République Algérienne Démocratique et Populaire

Ministère de l’Enseignement Supérieur et de la Recherche Scientifique

Université de Tahri Mohammed -BECHAR
Faculté de biologie
Département de biologie

Chromatographie sur échangeuse d'ions et leur

application

 Présenté par : Chargé module :

Mme : RAHMANI
- Yaguer Nadjet
- Rezzoug Rabab

PROMOTION : 1er année master microbiologie appliqué

Année universitaire :2020/2021
 1. GENERALITES SUR LA CHROMATOGRAPHIE :
La chromatographie Elle est utilisée dans divers domaines, tels que la chimie
fine, la parfumerie, l’œnologie, l’industrie pétrolière, la biologie, l’industrie des
matières plastiques, etc. C’est une technique d'analyse qualitative et quantitative
dans laquelle l'échantillon contenant une ou plusieurs substances est entraîné par
un courant de phase mobile, qui peut être liquide, gaz ou fluide supercritique, le
long d'une phase stationnaire, qui peut être du papier, de la gélatine, de la silice,
un polymère, de la silice greffée etc.
Chaque substance se déplace à une vitesse donnée, dépendant de ses
caractéristiques (polaire, non polaire, ionique, etc., et de celles des deux phases.
La chromatographie est utilisée pour connaître la concentration de chaque
composé d'un mélange et même leur structure quand elle est couplée (GC-MS,
LC-MS, LC-RMN, etc.).
Figure 1 : Chromatographie sur échangeuse d'ions et leur application

2.Historique :
Fin des années 1960 : Début du développement de la chromatographie ionique, mais
application à la séparation des espèces ioniques retardée par manque d’une technique
générale et sensible.
En 1975 : La chromatographie ionique est introduite par Small, Stevens et Bauman comme
nouvelle méthode analytique.
Elle évolue rapidement dans sa détection pour aller vers une détection plus sensible des ions
par leur conductance électronique. Une colonne dite suppresseur réduit chimiquement la
conductance de l’éluant. 
En 1979, Fritz et al. Décrit une séparation et une détection alternative à celle de la cellule de
conductivité classique. Le principe est d’utiliser des résines échangeuses d’ions de faible
capacité et des éluant à faibles teneur en ions (permettant une conductance faible)5.
A la fin des années 1970, des techniques chromatographiques ioniques ont été utilisées pour
analyser les ions organiques pour la première fois.
En 1983 : Développement d’un détecteur ampérométrique pulsé permettant une détection
très sensible des hydrates de carbone, des acides aminés et des composés soufrés divalents .
Dans le début des années 1990, le développement des colonnes avec des sélectivités
spéciales a été effectué.

3.Définition du la chromatographie d’échange d’ions :

La chromatographie d’échange d'ions est une technique de séparation des molécules basée
sur leur différence de charge et s’applique uniquement aux groupe des protides (c'est ta dire
acide amine peptide et protéine puisque les autres biomolécules elle n’a pas des propriété
ionique)
Basée sur l’utilisation d’une phase mobile, qui contient le mélange de substances à
fractionner, et une phase stationnaire, au travers de laquelle les substances sont séparées.
- les interactions des différentes substances avec la phase stationnaire ralentissent plus ou
moins leur migration au travers de cette phase selon les propriétés respectives de chaque
substance - les propriétés communément utilisées pour effectuer le fractionnement sont:
- les interactions ioniques (Chromatographie par Chromatographie par échange d change
d’ions) - la taille (Chromatographie par gel Chromatographie par gel -filtration) - la
spécificité (Chromatographie d Chromatographie d’affinité affinité).

4.PRINCIPE :

Ce procédé de séparation est basé sur des processus d'échange d'ions se produisant entre les
analystes dans la phase mobile et la résine fixée sur la colonne.
La chromatographie d'échange d'ions est utilisée pour séparer les anions et les cations
inorganiques et organiques.
La séparation des anions est réalisée avec une colonne d’échange anionique et la séparation
des cations est réalisée avec une colonne d’échange cationique.
 5.Les types de séparation d'échange ionique :
 Il Ya Deux types de séparation d'échange ionique est possible :
-l'échange cationique
-l'échange anionique

Une résine échange d’ions consiste en une matrice insoluble comportant des groupes
chargés (chimiquement liés au support), qui vont permettre de retenir des contre-ions
mobiles.
La charge du contre-ions échangé (positivement ou négativement) détermine le type
d’échangeur d’ions : échangeur d’anion ou de cation.

