Dysfonctions Lymphocytaires

Fabienne Venet
Laboratoire d’Immunologie Cellulaire & Laboratoire Commun de Recherche bioMérieux-HCL
EAM 4174 – UCBL1-HCL
Hôp. E. Herriot - Hospices Civils de Lyon - F
fabienne.venet@chu-lyon.fr

1
 Déclaration de liens d'intérêt

Mon intervention ne présente aucun conflit d’intérêt.

Néanmoins,
- une partie de mon activité de recherche est réalisée dans
le cadre du Laboratoire Commun de Recherche HCL-bioMérieux.

- la société Beckman-Coulter sponsorise certains aspects

de mon travail.
 Sujet

Lymphocyte
Immunodépression
Réanimation

Objectif
Présenter les principales altérations
lymphocytaires décrites chez les patients de
réanimation
3
 Plan de la présentation

I- Bref Rappels : quels lymphocytes et quelles fonctions ?

II- Altérations lymphocytaires des patients graves de

réanimation : quelles données en clinique ?

III- Conclusions et Perspectives – Questions non résolues

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I – Rappels Fonctions

Lymphocytes B Production d’Ac

Cytotoxicité
Anti-virale / germes
Lymphocytes T CD8+ intracellulaires
Progéniteur
Commun Lymphocytes T Immunité cellulaire
Th1 Germes intracellulaires

Germes extracellulaires
Th2 Anti-parasitaire
Lymphocytes T CD4+
Immunité des muqueuses
Th17 Germes extracellulaires /
champignons

Treg Régulation

Immunité anti-virale /
Lymphocytes NK anti-tumorale
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I – Rappels

6
II – Altérations lymphocytaires post-agression : quelles données en
clinique ?

A- Lymphopénie sévère et Apoptose massive

B- (a) Prolifération, (b) Production de cytokines

C- Expression de récepteurs co-inhibiteurs

D- Diminution de la diversité du répertoire TCR

E- Augmentation relative des Treg

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II – Altérations lymphocytaires post-agression : quelles données en
clinique ?

A- Lymphopénie sévère et Apoptose massive

B- (a) Prolifération, (b) Production de cytokines

C- Expression de récepteurs co-inhibiteurs

D- Diminution de la diversité du répertoire TCR

E- Augmentation relative des Treg

8
Castelino et al.
Etude rétrospective sur une période de 3 mois
Lymphopénie si Ly < 600 / µL (approx. 400 CD4+ T cell)
=> 1042 patients lymphopéniques

Les patients de réanimation présentent fréquemment une lymphopénie. 9

 n = 21 patients
en choc
septique

Médiane H0 = 168 cells/µl

Médiane H48 = 230 cells/µl

Cette lymphopénie est présente dès le début du choc et affecte toutes

10
les sous-populations lymphocytaires.
n = 6 volontaires sains,
n = 71 patients septiques,
n = 55 patients de réa non-septiques

Cette lymphopénie est

associée à une augmentation
de l’apoptose des
lymphocytes circulants.

11
n = 30 patients en choc septique Nombre de cellules non-apoptotiques
(Annexin negative)

Une lymphopénie marquée et persistante est associée à un risque 12

augmenté de décès.
 Stratification sur la valeur des lymphocytes totaux à J4
< 600 cell / µl => Lymphopénie sévère persistante
n = 335 patients septiques
dont 76 non-survivants à J28 700 et 1100 cell / µl => Lymphopénie modérée persistante
> 1200 cell / µl => Pas de lymphopénie

Une lymphopénie marquée et persistante est associée à un risque

13
augmenté de décès et d’infection nosocomiale.
II – Altérations lymphocytaires post-agression : quelles données en
clinique ?

A- Lymphopénie sévère et Apoptose massive

B- (a) Prolifération, (b) Production de cytokines

C- Expression de récepteurs co-inhibiteurs

D- Diminution de la diversité du répertoire TCR

E- Augmentation relative des Treg

Baumjohann Nat Rev Immunol 2013 14

 (a) Prolifération cellulaire

n = 7 patients en choc septique

n = 10 volontaires sains

Les lymphocytes T CD4+ et les Ly T CD8+ circulants de patients de

réanimation présentent une baisse de leur prolifération. 15
 (a) Prolifération cellulaire

Heidecke et al

n = 41 volontaires sains
n = 32 patients en sepsis sévère
Sepsis onset = les 3 premiers jours du sepsis
Sepsis final = les 3 derniers jours du sepsis (?)

Une baisse prolongée de la

prolifération est associée a un
risque augmenté de décès.

