See discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.

net/publication/26855962

Study of antigenic profile of blasts in acute lymphoblastic leukaemia: Flow

cytometric analysis of 152 cases

Article in Annales de Biologie Clinique · September 2009

DOI: 10.1684/abc.2009.0361 · Source: PubMed

CITATION READS

1 620

5 authors, including:

Nejia Braham Jmili Saloua Yacoub jemni

University of Monastir University of Monastir
37 PUBLICATIONS 180 CITATIONS 70 PUBLICATIONS 480 CITATIONS

SEE PROFILE SEE PROFILE

Khelif Abderrahim Mondher Kortas

Centre Hôpital Universitaire Farhat Hached University of Monastir
125 PUBLICATIONS 939 CITATIONS 51 PUBLICATIONS 150 CITATIONS

SEE PROFILE SEE PROFILE

Some of the authors of this publication are also working on these related projects:

HEMATOLOGY View project

Fungal diseases View project

All content following this page was uploaded by Khelif Abderrahim on 27 November 2017.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

 article original abc
Ann Biol Clin 2009 ; 67 (5) : 543-51

Etude du profil antigénique des blastes

au cours des leucémies aiguës lymphoblastiques :
analyse de 152 cas par cytométrie en flux
Study of antigenic profile of blasts in acute lymphoblastic leukaemia:
Flow cytometric analysis of 152 cases

N. Braham Jmili1 Résumé. Le but notre travail est de déterminer le profil antigénique des blas-
S. Souguir1 tes au cours des leucémies aiguës lymphoblastiques (LAL) et de rechercher
d’éventuels phénotypes aberrants chez 152 patients atteints de leucémies
S. Yacoub2
aiguës non myéloïdes. Les échantillons ont été traités par cytométrie en flux
A. Khelif3 (CMF) sur un cytométre de type EPICS XL (Beckman Coulter) après mar-
M. Kortas1 quage par un panel d’anticorps monoclonaux (Beckman Coulter). La classifi-
1
Laboratoire d’hématologie, cation immunologique de notre série d’étude selon les critères d’EGIL
CHU Farhat Hached, Sousse, Tunisie (European Group of Immunological Leukemia) a montré 52,6 % de cas de
<jmilinejia@yahoo.fr> LAL, 75 % des cas appartiennent à la lignée lymphoïde B. 80 % des LAL
2
Centre régional de transfusion type B présentent un profil antigénique exprimant le CD10, marqueur de bon
sanguine, Sousse, Tunisie
3 pronostic. Dans 10,5 % des cas, il s’agit d’une leucémie aiguë biphénotypique
Service d’hématologie clinique,
CHU Farhat Hached, Sousse, Tunisie (lymphoïde et myéloïde). Dans 25 % des cas, nous avons détecté la coexpres-
sion de marqueurs aberrants. La cytométrie en flux a donc un champ d’appli-
cation très large pour l’étude des cellules leucémiques : elle permet d’établir
un diagnostic précis de la lignée responsable de la prolifération maligne ainsi
que la détermination de son stade de maturation, recueillir les facteurs pronos-
tiques des leucémies aiguës pour une meilleure adaptation d’un traitement
adéquat, suivre l’évolution de la maladie après chimiothérapie et étudier la
maladie résiduelle.
Mots clés : cytométrie en flux, immunophénotype, leucémies aiguës
lymphoblastiques

Abstract. The aim of this study was to characterize the antigenic profile of
blasts in acute lymphoblastic leukaemia (ALL) and to determine possible phe-
notypic aberrancies in a series of 152 patients with acute leukaemia diagnosed
non myeloid leukaemia in cytology. Samples were analyzed by EPICS XL
flow cytometer (Beckman Coulter) after staining with monoclonal antibodies
(Beckman Coulter). Based on criteria of EGIL (European Group of Immuno-
logical Leukaemia), cases were classified as: acute lymphoblastic leukaemia
(ALL, 52,6%); 75% cases of ALL belong to lymphoid B lineage. 80% of
ALL B were CD10 positive, marker of best prognosis. In 10,5% of cases,
biphenotypic leukaemia is diagnosed (lymphoid/myeloid). In 25% of cases
aberrancies in phenotype were found. Flow cytometry has wide field of appli-
doi: 10.1684/abc.2009.0361

cations to characterize blast cells from patients with acute leukaemia: to esta-
Article reçu le 4 avril 2009, blish diagnosis of lineage responsible in proliferation, to determine the stage
accepté le 20 juillet 2009 of maturation, to predict prognosis for a better adaptation of adequate treat-

