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Mode opératoire : Spermogramme -
20/12/2023 1/3
Spermocytogramme

1. Objet et domaine d’application

Ce mode opératoire décrit l’examen du sperme ou spermogramme-spermocytogramme au
laboratoire
 Spermogramme = désigne tous les tests à l’état frais numération, mobilité, vitalité des
spermatozoïdes (spz).
 Spermocytogramme = désigne l’analyse cytologique faite dans un second temps à partir
d’un frottis coloré.

2. Responsabilité
Secrétaires pour la partie « instructions au patient »
Techniciens et biologistes pour la partie technique

3. Déroulement de l’activité
3.1. A la réception de l’échantillon

A réception de l’échantillon en salle de bactériologie :

- Vérifier l’étiquetage de l’échantillon
- Maintenir l’échantillon dans l'étuve à 37°C jusqu’à liquéfaction (entre 20 à 60
minutes maximum après l’éjaculation)

3.2. 1 heure après l'éjaculation

- Homogénéiser l’échantillon
- Noter le volume du sperme en lisant la graduation sur une pipette graduée jetable.
- Mesurer le pH en déposant une goutte de sperme sur une bandelette de papier pH. Après 30
secondes, la couleur de la zone imprégnée doit être uniforme. Elle est comparée à l'échelle de
couleurs permettant la lecture du pH.
- Evaluer la viscosité : La consistance du sperme liquéfié peut être évaluée après aspiration
douce dans une pipette, en notant la façon dont le sperme s'écoule par simple gravité à
l’extrémité de la pipette. Un sperme ayant une viscosité normale s’écoule sous la forme de
gouttes bien séparées alors qu'un sperme de consistance augmentée forme des filaments de
plus de 2 cm de long entre chaque goutte.
NB : Une consistance anormale, due par exemple à la présence d'une quantité importante de
mucus, peut gêner la mesure de différentes caractéristiques spermatiques comme la mobilité
ou la concentration ou encore la détection des anticorps fixés sur les spermatozoïdes.
- Pour les différentes colorations : préparer 4 lames (minimum) étiquetées

 1ère lame : déposer une goutte de sperme entre lame et lamelle et lire rapidement la mobilité
des spermatozoïdes au microscope à l’objectif × 40 en contraste de phase. Noter les
résultats sur la feuille de travail.
 catégorie "a" : mobilité fléchant et rapide

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Spermocytogramme

 catégorie "b" : mobilité lente

 catégorie "c" : mobilité sur place
 catégorie "d" : immobilité
NB : La mobilité peut se faire aussi à 3heures à condition de conserver le sperme à 37°C

 2éme lame (Pour la vitalité) : Mélanger 50µl de sperme avec 100µl d’éosine à 1%, après 30
secondes, ajouter 150µl de nigrosone 10%.
Etaler sur une lame et laisser sécher.
 Spermatozoïdes morts : rose (dès qu’une zone est rose, ils sont à considérer comme
morts)
 Spermatozoïdes vivants : incolore, càd blanc par rapport au fond bleu-violet.

 3éme lame (Pour la MGG) : colorer au MGG une des lames étalées, compter le % de
polynucléaires / cellules lignée spermatique et signaler la présence d'hématies.
Étudier la morphologie au microscope à l’objectif ×100 à l’immersion (annexe feuille des
anomalies morphologiques)

 4éme lame : après conservation de l’échantillon 3 heures dans l’étuve, refaire la mobilité
comme la 1ère lame et la noter sur la feuille de travail.

- Faire la numération des spermatozoïdes et des cellules sur une cellule de comptage (selon les
recommandations du fabricant)
- Noter les éventuels amas de spermatozoïdes :

 L’agglutination des spermatozoïdes est définie par l'attachement de spermatozoïdes

mobiles entre eux par la tête, par la pièce intermédiaire, ou par le flagelle; ou de
manière mixte, par exemple, agglutination tête-flagelle. La présence d'agglutinats
évoque une cause immunologique d'infertilité mais n'est pas une preuve suffisante.
L'agglutination doit être évaluée sur 10 champs sélectionnés au hasard.
 L’attachement de spermatozoïdes immobiles entre eux ou de spermatozoïdes mobiles à
des filaments de coagulum, à d'autres cellules ou à des débris ne constitue pas une
agglutination spécifique mais une agrégation non spécifique qui doit être notée comme
telle

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Spermocytogramme

RECAPITULATIF

1 heure après PH Papier PH (entre 7,2 et 8)

émission
Viscosité

Volume Pipette graduée

Mobilité une goutte de sperme entre microscope à l’objectif ×

lame et lamelle 40

frottis (une goutte de microscope à l’immersion

vitalité sperme) x100

Numération selon les recommandations Cellule de Comptage

du fabricant

3 heures après Mobilité une goutte de sperme entre microscope à l’objectif ×

émission lame et lamelle 40

A faire dès que MGG Coloration MGG microscope à l’immersion

possible x100

NB : Le biologiste doit toujours contrôler le 100 % du spermocytogramme

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