Fibrinolyse : physiologie et

exploration

Dr. F ADDA
 Définition
• La fibrinolyse est un système physiologique qui aboutit à la lyse d’un

caillot de fibrine formé au niveau de la brèche vasculaire par l’action

d’une enzyme protéolytique la plasmine pour assurer la

reperméabilisation du vaisseau après la formation du thrombus.

• Ce système permet un équilibre avec la coagulation. son rôle est de

dissoudre une thrombose constituée et de prévenir une accumulation de

fibrine.

• La fibrinolyse requiert des activateurs et des inhibiteurs dont le rôles

peuvent être explorés par différentes tests d’hémostase.

Acteurs et activateurs Acteurs et activateurs
Plaquette Plasminogène
Facteurs de la t-PA
coagulation Urokinase
XII

Hémostase primaire Fibrinolyse

Coagulation Dissolution du caillot
Constitution du caillot

Inhibiteurs: AT, PC et PS inhibiteurs: PAI,

α2antiplasmine

L’équilibre physiologique de l’hémostase.

Physiologie de la fibrinolyse
Les facteurs du système fibrinolytique
 • T-PA
• U-PA
Activateurs

Enzyme
• Plasmine

substrat

• Fibrinogène +
fibrine
 Fibrinogène et fibrine
Fibrinogène
• Synthétisé par le foie et les
mégacaryocytes.
• Concentration plasmatique 2 à 4
g/l
• Demi vie 100 à 150 heures.
• Glycoprotéine de 340 KDa = 3
paires de chaines
polypeptidiques unies par ponts
disulfures inter et intra chaines.
• Les chaines Aα, Bβ, γ sont codée
par un gène différents.
• Les gènes sont tous situés sur le
chromosome 4.
Fibrine
• Clivage de 4 liaisons particulières
Arg-Gly au niveau des extrémités N
terminal des chaines Aα, Bβ par la
thrombine → départ des 2
fibrinopéptides FPA puis 2FPB
(fibrinogène en monomères de
fibrine).
• Les nouvelles séquences N
terminales Gly Pro Arg sur les
chaines α et Gly His Arg sur les
chaines β des monomères de fibrine
s’apparient avec des séquences
complémentaires sur les chaines α
et β d’un monomère
voisin→formation d’un polymère de
fibrine.
 Conversion du fibrinogène en fibrine