Tirés à part : N. Braham Jmili

Ann Biol Clin, vol. 67, no 5, septembre-octobre 2009 543

article original
ment, to follow evolution of disease after chemotherapy and to study minimal
residual disease.
Key words: acute lymphoblastic leukaemia, flow cytometry, immunophenotype
Le très grand intérêt que l’on porte aux leucémies
s’explique par leur fréquence chez le petit enfant et par
leur valeur de « maladie pilote » de la cancérologie.
C’est pour les leucémies qu’ont été découverts, et que
ne cessent d’être développés, les premiers traitements
des cancers par des médications chimiques. Le diagnostic
des leucémies aiguës lymphoblastiques (LAL) a été long-
temps basé sur la simple morphologie « lymphoïde » des
cellules cancéreuses (blastes) et la négativité de la myélo-
peroxydase, enzyme spécifique de la lignée myéloïde.
Cependant au cours des dernières décennies, la mise en
évidence par cytométrie en flux (CMF) des marqueurs
cellulaires a permis d’affirmer la nature lymphoïde des
blastes et d’individualiser différents sous-groupes.
La CMF est la technique de choix pour la réalisation de
l’immunophénotypage des leucémies aiguës. Cette tech-
nique est introduite en Tunisie pour l’immunophénoty-
page des hémopathies malignes depuis quelques années,
mais elle n’est pas généralisée à tous les malades. La CMF
n’a pas pour objet de remplacer les techniques tradition-
nelles utilisées pour le diagnostic des hémopathies mali-
gnes telles que la cytologie et l’histologie qui restent
jusqu’à présent les techniques d’urgence pour la classifi-
cation de ces entités. Toutefois, elle permet d’obtenir des
informations complémentaires permettant de mieux défi-
nir cette pathologie et de fournir des éléments importants
pour définir l’agressivité d’un processus néoplasique, de
prédire la réponse à une thérapie particulière ou encore
pour suivre l’évolution de la maladie au cours du traite-
ment [1-3]. L’objectif de notre travail est l’étude du profil
antigénique des cellules cancéreuses au cours des leucé-
mies aiguës lymphoblastiques par CMF.
Matériel et méthodes
Patients
Cette étude a concerné une série de 152 patients atteints
de leucémie aiguë non myéloïde (classées en cytologie en
LAL, LA difficiles à classer et LA myéloïdes avec atypies
morphologiques, rechute de LAL connue).
544
Prélèvements et échantillons
Il s’agissait de prélèvements de sang au pli du coude et de
prélèvements de moelle osseuse (prélevée au niveau ster-
nal chez l’adulte et au niveau de l’épine iliaque chez les
enfants). Les échantillons prélevés sur un tube en polypro-
pylène anticoagulé par l’éthylène-diamine-tétra-acétique
(EDTA) étaient accompagnés d’une fiche de prescription
donnant le motif de la demande sur laquelle sont mention-
nés : la nature du tissu à examiner (sang ou moelle), le
diagnostic suspecté, les traitements récents éventuels sus-
ceptibles d’affecter la qualité de l’examen (radio- ou chi-
miothérapie, par exemple) et les principaux renseigne-
ments cliniques en faveur de la suspicion du diagnostic
mis en œuvre.
Méthodes
Examens cytologiques et cytochimiques
L’hémogramme a été réalisé sur analyseur MAXM (Beck-
man Coulter). Des frottis sanguins et médullaires ont été
effectués pour tous les patients puis colorés au May-
Grünwald-Giemsa, par méthode automatique (Hematek-
Ames). Pour chaque patient, trois lectures indépendantes
des frottis ont été assurées et validées par des cytologistes.
Le diagnostic de LA a été porté dès qu’il y avait plus de
20 % de blastes dans la moelle osseuse. L’examen de sang
a permis d’établir la formule leucocytaire sanguine et a
contribué à la classification des LA selon le groupe
FAB. La séparation entre les sous-groupes des LA a été
basée sur l’appréciation du pourcentage des blastes dans
la moelle, le type de blastes et le compte absolu des
monocytes sanguins. La caractérisation de la myélopero-
xydase a été réalisée par la technique à la pyronine.
Immunophénotypage
Le marquage des blastes a été réalisé par un panel d’anti-
corps monoclonaux (Beckman Coulter) conjugués à des
fluorochromes selon un triple marquage (FL1 : isothiocya-
nate de fluorescéine (FITC), FL2 : R-Phycoerythrine (PE),
FL4 : R-Phycoerythrincyanine 5.1 (PC5) et dirigés contre
les antigènes hématopoïétiques : IgG1(FITC), HLA-
DR(FITC), CD7(FITC), CD3(FITC), CD10 (FITC),
CD22(FITC), CD15(FITC), CD65(FITC), CD3(FITC),
CD3 intracytoplasmique(IC)(FITC), CD16(FITC), CD19
Ann Biol Clin, vol. 67, no 5, septembre-octobre 2009
 Profil antigénique des blastes et leucémies aiguës lymphoblastiques

