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Introduction
Ils sont effectués selon trois modalités : la biopsie, les pièces opératoires et l'autopsie.
$\surd\ $ La biopsie : elle consiste à prélever un fragment de tissu sur un être vivant en vue d'un
examen anatomo-pathologique au niveau d'organes externes ou internes.
La biopsie s'effectue en plusieurs modalités :
$-\ $ Par ponction à l'aide d'une aiguille ou d'un trocart au niveau de l'organe en question (foie, rein...)
$-\ $ Par biopsie chirurgicale après anesthésie locale ou générale.
$-\ $ Au cours d'une endoscopie : la pince est dans ce cas montée sur l'endoscopie (appareil chirurgicale
qui permet de visualiser des opérations chirurgicales ou simplement d'observer des organes internes).
$\surd\ $ Les pièces opératoires on peut obtenir des tissus à partir des pièces opératoires par exérèse
(extraction ou retranchement d'un élément étranger ou nuisible du corps humain) partielle ou complète
d'un ou de plusieurs organes.
$\surd\ $ L'autopsie : elle correspond à un examen anatomo-pathologique pratiquer pour un cadavre.
N.B :
1) Définition
Le but de la fixation est de maintenir ou de conserver le prélèvement dans un état aussi proche de l'état
vivant.
Lors du prélèvement, les cellules déversent des enzymes qui peuvent provoquer leurs morts
(autodigestion ou autolyse).
De même à l'air libre certains prélèvements peuvent être contaminés par des bactéries qui vont
entrainer leur putréfaction.
Ainsi les modes d'action des fixations sont :
L'inhibition de l'autolyse, l'inhibition de la putréfaction, l'inhibition des constituants cellulaires ou
tissulaires pour leurs études.
Ce sont des composés qui font précipiter ou coaguler les macromolécules. Les fixateurs chimiques
peuvent être simples :
Exemple :
Exemple :
mélange de Bouin (acide acétique $+$ formol $+$ acide picrique $+$ eau), le mélange de carnoy.
Les plus utilisés sont l'azote liquide $(-196^{\circ}C)$ et la neige carbonique $(-60^{\circ}C).$
N.B :
Les fixateurs les plus communs à microscope optique et les plus utiliser dans le monde sont le Formol
$(4\%)$, Formaldéhyde $(10\%).$
Les fixateurs maintiennent normal les cellules en reliant les groupements des protéines des cellules.
B. Les techniques de coloration
1) Le principe
Il consiste à mettre l'échantillon dans un tube contenant de $HCL$ puis placer dans un bain mari
(permet la conservation en une température donnée) a $600^{\circ}C$ pendent $10\,mm$ et enfin à le
récupérer et le plonger dans le réactif de SCHIFF.
$L'ADN$ se colore en rase.
Elle est utilisée en hématologie avec les frottis sanguins, les ponctions inflammatoires et les coupes
d'organes hématologiques et lymphoïdes.
$$\begin{array}{|c|c|c|} \hline &MGG&\text{Hématologie}\\ \hline &\text{Basophile}&\text{Bleu}\\ \\
\text{Polynucléaires}&\text{Eosinophile}&\text{Orange}\\ \\ &\text{Neutrophile}&\text{Rose}\\ \hline
\end{array}$$
d) La coloration de PAPANICOLAOU
Elle est une technique qui utilise la force centrifuge (qui éloigne du centre) ou de centrifugation pour
séparer les différents composants d'un mélange.
La force de centrifuge est conduite par la rotation du récipient (centrifugeur).
L'augmentation de la vitesse de centrifugation permet une séparation plus nette des différents
constituants du mélange et surtout des macromolécules.
On parle d'ultracentrifugation.
Elle consiste à verser les mélanges hétérogènes dans le ou les tubes à essai puis à les soumettre en
rotation.
Sous l'effet de la force centrifuge, des particules sont expulsées dans le fond du tube à essai.
Il existe deux types de centrifugations :
$\surd\ $ La centrifugation différentielle
Elle permet de séparer les particules en fonction de leur taille par une succession de centrifugation en
des temps et des accélérations croissantes.
$\surd\ $ La centrifugation en gradient de densité
La vitesse de sédimentation d'une particule est en fonction de la différence entre sa densité et celle du
milieu ambiant.
Dans ce tube de centrifugation, le gradient de centrifugation du milieu ambiant peu changer en
modifiant le produit chimique de la solution.
$\surd\ $ Calcules de la vitesse de rotation pour une centrifugeuse précise :
Le nombre $g$ est la force requise pour obtenir une centrifugation optimale.
Il est nommé aussi force centrifuge relative $(RCF).$
La relation qui existe entre la vitesse et la rotation exprimé en tours ou en rotation par minutes $(RTM)$
; la force centrifuge la distance entre le centre du rotor et le fond du tube $(r)$ est décrite par la formule
suivante :
$$RTM=1000\surd\;RCF/r\times 1.118$$
Pour appliquer la formule de calcul on doit :
$-\ $ identifier la $RCF$ en se référant aux indications fournies par le fabriquant du tube.
