Cours Méthodes de séparation

Mastère Professionnel de chimie APCAI

2023-2024

Les méthodes de séparation

Si l'on ne sait pas ce que l'on cherche,

on ne comprend pas ce que l'on trouve

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 Chapitre I

Echantillonnage et prétraitements
des échantillons

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 Analyse en laboratoire
Échantillonnage

Pré-traitement
Etape avant l’analyse
proprement dite
Extraction des analytes

Extrait

Purification des extraits

Analyse

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Résultats, rapport d ’essai
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I. Problématique

60% du temps requis pour réaliser une analyse globale, sont

consacrés aux étapes de prétraitements d’échantillon et aux
méthodes d’extraction des analytes cibles.

Les étapes de prétraitement d’échantillon et d’extraction des analytes

cibles représentent à elles même près de 30 % des erreurs dans le
résultat final.

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 le (pré)traitement des échantillons est une étape fondamentale
du processus analytique.

Afin de mettre l’analyte à une concentration adaptée à la méthode d’analyse:

Dilution
Pré-concentration

Afin de l’isoler des autres constituants (Purification):

Précipitation
Extraction
Filtration/ultrafiltration/dialyse

Afin de le changer de matrice:

Extraction
Mise en solution/Minéralisation

Afin de le rendre détectable par la méthode d’analyse:

Complexation/Indicateurs colorés
Dérivatisation
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Les enjeux analytiques sont majoritairement confrontés à la
détection et quantification de composés traces.

Le traitement des échantillons est toujours l'étape limitante de la

chaîne analytique. Les objectifs sont :

(i) abaisser les seuils de détection et de quantification des

méthodes d’analyse

(ii) améliorer la sélectivité des méthodes

(iii) identifier de nouveaux composés présents à l’état de traces

ou d’ultra-traces

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II. Échantillonnage

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Norme Iso 17025 (2017)
Méthodes de séparation/Dr. B. Bejaoui Kefi 7
M1 APCAI- AU 2023 2024 Diagramme
Méthodes de séparation/Dr. Ishikawa
B. Bejaoui Kefi ou diagramme cause à effet
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1. Prélèvement et contraintes particulières

Du prélèvement de l’échantillon jusqu’à la préparation de l’extrait, il

est important d’éviter toute dégradation des composés à analyser.

Les dégradations peuvent être d’origine :

- physique : volatilisation, adsorption,
- chimique : oxydoréduction, réactions photochimiques,
- biologique : activité microbiologique, réactions enzymatiques.

A ces difficultés s’ajoutent les risques de contamination induits par

l’utilisation de récipients et outils de préparation non adaptés.

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Prélèvement de l’échantillon

Cette opération consiste à produire un échantillon destiné à l’analyse qui soit

représentatif de l’entité à caractériser.

Donc les procédures de prélèvement peuvent faire appel à des protocoles

spécifiques destinés à préserver les grandeurs à mesurer.

Remarque :
L’obligation de conserver les conditions de milieu peut nous amener faire des
traitements spécifiques aux échantillons et des mesures ou analyses immédiats de
ces derniers (sur terrain).

Pour certains analytes, on peut également être amené à stabiliser l’échantillon dès
que prélevé.

Cela peut se traduire, par exemple, par l’addition d’un volume connu de solvant à
un échantillon pour éviter la volatilisation de composés organiques de faibles
masses moléculaires…

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2. Conditionnement, transport des échantillons

Les critères de choix du récipient destiné à contenir l’échantillon brut relèvent

souvent du bon sens :
- taille, forme et masse,
- résistance mécanique,
- étanchéité du système de fermeture,
- résistance aux variations de température,
- étanchéité à l’humidité, aux échanges gazeux,
- disponibilité et coût,
-possibilité de réutilisation.

Dans certains cas, il convient d’éviter des interactions entre le matériau constitutif du
flacon d’échantillonnage et l’échantillon. Les principaux problèmes rencontrés sont :
- adsorption de l’analyte par les parois,
- contamination de l’échantillon par les constituants du récipient,
- réaction entre les constituants de l’échantillon et le récipient.

