LICENCE 2 "Sciences du Vivant et Géosciences"

Travaux Pratiques de Physiologie Végétale

Année universitaire 2023-2024

TP1 : Etude de la transpiration foliaire

Au cours de ce TP, on mettra en évidence la transpiration de rameaux de laurier cerise à l'aide d'un potomètre à
capteur électronique de pression. On étudiera l'influence de différents facteurs (surface foliaire, lumière, humidité,
vent…) sur le phénomène d'évapotranspiration. Par ailleurs, les stomates de plusieurs espèces végétales seront
dénombrés au microscope et les adaptations des plantes au manque d’eau seront discutées.

1) Transpiration chez le laurier

Matériel végétal : Rameaux de laurier cerise (Prunus laurocerasus)

Potomètre électronique: Cet appareil est basé sur un capteur de pression très sensible qui mesure la pression au
niveau d'une bulle d'air, dans un tube de polyéthylène rempli d'eau et connecté à la tige du rameau par un court
tube de silicone. L'évapotranspiration au niveau des feuilles se traduit par une absorption d'eau, ce qui diminue la
pression au niveau de la bulle d'air. Le signal analogique (volt) délivré par le potomètre est converti en un signal
digital par un boitier convertisseur, et transmis au logiciel d'analyse qui permet de suivre les variations de pression
correspondantes. La mesure est très sensible, l'appareil pouvant détecter l'absorption d'un seul μL d'eau par le
rameau.

Principe du potomètre à capteur électronique de pression

Dispositif expérimental

Mise en place du dispositif (La démonstration sera effectuée par l'enseignant).

1. Remplir le tube de silicone d'eau avec une pissette, l'immerger dans une bassine d'eau, fermer le clamp

2. Avec le sécateur, sectionner un rameau de laurier de façon à ce qu'il conserve 5-8 feuilles, et immédiatement

immerger la tige sectionnée dans l'eau.

1
3. Recouper la tige à 1cm de la section, en la maintenant toujours immergée.

4. En restant dans l'eau, insérer la tige dans le tube de silicone, en veillant à ne pas laisser de bulle d'air.

5. Installer le rameau sur le portoir, et enlever un peu d'eau à l'autre extrémité du tuyau de façon à laisser

environ 1-2 cm d'air.

6. Connecter le tuyau au potomètre via la sortie Luer-lock, sans forcer.

ATTENTION: la base du rameau doit se situer plus bas que l'entrée du tuyau dans le potomètre. Il ne

faut en aucun cas que de l'eau pénètre dans le potomètre électronique!!!

7. Ouvrir le clamp, et démarrer un enregistrement avec le logiciel Logger lite.

Traitement des données

Sauver vos résultats dans le répertoire correspondant à votre groupe (POTO G1, POTO G2 etc…).
Copier le graphe dans un diaporama powerpoint.
Le logiciel LoggerLite permet de facilement annoter le graphe en cours de mesure ou à posteriori, avec la
commande "insérer/annotation".
Les calculs de vitesse sont effectués par régression linéaire: surligner une portion de courbe avec la souris.
"Analyse/régression linéaire" => sélectionner "série 1", OK. Vous pouvez ajuster les curseurs pour affiner la
régression si besoin.

Relation entre transpiration et surface foliaire

Faire un enregistrement de la transpiration du rameau jusqu'à ce qu'elle se stabilise. Sectionner alors une première
feuille, et attendre que la vitesse se stabilise. Numéroter la feuille, et déterminer sa surface. Sectionner ensuite
toutes les feuilles une à une, en mesurant la vitesse de transpiration correspondante, et la surface de chaque
feuille.
Utiliser Excel pour construire un graphique illustrant l'intensité de la transpiration en fonction de la surface foliaire.

Effet de paramètres environnementaux

Refaire un montage sur un second rameau, et effectuer des mesures d'intensité de la transpiration dans différentes
conditions:
Conditions ambiantes, éclairement par une lampe, agitation de l'air par un ventilateur, saturation de l'atmosphère
(sac plastique)…
Reportez les valeurs (par unité de surface) dans un tableau Excel.