$-\ $ identifier le rayon du rotor de la centrifugeuse, car constatant le mode d'emploi ou en le lisant
directement sur le rotor.
Exercice d'application
Résolution
2) La chromatographie
Elle permet de séparer les éléments d'un mélange ou d'un solvant appelé phase mobile à partir d'un
support solide dit phase fine ou stationnaire.
Le principe de la chromatographie repose sur le déplacement différentiel des constituants du mélange
sur la phase fine ou solide.
En effet ces constituants parcourent ces phases proportionnelles à leurs caractéristiques intrinsèques
(poids, taille...) ou à leurs affinités avec la phase stationnaire (selon la polarité).
En fonction de la nature surtout de la phase mobile, on distingue la chromatographie en phase liquide
$(CPL)$ et la chromatographie en phase gazeuse $(CPG).$
3) L'électrophorèse
Elle est une technique de séparation et d'analyse basée sur la migration différentielle des éléments du
mélange.
Le principe est le suivant :
$-\ $ Les échantillons sont déposés dans des puits préfabriqués au sommet du gel.
$-\ $ Le tampon est le même dans les réservoirs du haut en bas $(pH=9)$ pour que toutes les protéines
aient une charge négative.
$-\ $ Un courant électrique continue parcourt le gel pendent la durée de migration (ainsi puisque les
protéines ont même charges, leur migration dépendra uniquement de leurs poids).
$-\ $ Après migration, le gel est retiré et les bandes de protéines sont visualisées par :
$-\ $ Coloration de bleu de Coomasie
$-\ $ Coloration de nitrate d'argent
C'est une technique de marque consistant à une association d'une molécule vectrice et d'un marqueur
radioactif.
Le marqueur radioactif est un atome au noyau instable à cause d'un excès de protons, de neutrons ou
les deux.
Ainsi elle émet des rayons gamma qui permettent de préciser sa localisation, le traceur est choisi par sa
capacité à se fixer préférentiellement dans tel ou tel type de tissu ou son aptitude à mettre en évidence
tel ou tel pathologie.
C'est le cas de l'iode qui a tendance à se concentrer sur la thyroïde : l'iode entre dans la formation des
hormones thyroïdiennes, ainsi le marquage par l'iode du radioactif permet de vérifier le fonctionnement
de la thyroïde, de suivre le chemin des molécules formées.
C'est le cas aussi du glucose qui permet de détecter les cellules tumorales. Ces cellules consomment
beaucoup de sucre.
Ainsi on peut les mettre en évidence en marquant une substance voisine du glucose appelé fluoro
désoxyglucose $(FDG).$
D'autres radios traceurs sont utilisés : il s'agit du sodium radioactif $\left(Na^{23}\right)$, du carbone
radioactif $\left(C^{14}\right).$
V. Les microscopes
Ils sont des instruments optiques grossissants, munis d'un objectif et de l'oculaire qui permet de grossir
l'image d'un objet de petite taille et donc on examine des détails invisibles à l'œil nu.
Il est utilisé en biologie pour observer des cellules et des tissus et en pétrographie (science qui étudie les
roches minérales), pour reconnaitre des roches en métallurgie pour analyser la structure d'un métal.
La lumière composée de photons passe à travers le condensateur qui concentre le flux lumineux en
rayons lumineuses.
La lentille d'un objectif permet un premier agrandissement entre $x40$ ; $x200$ et $x150$ (en fonction
de l'objectif) puis la lentille de l'oculaire qui permet un deuxième agrandissement en générale $x4.$
Ainsi l'œil reçoit une image agrandie
L'agrandissement final (grossissement) est le produit des deux grossissements.
$$\text{Grossissement}=G.\text{ de l'objectif}\times\;G.\text{ de l'oculaire}$$
Les microscopes optiques ne permettent pas de voir des objets de tailles $<0.02\,Um$ contrairement au
microscope électronique.
Ce dernier utilise à la place de la lumière un rayonnement électronique (électrons). Il existe deux types
de microscopes électroniques :
$-\ $ Le microscope électronique a transmission $(MET)$
Le pouvoir de séparation du $MET$ $($de $2$ nanomètres a $0.02$ nanomètre$)$ est théoriquement
$40000$ fois supérieur à celui du $MO$ et $2$ million de fois de l'œil.
Le $MET$ comprend :
$-\ $ Un canon a électron
$-\ $ Un système de détection d'électrons
$-\ $ des lentilles magnétiques
$\bullet\ $ Les microscopes électroniques à balayage $(MEB)$
Le principe du balayage consiste à explorer la surface de l'échantillon et à transmettre le signal du
détecteur a un écran cathodique dont le balayage est exactement électronisé et synchronisé avec celui
du faisceau.
Sciences de la vie et de la terre
Auteur:
M. Tine