(FITC), CD4(FITC), CD56(FITC), CD29(FITC), Lambda Caractéristiques immunophénotypiques

(FITC), Kappa(FITC), IgG1(PE), CD34(PE), CD2(PE),
Détection des blastes par cytométrie en flux
TCR(PE), CD5 (PE), CD20(PE), CD19(PE), CD38(PE),
CD79aIC(PE), CD33(PE), CD13(PE), CD117(PE), La détection des blastes par CMF a permis de révéler trois
MPOIC(PE), CD14(PE), CD1a(PE), CD8(PE), CD58 types de blastes selon la nature de leur expression dans le
(PE), CD45(PC 5). cytogramme granularité/CD45 (figure 3) : lymphoblaste,
myéloblaste, blastes de Burkitt.
Le marquage intracytoplasmique est fait après perméabi-
lisation leucocytaire (réactif IntraPrep Beckman Coulter). Classification immunologique (EGIL)
L’Optilyse Beckman Coulter pour la lyse des globules L’affectation des blastes à chaque lignée par l’EGIL [3]
rouges a été utilisé. s’appuie intégralement sur le profil antigénique qu’expri-
Les prélèvements ont été traités par cytométrie en flux
(CMF) sur un cytomètre de type Epics XL (Beckman
Coulter, Logiciel : Software système II version 3).
Le nombre d’événements à passer (cellules) est égal à
10 000. L’analyse est réalisée selon le fenêtrage (gating)
suivant : A : zone des mononucléés sur le cytogramme
granularité (SSC)/taille (FSC) ; B : zone des blastes sur
le cytogramme SSC/CD45.
L’étude de la classe et de la sous-classe immunologique
des LAL, ainsi que la recherche d’éventuels phénotypes
aberrants, ont été basées sur les critères d’EGIL (Euro-
pean group of immunological leukemia). Le traitement
statistique des données a été réalisé par le logiciel d’ana-
lyse statistique (EPI Info Version 6).

Résultats Figure 1. Cellules blastiques indifférenciées (moelle/MGG,

GX100) (patient n° 136).
Caractéristiques cliniques
Les données cliniques des 152 patients sont résumées
dans le tableau 1. Les patients sont âgés de 15 mois à
72 ans avec une moyenne de 26 ans. Le sex ratio est de
1,6 en faveur du sexe masculin. La présence d’un syn-
drome tumoral généralisé a été signalée dans 52/152
patients de notre série.

Caractéristiques hématologiques :
hémogramme-myélogramme
Les résultats de l’hémogramme sont résumés dans le
tableau 1. Le nombre des leucocytes est très variable
allant de 1,2 à 32,0 G/L. Un examen du frottis de sang
permet de vérifier la présence des anomalies quantitatives
signalées par l’automate, déterminer la formule leucocy-
taire et témoigner de la présence d’éventuelles cellules
anormales cancéreuses (blastes). Figure 2. Blastes myéloperoxydase négatifs dans une LAL
L’examen morphologique des frottis de moelle a permis (moelle, GX100) (patient n° 123). A : lymphoblastes : granularité
de dénombrer le pourcentage des blastes et la classifica- faible/CD45 faible dans une LAL (patient n° 9). B : myéloblastes :
granularité forte/CD45 faible dans une LAM (patient n° 33) ;
tion de la LA selon les critères FAB (figures 1 et 2, C : cytogramme SSC/CD45, blastes CD45 faible, lymphocytes
tableau 1). CD45 fort. D : blastes de Burkitt : granularité faible/CD45 fort.