Protéolyse du fibrinogène par la thrombine

Fibrinogène Fibrine
Aa Aa a a
Bb Bb b b
g g g g
Thrombine

+
fibrinopeptides A et B
 Conversion du fibrinogène en fibrine

Polymérisation des monomères de fibrine

a GPR
b GHR
g g

g g
b b
a a

Liaison hydrogène
 Conversion du fibrinogène en fibrine

Stabilisation de la fibrine

GPR RPG
GHR RHG

g g
b b
a a
Ca++ Ca++
XIII XIIIa
Liaison covalente
Thrombine
 Plasminogène et plasmine
Plasminogène
• Précurseur inactif de la plasmine
• Protéine = 1chaine polypeptidique (791 acides aminés + PM de 92 KDa.
• Comprend 7 domaines structurels composés:
• D’une chaine polypéptidique appelée peptide de préactivation (acides
aminés 1 à 77),
• 5 séquences homologues appelées kringles K1 à K5. (1K= 80 acides
aminés+ 3 ponts disulfures intramoléculaires et porte un site de grande
affinité pour la lysine appelé LBS). confèrent au plasminogène sa
capacité à se lier aux résidus lysine de la fibrine et de l’α2antiplasmine
ou d’autres glycoprotéines comme, la glycoprotéine riche en histidine,
le collagène, le kininogène, la thrombospondine…
• L’extrémité de la chaine comporte le site responsable de l’activité
proteolytique P, formé des acides aminés 562 à 791.
 Plasminogène et plasmine
Plasminogène
• Le gène est situé sur le chromosome 6 au niveau de la bande 6q26-q27.
• Récepteurs du plasminogène :
• Ils sont retrouvés sur les cellules endothéliales, globules blancs,
plaquettes, hépatocytes.
• On a deux récepteurs :
• Α-énolase
• Gangliosides
• Ils ont une très forte densité> sites par cellule.
• Les gangliosides : lient directement plasminogène par des LBS.
• Biosynthèse :
• Il est synthétisé essentiellement par le foie mais aussi par le
polynucléaire éosinophile, le rein et la cornée.
 Plasminogène et plasmine
Plasminogène
• Activation du plasminogène :
• Les LBS permet: la fixation du plasminogène à la fibrine inactivée mais aussi
α2antiplasmine, thrombospondine, acide amino caproique (EACA), l’acide
tranexamique.
• Les activateurs du plasminogène agissent par l’hydrolyse de la liaison peptidique
Arg561-Val562 du plasminogène, pour donner naissance à une molécule de
plasmine composée de 2 chaines A et B.
• Concentration du plasminogène et localisation :
• Le plasminogène est présent dans le sang, les espaces extracellulaires où il se
fixe sur la matrice (laminine, fibronectine) et à la surface des cellules comme la
cellule endothéliale et les plaquettes.
• Il existe dans le plasma humain sous forme libre ou complexé à la glycoproteine
riche en histidine (HRGP), à l’α2antiplasmine et au fibrinogène (20% libre, 50%
complexé à HGP et 15 l’α2antiplasmine et au fibrinogène).
• Sa concentration est de 200 mg/l et sa demi vie 2 à 3 jours
 Plasminogène et plasmine
Plasmine
• sérine-protéase
• Glu-Plg est hydrolysé en plasmine (Glu-plasmine) par clivage
Arg561-Val562
• 2 chaînes réunies par ponts S-S, PM : 85 kDa,
• Une chaîne lourde A (60 kDa) porte les LBS
• Une chaîne légère B (26 kDa) porte le site actif
His603,Asp646,Ser741 (le triade catalytique).
• La plasmine est liée à la fibrine, ce qui augmente son activité
• La plasmine dégrade la fibrine, le fg, les facteurs V, VIII, vWF,
XIIIa, éléments du complément, la matrice extracellulaire.
 Activateurs du plasminogène
t-PA
• principalement synthétisé par la cellule endothéliale, produit aussi
par cellule mésothéliale, MK, monocyte
• gène : chromosome 8
• Sa concentration plasmatique est de 5 µg/l.
• Demi-vie = 3-6 secondes, à 80 % lié à PAI-1
• sérine-protéase, une chaîne, 527 AA, PM 70 kDa
• 4 domaines :
Domaine F : résidus 4 à 50 en NH2-terminal, homologue avec le domaine
F de fibronectine--> affinité pour fibrine et pour cellules
Domaine E : 50 à 87 , homologue EGF --> liaison sur cellules
Domaine K1: 87 à 176 ; K2 : 176 à 262 --> liaison à la fibrine
Domaine sérine-protéase : 276 à 527 , site actif His322,Asp371, Ser478
 Activateurs du plasminogène
t-PA
• Le t-PA a une affinité essentiellement fibrinolytique et peu
fibrinogénolytique.
• Il a une grande affinité pour la fibrine, cette affinité est plus
grande si la fibrine est associée au plasminogène (la
protéolyse de la liaison Arg 561- Val 562 devient effective)
 Activateurs du plasminogène
u-PA ou Urokinase
• rôle secondaire dans la circulation, mais rôle important dans
la matrice extracellulaire.
• Pro urokinase ou single chain urinary type plasminogène
activator (Scu-PA) : PM 54 000, 411 AA, chromosome 10.
• La forme circulante est la pro-urokinase synthétisée par les
cellules rénales et d'autres cellules parenchymateuses.
• La pro-urokinase s'active en urokinase essentiellement au
contact du caillot de fibrine.
• hydrolyse limitée par plasmine ou kallicréine Lys158-Ile159 =
tcu-PA ou urokinase.
 Activateurs du plasminogène
Système kallicréine-Facteur XIIa
• Il existe une interaction de la phase contact de la coagulation
avec la fibrinolyse dont l’importance n’est pas parfaitement
élucidée.
• Ce système fait intervenir le FXIIa, le KHPM et la
prékallicréine.
• La kallicréine active la pro urokinase en urokinase et le t-PA
monocaténaire en t-PA bicaténaire.
 Activateurs du plasminogène
Streptokinase
• Un activateur médicamenteux, obtenu à partir de culture de
streptocoque β hémolytique.
• C’est une protéine constituée d’une seule chaine
polypeptidique, PM 47 KDa.
• La streptokinase réagit avec le plasminogène circulant pour
formé un complexe equimoléculaire Plg-SK.
 Inhibiteur de la plasmine
a2-antiplasmine
• simple chaîne, PM 70 000, 452 AA, 2 ponts S-S (serpine)
• 1 mMol/l, synthèse hépatique, action rapide sur la plasmine :
se lie sur LBS1 et inhibe son site actif
• Le résidu sérine de la plasmine clive l'a2-AP en Arg 354- Met
355
• Le peptide de 11 000 daltons reste accroché au LBS de la
plasmine
• forme un complexe 1:1 avec plasmine
 Inhibiteur de la plasmine
a2-macroglobuline C1-inhibiteur
• glycoprotéine, PM 750 000, • serpine, PM 105 000, 478 aa
4 chaînes identiques de 160 • inhibe fibrinolyse
000 dépendant du système
contact.

