Chromatographie de partage

- Greffage est souvent incomplet avec des pourcentages variables

- Prsence de rsidus silanols libres Si-OH: interactions hydrophiles
parasites
- Gnant pour les composs basiques: liaison hydrogne

- Reproductibilit, forme des pics

Principe du
End-capping

Chromatographie de partage
Domaine utilisation silice greffe 2 < pH <8

Evolution des phases

Chromatographie de partage

- Principe :
La sparation des soluts est fonde sur leur patage entre une
phase stationnaire et une phase mobile
CS
K=
= coefficient de distribution = coefficient de partage
CM

Et k = K VS
VM
Chromatographie de partage = extraction liquide/liquide
-- utilisation de 2 solvants non miscibles
-- un fix des particules de faible diamtre:
- augmentation surface dchange
- amlioration sparation : N

Les phases mobiles

Tampon: fix le pH de la phase

mobile
- Exemples de compositions de phases mobiles :
-Tampon phosphate
- Tampon actate
Chromatographie
- Tampon citrate
Chromatographie
Polarit
de (SM)
phases inverse
- Tampon
formiate
Polarit de phases normale

Hexane/dichloromthane/thanol
80/15/5 %

Hydrophobe / Hydrophile
(Relative)

Eau (Tampon) /mthanol

80/20 %

Hydrophobe / Hydrophile
(Relative)

Chromatographie de partage

- Principe :
Phase stationnaire est
- polaire: chromatographie de partage en polarit de phases
normale
sparation de composs polaires
- apolaire: chromatographie de partage en polarit de
phases inverse
sparation de composs apolaires

Chromatographie de partage

- Partage en polarit de phases normales :

Phase stationnaire hydrophile
O-H O

Si

H
H

O-H O
O-H

H
H
H

Eau des solvants

Phase mobile hydrophobe

Hxane /Dichlomthane
Compos hydrophile
Compos hydrophobe
Ordre dlution
Hydrophobe
Hydrophile

Temps de rtention peut tre trs lev avec asymtrie

Chromatographie de partage

- Partage en polarit de phases normales :

Utilisation de colonne de silice greffe avec des greffons prsentant
un caractre hydrophile

Chromatographie de partage

- Partage en polarit de phases normale :

Hydrophile
Hydrophobe

Chromatographie de partage

- Partage en polarit de phases inverse :

Influence de la force luante du solvant
Phase mobile
hydrophile

C18H37
Si

R
R

Silice greffe
hydrophobe
Eau/mthanol ou Eau/actonitrile ou Eau/THF 80/20 %

Chromatographie de partage

- Partage en polarit de phases

inverse :
Phase stationnaire greffe avec des
groupements apolaires:
- C8
- C18 +++
- Phnyle

Phase mobile: % variable

- eau ou tampon
- mthanol ou actonitrile ou THF

Chromatographie de partage

- Partage en polarit de phases inverse :

Choix de la phase mobile est empirique : classification dHildebrand
2 < k < 10
d

G: grande

Chromatographie de partage
- Partage en polarit de phases inverse :
Ordre dlution
Hydrophile
Hydrophobe
Reverse Phase: RP

Hydrophobie

Chromatographie de partage

- Partage en polarit de phases inverse :

Influence du caractre hydrophobe du solut sur la rtention

Ordre dlution
Hydrophile
Hydrophobe

Chromatographie de partage

BDCQ

Hydrophilie et

Bis desethylchloroquine
BDCQ

tR

Cyt

Cyt
H

Mono desethylchloroquine
MDCQ

Chloroquine CQ

Chromatographie de partage

- Partage en polarit de phases inverse :

Influence de la fraction volumique du solvant (% solvant)

Augmentation du pouvoir luant

Chromatographie de partage

- Partage en polarit de phases inverse :

Influence du pH de la phase mobile

Chromatographie de partage

- Partage en polarit de phases inverse :

RCOOH + H2O

Influence du pH de la phase mobile

Ka=

RCOO- + H3O+

[ RCOO- ]. [H3O+]
[ RCOOH]

pKa = -log Ka

R-COO-

pH = pKa - 2 100 % RCOOH

pH = pKa + 2 100 % RCOO-

R-COOH

pka = 4,2

pka = 4.8

pka = 3
pka = 4.1

Chromatographie de partage

- Chromatographie de partage : +++ utilise

- polarit de phases normale
- rserve la sparation des composs polaires
- possibilit dutiliser silice non greffe et greffe (amine,cyanopropyle)
- lution plus hydrophobe au plus hydrophile
- moins polyvalente et moins reproductible
- polarit de phases inverse
- Reverse Phase (RP) avec phase greffe C18,C8, phnyle
- lution plus hydrophile au plus hydrophobe
- reproductible et polyvalente
- soluts sparer solubles dans eau ou solvants polaires
- applicables la sparation de nombreux composs: mdicaments,
vitamines, polluants

Chromatographie avec formation de paires dions

-Cas particulier de la chromatographie de partage en polarit de
phase inverse: chromatographie avec appariement dions
-Adapts la sparation des composs ionisables :
- acides faibles: acides carboxyliques
- bases faibles: amines
- Ajout dun contre-ion (CI) la phase mobile
- concentration 10-3 10-2 mmol/L
- composs chargs chane hydrophobe

Chromatographie avec formation de paires dions

Solut

Contre ion
Phase mobile
(Tampon pH fix, % mthanol ou actonitrile)

Paire ion

Interactions hydrophobes

Si

Phnomne de partage

Chromatographie avec formation de paires dions

Contre ion donn une concentration donne
-

+ +

+
+
-

- nombre de molcules de CI
- hydrophobie du solut : logP

+
-

Variations de lhydrophophie de
la paire dions

Hydrophobie croissante
R

Chromatographie avec formation de paires dions

Solut

Phase mobile
(Tampon pH fix, % mthanol ou actonitrile)

Contre ion

Si

Interaction ionique

Si

Phnomne dchanges dions dynamiques

Chromatographie avec formation de paires dions

Influence de la concentration en contre ion

Chromatographie avec formation de paires dions

Influence de la fraction volumique du solvant

Concentration en CI

Chromatographie avec formation de paires dions

Exemple de sparations de diffrents acides faibles

Chromatographie avec formation de paires dions

Exemple de sparations de catcholamines et mtabolites

Chromatographie avec formation de paires dions

Conditions dapplication
- pH de la phase mobile tel que le compos sparer soit totalement
ionis

- Concentration habituelle en CI 10-3 10-2 mmol/L

- Quand la concentration en CI augmente, k augmente donc les tR
augmentent

-Augmentation de la fraction volumique du solvant diminue les temps

de rtention , mais annule la sparation, baisse de la slectivit ()
- Pas de gradient en chromatographie de paires dions

Ne pas confondre avec la chromatographie dchange dions