CATALSE :

a. PRINCIPE

La catalase est une enzyme qui catalyse la dégradation du peroxyde d'hydrogène (H2O2),
produit toxique du métabolisme aérobie de nombreuses bactéries, en H2O et 1/2 O2.

H2O2 H2O + 1/2 O2

La recherche de la catalase est un test fondamental pour l'identification des bactéries à

Gram positif.

NB: pratiquement toutes les bactéries à Gram négatif sont catalase +.

Oxydase :

a. PRINCIPE

La cytochrome oxydase ou oxydase est une enzyme de la chaîne respiratoire

bactérienne qui catalyse des réactions d'oxydation du type:

DH2 + ½ O2 D + H2O

En présence d'oxygène ambiant, cette enzyme peut oxyder un substrat incolore en un produit
facilement repérable car coloré:

Substrat réduit incolore Produit oxydé coloré

La recherche de l'oxydase est un test fondamental pour l'identification des bacilles à Gram
négatif.

TYPES RESPIRATOIRES

Principe
Le milieu viande foie permet de déterminer le type respiratoire d’une bactérie, c’est-à-dire définir
son comportement vis-à-vis du dioxygène. Certaines bactéries ne peuvent vivre qu’en son absence,
d’autres qu’en sa présence, d’autres encore sont indifférents.

VOIE D’ATTAQUE GU GLUCOSE

Principe :
milieu hugh et leifson permet de déterminer la voie d’attaque du glucose utilisé comme source
d’énergie par la plupart des bactéries. Pour synthétiser de l’énergie, les bactéries peuvent attaquer
par : o voie oxydative : le glucose est utilisé uniquement en présence de dioxygène (faible libération
d’acides). o voie fermentative : le glucose est utilisé en absence de dioxygène et en présence de
dioxygène ou seulement en absence de dioxygène (forte libération d’acides).
MILIEU DE KLIGLER HAJNA

principe
la lecture de la fermentation des glucides

Le milieu de Kligler contient 2 glucides: glucose et lactose (10 fois plus de lactose
que de glucose). Les entérobactéries utilisent d'abord le glucose (elles ont dans
leur cytoplasme toutes les enzymes nécessaires à l'utilisation de ce
glucide: enzymes constitutives) et ensuite, éventuellement le lactose.

Dans le culot (anaérobiose):

Le glucose est dégradé par fermentation, d'où production importante d'acides et
virage du rouge de phénol au jaune. L'utilisation ultérieure du lactose (si elle a lieu)
ne modifiera pas la teinte du rouge de phénol.
On lit donc le caractère glucose dans le culot.

Sur la pente (aérobiose):

Le glucose est attaqué par voie oxydative, d'où production faible d'acides (d'autant
plus faible que la quantité de glucose présent est faible).
Si la souche est lactose -, la faible acidité produite sera masquée par l'utilisation des
acides aminés (alcalinisation).
Si la souche est lactose +, il y aura acidification due à l'oxydation du lactose,
présent en quantité importante: virage du rouge de phénol au jaune.
On lit donc le caractère lactose sur la pente.

la production d'H2S

La mise en évidence de la production d'H2S se fait grâce à la présence

de thiosulfate de sodium et de citrate ferrique (fer III). En effet, chez une
souche dite H2S +:

 Le thiosulfate est réduit en anaérobiose en H2S

 L'H2S formé se combine au citrate de fer présent pour former un précipité
de sulfure de fer noir.

Recherche de l’uréase
Principe :
L’uréase dégrade l’urée selon la réaction suivante :

2 NH4 + H2O -------- Urée + CO3 2-

 Les ions co3 2- vont entraîner une forte alcalinisation du milieu qui sera révélée par un virage de
l’indicateur de pH (le rouge de phénol) à sa teinte basique (rouge).

recherche de la production d’indole

PRICNIPE
La tryptophanase hydrolyse le tryptophane selon la réaction suivante :

Tryptophane + H2O → indole + acide pyruvique + NH3

L’indole forme un complexe coloré en rouge en présence d’un réactif : le réactif de Kovacs.