Corrigé Type Examen final

Génétique moléculaire et plasticité des génomes microbiens 2020-2021

Exercice 1 : (6pts)

a. En ajoutant le phage T6 on tue les bactéries sensibles de la souche Hfr et on interrompt

la conjugaison puisqu’il s’agit d’un phénomène actif où l’ADN est dupliqué puis
transféré vers la réceptrice. Les réceptrices sont résistantes et échappent à l’action de T6
et pourront se développer dans le milieu d’étalement, du fait de leur résistance à la
streptomycine, mais à la condition d’avoir reçu et recombiné la séquence sauvage
homologue de la mutation thr–, pour le premier milieu, ou la séquence sauvage
homologue de la séquence mutée gal– pour le second milieu. Ce protocole de
conjugaison interrompue permet de conclure que la séquence thr+ n’est pas transférée
avant au moins 5 min de conjugaison (entre 5 et 10) et que la séquence gal+ ne l’est pas
au moins avant 20 min (entre 20 et 30); les deux mutations sont donc distantes d’environ
15 min de temps de conjugaison. (2pts)

- En absence de phage T6, on procéderait à une forte agitation (vortex) qui rompt les ponts
cytoplasmiques. (1pt)

b. Dans la première expérience, des colonies [thr+] et même [gal+] apparaissent dès la
cinquième minute alors qu’on vient de conclure que les séquences thr+ et gal+
n’entraient pas avant 5 et 20 min respectivement, mais ces observations n’ont qu’une
contradiction apparente avec celles de la deuxième expérience, car ici l’absence de
traitement au phage T6 (et d’agitation) laisse les conjugaisons se poursuivre sur la boîte
après l’étalement. (1pt)

- Ce protocole de conjugaison non interrompue est beaucoup moins précis car il donne
l’ordre d’entrée mais pas la distance en temps de conjugaison. Seule l’interruption
permet d’affirmer qu’avant un temps donné la séquence testée n’est jamais entrée. (1pt)

- Dans la mesure où il y a toujours plus de thr+ que de gal+, on doit conclure que thr+
passe en premier. En effet si tel est le cas, il y aura un certain nombre de conjugaisons
spontanément interrompues entre le passage de thr+ et celui de gal+, de sorte que le
nombre de réceptrices ayant reçu thr+ sera toujours plus élevé que le nombre de
réceptrices ayant reçu gal+. (1pt)
Exercice 2 : (6pts)

a. Ceci est simplement calculé comme le pourcentage de colonies pur + qui sont également
nad + = 100% (3 + 10) / 50 = 26% (1pt)

b. Ceci est calculé comme le pourcentage de colonies pur + qui sont également pdx– =
100% (10 + 13) / 50 = 46% (1pt)

c. pdx est plus proche, tel que déterminé par les taux de cotransduction. (1pt)

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d. D'après les fréquences de cotransduction, vous savez que pdx est plus proche de pur que
nad, il y a donc deux ordres de gènes possibles: pur pdx nad ou pdx pur nad. Maintenant,
considérez comment un chromosome bactérien qui est pur + pdx + nad + pourrait être
généré, étant donné les deux ordres de gènes: si pdx est au milieu, 4 croisements sont
nécessaires pour obtenir pur + pdx + nad +; si pur est au milieu, seuls 2 croisements sont
nécessaires. Les résultats indiquent qu'il y a moins de transducteurs pur + pdx + nad +
que toute autre classe, ce qui suggère que cette classe est «plus difficile» à générer que
les autres. Cela implique que pdx est au milieu et que l'ordre des gènes est pur pdx nad.
(1pt)

(2pts)

Exercice 3 : (5pts)
a. Organisation.
L’IS est constitué de :
- un ou deux cadres de lecture ouverts (orfs) qui codent pour une transposase (TnpA).
Rôle : est la catalyse le clivage de l'ADN et les transferts de l'IS. (1pt)
- les orf se terminent par des séquences répétées de terminaison imparfaites (IR). Rôle :
nécessaires pour la liaison de la transposase. (1pt)

(1pt)

b. Impacts de la transposition
- Inactivation des gènes : en raison de la perturbation des séquences codantes par l’IS ou
par l’insertion dans les parties régulatrices de la transcription conduisant à la création
de pseudogènes. (1pt)
- Augmentation de l’expression génique : les éléments IS peuvent également affecter les
voies de régulation, modulant ainsi l'expression des gènes. Cela peut augmenter les
niveaux d'expression si l’IS est inséré dans une séquence de répresseur. (1pt)

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Exercice 4 : (3pts)

N° de N° de
Réponse Réponse
question question
1. D (0.25pt) 7. C (0.25pt)
2. C (0.25pt) 8. C (0.25pt)
3. C (0.25pt) 9. C (0.25pt)
4. C (0.25pt) 10. D (0.25pt)
5. D (0.25pt) 11. B (0.25pt)
6. D (0.25pt) 12. D (0.25pt)

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