Ann Biol Clin, vol. 67, no 5, septembre-octobre 2009 545

article original

Tableau 1. Données cliniques et cytologiques des 152 patients. ment les cellules blastiques pour chaque cas de notre série
(tableau 2). Un antigène est considéré comme un mar-
Âge 15 mois à 72 ans queur positif pour sa lignée spécifique quand il est
Moyenne : 26 ans
exprimé au-delà de 20 % des cellules. Les figures 4A,
Sexe H/F : 1,6
4B et 4C illustrent respectivement une LAL B, une
Signes cliniques Liés à l’insuffisance médullaire : 124/152 cas
Syndromes anémiques : 84/152 cas LAL T et une LA biphénotypique lymphoïde B/myéloïde.
Syndromes hémorragiques : 44/152 cas
Syndromes infectieux : 20/152 cas Sous-classification des leucémies aiguës lymphoïdes
Liés à la prolifération tumorale : 104/152 cas selon l’EGIL
Hypertrophie des organes hématopoı̈étiques : Pour les patients atteints d’une LAL (confirmée par
104/152 cas
Adénopathies : 40/152 cas CMF), nous avons déterminé dans un premier temps la
Splénomégalie et/ou hépatomégalies : 12/152 cas nature B ou T de la lignée lymphoïde en cause, puis la
Généralisée : 52/152 cas sous-classe selon les critères d’EGIL (tableau 2) : 53 %
Atteinte osseuse : 12/152 cas
Atteinte cutanée : 4/152 cas
des cas de LA traités appartenaient à la lignée lymphoïde,
Atteinte neuroméningée : 8/152 cas 75 % étaient des LAL type B, et 80 % de LAL B expri-
Autres : maient le marqueur d’immaturité CD10.
Pleurésie : 4/152 cas
Dysmorphie faciale : 3/152 cas Recherche des phénotypes aberrants
Suspicion de rechute : 28/152 cas
Trente-huit des patients de notre série d’étude ont présenté
Hémogramme Lignée blanche ; Lignée rouge ; Plaquettes
GB (/G/L) : 1,2-320 ; Hb (g/L) : 32 à 128 ; G/L : 1-350 en plus des marqueurs spécifiques pour la classification de
Moyenne : 41 ; Moyenne : 78 ; Moyenne : 48 la lignée en cause et pour la détermination des stades de
Blastes (%) : 0 à 95 ; VGM(fl) : 60 à 120 maturation des phénotypes aberrants qui ne s’accordent
Moyenne : 54 ; Moyenne : 88
pas avec la lignée d’origine (tableau 3).
Myélogramme Nombre de cas (Pourcentage)
LAL 1/2 94 (62)
LAL 3 10 (6,5)
LAM 20 (13,1) Discussion
LADAC 28 (18,4)
GB : globules blancs ; Hb : hémoglobine ; LAL : leucémies aiguës lymphoï-
des : LAM : leucémies aiguës myéloïdes ; LADAC : leucémies aiguës diffi-
La leucémie aiguë lymphoblastique est une maladie excep-
ciles à classer. tionnelle en période néonatale et son pronostic est sévère

Tableau 2. Classification immunologique des 152 cas de leucémies aiguës.

Classe immunologique Sous-classe Nombre de cas %A %B

LAL B LAL B-I 0 0 0
CD19+, CD79a+, CD22+ (au moins 2 des 3) (Pro-B)
(60 cas) LAL B-II 4 2,6 6,6
(LAL commune)
LAL B III 44 28,9 73,3
(Pré-B)
LAL B-IV 12 7,9 20
(B Mature)
LAL T LAL T-I 0 0 0
CD3+ IC (Pro-T)
(20 cas) LAL T-II 4 2,6 20
(Pré-T)
LAL T-III 12 7,9 60
(thymocytes communs corticaux, intermédiaires)
LAL T-IV 4 2,6 20
(T Mature)
LAM 28 18,4
LA biphénotypique 16 10,5
LA indifférenciées 8 5,2
Prélèvements non concluants 20 13,1
LA : leucémies aiguës ; LAL : leucémies aiguës lymphoïdes ; LAM : leucémies aiguës myéloïdes ; %A : pourcentage de la classe immunologique par rap-
port au nombre total de cas ; %B : pourcentage de la sous-classe immunologique par rapport au nombre total de LAL.

546 Ann Biol Clin, vol. 67, no 5, septembre-octobre 2009

 Profil antigénique des blastes et leucémies aiguës lymphoblastiques

21 21

1000

1000
800

800
600

600
(128x128)

(128x128)
ss
ss
400

400
200

200
0

0
.1 1 10 100 1000 .1 1 10 100 1000
FL4 CD45 FL4 CD45

1000
1000

800
800

600
600
SSC

(128x128)
ss

(128x128)
400

400

Lymphocytes
200

200

Blastes
0

.1 1 10 100 1000 .1 1 10 100 1000

FL4 CD45 FL4 CD45

Figure 3. Détection des blastes par cytométrie en flux.

Tableau 3. Recherche des phénotypes aberrants dans les 80 cas de leucémies aiguës lymphoïdes.

Marqueurs aberrants Origine du marqueur aberrant Fréquence Classe immunophénotypique

Nombres de cas (%) des LAL exprimant le marqueur aberrant
CD5 Marqueur lymphoı̈de T 12 (15) LAL B (10/12 cas)
LA biphénotypique myéloı̈de lymphoı̈de B (2/12 cas)
CD7 Marqueur lymphoı̈de T 8 (10) LAL B (7/8 cas)
LA biphénétypique myéloı̈de lymphoı̈de B
(1/8 cas)
CD4 Marqueur lymphoı̈de T 3 (3,7) LAL B
CD8 Marqueur lymphoı̈de T 1 (1,2) LAL B
CD56 Marqueur NK 2 (2,4) LAL T
CD33 Marqueur myéloı̈de 12 (15) LAL B

Ann Biol Clin, vol. 67, no 5, septembre-octobre 2009 547

article original

A
4:B 4:A

1000

1000
1 2 1 CD 19+ 2
CD 79a+

100

100
FL2 LOG

FL2 LOG
(128x128)