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 2) Observation des stomates chez plusieurs espèces de plantes

A l'aide d'un vernis incolore, réaliser des empreintes stomatiques sur les deux faces des feuilles de laurier cerise, de
Cissus (Rhoicissus rhombifolia) et de maïs (Zea mays) , laisser sécher quelques instants, décoller l'empreinte et
observer au microscope.

- faire un schéma de vos observations

- sachant que le diamètre du champ de vision à l'objectif 10 est de 1,8 mm, calculer à l'objectif 40 le nombre de
stomates par mm2 de surface foliaire pour les trois plantes.
- interpréter les résultats.

Compte rendu
Présentez les résultats dans un diaporama PowerPoint (4 diapositives au maximum) qui sera imprimé en recto-
verso, en incluant des commentaires synthétiques.

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 TP 2 : ETUDE DE LA NUTRITION DES PLANTES PAR UNE APPROCHE DE PHENOTYPAGE

But: il s’agit, par une approche de phénotypage (étude des caractères observables chez un organisme), de mettre
en évidence le rôle des éléments minéraux dans la croissance des plantes.
Pour cela, du cresson est mis en culture sur un substrat inerte et en présence d’une solution nutritive dont la
composition est contrôlée et dans laquelle un élément minéral est absent. A l’issue de la culture en serre, la
croissance des plantes est évaluée grâce à une échelle de notation et par pesée de la matière fraîche, et les
symptômes de carence sont notés. Le phénotypage comprend également un dosage des ions phosphates sur une
partie des échantillons (voir TP3).

1ère partie : Semis des plantes de cresson

(partie réalisée avant la séance par la préparatrice des TP)

Principe:
Des graines de cresson alénois (Lepidium sativum, Brassicacées) sont mises à germer dans des
gobelets contenant un substrat inerte fait de perlite (billes de verre expansé) et une solution minérale dont la
composition est connue. Une série de semis totalisant 11 gobelets allant de la solution minérale complète à l'eau
distillée en passant par 9 solutions nutritives dont chacune est carencée en un élément (voir les tableaux 1 et 2 ci-
dessous) est réalisée.

Mode opératoire
1- Préparer 11 gobelets remplis aux 4/5 de perlite, les numéroter de manière indélébile de 1 à 11. Ajouter
à chaque gobelet 100 mL de la solution nutritive qui lui correspond.
2- Déposer 10 graines de cresson dans chaque gobelet et les répartir uniformément.
Les plantes se développeront en serre pendant une période d’environ 4 à 5 semaines et seront arrosées
régulièrement avec de l’eau déminéralisée

Identification des éléments en carence : D'après les tableaux 1 et 2 ci-dessous, identifier les éléments en
carence dans les différentes solutions et compléter la colonne "carence" du tableau 3.

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 TABLEAU 1- COMPOSITION DES SOLUTIONS MERES

A Phosphate monoammonique NH4H2PO4 23g/litre

B Nitrate d'ammonium NH4NO3 40
C Nitrate de calcium Ca(NO3)2 189
D Chlorure de calcium CaCl2 29
E Chlorure de magnésium MgCl2, 6H2O 41
F Nitrate de magnésium Mg(NO3)2, 6H2O 51
G Sulfate de magnésium MgSO4, 7H20 99
H Phosphate monopotassique KH2PO4 27
I Nitrate de potassium KNO3 121
J Sulfate de potassium K2SO4 87
K Perchlorure de fer FeCl3, 6H2O 10
L Oligoéléments *
M Fer complexé avec EDTA ** 14

* Oligoélements (acide borique, H3BO3: 0,72g, chlorure cuivrique, CuCl2,2H2O: 0,02g,

chlorure de manganèse, MnCl2,4H2O: 0,45g, chlorure de zinc, ZnCl2: 0,06g, acide
molybdique 85%, MoO4: 0,01g)
** Fer complexé avec EDTA (acide éthylène diamine tetraacétique)

TABLEAU 2- COMPOSITION DES SOLUTIONS NUTRITIVES

A B C D E F G H I J K L M
1 5 - 5 5 - - 5 - 5 - - 2 2
2 - - - 21 - - 5 5 - 5 - 2 2
3 - 1 - 5 - - 5 - 5 - - 2 2
4 5 6 5 5 - - 5 - - - - 2 2
5 5 8 - - - - 5 - 5 - - 2 2
6 - 6 5 5 - - - 5 1 4 - 2 2
7 - - 5 - 5 5 - 5 5 - - 2 2
8 5 - 5 5 - - 5 - 5 - - 2 -
9 5 - 5 5 - - 5 - 5 - 2 2 -
10 5 - 5 5 - - 5 - 5 - - - 2
11 eau distillée