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Exemples

Dans la pratique, pour le dosage des composés organiques, on utilisera plutôt le verre.
Lorsque des réactions en présence de lumière sont à craindre, ce dernier sera ambré.
Les bouchons seront munis de capuchons en PTFE ou de feuilles d’aluminium.

Pour les composés minéraux on utilisera plutôt des polymères neutres comme le PTFE
(Polytetrafluoroethylene).
Il existe plusieurs qualités polymères (PTFE, PFA…) ; à chacune correspond des
caractéristiques de surface (adsorption, rugosité...).

Certains échantillons biologiques peuvent être le siège d’une activité microbiologique plus
ou moins intense susceptible de les dénaturer et/ou de modifier les valeurs des grandeurs à
mesurer.
Dans ces cas, on utilisera le transport à froid pour limiter ces phénomènes : congélation
ou à température proche de 0°C dans le cas contraire ou lorsque les temps de trajet entre
le lieu de prélèvement et le laboratoire sont réduits.

Pour les échantillons fragiles, les conditions de transport doivent prendre en compte la
sensibilité de l’échantillon à l’écrasement (transport de pêches, de fruits ou de légumes
par exemple).

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III. Prétraitements des échantillons

C’est la succession d’opérations qui peuvent être faites en amont des étapes de
déshydratation, du broyage des échantillons et d’extraction des analytes ou même
directement avant l’analyse lorsque ces dernières opérations ne sont pas nécessaires.
On peut citer :

- la séparation des phases solides et liquides

- l’élimination de constituants indésirables : un lavage préalable pour éliminer des

dépôts superficiels sur l’échantillon.
•Cette méthode de lavage ne doit pas être agressive pour le végétal pour ne pas
extraire les éléments contenus dans l’échantillon.

•Les ultrasons par leur action mécanique de surface nettoient sans entamer la
surface du végétal.

•Les surfactants (type triton X) peuvent être utilisés s’ils sont dilués et s’il
contiennent des quantités très faibles des éléments à analyser.

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1. la réduction d’un échantillon
On peut utiliser la méthode par quartage dont un exemple est donné ci-dessous (figure 1),
sachant que dans son principe elle peut s’appliquer à tous les niveaux de la préparation des
échantillons et sur des échantillons en poudres, en grains ou en granulats. D’autres techniques
de division sont décrites dans les normes T 20-083 et ISO 8213:1986.

T 20-083 - Produits chimiques à usage industriels - Techniques de l’échantillonnage.

ISO 8213/1986 – Produits chimiques à usage industriel – Techniques de l’échantillonnage – Produits chimiques
M1 APCAI-
solides deAU 2023 granulométrie
petite 2024 Méthodes degrossiers.
et agglomérats séparation/Dr. B. Bejaoui Kefi 15
2. Préparation des échantillons pour stockage

Le séchage
• Avant stockage certains échantillons peuvent être sécher:
• à l’air,
• à l’étuve (à des températures fixées)
• ou par lyophilisation

• Le choix de la méthode de séchage dépend de la nature de l’échantillon et des analytes

cibles

• Avant séchage il préférable de réduire la granulométrie et la taille des échantillons.

Remarques

La température de séchage à l’étuve est un paramètre très important. Il en est de même pour
la lyophilisation.

L’opération de séchage ne doit pas dégrader ou changer les caractéristiques physico-

chimiques de l’analyte.

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la lyophilisation

La lyophilisation est une technique de

déshydratation qui permet de stopper le
développement des microorganismes pour une
conservation à long terme.

La lyophilisation, autrefois
appelée cryodessiccation, consiste à déshydrater un
produit préalablement surgelé, par sublimation.

C'est une méthode de dessiccation sous vide, à basse

température, de produits liquides préalablement
congelés.