(128x128)
10

10
D D
1

1
3 4 3 4

.1
.1

.1 1 10 100 1000 .1 1 10 100 1000

FLD CD45 FLD CD45

A : Cytogramme CD79a/CD45 B : Cytogramme C1D9a/CD45

B 4:B
3:B

1000
1 2
1000

1 2
CD 7+ CD 2+

100
100
FL2 LOG

FL2 LOG

(128x128)
10
(128x128)
10

D
C
1

3 4
1

3 4
.1
.1

.1 1 10 100 1000
.1 1 10 100 1000
FLD CD45 FLD CD45

A : Cytogramme CD7/CD45 B : Cytogramme C2/CD45

C
1000

1000

1 2 1 2
CD 19+ CD 33+
100

100
FL2 LOG

FL2 LOG
10

10

D D
1

3 4 3 4
.1

.1

.1 1 10 100 1000 .1 1 10 100 1000

FL4 CD45 FL4 CD45

A : Cytogramme CD19/CD45 B : Cytogramme CD19/CD45

Figure 4. A : LAL B (patient n° 9). B : LAL T (patient n° 18). C : LA biphénotypique lymphoïde B et myéloïde (patient n° 116).

[4], mais elle est plus fréquente chez les jeunes entre 2 et Europe et aux États-Unis, les LA représentent 80 % des
10 ans ; elle représente la maladie maligne la plus rencon- leucémies et environ 35 % des cancers de l’enfant [7].
trée en pédiatrie. Un deuxième pic de fréquence se situe Le sex ratio calculé pour notre série est de 1,6 en faveur
chez l’adulte âgé autour de 70 ans [3]. En Tunisie et du sexe masculin ce que confirme la littérature [8, 9].
selon le registre du cancer du centre tunisien, les leucémies Les leucémies sont caractérisées par l’association à des
aiguës lymphoblastiques représentent le cancer le plus fré- degrés variables de signes témoignant à la fois une infil-
quent chez l’enfant avec une fréquence de 30 % [5, 6]. En tration tumorale ainsi qu’une insuffisance médullaire.