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 2ème partie : Phénotypage des plantes de cresson

Principe: Il s’agit de réaliser différentes mesures et observations sur les plantes de cresson mises en culture
plusieurs semaines auparavant :
- évaluation de la croissance des plantes grâce à l’utilisation d’une échelle de notation et à la pesée de la
quantité de matière fraîche correspondant aux parties aériennes
- notation de la présence de symptômes de carence sur les plantes

Mode opératoire:
1- Observer les plantes :
- remplir la colonne "croissance" du tableau 3 en utilisant l'échelle de notation donnée sous le tableau

- remplir la colonne "symptômes" du tableau 3 à l'aide des tableaux des éléments nécessaires à
l'alimentation minérale des plantes

- prélever les parties aériennes dans chaque pot, effectuer une pesée de la matière fraîche de chaque pot
et reporter la valeur dans la colonne "M.F." du tableau 3

-conserver à 4°C les plantes cultivées sur les solutions 1, 3 et 11 pour la séance suivante (dosage des ions
phosphates)

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 TABLEAU 3 : PHENOTYPE DES PLANTES DE CRESSON

N° sol. Carence Croissance Symptômes M.F.

* (en g)
1

10

11

*Croissance maximale +++++

Croissance sub-normale ++++
Croissance modérée +++
Croissance faible ++
Croissance très faible +

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 TP 3 : dosage des ions phosphates chez le cresson

Le matériel végétal utilisé est celui du TP précédent (TP2). Le but de cette séance est de doser les ions
phosphates dans les parties aériennes des plantes cultivées sur les solutions 1, 3 et 11.
Le dosage des ions phosphates dans les 3 échantillons (plantes cultivées sur les solutions n°1, 3 et 11) est réalisé
par colorimétrie. Son principe est la formation par les ions phosphates et l’acide molybdique, d’un complexe
phospho-molybdique jaune, qui vire au bleu intense -bleu de molybdine- en milieu réducteur.

1. Extraction
- Prélever 0,5 g de feuilles et de tiges et les broyer au mortier avec 1 pincée de sable de Fontainebleau et 5 ml
d'acide trichloracétique (TCA) à 10 %.
- Transférer le broyat dans un tube à centrifuger de 30 mL
- Centrifuger 5’ à 5 000 g
- Recueillir le surnageant dans une fiole jaugée de 20 mL et ajuster à 20 mL avec de l'eau distillée

2. Gamme étalon
Les phosphates présents dans la matière végétale étant dosés par la mesure de l’absorbance de l'échantillon
obtenu par extraction par le TCA et par comparaison avec une gamme étalon préparée simultanément dans les
mêmes conditions, préparer dans des tubes à essai, une gamme de 1 mL de solutions contenant respectivement 0,
25, 50, 75, 100 mg/L de NaH2PO4, à partir d'une solution de NaH2PO4 à 100 mg/L

3. Mesure de l’absorbance
- à 1 mL de chacune des solutions [gamme étalon et extraits (préparer 2 tubes pour chaque extrait)], ajouter 450 µL
de réactif dans chaque tube
Composition du réactif :
- acide sulfurique 10 %
- molybdate d'ammonium à 2 %
- sulfite de sodium à 8 %
- hydroquinone à 0,1 %

- agiter le contenu des tubes (vortex).

- après 15 minutes environ, mesurer l’absorbance à 690 nm. Au cas où un extrait serait trop concentré (absorbance
supérieure au point de gamme 100 mg/L), diluer immédiatement l'extrait avec de l'eau distillée et recommencer la
réaction.
- tracer la courbe absorbance = f[H2PO4-].
- sachant que NaH2PO4 = 120 g/mol et Na = 23, calculer la teneur en ions phosphates H 2PO4- en mg par g de matière
fraîche.

Compte-rendu

Le compte-rendu regroupant les résultats des TP 2 et 3 est à rendre à la fin de la séance 3 (compte-rendu réalisé en
salle pendant les séances de TP)