester
! 1 sérum témoin, noté T, d’un individu qui n’est plus immunisé
! 6 solutions d’anticorps anti-toxine tétanique de concentrations décroissantes et connues :
• C1= 0,4 UI/ml
• C2=0,2 UI/ml
• C3=0,1 UI/ml
• C4=0,05 UI/ml
• C5=0,012 UI/ml
• C6= 0,003 UI/ml

! Une blouse, des gantes et des lunettes de protection

! 10 micropipettes
! 1 solution de lavage PBS
! 1 solution de substrat de l’enzyme-TMB
! Évier
Protocole simple:
Dans les huit petits tubes de la barrette, on place une gélose contenant des toxines tétaniques (antigènes). On
y ajoute le sérum contenant les anticorps antitétaniques, à concentrations décroissantes, du tube 1 au tube 6.
Le tube T (témoin négatif) contient le sérum témoin T et le tube S contient le sérum S de l’individu à tester.
On attend ensuite 10 minutes le temps que les anticorps se fixent sur les antigènes, puis on renverse les tubes
au-dessus de l’évier afin d’éliminer les anticorps non fixés aux antigènes, grâce à la solution lavage PBS.
Puis, on ajoute dans tous les tubes deux gouttes d’anticorps de détection, couplés à une enzyme. Il s’agit
d’anticorps anti-anticorps antitétaniques. On attend 5 minutes le temps qu’ils se fixent sur la queue des
anticorps antitétaniques, eux-mêmes fixés sur les antigènes, et eux-mêmes fixés sur le gel. Puis on réalise
deux nouvelles fois le lavage au PBS, pour ici, éliminer tous les anticorps anti-anticorps antitétaniques non
fixés. Enfin, on ajoute deux gouttes de substrat, de couleur violette.

Résultats et interprétation:

On observe des changements de couleurs dans les tubes:

- tube 1 de concentration en anticorps antitétaniques C1: jaune/vert
- tube 2 de concentration en anticorps antitétaniques C2: vert /jaune
- tube 3 de concentration en anticorps antitétaniques C3: vert/bleu
- tube 4 de concentration en anticorps antitétaniques C4: vert/bleu
- tube 5 de concentration en anticorps antitétaniques C5: bleu
- tube 6 de concentration en anticorps antitétaniques C6: bleu
- tube 7 témoin négatif T: violet
- tube 8 individu à tester S: violet
On remarque qu’après ajout du substrat, le témoin n’a pas changé de couleur: de fait, il est violet car
le substrat est violet. Pour les puits à fortes concentrations en anticorps antitétaniques, les couleurs
vont du jaune au bleu en passant par du vert. On constate que pour l’individu à tester, le tube reste
violet, comme le témoin négatif. On en déduit que l’individu malade présente une très faible
quantité d’anticorps.

Conclusion:

On sait qu’un sujet est considéré comme protégé contre le tétanos lorsque son taux d’anticorps est
supérieur ou égal à 0,1 UI par mL. Or, ici notre patient présente un taux d’anticorps inférieur a 0,1
UI par mL (car couleur violette). Donc il n’est pas immunisé contre la toxine responsable du
tétanos.

Notre patient doit donc se refaire vacciné contre le tétanos, pour pouvoir redévelopper les anticorps
antitétaniques.