548 Ann Biol Clin, vol. 67, no 5, septembre-octobre 2009

 Profil antigénique des blastes et leucémies aiguës lymphoblastiques
Ces signes peuvent orienter le clinicien vers la suspicion
de cette maladie [3]. En effet, d’après notre étude, un syn-
drome tumoral est décrit dans 68 % des cas au diagnostic.
Ceci est révélé fréquemment par une hypertrophie des
organes hématopoïétiques : adénopathies (cervicales,
médiastinales, inguinales, sous maxillaires), splénoméga-
lie et hépatomégalie. En effet, divers organes peuvent être
infiltrés par les cellules leucémiques, ce qui augmente leur
taille et contrarie leur bon fonctionnement [10, 11]. Il a été
démontré que ces manifestations sont plus communes
dans les LAL que les LAM [12]. Des douleurs osseuses
peuvent aussi être observées (tableau 1), évoquées le plus
souvent par une localisation atypique de douleurs articu-
laires résistant aux traitements habituels [13, 14]. L’insuf-
fisance médullaire est liée à l’envahissement médullaire
par les cellules blastiques, au détriment des autres lignées
hématopoïétiques [15, 16].
Comme indiqué classiquement dans la littérature, nous
avons retrouvé chez nos patients une anémie normocytaire
arégénérative, avec hyperleucocytose et présence souvent
importante de blastes au niveau sanguin [16, 17]. La classi-
fication des LA nécessite l’étude cytologique conjointe du
sang et de la moelle, afin d’apprécier l’importance de la
blastose médullaire qui est beaucoup plus importante
qu’au niveau du sang périphérique [18, 19]. La cytomorpho-
logie des cellules blastiques observées dans le sang ou dans
la moelle constitue la clé du diagnostic des LA [20, 21].
En suivant les recommandations FAB, nous avons pu
classer les leucémies aiguës de notre série (tableau 1).
L’aspect lymphoïde est évident dans 68 % des cas, dont
62 % des cas sont de type L1/2. Ces deux catégories sont
les plus fréquentes des LAL, en particulier les LAL1 avec
une fréquence de 80 à 85 % [19]. Seulement 6,5 % de
LAL sont de type L3. Cette catégorie à cellules de Burkitt
est considérée comme une phase leucémique du lym-
phome de Burkitt [21]. Les LAL3 sont peu fréquentes
en France, tant chez l’adulte (9,7 %) que chez l’enfant
(4,6 %) [22]. La cellule blastique de cette catégorie est
une cellule lymphoïde de taille moyenne avec un noyau
bien nucléolé, un cytoplasme intensément basophile dans
lequel on observe souvent de multiples vacuoles [21, 23].
En présence de blastes difficiles à classer [24], comme
cela a été le cas chez 28 de nos 152 patients, il est néces-
saire de caractériser ces populations leucémiques par des
marqueurs immunologiques. L’immunophénotypage est le
seul examen permettant d’affirmer leur caractère lym-
phoïde ou éventuellement myéloïde et donc de diagnosti-
quer une LAL et d’éliminer certaines LAM très peu diffé-
renciées ou rares [20, 24, 26].
L’utilisation du CD45 permet de rédiger l’analyse immuno-
phénotypique sur les cellules mieux ciblées [15, 20, 27].
Dans notre travail et selon la figure 3, on peut distinguer
Ann Biol Clin, vol. 67, no 5, septembre-octobre 2009
trois catégories de blastes sur le cytogramme CD45/SSC
(granularité). D’une part, on remarque que la population
des myéloblastes dans une LAM est un peu décalée vers
les granuleux par rapport à celle des lymphoblastes : les
précurseurs de la lignée myéloïde montrent donc un signal
plus intense en structure SSC que les précurseurs lymphoï-
des et ceci pour une même intensité du CD45. D’autre part,
pour les cellules de Burkitt, on observe une seule popula-
tion cellulaire (CD45 fort) sur le cytogramme SSC/CD45,
il s’agit de cellules lymphoïdes B matures [28].
L’assignement des blastes à une lignée par CMF, repose sur
la positivité aussi bien sur la négativité des résultats obte-
nus avec les différents antigènes testés [25]. D’après nos
résultats, l’examen immunophénotypique nous a révélé
5,2 % de cas présentant une leucémie aiguë indifférenciée
car ils n’expriment aucun marqueur spécifique de lignée.
Les LA indifférenciées expriment souvent seulement les
marqueurs d’immaturité HLA-DR et CD34 [25].
Dix pour cent des cas sont des LA biphénotypiques, ce
groupe constitue une catégorie particulière de leucémies
aiguës ambiguës, dans lesquelles la population cellulaire
exprime à la fois des marqueurs de deux origines différen-
tes. L’immunophénotypage est le seul examen permettant
de détecter cette entité. Le diagnostic de LA biphénotypi-
ques a été retenu dans notre étude en se référant au score
établi par l’EGIL pour chaque antigène, qui nous a permis
d’affecter pour chaque lignée une valeur supérieure à 2.
Il s’agit dans tous les cas, d’une coexpression des mar-
queurs lymphoïdes B avec les marqueurs myéloïdes.
Cette entité est la plus fréquente des LA avec ambiguïté