6.RESINES :
Les échangeurs utilisés en chromatographie des protéines dépendent de deux caractéristiques
importantes :
- La nature de leur matrice.
- Le type de groupement fonctionnel (utilisé pour favoriser l’attachement de la protéine)

Les matrices utilisées en chromatographie sont des polymères insolubles préparés sous
formes de billes, appelées familièrement résines

Différentes résines : sépharose, séphacryl, celluloses substituées

Son modifié par ajout d'un groupement charger
Il peut s'agir :
 - des groupement chargée négativement (échange de cations) tels que les groupements
sulfonique, carboxylique, phosphates, sulfoéthyl ……
Il peut aussi s’agir :
- des groupement positivement (échange d’anions)

Groupements diéthylaminoéthyl (DEAE), aminoéthyl, triméthylamine

7. Des exemples sur les résines Résine échangeuse de cations :

La résine porte des composés type G ⁻, capable d’échange un cation X ⁺
Réaction d’échange : Résine -G ⁻ / X ⁺+ cation ⁺ = Résine – G⁻ / cation ⁺ + X ⁺

On distingue :
Les échangeurs de cations fort (résine sulfonique R- SO ⁻₃)
Les échangeurs de cations faibles (R-COO⁻).
Ex : Dowex 50 et CM- sephadex
Ces résines sont vendeuse sous forme sèche :
Il faut les activer avant utilisation en les plaçant dans
Solution acide au saline, ce qui leur permet de fixer un contre-ion respectivement H ⁺et Na ⁺,
la résine est alors sous forme acide G ⁻; H ⁺ ou sous forme sodique G ⁻ ; Na ⁺ , prête à
l'emploi .
 8.Résine échangeuse de d’anions :
La résine porte des composés type G ⁺, capable d’échange un anion X ⁻.
Réaction d’échange : Résine -G ⁺ / X ⁻ + cation ⁺ = Résine – G⁺ / anion ⁻ + X ⁻.
On distingue :
Les échangeurs de anions forts (R- N⁺H(CH₃) ₂).
Les échangeurs de anions faibles (R-COO⁻).
Ex : Dowex 1, DEAD et QAE - sephadex
Ces résines sont activées par fixation d’un contre-ion qui peut être OH ⁻ ou CL ⁻.

9.Chromatographie par échange d’ions :

Dans un processus d’échange d’ions, les ions liés électro-statiquement à un support
insoluble sont remplacés de manière réversible par des ions en solution :
R⁺ Aˉ + B ˉ R⁺ B⁻ + A⁻
R⁺ A⁻ est un échangeur d’anions, sous la forme A⁻
Un échangeur de cations porte des groupes chargés négativement et lierait des cations de
manière réversible
Les protéines portent à la fois des charges positives et négatives et peuvent lier à la fois un
échangeur d’anions ou de cations
L’affinité avec laquelle une protéine se lie à un échangeur d’ions dépend:
Du pH de la solution, puisque la charge nette des protéines varie selon le pH
De la nature et des concentrations des autres ions en solution, qui vont aussi
compétitionner pour les sites de liaison de l’échangeur d’ions
Ces deux principes peuvent être utilisés pour purifier une protéine donnée parmi un
mélange de molécules biologiques.
 10. Les étapes de la chromatographie d’échange
d’ions :
1. Fixation :
Seuls les anions contenus dans l’échantillon se fixent sur le résine échangeuse d'anion a la
place du contre-ions qui élué avec le cation non retenté.
2. Elution :
Décrochage de l’anion précédemment fixé utilisation d’un PH qui modifie sa charge.

11. Application de la chromatographie d’échange

d’ions :

Traitement de L’eau
Industrie du sucre : le procédé consiste à les éliminer les « non sucres » d’un jus
sucrés dans le but d’augmenter le rendement de cristallisation du sucre
Produits de laiterie : le lactosérum, ou petit- lait, obtenu lors de la fabrication du
fromage, est riche en protéines et trouve des emplois dans l’industrie alimentaire.
On le déminéralisé pour en augmenter la pureté. Le principe est le même que
celui de la déminéralisation d’eau ou de jus sucrés.
 12. Conclusion :
La chromatographie est une technique qui se décline selon de multiples variantes pour
séparer des constituants dans un but soit analytique, soit préparatif. Cet ensemble de
techniques, parfois très différentes dans leur mise en œuvre, est très utilisé en laboratoire
comme dans les établissements scolaires (la chromatographie des chlorophylles d’un végétal
est un grand classique). S’agissant de séparer des molécules pouvant être très variées dans
leur composition, poids moléculaire ou forme, la chromatographie nécessite le plus souvent
une étape de mise au point pour trouver le protocole adapté. Il est également rare de pouvoir
purifier convenablement une molécule en une seule étape, et il est généralement nécessaire
de réaliser successivement plusieurs types de chromatographies, ou de coupler cette
technique avec d’autres techniques de purification (centrifugation, électrophorèse,
précipitation, etc.). Vous trouverez, dans la figure 10, une comparaison entre les différents
types de chromatographie.

13. REFERENCE :

http://fdanieau.free.fr/cours/bts/A1/stbi/chapitre7/Echange Dions.pdf
http://www.123bio.net/cours/chromato/echange.html
https://www.universalis.fr/encyclopedie/echangeurs-d-ions/1-resines-echangeuses-d-ions/
file:///C:/Users/Desktop/2-Chrom atographie.pdf