Glycoprotéine riche en histidine (HRG)

glycoprotéine, 75 000 daltons, 507 aa

forme un complexe réversible avec 50

% du Plg (LBS1)
 Inhibiteur des activateurs du
plasminogène
PAI-1
• serpine, simple chaîne, PM 52 000, 379 aa
• inhibe t-PA (1 et 2 chaînes), affinité égale pour t-PA et pour
urokinase
• inhibe tcu-PA, mais pas Scu-PA
• forme un complexe inactif réversible, puis irréversible
• taux plasmatique variable 1-100 ng/ml (200 pM), plus élevés
le matin
• stabilisé dans le plasma par liaison à protéine S ou
vitronectine
• taux augmente pendant la grossesse et lors de
insulinorésistance
Mécanisme de la fibrinolyse
Déroulement de la fibrinolyse
 Le système plasminogène-plasmine
Digestion de la fibrine (1)

………..
(-)
(-)
tPA

……………
(-)

PAI-1
……….. tPA
tPA
…........

Fibrine

PDF solubles
 Le système plasminogène-plasmine
Digestion de la fibrine (2)

tPA Pg
Pn
Fibrine

PDF solubles
a2-antiplasmine (Foie)
TAFI ( Foie)
Contrôle: PAI-1 (pro-carboxypeptidase B)
 action de la plasmine

E E E
D D D D D D
fibrine
E E E

D D D D D D D

E E
D D D D D D PDF

D D dimères => dosage +++

D
 Cellule endothéliale
Thrombine
Cytokines (TNF)
Stase veineuse
Exercice physique
Une partie t-PA

PAI
Une partie Plasminogène
LBS
Plasmine

Plasmine
Fibrine α2 antiplasmine
D Dimères
α2 macroglobuline
PDF

Fibrinogène
 Extravasculaire
Chimiotactique
Cicatrisation
Embryogénèse
Angiogénèse scu-PA tcu-PA
Dissémination
métastatique
Plasminogène
LBS

Plasmine
Fibrine
PDF D Dimères

Fibrinogène
 Exploration de la fibrinolyse

Se fait devant:
Un syndrome hémorragique non expliqué
Certaines situations chirurgicales
Une situation de thrombose récidivante non expliquée
 Interrogatoire
• L'âge du patient au moment du 1er accident.
• Les ATCD personnels et familiaux.
• Le type et les circonstances de survenue d’événement
hémorragique ou de thrombose.
• La notion d’accidents isolés ou au contraire récidivants.
• Une prise médicamenteuse.
• Les hémorragies peuvent être spontanées ou
provoquées type d’ecchymose en carte géographique,
d’hématurie ou d’hémorragie en point de piqure dans
le syndrome de défibrination ou hyper fibrinolyse.
 Le prélèvement
• L’ATC de choix: citrate trisodique(0.13M).
• 1V de citrate/9V de sang.
• Délai entre prvt et analyse <ou = 3h
• Centrifugation: 2500t/min pendant 15min à
15°C.
• Conservation: à -30°C.
 Les tests standards
• TQ.
• TCA.
• TT.
• TR.
• Temps de lyse du caillot des euglobulines ou le temps de
Von Kaulla:
Consiste à apprécier l’activité fibrinolytique plasmatique dans
un milieu largement déplétif en inhibiteur par précipitation en
milieu acide (pH 5.9)
La propre fibrinogène du patient sert de substrat à la
réaction.VN= 3 à 5 heures
 Les tests spécialisés
• Fibrinogène.
• La recherche et le dosage des PDF (0.5µg/ml).
• Dosage des D Dimères.
• Complexe soluble.
• Dosage des différents facteurs du système
fibrinolytique.