de lignée [29, 30].
Vingt cas de notre série n’ont pas été concluants par CMF,
en l’absence d’une population immature homogène.
Il s’agit le plus souvent de prélèvements désertiques.
D’autre part, les difficultés d’interprétation peuvent être
liées au caractère hétérogène de la prolifération : mélange
de blastes et de cellules pathologiques plus différenciées,
mélange de cellules leucémiques de plusieurs lignées.
Dans d’autres situations, l’hétérogénéité de la population
étudiée est due à la persistance de cellules normales lym-
phoïdes dans une LAL B ou T, ou bien de cellules nor-
males résiduelles myéloïdes dans une LAM [20].
Vingt-huit cas sur 152 (18,4 %) appartiennent à la lignée
myéloïde après l’analyse de leur profil antigénique. Alors
que d’après l’examen cytologique et cytochimique, nous
avons seulement 20 cas de LAM. Ceci a permis de confir-
mer les cas de LAM avec atypie morphologique et de
poser le diagnostic de 8 cas de leucémie aiguë myéloïde
peu différenciée (LAM0), ce qui confirme l’intérêt incon-
testable de l’immunophénotypage des LA avec blastes
indifférenciés [3, 25].
549
article original
Pour l’ensemble de notre série, l’assignement des blastes à
la lignée lymphoïde B ou T pure a été signalé dans 53 %
des cas. Il s’agit de 60/80 cas de LAL B (coexprimant les
deux marqueurs majeurs CD19 et CD79a (IC) dans 75 %
des cas (figure 4). Comme annoncé dans la littérature,
80 % des LAL-B expriment le marqueur d’immaturité
CD10 appelé aussi antigène CALLA (tableau 2), ce der-
nier présente un bon élément pronostique.
Parmi les 60 cas de LAL B, 12 présentent des blastes de
types B matures (CD45 fort). Immunophénotypiquement,
les cellules B matures sont associées avec l’expression en
surface des marqueurs CD19, CD20, CD22, la plupart des
cas montrent le caractère monoclonal par leur expression
ou bien de la chaîne légère kappa ou lambda [28]. Ces cel-
lules, qui expriment fortement le CD45, ont les caractéris-
tiques cytologiques des cellules de Burkitt (type LAL 3 du
groupe FAB) [25]. Cet aspect cytologique n’a été retrouvé
que dans 8/12 cas. D’autre part, nous n’avons pas enre-
gistré des cas de LAL Pro-B, cette entité est très rare et
présente le pronostic le plus défavorable des LAL B [18].
Le CD3(IC) est exprimé dans 20/80 cas de LAL témoi-
gnant de l’appartenance des blastes à lignée T [27].
Selon la littérature médicale, un pourcentage important de
LAL et de LAM peut exprimer un ou deux antigènes
d’une autre lignée. Cette expression est considérée
comme une infidélité de lignée. Elle est de mauvais pro-
nostic. On ne doit pas les confondre avec les leucémies
aiguës biphénotypiques [18, 27]. Une expression aber-
rante ou asynchrone des antigènes des LAL a été consi-
dérée comme une altération génétique déroulée durant les
stades précoces de différenciation lymphoïde. Dans notre
série, la présence de phénotypes aberrants est observée
chez 38 patients. Dans 12/60 cas de LAL B il y a coex-
pression d’un marqueur myéloïde CD33. L’expression
d’antigènes myéloïdes (CD13 et CD33) dans les LAL B
peut être associée à un réarrangement BCR-ABL particu-
lièrement fréquent chez l’adulte [25, 27]. En outre, 12
parmi les 60 cas de LALB coexpriment le CD5, un mar-
queur lymphoïde T. L’expression de CD5 par les cellules
lymphoïdes B est souvent repérée comme un phénotype
aberrant. Mais l’interprétation de cette aberration demande
une évaluation en parallèle de l’expression des chaînes
légères ainsi que le niveau d’intensité des marqueurs
CD20, CD22 et CD79b car le diagnostic différentiel
d’une forme leucémique d’un lymphome malin non hodg-
kinien peut être évoqué [27]. Deux patients présentant une
LA biphénotypique lymphoïde B et myéloïde ont exprimé
un marqueur aberrant T, le CD7. Ce dernier, est fréquem-
ment exprimé au niveau des LAM, il est classé selon
l’EGIL parmi les marqueurs mineurs de la lignée T avec
un score de (0,5) [27]. Le marqueur CD56 des cellules
NK a été exprimé dans deux cas de LAL-T.
550
Conclusion
Il est recommandé d’élargir le panel d’anticorps pour
l’immunophénotyge dans le but d’une meilleure caractéri-
sation de la leucémie aiguë et afin d’augmenter les chan-
ces de trouver des phénotypes aberrants permettant le
suivi de la maladie en période post chimiothérapie. Mais
l’affirmation d’un marqueur aberrant pour une lignée n’est
pas standardisée entre tous les laboratoires de spécialité et
leur détection peut avoir certaines limites : faux négatifs,
fixation non spécifique, marqueur contaminé.
Références
1. Baruchel A. Biologie et leucémies aiguës lymphoblastiques de
l’enfant. Rev Fr Lab 2003 ; 349 : 14-6.
2. Inwoley KA, Sawadogo D, Mizero L, Salou M, Karim N, Sangaré A.
Apport de l’immunophénotypage dans le diagnostic des leucémies
aiguës à Abidjan, Côte d’Ivoire. Bull Soc Pathol Exot 2004 ; 97 :
