Analyse

chromatographique
Les différentes chromatographies
UHPLC CPG-HEAD
HPLC UPLC SPACE
Chromatograp Chromatogra Chromatogra Chromatogra
hie en phase phie en phie en phie en
liquide à phase liquide phase liquide phase
haute à ultra haute à ultra gazeuse
performance performance performance

Limite de Limite de Limite de pression

pression 400 Bar pression 600 Bar 1200 Bar
 Chromatographie
en phase liquide à
haute performance
(HPLC)

Principe
La Chromatographie Liquide Haute Pression (ou Haute Performance) permet de
séparer, d’identifier et de quantifier un ou plusieurs composés qui peuvent être
dissous dans un liquide à des concentrations aussi faibles que l'état de traces
(quelques ppm). 
 Principe de HPLC

Système informatique

Colonne
(phase stationnaire)

Injecteur

SOLVANT Pompe détecteur déchet

(phase mobile)
 Réservoir du Solvant

 Le plus souvent il y a quatre réservoirs pour pouvoir

réaliser des gradients d’élution. Ce sont généralement
des bouteilles en verre dans lequel plonge un tube

 Une phase mobile, ou solvant organique (ou

mélange de solvants) ou éluant, est introduite au
sommet de la colonne et entraine les constituants
(ou solutés) du mélange.
 Pompe

 C'est la partie qui sert à stocker l'éluant et à l'injecter sous

pression dans la colonne, les solvants sont homogénéisés
et mixés grâce à un mixeur

 Elle délivre en continu la phase mobile. Elle est définit

par la pression qu’elle permet d’atteindre dans la
colonne (jusqu’à 400 bars), son débit et la stabilité du
flux. 
 contient le dégazeur
 injecteur

 l y a plusieurs types d'injecteurs :

o Boucle d'injection : permet la répétabilité du volume
d'injection, constituer d’une seringue lié à une aiguille par
un tube
o Injecteur seringue
 Après chaque injection il y a un rinçage de l’injecteur par
un liquide de rinçage dans la position D
 colonne

 Une colonne est remplie avec une phase stationnaire

 La colonne met dans un four
 Il y’ a une stabilité de température
  on a deux types de chromatographies selon le type de colonne:

• Colonne de silice
Chromatographie • La phase stationnaire est polaire
normale

• Colonne de silice griffé à une

Chromatographie chaine de carbone ( C8, C18…)
inversé • La phase stationnaire est apolaire
 détecteur

 Il plusieurs types de détecteur: exemple (Une lampe d’iode ( UV-

visible))
 Un fuseaux lumineux va bombarder le cuve et donner une absorbance
selon une longueur d’onde spécifique au molécule d’interet
 Les analytes qui ont le moins d’affinité avec la phase stationnaire ou
une plus grande quantité d'interactions avec la phase mobile quitte la
colonne plus rapidement. L’ensemble des pics enregistrés par un
système informatique est appelé chromatogramme.
 Chromatographie
en phase
gazeuse- Head
space

 Même principe que le HPLC sauf que la phase mobile est un gaz inerte
généralement l’azote ou le hélium
 Il faut volatiliser les échantillons qui sont non volatiles
 Le Head-space est un échantillonneur qui aspire le gaz de tête de tube
La biosécurité de
laboratoire
 Des armoires
spécifiques
pour les
produit
toxiques

Des
Les protecteurs
Des moyens de de personnel
aspirateurs
d’air couplés à sécurité (gants,
des filtres chimique masques,
des
lunette…)

Des armoires
spécifiques
pour les
produits
inflammables
Thank you