La lyophilisation consiste en l'élimination

progressive de l'eau du produit préalablement
congelé (phase solide) par passage à la phase vapeur,
sans passer par la phase liquide. Ce changement
d'état s'appelle la sublimation.

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Principe d’une lyophilisation

1) On commence par congeler le produit liquide, pâteux ou solide

à des températures de l’ordre de -20 °C à -80 °C.

2) On le soumet ensuite à une évaporation sous vide ou

dessiccation primaire. Cela permet de faire passer l'eau
contenue dans le produit directement de l'état solide à l’état
gazeux.
On capture la vapeur d’eau ainsi produite par congélation, à
l’aide d’un condenseur.

3) Enfin, la dessiccation secondaire permet d’extraire par

désorption les molécules d’eau piégées à la surface des
produits séchés.

A la fin de ce cycle, le produit ne contient que de 1 à 5% d’eau.

Cette technique permet de conserver à la fois le volume, l’aspect et
les propriétés du produit.

L’appareil utilisé est un lyophilisateur.

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Le broyage et les broyeurs
On distingue deux types de broyeurs :
1. ceux munis d’un tamis dans lesquels l’échantillon se réduit au fur et à mesure que
les particules passent à travers les mailles
2. et ceux constitués d’une enceinte hermétique conservant la totalité de l’échantillon
pendant toute la durée du broyage.

Les végétaux fibreux tels

que les pailles sont Les broyeurs adaptés aux
broyés à l’aide d’un grains : broyeurs
broyeurs à couteaux centrifuges ou à billes par
exemple.

broyeurs à couteaux
M1 APCAI- AU 2023 2024 Méthodes de séparation/Dr. B. Bejaouibroyeurs
Kefi centrifuges ou à billes
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L’utilisation de l’échantillon à l’état brut
Les solutions et suspensions
- le cas des solutions limpides ne pose pas de problème particulier

- celui des solutions avec suspensions a déjà été en partie discuté en évoquant la séparation des
phases solides et liquides. On peut et toujours selon le cas soit :
*broyer et homogénéiser la totalité de l’échantillon
*ou également séparer les deux phases qui peuvent constituer deux échantillons
distincts, puis on procède à analyser les analytes cibles dans chaque phase à part.

Les échantillons solides ou pâteux

La représentativité de l’échantillon pour essai est d’autant plus facile à obtenir que la
granulométrie des particules solides est réduite.
Pour des échantillons solides humides on peut envisager :
- le broyage cryogénique, l’échantillon est alors préalablement refroidi dans l’azote
liquide par exemple ;
- le broyage après déshydratation chimique. Cette méthode convient pour le dosage des
composés organiques, on ajoute à l’échantillon du sulfate de sodium et un silicate de
magnésium (talc) anhydres. La déshydratation s’effectue à une température de l’ordre
de 4°C, l’échantillon est alors prêt pour être broyé et homogénéisé.
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IV. Caractéristiques physico-chimiques d’une espèce chimique
Une espèce chimique est un ensemble de molécules ou d’ions tous identiques. Chaque espèce
chimique est caractérisée par son nom, son aspect, sa formule chimique, et des grandeurs
physiques (solubilité, masse volumique, densité).
Il existe deux types d’espèces chimiques : les espèces chimiques naturelles et les espèces
chimiques synthétiques,

• Dans un mélange, les composants retiennent leur propriétés physiques propres. C'est en utilisant
ces différences dans les propriétés physiques que les composants peuvent être séparés et isolés.

•La connaissance de certaines caractéristiques physico-chimiques des composés à analyser peut

aider au choix d’une méthode appropriée de prétraitement des échantillons et même de la
méthode d’extraction des analytes après.
Parmi les caractéristiques physico-chimiques on peut citer :
- la température d’ébullition ou la tension de vapeur à température et pression données,
- la sensibilité à certains types de dégradation, photochimique par exemple,
- la solubilité dans l’eau,
- la polarité des composés,
- le coefficient de partage eau-octanol etc.

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Les méthodes de séparation

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