319-22.
3. Stainy A. Les leucémies aiguës lymphoïdes. In : Sebahoun G, ed.
Hématologie clinique et biologique. Paris : Arnette, 2005 : 277-84.
4. Jacquot A, Bernard F, Dupont M, Taviaux S, Guyot D, Plan O. Leu-
cémie aiguë lymphoblastique néonatale : une affection rare à révélation
immédiate en salle de naissance. Arch Pédiatr 2007 ; 14 : 887-9.
5. Laatiri M, Ennabli S. Lymphome non hodgkiniens. In: Maleej M.
Cancérologie pratique. Tunis : Centre de publication universitaire,
1999 : 447-55.
6. Feki S, Omri H, Lâatiri MA, Ennabli S, Boukef K, Jenhani F. Contri-
bution of flow cytometry to acute leukaemia classification in Tunisia.
Disease Markers 2000 ; 16 : 131-3.
7. Chan KW. Acute myeloid leukaemia. Acute lymphoblastic leukae-
mia. Curr Prob Pediatr Adolesc Health Care 2002 ; 32 : 40-9.
8. Belot A, Maynadié M, Janoray-Manivet I, Monnereau A, Delafosse
P, Troussard X. Cancer incidence and mortality in France over the
period 1980-2005. Rev Epidem Sante 2008 ; 56 : 159-75.
9. Clavel J, Goubin A, Auclere MF, Auvrignon A, Waterkeyen C. Inci-
dence of childhood leukemia and non-hodgkin’s lymphoma in France.
Natl Reg Childhood Leukemia Lymphoma 2004 ; 13 : 97-103.
10. Vilmer E, Dhedin N. Leucémies aiguës lymphoblastiques. Rev Prat
2002 ; 52 : 213-7.
11. Bauduer F. Aspects cliniques des leucémies aiguës. Encyclopédie
Médico-Chirurgicale. Paris : Elsevier, 2002; 13-018-G10 : 8p.
12. Kebriaei P, Anastasi J, Larson RA. Acute lymphoblastic leukaemia :
diagnosis and classification. Best Pract Res Clin Haematol 2002 ; 15 :
597-621.
13. Dumoucel S, Prieur AM, Mousset G, Boutard P, Méchin F. Quand
évoquer une leucémie devant des arthralgies avec hémogramme nor-
mal ? Arch Pédiatr 2008 ; 15 : 1018.
14. El Aichaoui S, Bahiri R, Benbouazza K, Bzami F, Amine B, Allali
F, et al. Polyarthrites révélatrices d’une leucémie. Rev Méd Int 2006 ;
27 : 555-7.
15. Latger Cannard V, Jamain N, Lesesve JF, Buisine J. Immunophéno-
typage des leucémies aiguës : utilisation de CD45 en 3e couleur pour
Ann Biol Clin, vol. 67, no 5, septembre-octobre 2009
 Profil antigénique des blastes et leucémies aiguës lymphoblastiques
améliorer la discrimination des cellules blastiques. Rev Fr Lab 2000 ;
319 : 37-43.
16. Sebahoun G. Anémies caractérisation, mécanisme, orientation diag-
nostique. In : Sebahoun G, ed. Hématologie clinique. Paris : Arnette,
2005 : 45-8.
17. Imbert M. Place du biologiste dans le diagnostic et le suivi des leu-
cémies aiguës. Rev Fr Lab 2002 ; 344 : 67-70.
18. Ludwig WD, Haferlach T, Schoch C. Diagnosis, classification and
prognosis : classification of acute leukemia. In : Pui CH, ed. Treatment
of acute Leukemias : new directions for clinical research. Human Press,
2003 : 37-41.
19. Imbert M. Nouvelles approches diagnostiques et thérapeutiques en
hématologie. Rev Fr Lab 2007 ; 395 : 23-4.
20. Baruchel A. Impact de la biologie dans la caractérisation, la compré-
hension et le traitement des leucémies aiguës lymphoblastiques de
l’enfant. Arch Pédiatr 2003 ; 10 (Suppl. 1) : 102S-105S.
21. Valensi F. Classification des leucémies aiguës : nouvelles approches
de l’OMS (Organisation Mondiale de la Santé). Rev Fr Lab 2002 ; 344 :
19-24.
22. Roy P, Coleman MP. Epidémiologie des leucémies aiguës lymphoï-
des. Rev Epidemiol Santé Publique 1992 ; 40 : 323-34.
23. Hamouda F, El-Sissy AH, Radwan AK, Hussein H, Gadallah FH,
Al-Sharkawy N. Correlation of karyotype and immunophenotype in
Ann Biol Clin, vol. 67, no 5, septembre-octobre 2009
View publication stats
childhood acute lymphoblastic leukaemia; experience at the national
cancer institute, Cairo university, Egypt. J Egypt Natl Canc Inst 2007 ;
19 : 87-95.
24. Braham Jmili N, Ben Abdelaziz A, Nagara M, Mahjoub T, Ghan-
nem H, Mondher K. Profil épidémiologique et cytologique des leucé-
mies aiguës : à propos de 193 cas colligés au centre Tunisien. Rev Fr
Lab 2005 ; 399 : 23-8.
25. Jouault H. Place de la cytométrie en flux pour le diagnostic et le
suivi des leucémies aiguës. Rev Fr Lab 2002 ; 344 : 25-30.
26. Valensi F. Morphologie des cellules sanguines normales. Hématolo-
gie 2005 ; 2 : 1-13.
27. Craig FE, Foon KA. Flow cytometric immunophenotyping for
hematologic neoplasms. Blood 2008 ; 111 : 3941-7.
28. Komrokji R, Lancet J, Felgar R, Wang N, Bennett JM. Burkitt’s
leukemia with precursor B-cell immunophénotype and atypical morpho-
logy (atypical Burkitt’s leukemia/lymphoma) : case report and review of
literature. Leukemia Res 2003 ; 27 : 561-6.
29. Troussard X, Mâaroufi N. Leucémie aiguë biphénotypique BAL :
mythe, réalité, perspectives. Spectra Biol 2006 ; 152 : 34-8.
30. Braham-Jmili N, Omri H, Fekih S, Hizem S, Ben Youssef Y, Ben
Mohamed S, et al. Leucémies aiguës biphénotypiques, à propos trois
cas. Feuill Biol 2006 ; 271 : 65-8.
551