Stimulation par Ac anti-CD3/CD28 16

 (b) Production de cytokines

n =9 trauma
n = 11 volontaires sains

Stimulation par Ac anti-CD3/CD28 – Dosages dans le surnageant de culture

Les lymphocytes circulants de patients de réanimation présentent

une baisse de leur capacité de production de cytokines. 17
 (b) Production de cytokines

n = 12 patients en choc septique

n = 10 volontaires sains

Les lymphocytes circulants T CD4+ et T CD8+ de patients de réanimation

présentent une baisse de leur capacité de production de cytokines. 18
 (b) Production de cytokines

Heidecke et al
n = 32 patients en sévère sepsis
n = 41 volontaires sains Stimulation par Ac anti-
CD3/CD28 – Dosages dans le
surnageant de culture

Une altération prolongée de la production de cytokines est 19

associée à un risque augmenté de décès.
II – Altérations lymphocytaires post-agression : quelles données en
clinique ?

A- Lymphopénie sévère et Apoptose massive

B- (a) Prolifération, (b) Production de cytokines

C- Expression de récepteurs co-inhibiteurs

D- Diminution de la diversité du répertoire TCR

E- Augmentation relative des Treg

20
 Rappel: La synapse immunologique

21
Chen Nat Rev Immunol 2013
 n = 49 volontaires sains et 37 patients en choc septique

Les lymphocytes T des patients de réanimation présentent une 22

augmentation de l’expression des récepteurs co-inhibiteurs.
II – Altérations lymphocytaires post-agression : quelles données en
clinique ?

A- Lymphopénie sévère et Apoptose massive

B- Baisse de Prolifération / Production de cytokines

C- Expression de récepteurs co-inhibiteurs

D- Diminution de la diversité du répertoire TCR

E- Augmentation relative des Treg

23
 Mesure de la diversité du TCR
(normalisé sur la valeur des Ly T)

Relative
Intensity
Jβ Volontaire sain

Vβ

Les lymphocytes T des Choc septique

patients de réanimation (au diagnostique)
présentent une baisse de
la diversité du répertoire T.

24
hTRB VJ combinatorial diversity (%)

n = 40 patients en choc septique

n = 27 volontaires sains

La baisse de la diversité
du répertoire T est
associée à un risque
augmenté de décès.
II – Altérations lymphocytaires post-agression : quelles données en
clinique ?

A- Lymphopénie sévère et Apoptose massive

B- Baisse de Prolifération / Production de cytokines

C- Expression de récepteurs co-inhibiteurs

D- Diminution de la diversité du répertoire TCR

E- Augmentation relative des Treg

26
n = 30 patients en choc septique
N = 17 volontaires sains
Les patients de réanimation présentent une augmentation
27
relative des lymphocytes T régulateurs.
Les patients de réanimation présentent
une augmentation relative des
lymphocytes T régulateurs.
Observations faites à partir du sang périphérique

Que se passe-t-il au niveau des organes ?

29
Boomer et al

30
Les patients décédés après un sepsis présentent une
lymphopénie splénique. 31
Les patients décédés après un sepsis présentent une baisse de
production de cytokines au niveau splénique. 32
 Ly T CD4+ spléniques Ly T CD4+ pulmonaires

Les patients décédés après un sepsis présentent une augmentation de

l’expression des récepteurs co-inhibiteurs sur les Ly T spléniques et
pulmonaires. 33
 Conclusions et Perspectives

Les patients de réanimation présentent des altérations de la réponse

lymphocytaire affectant
=> leur nombre (lymphopénie, apoptose)
=> leur phénotype (↑ R co-inhibiteurs ↓ diversité du TCR)
=> leurs fonctions (↓ cytokine ↓ prolifération)

L’intensité et la durée de ces altérations sont associées à un risque

augmenté de décès et/ou d’infection nosocomiales.

Justifie la mise en place de traitements immunoadjuvants ciblant ces

altérations ?

34
 Questions en suspens ?

1- Existe-t-il un lien entre altérations de la réponse innée et de la

réponse adaptative post-agression ?

2- Quels sont les meilleurs biomarqueurs des altérations

lymphocytaires post-agression ?

3- Le traitement de ces altérations par des thérapeutiques immuno-

adjuvantes permettra-t-il de diminuer le nombre de décès /
infections nosocomiales en réanimation ?

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 Financements / Remerciements
PhD students and residents
Julie Démaret, Claude-Alexandre Gustave, Fanny Poujol
Immunology Lab
Christophe Malcus, Françoise Poitevin-Later, Julien Bancel
Anne Portier
ICU (CHLS)
Alain Lepape, Arnaud Friggeri, Hélène Vallin, Marion Provent, Nathalie Panel, Mathieu Fontaine
ICU (HEH)
Thomas Rimmelé, Bernard Floccard
ICU ( St Etienne)
Jérôme Morel, Guillaume Dupont
LCR HCL-bioMérieux
Julien Textoris, Marie-Angelique Cazalis, Estelle Perronet, Elisabeth Cerrato, Emmanuelle Gallet-
Gorius, Jeremy Schilling, Estéllie…

Hospices Civils de Lyon (DRCI) & bioMérieux (LCR)

European Society Intensive Care Medicine: 2011 Clinical Research Award to F. Venet (IL-7)
French ministry of health: PHRC 2009
Inserm-DHOS: Recherche Translationnelle 2009 (T cell diversity)
Richard Hotchkiss (St Louis) / Alfred Ayala (Providence)

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