Suite cours chapitre 1

M1/Biochimie 2020/2021

3-La chromatographie d’échange ionique

Principe :

Cette méthode est dite aussi chromatographie sur échangeurs d’ions ou par échange ionique ou
par échange d’ions.

Dans ce type de chromatographie, la phase stationnaire porte des groupements fonctionnels

positifs ou négatifs fixes et des ions mobiles de charges opposées (contre-ions) vont assurer
l’électroneutralité. Ce sont ces ions mobiles qui peuvent être de grosses molécules et qui,
retenus au voisinage des charges fixes, vont être échangés avec les ions amenés par la phase
mobile.

La séparation est donc basée sur cette propriété d’échange d’ions et ne peut s’appliquer qu’à
des molécules ionisées i.e chargées (telles que les acides ou les bases) ou ionisables i.e
chargeables (telles que les molécules amphotères).

La phase stationnaire est composée d’une matrice ou une résine polyosidique (naturelle) ou
synthétique à la surface de laquelle des groupements fonctionnels appelés sites de fixation,
négatifs (la phase stationnaire dans ce cas est appelée échangeur anionique) ou positifs (la phase
stationnaire dans ce cas est appelée échangeur cationique) sont fixés de façon covalente.

Les échangeurs anioniques (possédant une charge négative) peuvent échanger des cations : on
les nomme échangeurs de cations et sont des acides.

Les échangeurs cationiques (possédant une charge positive) peuvent échanger des anions : on
les nomme échangeurs d’anions et sont des bases.

La désorption des composants liés se fait par augmentation progressive de la concentration des
contre-ions dans la phase mobile (on dit par gradient de concentration) ou par variation de son
pH (par gradient de pH).

Ainsi dans le cas de l’échange d’un cation, le pH doit être faible (tampon faible), dans le cas de
l’échange d’un anion, le pH doit être élevé (tampon élevé) alors que l’élution d’une molécule
amphotère (telle qu’une protéine) a lieu lorsque le pH du milieu est égal à son pHi (voir TD).

1
La chromatographie par échange d’ions se pratique le plus souvent sur colonne, mais la
méthode peut être transposée sur couche mince ; du papier échangeur d’ions est également
commercialisé.

Applications :

- Séparation de mélanges de nucléotides et d’acides nucléiques

- Traitement et dépollution de l’eau

- Déminéralisation de divers composés

- Élimination de l’acidité dans le processus de fabrication des jus de fruits par exemple